线粒体介导细胞凋亡和心肌保护新途径

在细胞凋亡过程中，线粒体起着主开关作用，线粒体通透性转换孔开放，线粒体跨膜电位耗损，细胞色素C和凋亡诱导因子释放到胞质中，通过两条途径分别导致细胞凋亡，Bcl-2家族蛋白以线粒体为靶位调控凋亡。线粒体KATP通道开放可以预防线粒体跨膜电位耗损而减少细胞凋亡，从而揭示了线粒体KATP通道开放产生心肌保护的新途径。     

心肌和脑保护中的新策略--线粒体途径

线粒体KATP通道被认为是心肌和脑缺血预适应和药物性预适应的效应器,线粒体膜电位耗散和继发的通透性转换孔道(PTP)的开放是细胞凋亡的上游途径.线粒体KATP通道开放可以预防线粒体膜电位的耗散.以线粒体为靶位的新型抗氧化应激和细胞凋亡的器官保护方法将有广泛的临床应用前景.     

心肌和脑保护中的新策略——线粒体途径

线粒体KATP通道被认为是心肌和脑缺血预适应和药物性预适应的效应器，线粒体膜电位耗散和继发的通透性转换孔道(PTP)的开放是细胞凋亡的上游途径。线粒体KATP通道开放可以预防线粒体膜电位的耗散。以线粒体为靶位的新型抗氧化应激和细胞凋亡的器官保护方法将有广泛的临床应用前景。     

NS5 ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡

目的探讨HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法将NS5ATP9基因表达质粒、NS5ATP9干扰RNA质粒及各自的对照空质粒转染到HepG2细胞中,48h后换无血清培养基培养24h诱导细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR验证转染后NS5ATP9mRNA表达水平的变化,采用Annexin V/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测Bax蛋白表达,综合观察NS5ATP9对HepG2细胞血清饥饿诱导凋亡的影响。结果 Annexin V/7-AAD检测结果显示,和对照组细胞相比NS5ATP9过表达组早期凋亡和总凋亡率显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组细胞的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率均显著增加(P0.05)。JC-1检测结果显示,和对照组相比NS5ATP9过表达组细胞线粒体膜电位保持正常形式的比例增加,而出现去极化电位形式的比例显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组线粒体膜电位保持正常形式的比例显著减少(P0.05)。Western blot检测结果显示,NS5ATP9干扰RNA组促凋亡分子Bax表达量显著升高(P0.05),NS5ATP9过表达组Bax表达量则有下降趋势。结论 NS5ATP9基因抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过线粒体途径实现。     

细胞色素C在ATP耗竭诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究线粒体细胞色素C的释放在ATP耗竭导致的肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断细胞内ATP的生成，诱导细胞凋亡。利用JC-1测定线粒体膜电位的变化。以间接免疫荧光和western印迹检测细胞色素C在细胞内的分布。荧光肽法测定Caspase3的活性。琼脂糖凝胶电泳分析DNA碎解。结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭时，线粒体膜电位显著降低，细胞浆内细胞色素C的含量增多，Caspase3活性增强。细胞内ATP再恢复时，细胞色素C的释放和Caspase3活性继续增加，并出现DNA的碎解。结论 肾小管上皮细胞ATP耗竭时，线粒体细胞色素C的释放在介导Caspase依赖的细胞凋亡通路中发挥重要作用。     

甘氨酸对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的 明确甘氨酸对缺血缺氧致心肌细胞凋亡过程的影响.方法 建立SD乳鼠心肌细胞缺血缺氧模型,分为单纯缺血缺氧组和甘氨酸处理组(培养液中加入终浓度5 mmoL/L甘氨酸,其余处理同单纯缺血缺氧组).以SD乳鼠正常心肌细胞作为对照组.3组细胞培养6 h后,检测凋亡情况、线粒体跨膜电位及分布情况、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性变化.结果 (1)细胞凋亡程度:对照组和甘氨酸处理组荧光强度均明显低于单纯缺血缺氧组(P<0.01).(2)线粒体跨膜电位:对照组心肌细胞荧光强度为73±4,单纯缺血缺氧组荧光强度(32±7)明显较弱(P＜0.01),甘氨酸处理组荧光强度(52±4)强于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).(3)mPTP开放情况:对照组心肌细胞线粒体荧光强度(90±7)较强,甘氨酸处理组荧光强度(62±8)明显强于单纯缺血缺氧组(27±4,P＜0.01).(4)caspase-3活性:对照组和甘氨酸处理组均显著低于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).结论 甘氨酸对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与改变线粒体膜电位、减少mPTP开放、减轻钙超载、降低caspase-3活性有关.     

尼可地尔预先给药对兔心肌缺血再灌注时心肌线粒体的影响

目的 评价尼可地尔预先给药对兔心肌缺血再灌注时心肌线粒体的影响.方法 雄性新西兰白兔32只,随机分为4组(n=8),假手术组(S组)仅在左冠状动脉旋支中点穿线;I/R组、尼可地尔组(N组)和尼可地尔+5-羟葵酸组(N+5-HD组)均进行心肌缺血30 min.N组和N+5-HD组缺血前10 min静脉注射尼可地尔100μg/kg负荷量,随后以10μg·kg-1·min-1的速率静脉输注至缺血前即刻;N+5-HD组在缺血前20 min静脉注射线粒体ATP敏感性K+通道阻断剂5-羟葵酸5 mg/kg.再灌注120 min时,取心肌组织,测定线粒体膜电位、心肌Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)表达水平,计算Bcl-2和Bax表达的比值(Bcl-2/Bax).电镜下观察线粒体超微结构.结果 与S组比较,其余3组线粒体膜电位、Bcl-2/Bax降低,Cyt c表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,N组线粒体膜电位、Bcl-2/Bax升高,Cyt c表达下调(P＜0.05).N组线粒体损伤程度轻于I/R组.5-羟葵酸可逆转尼可地尔导致的上述改变.结论 尼可地尔预先给药可保护线粒体膜电位,减少Cyt c易位至胞浆,从而抑制兔心肌缺血再灌注时细胞凋亡,其机制与开放线粒体ATP敏感性K+通道有关.     

低表达蛋白HAX1对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察低表达蛋白HAX1对Hela细胞维持线粒体膜电位及细胞凋亡的影响.方法 利用RNA干扰技术抑制Hela蛋白HAX1表达3 d后,利用阳离子脂质荧光染料JC-I标记法和流式细胞仪检测并比较实验组(蛋白HAX1低表达组)及对照组细胞线粒体膜电位变化趋势.加入H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡3 h后利用Annexin V-FITC法检测并比较两组细胞凋亡率.结果 对照组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为9.52%,实验组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为21.12%,实验组细胞线粒体膜电位降低比率多于对照组(P＜0.05).对照组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为21.80%,实验组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为31.73%.实验组细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 低表达蛋白HAX1不仅可以降低Hela细胞线粒体膜电位稳定性,而且促进Hela凋亡.     

高功率微波对人T淋巴细胞的影响机制和干预措施

目的：观察高功率微波辐照后人T淋巴细胞活性氧和线粒体跨膜电位的变化,并探索某些干预措施对其损伤后的影响。方法：采用DCFH-DA分子探针和荧光染料罗丹明-123结合流式细胞仪分别检测人T细胞经0、10、30、50mW/cm~2微波辐照及给予某些干预措施后细胞内活性氧和线粒体跨膜电位的变化。结果：(1)经10mW辐照后即可见T细胞内活性氧水平的升高,于30mW辐照后达到峰值;而10mW辐照后T细胞线粒体跨膜电位出现明显降低,于30mW辐照后降至最低。(2)于照前给予活性氧抑制剂能有效抑制T细胞内活性氧水平的升高;T细胞转入bcl-X_L基因后也能明显抑制细胞内活性氧水平的升高和线粒体跨膜电位的下降,高剂量组更为明显。结论：一定强度的高功率微波能引起T细胞活性氧和线粒体跨膜电位变化等早期凋亡事件的发生,活性氧抑制剂和bcl-X_L基因过表达能有效抑制这些早期事件的发生。     

ω-3多不饱和脂肪酸诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的观察ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)对SGC-7901人胃癌细胞系凋亡的影响并探究其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞形态学、DNA电泳和流式细胞技术对细胞生长与凋亡进行观察和分析,利用荧光探针rhodamine123检测线粒体跨膜电位,酶联免疫吸附法分析线粒体和胞质中细胞色素C的分布,气相色谱分析线粒体膜磷脂构成。结果二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)能显著抑制胃癌细胞的生长,诱发细胞凋亡,并呈现时间和剂量依赖性关系。40μg/mlEPA和DHA作用细胞24h后,线粒体跨膜电位显著降低(P<0.001),线粒体膜间细胞色素C大量释入胞质,EPA和DHA在线粒体膜磷脂构成中的比例迅速升高(P<0.001),而花生四烯酸(20:4ω-6,AA)占总磷脂的比例明显降低,由对照组的30.8%分别下降为20.9%和18.6%。结论ω-3PUFAs通过诱导细胞凋亡抑制胃癌细胞的生长,线粒体膜构成和功能的改变可能是ω-3PUFAs诱导凋亡的重要机制。