缺血后处理抑制内质网应激PERK通路减轻大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤

目的探讨缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用及相关机制。方法 36只Wistar大鼠(257-326g),随机分为3组,对照组(Con组),缺血再灌注组(IR组),缺血后处理组(IPo C组)。采用Langendorff灌流装置建立缺血再灌注损伤模型,TTC染色评价梗死面积,Western blot检测凋亡蛋白及内质网应激相关通路蛋白表达。结果 IR组较Con组梗死面积增加,而Bcl-2表达显著降低,GRP78、CHOP、cleaved caspase12、cleaved caspase3、Bax及p-PERK表达水平显著增加。缺血后处理显著缩小梗死面积,并部分逆转相关蛋白表达的变化。结论缺血后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,可能与抑制PERK通路介导的ERS相关凋亡相关。     

亚甲蓝减轻大鼠离体心脏缺血/再灌注引起的线粒体损伤

目的:探讨亚甲蓝(methylene blue,MB)对大鼠离体心脏缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)线粒体损伤的作用。方法:将Spragure-Dawley大鼠随机分为对照组(control组)、I/R模型组和MB治疗组(I/R+MB组),建立Langendorff离体心脏灌注模型(n=6)。手术前2 h,MB组大鼠按2 mg/kg腹腔注射MB。对照组持续灌注K-H液110 min,I/R组与I/R+MB组平衡灌注20 min后停灌30 min,再灌注60 min。实时记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室最大压力变化速率(±dp/dt_(max))和左室舒张末压(LVEDP)。测定冠脉流出液中肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。测定心肌组织中活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)和三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。分离心肌组织线粒体,测定线粒体肿胀程度和线粒体膜电位(MMP)。结果:与对照组相比,I/R组的心功能恶化,冠脉流出液中的CK-MB和LDH活性升高,心肌组织中的ROS和MDA增加,SOD活性降低,ATP减少,线粒体肿胀程度升高,MMP下降(P0.05);与I/R组相比,I/R+MB组的心功能改善,CK-MB和LDH的释放减少,组织中的ROS和MDA减少,SOD活性和ATP含量升高,线粒体肿胀程度降低,MMP升高(P0.05)。结论:MB通过减轻线粒体损伤对大鼠离体I/R心脏发挥保护作用。     

异丙酚通过抑制JAK/STAT通路减轻肝冷缺血再灌注大鼠肾损伤

目的:探讨JAK/STAT信号通路在异丙酚减轻大鼠肝冷缺血再灌注后肾损伤中的作用。方法:SD大鼠随机分为4组(n=8):假手术组(sham组);肝冷缺血再灌注模型组(I/R组);异丙酚组(Pro组),于再灌注前5 min经右侧股静脉给予异丙酚20 mg·kg~(-1)·h~(-1)持续泵注30 min;JAK2抑制剂AG490组(AG490组),于建立模型前30 min腹腔注射AG490 10 mg/kg。再灌注6 h后处死大鼠,采集血样和肾组织标本,检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;观察肾组织的病理学改变,并进行肾小管损伤评分;检测肾组织细胞凋亡并计算凋亡指数(AI);检测p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平。结果:与sham组比较,I/R组血清的Cr和BUN浓度、肾组织的MDA含量、肾小管损伤评分及AI均明显升高,SOD活性降低,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与I/R组相比,Pro组和AG490组的血清BUN和Cr浓度、肾组织的MDA含量、AI和肾小管损伤评分降低,SOD活性升高,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:异丙酚可减轻肝冷缺血再灌注后肾损伤,其机制可能与抑制JAK/STAT信号通路激活有关。     

JAK/STAT通路在大鼠肠缺血再灌注所致肠损伤中的作用

目的: 探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肠缺血再灌注(I/R)所致肠损伤中的作用。方法: 雄性健康SD大鼠40只,体重230~255 g,随机分为5组(n=8):假手术组(sham组),仅分离肠系膜上动脉(SMA)但不夹闭;肠缺血再灌注组(I/R组),采用阻断SMA 60 min后开放120 min的方法制备肠I/R损伤模型;AG490(JAK特异性抑制剂)组,于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射8 mg·kg^-1 AG490,余同I/R组;雷帕霉素(STAT特异性抑制剂)组(RPM组),于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射0.4 mg·kg^-1 RPM,余同I/R组;二甲基亚砜组(DMSO组),于夹闭SMA前30 min侧腹部皮下注射2 μmol·kg^-1 DMSO,余同I/R组,DMSO系AG490和RPM的溶剂。所有大鼠均于再灌注120 min后取小肠观察肠黏膜形态学变化并行Chiu's评分,同时取肠黏膜组织检测髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及丙二醛(MDA)和乳酸(LD)含量,采集动脉血检测血清二胺氧化酶(DAO)活性及15-F_2t-isoprostane、内皮素-1(ET-1)和血栓烷素B₂(TXB₂)浓度。TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况并计算凋亡指数;采用Western blotting检测磷酸化的JAK2(p-JAK2)及STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果: 与sham组比较,其余各组的Chiu's评分和肠黏膜细胞凋 亡指数均显著升高(P＜0.05);而I/R组和DMSO组的LD和MDA含量、DAO活性、MPO活性、15-F_2t-isoprostane浓度、ET-1浓度及TXB₂浓度均显著升高,p-JAK2及p-STAT3蛋白表达量也显著升高,SOD活性显著降低(P＜0.05)。与I/R组和DMSO组比较,AG490组和RPM组的DAO活性、MPO活性、肠黏膜上皮细胞凋亡指数、ET-1浓度、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达均显著降低,SOD活性则显著升高(P＜0.05)。 结论: JAK/STAT信号通路的激活参与了肠I/R所致的肠损伤的发生,其作用与促进氧化应激损伤、中性粒细胞的聚集和肠黏膜细胞凋亡有关。     

纳布啡通过激活MAPK/ERK信号通路减轻心肌缺血再灌注大鼠心脏损伤

目的：探究纳布啡（NAL）对心肌缺血再灌注（MIR）大鼠心脏损伤的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的关系。方法：经在体冠脉阻断法构建MIR大鼠模型,随机分为MIR组、NAL组和NAL+PD98059[MAPK激酶1/2(MEK1/2)抑制剂]组,另设假手术（sham）组,每组10只。系活结30min后,各组大鼠给予相应的生理盐水、2.5 mg/kg NAL和10 mg/kg PD98059腹腔注射。2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）、HE及TUNEL染色分别检测心肌梗死面积、病理变化及细胞凋亡情况;试剂盒检测血清肌酸激酶（CK）、心肌钙蛋白T(cTnT)和乳酸脱氢酶（LDH）水平,以及心肌丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、活性氧（ROS）和总抗氧化能力（T-AOC）水平;Western blot检测心肌凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。结果：相比于sham组,MIR组心肌纤维断裂,心肌细胞变形,可见炎症细胞浸润,心肌梗死面积增大,细胞凋亡率,心肌cleaved caspase-3蛋白水平,血清CK、cTnT和...     

黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,取30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄角颗粒组,并按分组给予相应处理。采用Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能评分,TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积百分比,HE染色观察各组大鼠脑组织病理形态,TUNEL染色法检测各组大鼠脑细胞凋亡率,Western blot检测各组大鼠脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显加重(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著上升(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与模型组相比,黄角颗粒组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显减轻(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著下降(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活相关。     

血必净通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路减轻大鼠睾丸缺血再灌注损伤

目的:探究血必净对缺血再灌注(I/R)损伤大鼠睾丸的保护作用及其相关机制。方法:45只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、血必净低剂量组、血必净高剂量组和地塞米松组(均n=9);除对照组大鼠外,其它各组大鼠构建睾丸扭转复位模型,术后低、高剂量组及地塞米松组大鼠分别腹腔注射0.5和2 mL·kg^-1·d^-1血必净及0.5 mL·kg^-1·d^-1地塞米松。用药第3、7和14天取各组大鼠左侧睾丸,采用HE染色观察各组大鼠睾丸组织病理学改变;生化检测各组大鼠睾丸组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、内皮素1(ET-1)和一氧化氮(NO)水平,Western blot检测各组大鼠睾丸组织中细胞周期相关蛋白、细胞凋亡相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的水平。结果:血必净可显著减轻I/R大鼠睾丸损伤,显著升高I/R大鼠睾丸组织中SOD活性,降低MDA、ET-1和NO的含量,抑制I/R损伤组织中的氧化应激,介导细胞周期和细胞凋亡相关因子的表达,并显著升高I/R大鼠睾丸中p-PI3K、...     

Apelin-13对离体缺血/再灌注大鼠心脏损伤的影响

目的观察apelin-13对离体大鼠缺血/再灌注心脏损伤的影响,并初步探讨其对apelin受体APJ(putative re-ceptor protein related to the angiotensin receptorAT1)及细胞信号Akt1/2的影响。方法Langendorff装置恒流灌注大鼠离体心脏,采用停灌/复灌方式复制缺血/再灌注模型;观察缺血/再灌注期间心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率( LVdp/dtmax)及舒张期左心室内压下降的最大变化速率(-LVdp/dtmax);RT-PCR和Western blot测定组织中APJ受体mRNA和Akt1/2蛋白的表达情况。结果Apelin-13可以增加缺血/再灌注损伤心脏的±dp/dtmax(P<0·01);可以明显增强心肌组织中Akt1/2的表达;缺血/再灌注可以引起心肌组织中APJ受体表达上调。结论Apelin-13拮抗缺血/再灌注引起的心脏收缩及舒张功能障碍;可能与组织中APJ受体表达上调引起Akt1/2表达增强有关。     

Ghrelin通过激活mTOR通路减轻小鼠肠缺血/再灌注损伤

<正>本刊编委,湖北省武汉市一医院崔天盆教授(通讯作者)指导张宏玮(第一作者)等在《Int J Mol Med》(2013,32(4):851-859,IF=1.9)发表了题为"Ghrelin attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury in mice by activating the mTOR signaling pathway"的研究论文,主要内容如下:1研究背景和目的:肠缺血再灌注是一种急危重症,会导致严重炎症和远处器官损伤。mTOR/p70S6K信号通路活化能     

川芎嗪通过JAK2/STAT3信号通路调节线粒体自噬减轻心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的:探究川芎嗪对心肌缺血再灌注的保护作用与机制.方法:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支,缺血30 min后再灌注60 min建立心肌缺血再灌注模型,将造模成功的大鼠随机分为4组,分别为对照组(IR组)、川芎嗪治疗组(Lig组)、川芎嗪治疗且Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)抑制剂AG490处理组(Lig-AG组)及A...     

大车前苷通过PI3K/Akt信号通路减轻大鼠肠缺血再灌注损伤

目的 探讨大车前苷通过PI3K/Akt信号通路减轻肠缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的作用及机制.方法 24只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血再灌注损伤组与大车前苷组,每组8只,在建模后大车前苷组灌胃给予大车前苷0.4g/kg.各组于再灌注3 h后,通过湿干重检测肠组织含水率;HE染色检测各组肠组织损伤情况;Western ...     

氯胺酮减轻大鼠脊髓缺血/再灌注损伤

目的 探讨氯胺酮对大鼠脊髓缺血/再灌注(SCII)损伤及ERK1/2信号通路的影响。方法 将大鼠随机分为假手术组(S组)、SCII组(Zivin法建立模型)、低和高剂量氯胺酮组(分别每天给予50和100 mg/kg氯胺酮,连续14 d);评估大鼠后肢运动情况,检测脊髓组织炎性因子、氧化应激指标;并采用Nissl染色法检测脊髓神经元数量;TUNEL法检测凋亡率;Western blot检测蛋白表达情况。结果 与S组相比,SCII组术后Tarlov评分降低,并随时间呈梯度性升高;且脊髓组织正常神经细胞数减少,凋亡率升高;IL-1β、TNF-α、IL-6、VCAM-1水平及丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)水平均升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-过氧化物酶(GPX)明显降低(P<0.05),p-ERK1/2表达及p-ERK/ERK1/2比值均升高(P<0.05);与SCII组相比,氯胺酮组上述指标的变化均减轻(P<0.05),且低剂量组更明显。结论 低剂量氯胺酮可减轻SCII程度,ERK1/2信号通路可能参与该过程。     

天麻素预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨天麻素对大鼠离体心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法 60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注组、天麻素预处理(10、50、100、200μmol/L)组,应用Langendorff离体心脏灌注系统建立心脏I/R损伤模型。除正常对照组外,各组分别进行平衡灌注、全心停灌/再灌处理,从心功能各项指标、心肌酶学、心肌梗死面积(TTC染色)及组织病理学(HE染色)变化4个层面评估天麻素预处理对大鼠离体心脏(I/R)损伤的影响,评价不同浓度天麻素预处理对心脏(I/R)损伤心肌的保护作用。结果与缺血/再灌注组相比,不同浓度天麻素预处理组均可改善缺血/再灌注损伤心功能的各项指标,包括左心室发展压(LVDP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)和心率(HR);并降低冠脉流出液中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白(Trop-I)的活性,有效减少心肌梗死面积,其中以100μmol/L浓度的天麻素效果最显著(P0.05)。结论天麻素预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注引起的心肌损伤有保护作用,其中以100μmol/L的保护作用最为显著。     

氯胺酮减轻大鼠脊髓缺血/再灌注损伤

目的 探讨氯胺酮对大鼠脊髓缺血/再灌注(SCII)损伤及ERK1/2信号通路的影响。方法 将大鼠随机分为假手术组(S组)、SCII组(Zivin法建立模型)、低和高剂量氯胺酮组(分别每天给予50和100 mg/kg氯胺酮,连续14 d);评估大鼠后肢运动情况,检测脊髓组织炎性因子、氧化应激指标;并采用Nissl染色法检测脊髓神经元数量;TUNEL法检测凋亡率;Western blot检测蛋白表达情况。结果 与S组相比,SCII组术后Tarlov评分降低,并随时间呈梯度性升高;且脊髓组织正常神经细胞数减少,凋亡率升高;IL-1β、TNF-α、IL-6、VCAM-1水平及丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)水平均升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-过氧化物酶(GPX)明显降低(P<0.05),p-ERK1/2表达及p-ERK/ERK1/2比值均升高(P<0.05);与SCII组相比,氯胺酮组上述指标的变化均减轻(P<0.05),且低剂量组更明显。结论 低剂量氯胺酮可减轻SCII程度,ERK1/2信号通路可能参与该过程。     

多巴胺受体2减轻离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 观察多巴胺受体2(DR2)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其可能机制.方法 将大鼠40只,每组n=10,随机分成对照组(control)、I/R组、10 pmol/L Bromocriptine(DR2激动剂)组(Bro),10 μmol/L Haloper-idol(DR2抑制剂)组(Hal).用Langendorff离体灌流装置,复制大鼠心肌I/R损伤模型.Powerlab生理记录仪记录心功能;比色法测定冠脉流出液LDH、CK活性和心肌组织匀浆SOD活性以及MDA含量;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测DR2、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达.结果 与对照组比较,I/R组DR2、Bcl-2、caspase-3和cmpase-9蛋白表达、LDH和CK活性、MDA含量和细胞凋亡率均增加(P＜0.01),唯有SOD活性降低,心功能减弱(P＜0.01).与I/R组比较,Bro降低LDH和CK活性、MDA含量、细胞凋亡率、caspase-3和caspase-9的表达,升高SOD活性,改善心功能和进一步增加Bcl-2的表达(P ＜0.01);Hal对上述指标影响不显著.结论 DR2可减轻心肌I/R损伤,其机制与抗氧化、清除自由基、上调Bcl-2表达以及下调caspase-3和caspase-9的表达有关.     

挥发性麻醉药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的： 研究挥发性麻醉药对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响。方法： SD大鼠136只，随机分为17组，每组8只。采用Langendorff离体大鼠心脏模型。按给药方式分为6大组：假手术组（含1亚组）：自然灌流85 min;对照组（含4亚组）：平衡15 min为1亚组，平衡后续灌15 min为1亚组，平衡续灌后缺血10 min为1亚组，平衡续灌缺血25 min后复灌30 min为1亚组;氟烷组（含3亚组）：平衡15 min后，灌注含1.5 MAC氟烷灌注液15 min为1亚组，平衡续灌含药液后缺血10 min为1亚组，平衡续灌缺血25 min复灌含1.5 MAC氟烷的灌注液30 min为1亚组;1.5 MAC的恩氟烷、异氟烷、七氟烷大组，各大组包括3亚组，处理同氟烷组。记录各组心脏在平衡15 min、给药后(或续灌15 min)、复灌30min的左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室压力升高或降低最大速率(±dp/dtmax)、心率（HR）、冠脉流量（CF）。实验结束后测定心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、心肌丙二醛（MDA）含量、高能磷酸盐（ATP）含量、Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-ATP酶活性。结果： （1）恩氟烷、异氟烷、七氟烷组在给药后CF高于对照组（P<0.05）；各用药组在给药后LVDP、±dp/dtmax低于对照组（P<0.01）、而LVEDP高于对照组（P<0.05）；复灌30 min各用药组LVDP、±dp/dtmax高于对照组（P<0.01）。氟烷、异氟烷组在给药后和复灌30 min的HR低于对照组（P<0.05或P<0.01）。（2）各用药组在缺血前、缺血期和复灌30 min的心肌ATP含量高于及复灌30 min SOD活性高于对照组，MDA含量低于对照组（P<0.05或P<0.01）。（3）氟烷、恩氟烷、异氟烷组在缺血前Ca2＋-ATP酶活性低于对照组、各用药组在缺血期和复灌30 min此酶活性高于对照组（P<0.05或P<0.01）。（4）在复灌30min，氟烷组的Na＋-K＋-ATP酶活性高于对照组和其它3用药组（P<0.05或P<0.01）。结论： 挥发性麻醉药可抑制心肌收缩功能，对缺血再灌注心肌有保护作用。缺血再灌注后，能明显促进心肌功能与代谢的恢复，而且能提高CF、心肌Ca2＋-ATP酶及Na＋-K＋-ATP酶活性。     

降纤酶对离体大鼠工作心脏缺血再灌注损伤的作用

目的 :探讨降纤酶 ( Df)对心脏缺血再灌注损伤的作用。方法 :采用离体大鼠工作心脏缺血再灌注损伤模型 ,通过检测缺血再灌注损伤前后对照组、Df低剂量组及 Df高剂量组的心功能参数 ,观察Df的作用。结果 :Df可降低实验动物的室颤发生率 ,增强心肌收缩力 ( P<0 .0 5 ) ,防止冠脉流量下降 ( P<0 .0 5 )及左室内压下降 ( P<0 .0 1) ,促进压力最大上升速度的恢复 ( P<0 .0 5 )。结论 :Df对心脏缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。     

缺血后处理对抗大鼠离体心脏缺血再灌注损伤及其作用机制

目的： 研究缺血后处理（postconditioning）对抗大鼠离体心脏缺血再灌注损伤及其作用机制。方法：采用SD大鼠心肌缺血/再灌注模型，并于再灌注一开始即给予3次全心停灌30 s，再灌30 s处理作为缺血后预处理。记录心肌收缩功能指标，以Even’s blue-TTC法监测心肌梗死范围，并对心律失常严重程度进行定量分析。结果：缺血后处理组左室峰压（LVSP）、最大左室收缩速率（+dp/dt_max）以及心率明显高于缺血对照组。缺血后处理可明显缩小心肌梗死范围（22.97%±3.96% vs 缺血对照组 44.30%±13.61%，P<0.01）。观察复灌10 min时心律失常评分发现，缺血后处理组明显低于缺血对照组。缺血后处理组和缺血预处理组具有类似的心肌保护作用。5-HD组LVSP和+dp/dt_max低于缺血后处理组，心律失常评分增高，心肌梗死范围扩大。结论: 缺血后处理对大鼠缺血再灌注损伤具有心脏保护作用，其作用机制可能是部分通过激活线粒体ATP依赖性钾离子(mitoK_ATP)通道起作用。