儿童免疫性血小板减少症DNA甲基转移酶mRNA的表达

目的通过检测免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血淋巴细胞中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)m RNA的表达,探讨DNA甲基化与儿童ITP发病机制之间的联系。方法采用RT-PCR方法检测36例新诊断ITP患儿与26例健康体检儿童外周血淋巴细胞中Dnmt1、Dnmt3a m RNA的表达水平;并进行分析比较。结果新诊断ITP患儿外周血淋巴细胞中Dnmt1的m RNA表达为(3.02±0.49),较对照组(4.58±0.52)明显降低,差异有统计学意义(t=11.95,P0.01);ITP患儿Dnmt3a m RNA的表达为(1.49±0.44),较对照组(2.41±0.32)明显降低,差异有统计学意义(t=9.12,P0.01)。结论新诊断ITP患儿可能存在DNA低甲基化,这种DNA低甲基化与儿童ITP发病机制关系密切。     

sCD40L在儿童免疫性血小板减少症的表达研究

目的研究sCD40L在儿童免疫性血小板减少症(ITP)中的表达,探讨其在儿童ITP发病中的作用及临床意义。方法应用酶联免疫吸附法检测40例儿童ITP患儿血清sCD40L水平,40例健康体检儿童作为正常对照组,并对sCD40L与血小板计数进行相关分析。结果(1)血清sCD40L浓度:ITP患儿血清sCD40L浓度为(2.93±1.22)ng/mL,正常对照组为(2.35±1.19)ng/mL,ITP患儿血清sCD0L浓度明显高于正常对照组,差异显著,有统计学意义(t=2.139,P=0.036)。(2)sCD40L水平与血小板计数的相关性:相关分析显示,ITP患儿血清sCD40L水平与血小板计数无相关性(r=0.178,P=0.273)。结论血清SCD40L增高与血小板活性增强有关,而与血小板数量无关。sCD40L高表达导致的CD40L/CD40传导通路异常可能参与了儿童ITP的发病机制,阻断此传导通路可能为慢性难治性ITP患儿的靶向治疗提供一个新的治疗方向和思路,有待进一步研究。     

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞凋亡信号蛋白表达的临床意义

目的检测凋亡信号蛋白死亡结构域(FADD)、Fas、FasL和核因子κB(NF-κB)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞中的表达,探讨其对T细胞凋亡的影响及其临床意义。方法无菌采集35例ITP患儿及30例健康儿童外周血,T细胞分离富聚柱法分离纯化T细胞,流式细胞仪检测T细胞凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达;免疫组化法检测FADD、NF-κB P65蛋白的表达。结果ITP患儿T细胞凋亡信号蛋白Fas、FADD表达与正常儿童比较明显下降,FasL、NF-κB P65表达显著上升,差异均有显著性意义(P均<0.05);患儿外周血T细胞凋亡率明显降低,并与血小板计数呈对数正相关(r=0.880 P<0.05)。结论ITP患儿可通过下调引起T细胞凋亡的信号蛋白Fas、FADD表达,同时上调活化增殖蛋白FasL、NF-κB P65表达,导致ITP患儿T细胞凋亡减少、活性增强,引起血小板大量损伤。     

急性白血病患儿DNA甲基转移酶基因表达的临床预后价值

目的 通过检测DNA甲基转移酶(DNMT)基因在AL患儿中的表达水平,探讨其与临床预后之间的相关性.方法 采用半定量反转录聚合酶链反应方法 对56例AL患儿和20例对照儿童的骨髓进行DNMT1、DNMT3A、DNMT3B 和p15、mdrl mRNA水平检测.结果 在56例AL患儿中DNMT1阳性率为73.2%(41/56例);DNMT3A阳性率为67.9%(38/56例);DNMT3B阳性率为64.3%(36/56例);三者同时阳性者31例,同时阴性者4例,至少1种DNMT阳性者21例;p15 阳性率为19.6%(11/56例);mdrl阳性率为28.6%(16/56例).AL患儿3种DNMT表达均显著高于对照组(P＜0.01), AL患儿3种DNMT基因表达之间呈显著正相关,表现为协同高表达;p15、mdrl与DNMT表达呈显著负相关(rDNMT1-p15=-0.578;rDNMT1-mdr1=-0.603;rDNMT3A-p15=-0.463;rDNMT3A-mdr1=-0.396;rDNMT3B-p15=-0.624;rDNMT3B-mdr1=-0.735 Pa＜0.01),p15、mdrl之间则无相关性(r=0.012 P=0.326).3种DNMT1、DNMT3A、DNMT3B同时阳性者,化疗后完全缓解率为87.1%(27/31例),三者同时阴性者无1例缓解,至少1种DNMT阳性者完全缓解率为66.7%(14/21例)(P<0.01).结论 DNMT基因在AL患儿呈异常高表达,尽管其阳性率较成人低,其通过促使抑癌基因启动子区域甲基化失活,从而导致白血病恶性克隆的形成.对于高表达DNMT的AL患儿,可能对化疗更敏感,提示DNMT基因高表达可能是AL患儿临床预后较好的指标.     

特发性血小板减少性紫癜患儿血小板膜糖蛋白表达及临床意义

目的 检测儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)血小板膜糖蛋白(GP)的表达并探讨其临床意义.方法 采用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)法检测80例ITP患儿GP Ⅰ b/Ⅸ、GPⅡb、GPⅢa、GPⅠ b的阳性表达率.分别观察总ITP患儿、不同性别ITP患儿、急慢性ITP患儿GP阳性表达率与ITP疗效的关系.结果 80例ITP患儿中GP阳性组与阴性组的疗效比较差异有统计学意义(x2=8.535,P＜0.01);44例男性ITP患儿与36例女性ITP患儿GP阳性组与阴性组间疗效比较差异无统计学意义(x2=0.013,P＞0.05),组内比较差异有统计学意义(男:x2=4.156,P＜0.05;女:x2=4.433,P＜0.05);67例急性与13例慢性ITP患儿GP阳性组与阴性组间疗效比较差异有统计学意义(x2 =23.513,P＜0.001),急性ITP患儿组内比较差异有统计学意义(x2 =4.157,P＜0.05),慢性ITP患儿组内比较差异无统计学意义(x2 =0.410,P＞0.05).结论 儿童ITP患儿疗效与GP阳性表达率明显相关,GP阳性率在一定程度上可以反映患儿的病情程度,作为判断儿童ITP疗效及监测预后的指标之一.     

急性特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞蛋白激酶C活性的分析

目的探讨急性特发性血小板减少性紫癜(acuteidiopathicthrombocytopenicpurpura,AITP)患儿外周血T细胞蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的活性变化及其与T细胞活化和血小板减少程度之间的关系。方法无菌采集35例急性ITP患儿及30例正常儿童外周抗凝血,用T淋巴细胞分离富集柱法分离纯化T细胞,分别用非同位素标记法检测T细胞PKC的活性变化,用流式细胞仪检测T细胞活化标志FasL蛋白的表达,血细胞计数仪计数血小板。结果急性ITP患儿T细胞PKC的总活性与正常儿童相比明显增强[(0.97±0.21)nmol/(min.ml)、(0.55±0.13)nmol/(min.ml),P<0.01],T细胞活化标志FasL蛋白表达与正常儿童比较显著升高[ThFasL:(32.7±3.4)%、(14.7±4.2)%;TcFasL:(17.3±9.7)%、(11.6±8.5)%,P<0.01],并且T细胞PKC的活性变化与ThFasL、TcFasL的表达均呈显著正相关(r1=0.68,r2=0.53,P<0.05),与血小板计数呈显著负相关(r=-0.75,P<0.05)。结论急性ITP患儿外周血PKC活性增强可引起患儿T细胞的活化,活性T细胞增多可导致患儿血小板大量损伤,并引起临床症状,提示PKC信号传导在急性ITP的免疫病理机制中发挥重要作用。     

Foxp3及NFAT1在再生障碍性贫血患儿中的检测及意义

目的 研究再生障碍性贫血(简称再障)患儿治疗前后外周血中Foxp3 及NFAT1 蛋白表达水平的变化,探讨其在再障发病中的作用。方法 提取60 例正常儿童(对照组)和68 例治疗有效的再障患儿治疗前后外周血中的单个核细胞,采用免疫印迹法检测Foxp3、NFAT1 蛋白的表达,并分析Foxp3、NFAT1 蛋白表达的相关性及其与外周血血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)数量的相关性。结果 再障组患儿治疗前(发病期)外周血中Foxp3、NFAT1 蛋白的表达较对照组明显降低(PPr=0.812,PP结论 再障患儿外周血中Foxp3、NFAT1 蛋白表达水平降低,提示其在再障的发病过程中起重要作用;外周血Foxp3、NFAT1 蛋白表达水平在一定程度上可以提示病情的变化。     

Toll样受体在儿童ITP的表达及临床意义

目的探讨外周血血小板表面天然免疫分子TLR2、TLR4表达的变化及相关性在儿童特发性减少性紫癜(ITP)发病中的意义。方法采用流式细胞学技术检测24例急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿、20例慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患儿和20例对照儿童外周血血小板表面TLR2、TLR4的水平。采用SPSS13.0进行统计学分析,P<0.01为差异有统计学意义。结果AITP组、CITP组患儿CD41+TLR2+、CD61+TLR4+阳性率显著低于对照组(P<0.01);并且AITP组显著低于CITP组(P<0.01);两者的表达呈正相关(rs=0.65,P<0.01)。结论联合检测外周血血小板表面TLR2和TLR4表达的变化有助于进一步研究儿童ITP的发病机制,有望成为ITP患儿早期分型的指标之一。     

特发性血小板减少性紫癜患儿血清B细胞激活因子变化的意义

目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿血清B细胞激活因子(BAFF)水平变化的意义。方法采用双抗体夹心ELISA法,对2008年4-11月初次在本院住院的42例ITP患儿(试验组)治疗前的血清BAFF水平进行检测,并进行血小板计数(BPC);同时检测40例拟择期手术患儿(对照组)血清BAFF水平。比较试验组治疗前后与对照组血清BAFF水平的差异,应用Pearson直线相关分析法分析试验组患儿治疗前后血清BAFF水平与血小板的相关性。结果ITP患儿治疗前BAFF水平为(0.943 3±0.583 5)μg.L-1,治疗后BAFF水平为(0.454 5±0.216 0)μg.L-1,对照组BAFF水平为(0.538 9±0.234 7)μg.L-1。ITP患儿治疗前血清BAFF水平显著高于对照组和ITP患儿治疗后(Pa<0.01),治疗后BAFF的表达较治疗前明显降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析显示,外周BPC与血清BAFF水平呈负相关(r=-0.305,P<0.01)。结论增高的BAFF可能参与ITP的发病机制。     

B淋巴细胞激活因子表达水平在儿童特发性血小板减少性紫癜诊断及预后判断中的意义

目的研究B淋巴细胞激活因子(BAFF)表达水平在儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)诊断及预后中的应用价值。方法将2011年9月—2013年9月期间收治的初诊ITP患儿纳入研究组,同期健康体检儿童纳入对照组,检测两组对象血清中BAFF、抗血小板抗体PAIgG、PAIgM、PAIgA水平及血小板计数,观察治疗效果。结果急性型和慢性型ITP患儿外周血BAFF、PAIgG、PAIgM、PAIgA含量均高于对照组,PLT计数少于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。直线回归分析结果提示,BAFF含量与PAIgG、PAIgM、PAIgA的含量呈正相关(β=1.87~2.25,P均0.05),与血小板计数呈负相关(β=-2.42,P0.05);同时BAFF含量与疗效呈负相关(β=-1.88,P0.05)。当BAFF取值为1.35时,其诊断治疗有反应的灵敏度为0.84,特异度为0.75;ROC曲线下面积AUC为0.85(95%CI:0.73~0.98,P=0.000)。结论 ITP患儿血清中BAFF表达量增加,且与抗血小板抗体、血小板计数以及治疗效果具有良好的相关性,可作为诊断疾病和判断预后的良好指标。