糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的 探讨糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的影响变化,阐明糖尿病冠状动脉损伤的分子机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立大鼠糖尿病动物模型,酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,全细胞膜片钳实验技术和Western blot分别记录和测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流和亚基的表达;采用荧光测定方法测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度.结果 当刺激电压＞100 mV时,糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度明显低于正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度(P＜0.05),在刺激电压为150 mV时,电流密度分别为(275±40)pA/pF(n=8)和(70±10)pA/pF(n=6);与正常组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),但β1亚基蛋白表达较低(P＜0.05);正常组和糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞内钙离于浓度分别为(92±7)nmol/L(n=5)和(151±18)nmol/L(n=6),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道电流密度下降及细胞内钙离子浓度升高可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因.     

糖尿病冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道开放概率及蛋白表达的变化

目的研究糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)及蛋白表达的影响,探讨糖尿病冠状动脉损伤的分子机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠动物模型,成功建立20只糖尿病大鼠动物模型作为糖尿病组;对照组(n=20)相应注射生理盐水。酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;采用Western blot实验方法测定大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道亚基的蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位为0,20,40,60,80,100和120 mV条件下,糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0明显低于对照组(P<0.05)。如刺激电位为120 mV时,对照组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0分别为1.210 5±0.048 1(n=5)和0.5217±0.1346(n=5);与对照组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达无差异(P>0.05),但β1亚基蛋白表达下降了63%(P<0.05)。结论糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道NP0降低可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。     

高血压大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的变化

目的研究在高血压背景下大电导钙激活钾(BK)通道的功能改变及其机制。方法用酶解消化方法分离12～16周龄自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCS),采用膜片钳全细胞模式记录SHR和WKY大鼠CASMCSBK电流,SHR和WKY大鼠BKα亚基和β1亚基mRNA水平用实时定量取聚合酶链式反应和凝胶电泳测定,蛋白水平表达用免疫组化的方法测定。结果 SHR大鼠CASMCS(n=6)BK电流密度比WKY(n=7)高2.03±0.62(P0.01);在mRNA水平,BKβ1亚基表达SHR组明显高于WKY组5.534±1.03倍(n=4,P0.05),BKα亚基表达则无明显差异(1.266±0.12,n=4,P0.05);BKβ1亚基和α亚基的表达SHR大鼠高于WKY大鼠。结论 SHR大鼠CASMCSBK电流密度比WKY大鼠增大,在mRNA和蛋白水平上BKβ1亚基表达也比WKY大鼠增强,这种变化可能是机体在高血压时自我调节的结果 。     

瞬时受体电位C通道和大电导钙离子激活钾通道复合体与血管张力调节

瞬时受体电位C通道(transient receptor potential canonical channel,TRPC通道)和大电导钙离子激活钾通道(1arge conductance Ca2+ -activated K+channel,BK通道)是血管平滑肌细胞上两类重要的离子通道,在血管收缩和舒张的过程中具有重要的调节作用[1-2].目前,人们对TRPC通道和BK通道各自的分子结构和功能已有一定的认识,但两者之间是否存在紧密联系,尚未完全清楚.     

姜黄素调控糖尿病小鼠主动脉平滑肌大电导钙激活钾通道β1亚基蛋白表达的研究

目的:探讨姜黄素对糖尿病小鼠主动脉平滑肌大电导钙激活钾通道β1亚基(BK-β1)蛋白表达的影响及可能的机制。方法:以注射链脲霉素的方法制备糖尿病小鼠模型,将雄性C57/BL6J小鼠分为4组:对照组、姜黄素对照组、糖尿病组和姜黄素糖尿病组,每组15只。姜黄素对照组和姜黄素糖尿病组给予姜黄素100 mg/(kg·d)灌胃,对照组和糖尿病组给予5%的羧甲基纤维素钠灌胃。灌胃8周后,Western blot检测腹主动脉BK-β1、肌肉环指蛋白1(MuRF1)、核因子κB1(NF-κB1)/p50和NF-κB/Rel家族成员RelA/p65的表达水平;免疫组化检测腹主动脉BK-β1和MuRF1的表达水平;动脉血管舒张反应性实验检测腹主动脉对BK通道激动剂NS-1619的反应性。结果:与对照组相比,糖尿病组的BK-β1的表达显著降低,MuRF1、NF-κB1/p50和RelA/p65的表达显著增加,腹主动脉血管环对NS-1619的舒张反应性降低(P0.05);与糖尿病组相比,姜黄素糖尿病组的BK-β1的表达显著增加,MuRF1、NF-κB1/p50和RelA/p65的表达显著降低,腹主动脉对NS-1619的舒张反应性显著改善(P0.05)。结论:姜黄素通过抑制MuRF1上调糖尿病小鼠主动脉平滑肌BK-β1表达,改善腹主动脉对NS-1619的舒张反应性,其机制可能与其抑制NF-κB的表达有关。     

不同降压药物干预对自发性高血压大鼠主动脉瞬时受体电位通道C亚族表达的影响

目的:研究雷米普利、缬沙坦和氨氯地平对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉(内膜及平滑肌)的瞬时受体电位通道C亚族3亚型及6亚型(TRPC3、TRPC6)表达的影响.方法:24只SHR随机分成4个组(η=6),1个SHR对照组,雷米普利组、缬沙坦组和氨氯地平组,采用灌胃法给药4周,另用6只Wistar鼠(WKY)作正常WKY组,观察给药治疗4周前后血压变化,实验结束时取主动脉组织进行TRPC3和TRPC6的检测,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测蛋白的表达.结果:SHR对照组与正常WKY组治疗前比较,血压明显增高(P<0.05),SHR对照组与正常WKY组治疗后比TR-PC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达显著增加(P均<0.05),差异均有统计学意义.药物治疗4周后,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组与治疗前比血压均有效地降低(P均<0.05),TRPC3的mRNA和蛋白表达均减少(P均<0:05),差异均有统计学意义.TRPC6的mRNA和蛋白表达改变不明显,雷米普利组、缬沙坦组、氨氯地平组间TRPC3、TRPC6的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义.结论:SHR大鼠主动脉TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达明显增高,给予雷米普利、缬沙坦和氨氯地平4周后血压下降,同时TRPC3mRNA和蛋白表达降低,提示TRPC3可能参与了SHR大鼠血压调控.     

碱性环境和高磷条件下大鼠胸主动脉平滑肌细胞成骨样表型转化中钙激活钾通道mRNA的表达

目的观察碱性环境中高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞中电导钙激活钾通道(KCa3.1)与大电导钙激活钾通道(KCa1.1)表达的变化,以及探究钙激活钾通道与大鼠胸主动脉平滑肌细胞表型转化之间的关系。方法采用组织块贴壁法培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞,利用10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化模型。使用HCl和Na HCO3调节培养基p H值。细胞随机分为5组:正常p H 7.4组、高磷p H 7.4组、高磷p H 7.7组、高磷p H 8.0组、TRAM-34干预组,共培养4天。用逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞中KCa3.1、KCa1.1α、KCa1.1β、Runt相关转录因子2(Runx2)和平滑肌22α(SM22α)表达。结果与正常p H 7.4组相比,高磷组Runx2水平明显升高,且随着p H升高而表达量增加(P0.05);高磷组SM22α水平明显下降,且随着p H升高而表达量减少(P0.05)。与正常p H 7.4组相比,高磷p H 7.4组KCa3.1表达升高(P0.05),KCa1.1α表达下降(P0.05)。在高磷组中,随着p H升高KCa3.1、KCa1.1α表达量增加(P0.05)。在同一组中KCa3.1表达高于KCa1.1α(P0.05)。KCa1.1β表达在3个高磷组间未见统计学差异(P0.05)。与高磷p H 8.0组相比,TRAM-34干预组Runx2mRNA水平明显下降(P0.05),SM22αmRNA水平明显上升(P0.05)。相关分析显示,KCa3.1表达与Runx2表达呈正相关(r=0.945,P0.01),与SM22α表达呈负相关(r=-0.926,P0.01);在正常p H 7.4组、高磷p H 7.4组中KCa1.1α表达与Runx2表达呈负相关(r=-0.746,P=0.029),与SM22α表达呈正相关(r=0.971,P=0.002);在高磷p H 7.7组、高磷p H 8.0组中KCa1.1α表达与Runx2表达呈正相关(r=0.805,P=0.002),与SM22α表达呈负相关(r=-0.806,P=0.005);KCa1.1β表达与Runx2、SM22α表达不相关(r=0.414,P=0.356;r=-0.155,P=0.714)。结论碱性环境中平滑肌细胞钙激活钾通道表达参与高磷诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞的表型转化。     

2型糖尿病大鼠胸主动脉上大电导钙激活钾通道α、β_1亚基蛋白及mRNA的变化

目的探讨不同病程T2DM大鼠胸主动脉上大电导钙激活通道(BKCa)蛋白及mRNA表达的变化。方法 60只大鼠被随机分成对照(Con)组10只和模型(M)组50只。Con组予常规饲养,M组采用高脂高糖饮食且腹腔注射小剂量STZ建立T2DM大鼠模型。免疫印记法和RT-PCR测定胸主动脉BKCa通道α,β1亚单位的蛋白和mRNA表达水平。结果 8周、12周M组BKCaα亚单位蛋白在胸主动脉中的表达为(0.942±0.324)和(0.925±0.521);BKCaɑ亚单位mRNA表达为(0.93±0.03)和(0.92±0.07)。(2)8周、12周M组BKCaβ1亚单位蛋白在胸主动脉中的表达为(0.452±0.25)和(0.401±0.34);BKCaβ1亚单位mRNA表达为(0.56±0.19)和(0.43±0.06)。与Con组比较,8周、12周M组β1亚单位蛋白和mRNA表达降低(P0.05)。结论 T2DM大鼠大血管上BKCa通道β1亚单位蛋白及mRNA的表达在8周及12周降低。     

ApN/TNF-α信号途径在有氧运动防治ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化过程中的抗炎症作用

目的观察有氧运动对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的防治效果,探讨脂联素(ApN)/肿瘤坏死因子(TNF)-α信号途径的抗炎症作用。方法 8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为对照组(C,10只)和运动组(E,10只)。14 w运动干预结束后取材观察主动脉管壁的病理变化,检测脂肪组织ApN mRNA表达和血清ApN水平及主动脉脂联素受体(AdipoR)1、TNF-α蛋白表达水平。结果 C组小鼠主动脉血管壁纤维板断裂,可见大量泡沫细胞浸润和纤维斑块,E组小鼠较C组主动脉病变有所延缓;E组小鼠ApN mRNA表达及血清水平显著高于C组(P0.05);E组小鼠主动脉AdipoR1蛋白表达显著高于C组(P0.05),主动脉TNF-α蛋白表达显著低于C组(P0.05)。结论有氧运动通过增强ApoE-/-小鼠ApN信号途径,抑制主动脉TNF-α蛋白表达,发挥防治AS的抗炎症作用。     

小鼠压力过负荷心衰心肌组织中转化生子因子-β1、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达

目的同步检测转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白在正常和心衰小鼠心肌中的表达,观察上述因子是否参与小鼠心衰的形成。方法选用昆明系雄性小鼠,制备压力过负荷心衰模型,分为正常对照组、假手术组及过负荷心衰组,利用蛋白印迹法检测三组心肌中的转化生子因子-β1、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达。结果与正常对照及假手术组比较,压力过负荷心衰组心肌组织中转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达均明显增强(均P0.05)。结论转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道参与小鼠压力过负荷心衰的形成过程。     

大电导钙激活钾通道结构与功能调节及其在疾病中的作用

正大电导钙激活钾通道(big-conductance Ca~(2+)-activated K+channel,BK通道)广泛表达于各种组织中,其激活具有钙和电压依赖性。激活血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)BK通道可引起膜电位超极化,舒张血管。BK通道由4个BK-α亚基和4个调节亚基组成,其中调节亚基包括β亚基(BK-β)或γ亚基(BK-γ)。研究表明,BK-β1亚基和     

转换生长因子-β_1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响

目的 研究转换生长因子-β_1(TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(HFLF)的窖蛋白-1、Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HFLF,以未加TGF-β_1的HFLF为对照组.分别以不同终浓度(2、5和10 μg/L)TGF-β_1处理的HFLF为实验组,每组5×10~8细胞,实验重复3次,逆转录-PCR和Western blot法分别检测TGF-β_1刺激3、6、12和24 h后各组窖蛋白-1及其mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达.组间均值比较采用单因素方差分析,采用直线回归模型进行相关性分析.结果 TGF-β_1作用后,HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系;TGF-β_1作用12 h,中剂量组(5 μg/L)窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达的积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P＜0.01);TGF-β_1作用24 h,中剂量组(5 μg//L)Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P＜0.01);相关分析结果显示,HFLF窖蛋白-1的蛋白表达下调与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调旱显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P＜0.05).结论 TGF-β_1可下调HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋门表达,并与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示HFLF窖蛋白-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关.     

血管紧张素原对动脉粥样硬化的作用及机制

目的探讨血管紧张素原(AGT)对动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法构建AS小鼠模型,RT-PCR检测AS小鼠斑块组织和正常小鼠主动脉血管组织中AGT的表达水平。以人巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)为研究对象,转染siRNA AGT、siRNA control,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后的AGT水平。MTT检测细胞转染后细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染后的细胞凋亡情况。Western印迹检测转染后细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 AS小鼠斑块组织中AGT的表达水平高于正常小鼠主动脉组织(P<0.01)。siRNA AGT可以有效抑制巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中AGT的转录表达。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7存活率与siRNA control组比较差异显著(P<0.01),转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC存活率与siRNA control组差异显著(P<0.01),抑制AGT的表达可以抑制巨噬细胞和平滑肌细胞的增殖。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01);转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01)。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7和主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中Caspase-3、Bax蛋白表达量显著高于siRNA control组,Bcl-2蛋白表达量显著低于siRNA control组(均P<0.01)。结论AGT在鼠AS斑块组织中过表达,抑制AGT可以抑制AS相关细胞增殖,促进细胞凋亡,作用机制与凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax有关。     

E3泛素连接酶对糖尿病冠状动脉大电导钙激活钾通道的调控及机制探讨

糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞上大电导钙激活钾通道(BK通道)功能异常,其表达下降受泛素-蛋白酶体系统的调控。F-box蛋白(FBXO)和肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)是参与调节BK-β1亚基蛋白泛素化的两种E3连接酶。FBXO和MuRF1蛋白表达增加,导致BK-β1亚基蛋白泛素化降解增加,表达减少,这可能是糖尿病时冠状动脉血管功能受损的机制之一。     

二十碳五烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制

目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(EPA)对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常组和糖尿病组,分离冠状动脉。采用微血管张力测定技术评估不同浓度(0.1、1、3、10、30、100μmol/L)EPA对正常和糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用并观察孵育(100nmol/L)大电导钙激活钾通道(BK通道)特异性阻滞剂伊比蝎毒素(IBTX)后血管张力的变化;酶消化法分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞并采用单通道膜片钳技术记录灌流不同浓度(0、10、30、100、300、1 000pmol/L)EPA时BK通道开放概率的变化;采用蛋白印迹技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉BK通道亚单位蛋白表达。结果 EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉舒张的比例随浓度升高而增加,孵育IBTX后舒张作用明显减弱;EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活随浓度升高而增强,且与正常组比较,EPA对糖尿病组大鼠冠状动脉的舒张作用及BK通道的激活作用较弱。两组大鼠冠状动脉BK通道蛋白α亚单位表达无差异,但糖尿病大鼠冠状动脉BK通道蛋白β1亚单位表达明显低于正常组(0.424 7±0.036 2vs 0.892 3±0.053 5,n=6,P0.05)。结论 EPA对糖尿病冠状动脉具有舒张作用,其机制与激活BK通道有关,糖尿病时BK通道β1亚单位表达减少,EPA对BK通道的激活作用减弱。     

BK表达在雌二醇介导的大鼠结肠平滑肌收缩中的作用

目的探讨大电导钙激活钾通道(BK)在17β-雌二醇(E2)介导的大鼠结肠平滑肌收缩中的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠去除双侧卵巢后背部皮下埋植30 mm硅胶管,内含不同溶液。随机分为以下4组:(1)对照组:溶剂玉米油;(2) E2组:含质量浓度为0. 3 g/L的E2,使血清E2保持在生理浓度;(3) EI组:含相同浓度E2及E2抑制剂(ICI 182780);(4)牛血清白蛋白结合E2(BSA-E2)组:含质量浓度为0. 3 g/L的BSA-E2。各组干预14 d后,免疫荧光、Western blotting及qRT-PCR检测结肠平滑肌组织BK分布及表达。免疫荧光双标法检测BK与α肌动蛋白共表达。不同时间及不同浓度E2刺激后,Western blotting及qRT-PCR检测结肠平滑肌细胞(SMCs)中BK表达;检测E2、雌激素受体阻断剂ICI 182780、BSA-E2、雌激素α受体激动剂PPT及β受体激动剂DPN对结肠平滑肌BK表达的影响。结果 E2组结肠平滑肌BK表达高于对照组、EI组及BSA-E2组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结肠SMCs上存在BK。50 nmol/L E2刺激24 h可显著促进BK表达。与对照组相比,E2组、雌激素β受体激动剂DPN组均可上调结肠SMCs BK表达(P 0. 05)。EI组、BSA-E2组与对照组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 E2可上调BK表达,此作用可由β受体介导。     

L及T型钙离子通道α1亚基在风湿性房颤心房组织中的表达变化

目的研究正常窦律(NSR)、风湿性瓣膜病窦律(RSR)及风湿性瓣膜病房颤(RAF)三组患者右房组织中L型钙离子通道α1C和T型钙离子通道α1G、α1H亚基mRNA及蛋白的表达差异。方法术中获取各组患者(NSR=10,RSR=11,RAF=16)少量右房标本,实时荧光定量RT-PCR对各组α1C、α1G及α1H亚基的mRNA丰度相对定量(2-ΔΔCt法);蛋白免疫印迹法比较三种α1亚基蛋白表达水平。结果与NSR及RSR组相比,RAF组的α1C及α1H的mRNA丰度及蛋白水平显著上调(P0.05),α1G表达水平三组间差异不显著;三种α1亚基在NSR及RSR两组间表达水平无显著差异。结论房颤时,α1C及α1H亚基表达水平上调,而α1G亚基表达水平不变;风湿性因素对L及T型钙离子通道的表达并无直接影响,但不能排除其对钙离子通道功能发生影响的可能。     

糖尿病小鼠主动脉平滑肌ROS/NF-κB信号通路对MuRF1介导的BK-β1降解的调控作用

目的 探讨糖尿病小鼠主动脉平滑肌活性氧簇（ROS）/核因子-κB（NF-κB）信号通路对肌肉环指蛋白（Muscle RING finger，MuRF）1介导大电导钙激活钾通道β1亚基（BK-β1）降解的调控机制。 方法 腹腔注射链脲霉素制备1型糖尿病小鼠模型，将雄性C57/BL6J小鼠分为6组（每组15只）:对照组，对照+N-乙酰半胱氨酸（NAC，ROS清除剂）组，对照+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC，NF-κB抑制剂）组，糖尿病组，糖尿病+NAC组，糖尿病+PDTC组。对照+NAC组和糖尿病+NAC组给予NAC 100 mg/（kg·d）腹腔注射治疗，对照+PDTC组和糖尿病+PDTC组给予PDTC 50 mg/（kg·d）腹腔注射治疗，对照组和糖尿病组给予同等体积的生理盐水腹腔注射。药物治疗12周后，Western blot检测胸主动脉BK-β1、MuRF1、RelA/p65的表达水平；动脉血管舒张反应性实验检测胸主动脉血管环对BK通道的激动剂NS-1619的反应性；酶消化法急性分离小鼠胸主动脉平滑肌细胞，全细胞膜片钳实验技术记录小鼠胸主动脉平滑肌细胞BK通道的电流。 结果 与对照组、对照+NAC组和对照+PDTC组相比，糖尿病组的BK-β1的表达显著降低（P<0.05），MuRF1和RelA/p65的表达显著增加（P<0.05），胸主动脉血管环对NS-1619的舒张反应性降低（P<0.05），当刺激电压>50 mV时，糖尿病组胸主动脉平滑肌细胞BK通道电流显著降低（P<0.05）；与糖尿病组相比，糖尿病+NAC组和糖尿病+PDTC组的BK-β1的表达显著增加（P<0.05），MuRF1和RelA/p65的表达显著降低（P<0.05），胸主动脉血管环对NS-1619的舒张反应性显著改善（P<0.05），当刺激电压>50 mV时，糖尿病+NAC组和糖尿病+PDTC组胸主动脉平滑肌细胞BK通道电流显著增加（P<0.05）。 结论 NAC和PDTC可抑制糖尿病小鼠胸主动脉平滑肌MuRF1介导的BK-β1降解，ROS/NF-κB信号通路可能是参与调控MuRF1介导的BK-β1降解。     

特异性Kv1.3通道阻断剂对大鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究特异性Kv1.3通道阻断剂对高脂喂养大鼠主动脉动脉粥样硬化(AS)发生的影响。方法构建AS大鼠模型,Wistar大鼠被随机分为正常对照(Control)组,AS组,AS药物治疗〔AS+Sh K(L5)〕组(n=10)。利用组织病理学方法观察三组大鼠主动脉组织病变;通过实时荧光定量PCR、Western印迹法检测大鼠主动脉组织Kv1.3通道和相关炎症因子表达水平;通过ELISA法检测大鼠外周血炎症因子水平。结果与Control组比较,AS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平均显著增高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,而AS组和AS+Sh K(L5)组之间血脂水平均无差异(P>0.05)。大鼠主动脉组织HE染色显示AS组大鼠主动脉内膜增厚,中层平滑肌排列紊乱,炎症细胞浸润;AS+Sh K(L5)组较AS组主动脉组织病变有所减轻。mRNA水平,AS组Kv1.3道通和炎症因子干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-2、IL-10、IL-4、IL-1β的表达量明显高于Control组,而在AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。蛋白水平中AS组Kv1.3道通和炎症因子(IFN-γ、IL-2和IL-10)的表达量明显高于Control组,而AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。AS组大鼠外周血炎症因子(IL-2、IFN-γ和IL-10)的水平较Control组升高,而AS+Sh K(L5)组较AS组有所降低。结论特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)能有效地抑制免疫细胞的活化,降低炎症因子的表达水平,从而减轻病变血管组织的炎症反应,同时可降低外周血炎症因子的水平,特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)对AS的发生有一定的抑制作用。     

血压变异性对Sprague Dawley大鼠主动脉及心肌组织瞬时受体电位通道6表达的影响

目的研究血压变异性(BPV)对Sprague Dawley(SD)大鼠主动脉及心肌组织瞬时受体电位通道6(TRPC6)表达的影响,探讨TRPC6与BPV的关系。方法 20只10周龄雄性SD大鼠随机分为两组,去窦弓神经(SAD)手术组和假手术组,每组10只。术后8周测量两组大鼠BPV、左心室质量指数(LVMI)以及主动脉和心肌组织中TRPC6的mRNA和蛋白表达。计算大鼠收缩压和舒张压的均数及标准差,并以标准差作为该时段的BPV。结果 SAD组24h收缩压标准差[(12.6±3.4)比(7.0±2.1)mmHg]及舒张压标准差[(8.2±3.8)比(3.4±0.5)mmHg]、LVMI[(2.19±0.06)比(1.71±0.04)mg/g]、主动脉及心肌组织中TRPC6的mRNA和蛋白表达均明显高于假手术组(均P<0.05)。结论 BPV增大时,大鼠主动脉及心肌组织TRPC6表达量增加。