比索洛尔提高心力衰竭大鼠心肌SERCA2a活性

目的观察比索洛尔对心力衰竭大鼠心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)活性的影响。方法腹腔注射阿霉素建立大鼠心力衰竭模型。实验分为对照组、假手术组、模型组、比索洛尔组、卡托普利组和比索洛尔+卡托普利组。检测心功能指标;ELISA法检测血浆脑钠肽水平;茎环状引物实时定量PCR检测心肌miR-25-3p表达水平;Western blot检测心肌SERCA2a和受磷蛋白(PLB)表达水平;定磷法测定心肌SERCA2a活性。结果与对照组比较,模型组大鼠心功能明显减退(P0.01),血浆脑钠肽水平和心肌miR-25-3p表达水平明显升高(P0.01),SERCA2a和PLB表达水平、SERCA2a/PLB比值和SERCA2a活性明显降低(P0.01);与模型组比较,比索洛尔组、卡托普利组和比索洛尔+卡托普利组大鼠心功能明显改善(P0.01),血浆脑钠肽水平和心肌miR-25-3p表达水平明显降低(P0.01),SERCA2a和PLB表达水平明显升高(P0.01);比索洛尔组和比索洛尔+卡托普利组SERCA2a/PLB比值和SERCA2a活性明显高于模型组(P0.05)。结论比索洛尔可以下调心肌miR-25-3p表达水平,提高SERCA2a和PLB表达水平,增强SERCA2a活性。     

中药心康方对心力衰竭大鼠心肌miR-25-3p表达水平和SERCA2a活性的影响

目的:观察中药心康方对心力衰竭大鼠心肌miR-25-3p表达水平和肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)活性的影响。方法:采用阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、心康方组和卡托普利组,分别以蒸馏水、心康方和卡托普利连续灌胃35 d。观察大鼠心功能指标,ELISA法检测血浆脑钠肽水平,定磷法测定心肌SERCA2a活性,Western blot法检测心肌SERCA2a和受磷蛋白(PLB)的蛋白表达水平,茎环引物实时定量PCR检测心肌miR-25-3p的表达水平。结果:心康方组和卡托普利组大鼠心输出量、左室短轴缩短率和射血分数明显高于模型组,血浆脑钠肽水平明显低于模型组,miR-25-3p表达水平明显低于模型组,SERCA2a和PLB的蛋白表达水平明显高于模型组(P0.01)。心康方组SERCA2a/PLB比值和SERCA2a活性明显高于模型组(P0.05),卡托普利组与模型组比较无明显差异。结论:中药心康方可以改善心力衰竭大鼠心功能,机制可能与下调心肌miR-25-3p表达水平、提高SERCA2a的蛋白表达水平及增强SERCA2a活性有关。     

缬沙坦对心肌梗死后心衰大鼠线粒体凋亡的影响及可能机制

目的 探讨缬沙坦对心肌梗死后心衰大鼠线粒体凋亡的影响及可能机制。方法 采用左前降支冠状动脉结扎法制备心衰大鼠模型，将大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(HF)、缬沙坦治疗组(ARNI);超声检测各组大鼠的心肌功能；HE染色观察心肌组织损伤；Masson染色观察心肌组织纤维化情况；激光共聚焦观察心肌钙离子荧光强度变化；TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况；定磷法检测心肌组织SERCA2a活力；Western blot检测各组大鼠心肌组织Cyto-C、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、SERCA2a、p-p38及p38蛋白表达。结果 与HF组比较，ARNI明显改善心衰大鼠心肌功能；减轻心肌组织病理损伤与纤维化情况；降低心肌钙离子荧光强度，抑制心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Cyto-C、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9表达，显著增强SERCA2 a活力，显著抑制p-p38蛋白表达。结论 缬沙坦可以改善心肌梗死后心衰大鼠线粒体凋亡，可能与通过介导p38MAPK-SERCA2信号通路活性调节钙离子超载有关。     

miR-874抑制剂调控caspase-8的表达和心肌细胞的增殖

目的:探讨miR-874抑制剂对大鼠心肌细胞caspase-8表达和细胞增殖的影响。方法:H_9C_2心肌细胞铺96孔板,24 h后用RNAiMAX对细胞进行转染,分为miR-874抑制剂转染组和对照组,16 h后用CellTiter-Fluor~(TM)细胞活力检测试剂盒检测细胞活力确定活细胞的数目,进而测定miR-874抑制剂对心肌细胞增殖的影响。用Caspase-Glo~试剂盒来检测细胞半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8)的活性。结果:miR-874抑制剂组的心肌细胞数目显著高于对照组;miR-874抑制剂组的心肌细胞caspase-8的活性显著高于对照组;miR-874抑制剂转染组心肌细胞caspase-8的活性归一化到细胞数目后显著高于对照组。结论:miR-874抑制剂促进大鼠心肌细胞增殖;miR-874抑制剂启动了促进caspase-8表达从而抑制大鼠心肌细胞坏死的途径。miR-874抑制剂有潜力应用于心衰治疗以减少心肌细胞的死亡。     

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨微小RNA（miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤的保护作用。 方法 50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3. 1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。 结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高（P<0.05）。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。 结论 MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。     

miR-139-3p在低氧诱导凋亡的心肌细胞中的表达及其作用研究

目的:探讨微小RNA-139-3p(miR-139-3p)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中的表达及其意义。方法:在正常和低氧条件下,采用RT-qPCR检测乳大鼠原代心肌细胞miR-139-3p的表达水平;进一步将miR-139-3p抑制剂和miR-139-3p抑制剂阴性对照转染到心肌细胞后,将细胞置于37℃密闭的缺氧盒中(95%N_2和5%CO_2)培养12 h,采用流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况。结果:低氧培养12 h后,与正常培养组(n=3)比较,低氧组(n=3)心肌细胞中的miR-139-3p相对表达量显著上调(P0.05)。低氧组心肌细胞凋亡率也显著升高(P0.05)。与miR-139-3p抑制剂阴性对照组(n=3)比较,miR-139-3p抑制剂组(n=3)的心肌细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论:miR-139-3p在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中表达上调。抑制miR-139-3p的表达能降低低氧诱导的心肌细胞凋亡。     

激活的Akt对心肌细胞的增殖调控

目的 通过检测Akt在大鼠心肌细胞退出细胞周期过程中的表达及Akt表达载体转染后大鼠心肌细胞有丝分裂的改变,探讨Akt对心肌细胞增殖的影响.方法 生后不同发育阶段和成年健康Wistar大鼠各5只,用RT-PCR和免疫印迹法,检测心肌组织Akt的mRNA和蛋白磷酸化水平改变;培养大鼠H9c2(2-1)心肌细胞,通过胰岛素...     

miR-125a-5p靶向 Scarb1基因对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响及其机制研究

目的探讨miR-125a-5p靶向调控清道夫受体B1(Scarb1)基因对缺氧/复氧大鼠心肌细胞损伤的影响及作用机制。方法将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为空白对照组、缺氧/复氧组、转染对照组和miR-125a-5p转染组。检测各组miR-125a-5p的表达量、心肌细胞的活力、凋亡率、ATP含量以及Scarb1、Cyt C、Bax、Bcl-2及NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况。利用Targetscan软件预测miR-125a-5p的靶基因, 用双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和Scarb1的靶向关系。结果与空白对照组相比, 缺氧/复氧组心肌细胞miR-125a-5p、Bax、Cyt C的表达和凋亡率明显升高(P<0.05), 细胞活力、Scarb1、Bcl-2的表达及ATP含量明显降低(P<0.05)。与转染对照组相比, miR-125a-5p转染组的情况与上述变化相反。双荧光素酶报告基因实验证实Scarb1为miR-125a-5p的靶基因。缺氧/复氧能够促进心肌细胞中NF-κB p65、c-Myc和Cyclin D1蛋白的表达, 而下调miR-...     

miR-214-5p靶向PAK4对缺血再灌注大鼠的心肌损伤和免疫反应的调节作用

目的:探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)靶向p21活化蛋白激酶4(PAK4)对缺血再灌注(I/R)大鼠的心肌损伤和免疫反应的作用。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、Ad-Scramble组和Ad-miR-214组(n=9)。在大鼠左心室前壁6个不同的位点注入腺病毒;4 d后,缝合左前部下行冠状动脉构建I/R模型。RT-qPCR检测miR-214的表达水平,HE染色观察心肌损伤,ELISA检测心肌损伤标志物(CK-MB、Mb和cTnI)和炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测MDA含量和SOD活性,基因软件预测靶基因并通过双萤光素酶报告验证,Western blot检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、PAK4、p-Akt和p-mTOR表达水平。结果:miR-214在I/R大鼠心肌细胞中低表达(P<0.01);miR-214-5p过表达减轻I/R大鼠心肌损伤程度,下调CK-MB、Mb和cTnI表达,降低心肌细胞凋亡率,上调Bcl-2表达,下调Bax、cas...     

微小RNA-199a-5p调控大鼠心肌细胞肥大的研究*

 目的：探讨微小RNA-199a-5p（miR-199a-5p）在心肌肥大模型中的表达及对大鼠心肌细胞肥大的调控作用。方法：用腹主动脉缩窄术（TAAC）构建心肌肥大大鼠模型,体外培养新生Sprague-Dawley大鼠心肌细胞,用血管紧张素II(Ang II)诱导心肌细胞肥大,荧光定量PCR (qRT-PCR)检测动物血浆和心肌细胞miR-199a-5p含量;合成大鼠miR-199a-5p的拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）,用脂质体转染mimic和inhibitor进入心肌细胞,用qRT-PCR检测肥大基因心房钠尿因子和β-肌球蛋白重链mRNA的表达变化;用氚标亮氨酸掺入量检测细胞蛋白合成速率变化;用细胞荧光染色法检测细胞表面积变化。结果：TAAC 术后28 d,大鼠血浆miR-199a-5p的含量较对照组显著增加 (P<0.05),在Ang II诱导肥大的心肌细胞中,miR-199a-5p的表达量也较对照组显著增加。在心肌细胞中过表达miR-199a-5p,能使细胞肥大基因表达增加,蛋白合成速率加快,细胞表面积增大,而使用inhibitor阻遏miR-199a-5p的作用后,能抑制Ang II诱导的肥大基因表达、细胞蛋白合成速率和细胞表面积的变化。结论:心肌肥大动物和细胞模型中miR-199a-5p的表达发生上调。过表达miR-199a-5p能促进体外培养的心肌细胞肥大,而阻遏miR-199a-5p的作用能抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大。