二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞;流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase-3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

顺铂诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡

为深入进行胶质瘤细胞凋亡的分了生物学研究及提高胶质瘤辅助化疗疗效打下基础。通过光镜,电镜,荧光显微镜分析,DNA断裂分析及流式细胞仪分析,进行顺铂诱导C6胶质瘤细胞调亡研究。本研究证实在3μg／mLCDDP作用72h,C6细胞出观细胞凋亡;光镜和电镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集贴达;流式细胞仅结果提示有凋亡峰出现,凋亡细胞占细胞总数17.3％±1.2％;荧光显微镜观察出现染色质浓集,染色质断裂：DNA电泳未表现出DNA呈梯状带型断裂。上述结果提示用顺铂成功地诱导大鼠C6胶质瘤细胞发生凋亡。     

罗格列酮对实验性大鼠脑出血后细胞凋亡的影响

目的:探讨罗格列酮对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后血肿周围脑组织细胞凋亡的影响。方法:88只健康老龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组8只,模型组40只,罗格列酮干预组40只,后2组又分为6 h、12 h、24 h、72 h、7 d 5个亚组,每组8只。采用大鼠股动脉新鲜自体不凝血50μl注入大脑纹状体基底节区复制脑出血模型,干湿重法检测脑组织含水量(water content of brain,BWC);原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑细胞的凋亡情况;免疫组化法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)和半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)的表达情况。结果:(1)随着大鼠脑出血后时间的延长,ICH组BWC呈逐渐增高趋势,并在72 h达高峰。与模型组比较,罗格列酮干预组BWC均降低,组织水肿减轻(P0.05)。TUNEL染色结果显示凋亡细胞的数量与各位BWC的复化相一致。(2)免疫组化法检测结果显示:大鼠脑出血后72 h,Caspase-3凋亡相关蛋白的表达明显上调。罗格列酮干预后,与模型组相比,PPARγ高表达,同时Caspase-3表达和凋亡细胞数明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:PPARγ激动剂罗格列酮可能通过抑制Caspase-3的表达,降低脑出血后脑组织的继发性凋亡损伤,对脑组织起保护作用。     

C6胶质瘤细胞诱导神经干细胞分化的初步研究

为了探讨C6胶质瘤细胞分泌的因子对神经干细胞分化的作用及机制。本研究从Wistar孕鼠(E17～E18)纹状体组织中分离、培养神经干细胞,将其分离纯化后进行nestin免疫荧光染色鉴定后分为两组进行诱导分化实验。对照组:RPMI1640培养液+基础培养基(1∶1配制);处理组:C6胶质瘤细胞培养上清+基础培养基(1∶1配制)。采用免疫印迹法分析胶质瘤细胞条件培养液作用于神经干细胞后的不同时相(1、3、5d)MAP-2蛋白的表达情况;通过RT-PCR检测不同时相(1、3、5d)MAP-2的表达及调控神经干细胞向神经元分化的多种转录因子如:neurogenin3(Ngn3)、neuroD和neuroD2的mRNA的表达情况。结果显示:处理组MAP-2在蛋白和mRNA水平的表达量均明显高于对照组(P<0.01),并且处理组的Ngn3、neuroD和neuroD2的mRNA水平比对照组也有明显升高。上述结果提示,C6胶质瘤细胞条件培养液能够促进神经干细胞向神经元分化,此作用可能与Ngn3、neuroD和neuroD2等转录调控因子表达水平的提高有关。     

外源性H2S对帕金森病模型小鼠神经保护作用及其对基质金属蛋白酶9和Caspase-1表达的影响

目的 探讨外源性硫化氢(H₂S)对1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP)对诱导的帕金森病(PD)小鼠保护作用及其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)和Caspase-1表达的影响。方法 将36只雄性昆明小鼠随机分为对照组(control)、PD组和PD+硫氢化钠(NaHS)组,每组12只。腹腔注射MPTP(30 mg/kg),每天1次,连续7 d诱导PD小鼠模型,PD+NaHS组于模型制作前30 min腹腔注射5.6 mg/kg NaHS(H₂S供体),对照组给予等量生理盐水。采用震颤麻痹评分、悬挂实验评估小鼠行为学变化,HE染色观察各组小鼠中脑黑质(SN)神经元的形态学改变;免疫组织化学和Western blotting法检测各组中脑SN区酪氨酸羟化酶(TH)、MMP-9和Caspase-1蛋白表达。结果 与control组比较,PD组小鼠震颤麻痹评分增高(P<0.05),悬挂实验评分降低(P<0.05);光学显微镜下中脑SN区神经元数量明显减少,排列紊乱,部分神经元胞体固缩,胞质红染;SN区TH阳性细胞数及...     

大鼠C6胶质瘤细胞的基因表达谱

目的:筛选比较大鼠C6胶质瘤细胞与正常星型胶质细胞中的差异表达基因。方法:利用Illumina Hi Seq4000技术对大鼠C6胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞进行转录组测序并对测序结果进行功能注释。以|log2 Fold Change|≥1和q值0.05为标准筛选差异表达基因,并通过GO和KEGG数据库分析其功能和参与的信号通路。结果:较之正常星形胶质细胞,大鼠C6胶质瘤细胞中共筛选得到4363个差异表达基因,其中1603个基因表达上调,2760个基因表达下调;GO富集结果表明:4109个差异表达基因共映射到906个GO term,主要与GTP酶活性正性调节、基因表达正性调节、蛋白结合和钙离子结合等功能相关;KEGG富集结果表明:1535个差异表达基因共参与106条通路,富集最多的是PI3K-Akt信号通路和癌症发生通路。结论:成功获取大鼠C6胶质瘤细胞与正常胶质细胞的基因表达谱,并对其差异基因进行GO和KEGG注释,结果有助于胶质瘤发生发展的研究。     

人参皂苷Rh2对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用

目的研究不同浓度的人参皂苷Rh2对细胞增殖、迁移以及侵袭的作用。方法使用不同浓度的人参皂苷Rh2对体外培养的大鼠胶质瘤细胞系C6进行处理,采用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验、Transwell小室模型分别检测其对C6细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果人参皂苷Rh2对C6胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,且在一定药物浓度范围内呈剂量-时间依赖性;对C6细胞迁移能力在药物浓度大于32μg/ml时有明显的抑制效果;对C6细胞侵袭的抑制作用也呈剂量依赖性,且在16μg/ml浓度即有明显效果。结论人参皂苷Rh2显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

铁调素对体外培养大鼠骨骼肌细胞铁代谢的影响

目的 探讨铁调素对骨骼肌铁代谢的调节机制.方法 培养大鼠骨骼肌L6细胞,随机分成4组,每组6个重复,每组各加入不同浓度的铁调素溶液(终浓度分别为0、0.05、0.1、0.15 mg/L)孵育12h,采用同位素示踪法,用55Fe测定细胞铁摄取及铁释放能力的变化;通过流式细胞仪检测细胞内铁池(LIP)铁含量;应用免疫印迹法检测膜铁转运蛋白1(FPN1)的变化.结果 与空白对照组比较,0.1mg/L 铁调素处理组肌细胞的铁释放能力明显下降(P<0.05),0.05及0.15mg/L铁调素处理组肌细胞的铁摄取和铁释放均无明显变化(P>0.05);0.1mg/L 铁调素处理组其细胞内LIP铁含量较对照组明显升高(P<0.05);0.1mg/L 铁调素处理组细胞膜上FPN1的表达较对照组明显降低(P<0.05).结论 铁调素可通过影响骨骼肌细胞FPN1的表达水平,降低骨骼肌细胞内铁的向外转运,增加细胞内铁池的铁含量,从而调节骨骼肌细胞的铁代谢.     

越桔原花青素调控脑胶质瘤细胞生长的机制研究*

 目的： 探讨越桔原花青素对脑胶质瘤细胞生长的影响。方法: 培养脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组以及10、20和40 μg/L越桔原花青素组,MTT法检测药物对C6细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞生长的变化,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率的变化,免疫细胞化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达,Western blotting检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果: 在24、48和72 h时,10、20和40 μg/L越桔原花青素均抑制C6细胞的生长,24和48 h时40 μg/L越桔原花青素组、72 h时20和40 μg/L越桔原花青素组细胞生长明显受抑制 (均P＜0. 01);倒置显微镜观察发现,各药物组细胞密度随药物浓度升高而减少;Annexin V/PI分析显示,细胞的凋亡率亦随着药物浓度的增加而明显增加;细胞免疫组化结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,C6细胞表达Bcl-2蛋白减少,表达Bax蛋白增加,但均无明显差异;Bax/Bcl-2的比值随着药物浓度升高而增加（P＜0.05或P＜0.01）; Western blotting结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,随着药物浓度升高,细胞表达Bcl-2蛋白减少（P＜0.01）而Bax和caspase-3蛋白表达均增加,Bax/Bcl-2的比值也明显增加（P＜0.01）。结论: 越桔原花青素抑制脑胶质瘤C6细胞的生长,其作用机制与调控Bax蛋白增加和Bcl-2蛋白减少,使Bax/Bcl-2比值增加,从而激活caspase-3,诱导凋亡发生有关。     

C6胶质瘤荷瘤大鼠免疫状态的初步研究

进行脑胶质瘤实验研究，需要相应的动物模型，立体定向注射制备大鼠C6胶质瘤模型较为理想，具有广泛的应用和研究价值。国内在20世纪90年代初建立了大鼠C6胶质瘤模型，吴景文等曾对其做过系统观察，但对荷瘤机体的免疫状态缺乏详细研究。研究表明，细胞免疫在抗肿瘤免疫中起主导作用，其机制主要是抗原特异性的CD8^ T细胞向肿瘤趋化、识别并杀伤肿瘤细胞。     

小RNA干扰Akt2对U87恶性胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨转染Akt2-siRNA表达载体阻断Akt2信号转导通路对U87恶性胶质瘤细胞运动、迁移和侵袭能力的影响. 方法 利用siRNA技术,稳定转染恶性胶质瘤细胞系U87;用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测Akt2的mRNA和蛋白的表达;划痕实验和体外侵袭实验分别检测恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力;用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力,纤维型肌动蛋白(F-actin)聚合实验检测F-actin的聚合能力;免疫印迹技术检测LIMK的磷酸化,证明Akt2影响F-actin聚合的机制. 结果 稳定转染siAkt2载体后,Akt2的mRNA和蛋白水平均下降;细胞向划痕移动的速度比对照组慢(P<0.05);侵袭并穿透基质胶(Matrigel)的细胞数量比对照组少(P<0.01);细胞内F-actin聚合比对照组减少(P<0.05);黏附实验结果显示,黏附5min、15min后,低表达Akt2的细胞比对照组的黏附数量均减少(P<0.05). 结论 Akt2基因沉默可以通过降低F-actin聚合、降低黏附于细胞外基质的能力而降低恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力.     

二十二碳六烯酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道的影响

 目的： 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）大电导钙激活性钾离子通道（BKCa）的作用。方法：采用酶解法获得单个活性良好的PASMC,PASMCs的BKCa电流变化采用全细胞膜片钳技术记录,PASMCs胞浆内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)采用激光共聚焦显微镜技术测定。结果：DHA 0.01 μmol/L对BKCa无显著激活作用;0.1、1、10 μmol/L DHA可显著激活BKCa。不同浓度的DHA（0、0.1、1、10 μmol/L）在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度分别为(30.5±6.5) pA/pF、(59.4±5.8) pA/pF、(87.2±4.3) pA/pF和(117.3±7.1) pA/pF (P<0.01)。急性缺氧在指令电压为+60 mV时,BKCa电流密度从(32.7±8.5) pA/pF降低至(11.9±5.8) pA/pF (P<0.01)。DHA (10 μmol/L) 能明显逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用（P<0.01）,同时DHA触发PASMCs内［Ca2+］i的增加,最大增加速率为（71.9±4.1）%（P<0.01）。结论：DHA通过增加PASMCs［Ca2+］i激活BKCa,逆转急性缺氧对BKCa的抑制作用,具有舒张肺血管的作用。     

Effect of docosahexaenoic acid on macrophage functions of rats

Docosahexaenoic acid (DHA) is an omega-3 fatty acid which has been demonstrated to exhibit anti-inflammatory effects. The objective of this study was to determine the effect of DHA on phagocytic and chemotactic activities of peritoneal macrophages obtained from rats. DHA was dissolved in 1 ml of corn oil at dose of 36 mg/kg/day and given via oral gavage for 4 weeks. Control rats received 1 ml/day corn oil as vehicle. At the end of the treatment period, peritoneal macrophages were isolated and chemotactic and phagocytic activities were assayed. Chemotactic and phagocytic activities were reduced in rats fed with DHA. These results demonstrated the effect of DHA in modulating immune activities of rat peritoneal macrophages.     

Effects of PI3K inhibition and low docosahexaenoic acid on cognition and behavior

Alterations in two components of the brain's insulin signaling pathway, docosahexaenoic acid (DHA) content and phosphoinositide 3-kinase (PI3K) activity, have been implicated in the insulin resistance that is central to type II diabetes mellitus (DM). A 2- to 3-fold increased risk of developing Alzheimer's disease (AD) in patients with type II DM suggests a potential link between cognition and insulin action. The current study was designed to examine the impact of DHA dietary content and PI3K activity on learning, memory, depression, and anxiety in rodents. Mice were divided into the following groups: (1) control diet and vehicle injection (control PI3K), (2) control diet and wortmannin injection (PI3K inhibition), (3) low DHA diet and vehicle, and (4) low DHA diet and wortmannin. Each group was assessed for effects on activity, cognition, depression, and anxiety. Concentrations of glucose and insulin in plasma were quantified to confirm insulin resistance. Results showed significant increases in depression, anxiety, plasma insulin and glucose, and significant decreases in activity in wortmannin-treated mice regardless of diet. The control diet/wortmannin-treated group showed a significant decrease in memory compared to all other groups. The low DHA diet/wortmannin-treated group had slightly improved memory and lower levels of depression compared to the control diet/wortmannin-treated group. Results of the present study suggest that inhibition of PI3K decreases activity and memory while increasing insulin resistance, depression, and anxiety. In addition, these results suggest a possible compensatory role of low DHA in decreasing the effects of dysfunctional PI3K in AD associated cognitive decline and depression.     

System L-amino acid transporters are differently expressed in rat astrocyte and C6 glioma cells

The system L-amino acid transporter is a major nutrient transport system that is responsible for Na+-independent transport of neutral amino acids including several essential amino acids. We have compared and examined the expressions and functions of the system L-amino acid transporters in both rat astrocyte cultures and C6 glioma cells. The rat astrocyte cultures expressed the l-type amino acid transporter 2 (LAT2) with its subunit 4F2hc, whereas the l-type amino acid transporter 1 (LAT1) was not expressed in these cells. The C6 glioma cells expressed LAT1 but not LAT2 with 4F2hc. The [14C]l-leucine uptakes by the rat astrocyte cultures and C6 glioma cells were Na+-independent and were completely inhibited by the system l selective inhibitor, BCH. These results suggest that the transport of neutral amino acids including several essential amino acids into rat astrocyte cultures and C6 glioma cells are for the most part mediated by LAT2 and LAT1, respectively. Therefore, the rat astrocyte cultures and C6 glioma cells are excellent tools for examining the properties of LAT2 and LAT1, respectively. Moreover, the specific inhibition of LAT1 in cancer cells might be a new rationale for anti-cancer therapy.     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。方法 采用微孔滤膜培养小室及室细胞联合培养法,进行人脐静脉内皮细胞系ＥＣＶ－３０４细胞与人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞的联合培养,并以免疫组化ＳＰ方法检测ＳＨＧ－４４细胞血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１～３ｄ后,ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂ     

黏液瘤病毒体外对胶质瘤细胞杀灭作用的研究

目的了解C6细胞在体外对黏液瘤病毒的易感性,并测定黏液瘤病毒对体外C6胶质瘤细胞的杀灭作用。方法以黏液瘤病毒感染体外培养的C6胶质瘤细胞,以灭活病毒作为阴性对照,5-Fu作为阳性对照,DEMD液做空白对照,应用Western—Blot法、倒置显微镜及MTT法观察各组细胞的形态、成活率。结果病毒感染组及5-Fu组24h后细胞成活率明显低于空白对照组及阴性对照组,同时病毒感染组细胞出现明显细胞病变。结论C6胶质瘤细胞在体外对黏液瘤病毒易感,黏液瘤病毒在体外对C6胶质瘤细胞有杀灭作用。