比索洛尔对心力衰竭大鼠心肌肌浆网钙ATP酶2a活性的影响

目的:观察比索洛尔对心力衰竭大鼠心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)活性的影响。方法:采用阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、比索洛尔组、卡托普利组和比索洛尔+卡托普利组,分别以蒸馏水、比索洛尔、卡托普利、比索洛尔+卡托普利连续灌胃35d。观察大鼠心功能指标,ELISA法检测血浆脑钠肽水平,茎环状引物实时定量PCR检测心肌miR-25-3p表达水平,Western blot检测心肌SERCA2a和PLB蛋白表达水平,定磷法测定心肌SERCA2a活性。结果:比索洛尔组、卡托普利组和比索洛尔+卡托普利组大鼠心功能指标明显高于模型组,血浆脑钠肽水平明显低于模型组,miR-25-3p表达水平明显低于模型组,SERCA2a和受磷蛋白(PLB)蛋白表达水平明显高于模型组(P0.01)。比索洛尔组和比索洛尔+卡托普利组SERCA2a/PLB比值和SERCA2a活性明显高于模型组(P0.01或P0.05),卡托普利组与模型组比较无明显差异。结论:比索洛尔可以改善心力衰竭大鼠心功能,机制可能与下调心肌miR-25-3p表达水平,提高SERCA2a、PLB表达水平,提升SERCA2a/PLB比值,增强SERCA2a活性有关。     

比索洛尔对心力衰竭大鼠心肌肌浆网钙三磷酸腺苷酶2a活性的影响

目的观察比索洛尔对心力衰竭大鼠心肌肌浆网钙三磷酸腺苷酶2a(SERCA2a)活性的影响。方法采用阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为假手术组、模型组和比索洛尔组,分别以蒸馏水或比索洛尔连续灌胃35d。心脏超声检测大鼠心功能指标,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆脑钠尿肽水平,实时定量聚合酶链反应检测心肌miR-25-3p表达水平,Western blot检测心肌SERCA2a和受磷蛋白表达水平,定磷法测定心肌SERCA2a活性。结果与假手术组比较,模型组大鼠心输出量、左心室短轴缩短率(FS)、左心室射血分数(LVEF)、心肌SERCA2a和受磷蛋白表达水平、SERCA2a与受磷蛋白比值和SERCA2a活性降低[SERCA2a活性(0.029±0.025)比(0.088±0.062)U/mg pro;P0.01],血浆脑钠尿肽和心肌miR-25-3p表达水平升高。与模型组比较,比索洛尔组大鼠心输出量、FS、LVEF、心肌SERCA2a和受磷蛋白表达水平、SERCA2a与受磷蛋白比值和SERCA2a活性升高[SERCA2a活性(0.072±0.063)比(0.029±0.025)U/mg pro;P0.05],血浆脑钠尿肽和心肌miR-25-3p表达水平降低。结论比索洛尔可以改善心力衰竭大鼠心功能,下调心肌miR-25-3p表达水平,提高SERCA2a与受磷蛋白比值,增强SERCA2a活性。     

miR-526b-3p调控ERK1/2通路对阿霉素所致大鼠心脏损害的干预作用

目的 探究miR-526b-3p调控细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2通路对阿霉素(ADM)所致大鼠心脏损害干预作用。方法 选取40只健康雌雄各半SPF级Wistar大鼠为研究对象,空白组10只,建立心脏损害模型,分为模型组、miR-526b-3p上调组、miR-526b-3p下调组,各10只。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-526b-3p表达水平,检测各组心功能各指标水平,采用碱性二甲基亚砜-鲁米诺化学发光法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用酶联免疫双抗体夹心法检测心肌磷酸肌酸激酶(CPK)活性,采用Western印迹检测左心室组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的相对表达量。结果 与模型组相比,miR-526b-3p上调组miR-526b-3p表达水平、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVEDs)、心搏出量(SV)、左心室射血分数(LVEF)水平、SOD活性、CPK活性、心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2通路蛋白表达量均较高,miR-526b-3p下调组上述指标均较低;与miR-526b-3p下调组相比,miR-526b-...     

比索洛尔对自发性高血压大鼠心室肥厚、心肌纤维化和相关因子的影响

目的 探讨比索洛尔对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化、心室肥厚和相关因子的影响.方法 24只SHR随机分为比索洛尔组和对照组,血压正常的Wistar-Kyoto大鼠12只作为正常对照组(WKY组).比索洛尔组将比索洛尔按2mg/kg溶于1mL蒸馏水中灌胃,每日1次,其余两组给予等体积的蒸馏水灌胃,12周后测定左心室重量指数(LVWI)以及心肌羟脯氨酸(HC)浓度,RT-PCR技术检测心肌组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平.结果 比索洛尔组收缩压明显降低,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),HC、LVMI、MMP-2和VEGF表达水平低于对照组(P<0.05).MMP-2和VEGF的表达水平呈正相关((r=0.803,P<0.05).结论 比索洛尔可以抑制自发性高血压大鼠心室肥厚,有效抑制大鼠心肌纤维化的形成,其机制与抑制MMP-2表达水平从而抑制 VEGF的表达有关.     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌β_1肾上腺素能受体及心功能的调节作用

目的研究比索洛尔对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠β_1肾上腺素能受体(β_1-AR)心功能的调节作用。方法 SD 大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)组;COA+比索洛尔组;假手术组;假手术+比索洛尔组。采用超声心动图和心室插管法评估心功能,ELISA_法检测各组大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)水平,RIA 法检测心肌腺苷酸环化酶(AC)活性,通过 RT-PCR 检测心肌β_1-AR、β肾上腺素能受体激酶1(β-ARK1)和 Gi 蛋白 mRNA 的表达变化,Western blot 检测β_1-AR 蛋白水平的表达变化。结果 COA 组大鼠心功能恶化,血浆 NE 水平明显升高,β_1-AR mRNA 表达减少、β-ARK1和 Gi 蛋白 mRNA 表达增加,β_1-AR 的蛋白水平表达减少,AC 活性明显下降;比索洛尔明显改善大鼠心功能[射血分数:COA+比索洛尔组:(66.7±8.4)%比 COA 组:(43.3±7.7)%,P<0.05],降低血浆 NE 水平[COA+比索洛尔组:(570.2±41.2)pg/mL 比 COA 组:(908.24±75.10)pg/mL,P<0.05],增高...     

绞股蓝总皂苷对阿霉素致心力衰竭大鼠心功能的影响

目的观察绞股蓝总皂苷(GP)对阿霉素(ADR)致心衰大鼠心肌ATPase活性和肌浆网Ca2+-ATPase(SERCA2a)的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组,正常对照组(NC),阿霉素组(ADR),绞股蓝总皂苷低、中、高剂量组(L-GP,MPGP and H-GP)。大鼠腹腔注射ADR2.5 mg·kg-1·d-1,隔日1次,共6次,复制心衰模型。绞股蓝总皂苷低、中、高剂量组分别给予绞股蓝总皂苷50、100和200 mg·kg-1·d-1灌胃。第7周末,采集大鼠心室内压,分析心功能;电镜观察心肌组织超微结构变化,同时测定心肌组织ATPase活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)和SERCA2a活性;RT-PCR检测心肌SERCA2a mRNA表达。结果 (1)与NC组相比,ADR组大鼠LVSP和±dP/dtmax均明显下降,LVEDP上抬(P<0.05或P<0.01),心肌ATPase活性和SDH活性显著下降(P<0.01);SERCA2a活性和SERCA2a mRNA表达水平显著下降(P<0.01);电镜显示心肌细胞变性坏死;(2)与ADR组比较,给予中、高剂量GP后大鼠心功能均有改善,电镜下心肌细胞变性坏死程度及心肌细胞超微结构形态改变显著减轻,心肌ATPase活性、SDH活性和SERCA2a活性明显升高,SERCA2a mRNA表达水平增加(P<0.05或P<0.01)。结论绞股蓝总皂苷改善阿霉素致心衰大鼠心肌功能,其机制可能与升高心肌组织ATPase活性、SERCA2a活性有关。     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌β1肾上腺素能受体及心功能的调节作用

目的 研究比索洛尔对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠β1肾上腺素能受体(β1-AR)心功能的调节作用.方法 SD大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)组;COA 比索洛尔组;假手术组;假手术 比索洛尔组.采用超声心动图和心室插管法评估心功能,ELISA法检测各组大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)水平,RIA法检测心肌腺苷酸环化酶(AC)活性,通过RT-PCR检测心肌β1-AR、β肾上腺素能受体激酶1(β-ARaKl)和Gi蛋白mRNA的表达变化,Western blot检测β1-AR蛋白水平的表达变化.结果 COA组大鼠心功能恶化,血浆NE水平明显升高,β1-ARmRNA表达减少、β-ARKl和Gi蛋白mRNA表达增加,β1-AR的蛋白水平表达减少,AC活性明显下降;比索洛尔明显改善大鼠心功能[射血分数:COA 比索洛尔组:(66.7±8.4)%比COA组:(43.3±7.7)%,P<0.05],降低血浆NE水平[COA 比索洛尔组:(570.2±41.2)pg/mL比COA组:(908.24±75.10)pg/mL,P<0.05],增高β1-AR mRNA表达[COA 比索洛尔组:(57.5±5.4)比COA组:(44.9±4.2)P <0.05],降低β-ARKl和Gi蛋白mRNA表达[β-ARKl:COA 比索洛尔组:(38.0±3.2)比COA组:(52.4β4.1),P<0.05;Gi蛋白:COA 比索洛尔组:(72.8±5.8)%比COA组:(102.9±8.5)%,P<0.053,Western blot 检测显示比索洛尔也增加β1-AR的蛋白水平表达[COA 比索洛尔组:(59.2±4.8)%比COA组:(30.9±2.3)%,P<0.05],AC活性明显升高.结论 比索洛尔能够调节慢性心力衰竭大鼠β1-AR信号转导通路,改善心功能,延缓心力衰竭进展.     

比索洛尔对容量超负荷心力衰竭大鼠心室肌细胞钙调节蛋白的影响

目的观察容量超负荷心力衰竭大鼠心室肌细胞钙调节蛋白心肌浆网Ca2+-ATPase 2a(SERCA2a)、钠钙交换体1型(NCX1)的表达变化及富马酸比索洛尔干预对其的影响。方法成年雄性SD大鼠72只,随机分为对照组16只、假手术组16只、心力衰竭组20只和干预组20只,后2组采用腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘法制作容量超负荷心力衰竭模型。术后8周,干预组给予富马酸比索洛尔(1mg/kg,1次/d)灌胃,连续4周。术后12周后,采用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠心室肌细胞SERCA2a、NCX1mRNA及蛋白表达。结果心力衰竭组较假手术组SERCA2amRNA和蛋白(0.57±0.15 vs 0.96±0.03,0.20±0.17 vs 0.85±0.19)表达明显降低、NCX1mRNA和蛋白(2.26±0.36 vs 0.99±0.24,1.66±0.14 vs 0.28±0.05)表达明显升高;干预组较心力衰竭组SERCA2amRNA和蛋白(1.15±0.12 vs 0.57±0.15,1.11±0.20 vs 0.20±0.17)表达明显升高、NCX1mRNA和蛋白(1.03±0.26 vs 2.26±0.36,0.32±0.06 vs 1.66±0.14)表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论富马酸比索洛尔干预可部分逆转容量超负荷心力衰竭大鼠心室肌细胞钙调节蛋白表达的改变。     

藏红花素对慢性心力衰竭大鼠心肌损伤和能量代谢的影响

目的 探讨藏红花素调控微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/激活转录因子4(ATF4)轴对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌损伤及能量代谢的影响。方法 选择SPF级雄性SD大鼠84只,随机分为假手术组、模型组、藏红花素低、中、高剂量组、卡托普利组、藏红花素+miR-139-5p抑制剂组,每组12只。检测大鼠心功能指标、心肌组织病理学形态、细胞凋亡率、心肌损伤指标、心力衰竭指标、炎性指标、氧化应激指标、心肌组织ATP含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、miR-139-5p、ATF4 mRNA表达水平,验证miR-139-5p与ATF4的靶向关系。结果 与模型组比较,藏红花素各剂量组心肌细胞凋亡率、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、TNF-α、白细胞介素1β(IL-1β)、丙二醛、ATF4 mRNA表达降低,LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)、超氧化物歧化酶(SOD)、ATP含量、SDH活性、miR-139-5p表达升高(P&...     

比索洛尔与阿托伐他汀对高血压大鼠心肌纤维化影响的实验研究

目的探讨单独或联合应用比索洛尔与阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌纤维化的影响。方法采用两肾一夹方法建立肾性高血压大鼠模型。将24只大鼠随机分为比索洛尔组、阿托伐他汀组、比索洛尔联合阿托伐他汀组,每组各8只。12周后测量左心室重量指数(LVMI),检测心肌羟脯氨酸(HC)浓度,苦味酸-酸性品红(VG)染色检测心肌胶原容积分数(CVF),免疫组化法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果与治疗前相比,比索洛尔组与阿托伐他汀组血压、LVMI、HC、CVF均明显降低(P0.05)。MMP-9表达降低(P0.05),且比索洛尔组上述指标改善优于阿托伐他汀组,联合用药组较另外两组改善明显(P0.05)。结论比索洛尔与阿托伐他汀均能有效抑制大鼠心肌纤维化的形成,其机制与降低MMP-9表达水平有关,且比索洛尔疗效优于阿托伐他汀,联合用药组疗效更加明显,二者之间存在协同作用。     

比索洛尔对心力衰竭大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响

目的探讨比索洛尔对心力衰竭大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响。方法选取180~200 g SD大鼠36只,普通基础饲料喂养1 w后随机分为假手术组(12只)、心力衰竭模型组(12只)、比索洛尔治疗组(12只),术后第4周开始给予比索洛尔治疗组每日1次灌胃给药(2.0 mg·kg-1·d-1),共灌胃4 w。4 w后,超声心动测定左室舒张末径(LVDS)、室收缩末径(LVDd),左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS),测定大鼠血流动力学指标:心率(HR),左心室收缩压(LVSP),左室舒张末期压(LVEDP),左心室压变化速率最大值等。测定心肌超氧化物歧化酶(SOD)和心肌丙二醛(MAD)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠心功能明显降低(P<0.05),LVDS、LVDd明显扩大而LVEF、FS降低;SOD水平降低,MAD水平升高(均P<0.05)。与模型组相比,比索洛尔治疗组心功能明显改善,LVDS、LVDd明显缩小,LVEF、FS升高,SOD水平升高,MAD水平降低(均P<0.05)。结论比索洛尔可降低氧化应激水平,改善心力衰竭大鼠心功能。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌钙调蛋白活性和基因表达的影响

目的观察硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA)活性及钙调控蛋白基因表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、Na HS治疗组(Na HS+DM组)和Na HS对照组(Na HS组)。采用链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。测定大鼠的心系数;HE染色观察心肌组织的病理学变化;利用无机磷比色法测定大鼠心肌SERCA活性;RT-PCR检测心肌组织SERCA、受磷蛋白(PLB)、兰尼碱受体2型(Ry R2)和1,4,5-三磷酸肌醇受体2型(IP3R2)的基因表达。结果与NC组相比,Na HS组各项指标均无显著差异(P>0.05);而DM组心系数明显增大(P<0.01);心肌纤维排列紊乱,细胞肿胀明显,有炎细胞浸润;心肌SERCA的活性明显降低(P<0.01);SERCA、Ry R2和IP3R2m RNA表达降低(P<0.01),PLB m RNA表达增加(P<0.01)。与DM组相比,Na HS+DM组心系数明显降低(P<0.01),心肌病理学变化明显改善,SERCA活性明显增加(P<0.01),SERCA、Ry R2和IP3R2m RNA表达明显增加(P<0.01),PLB m RNA表达降低(P<0.01)。结论 H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与调节钙调控蛋白的基因表达,增强钙泵活性有关。     

长期运动对慢性心力衰竭大鼠左室重构的抑制作用

目的观察8 w运动对心力衰竭大鼠左室结构、功能和重构基因表达的影响,探讨运动改善左室重构的可能机制。方法 40只SD大鼠随机分为心力衰竭对照组(HC组,n=10)、心力衰竭运动组(HE组,n=10)、假手术对照组(SC组,n=10)和假手术运动组(SE组,n=10),心力衰竭模型采用冠状动脉结扎术。HE组和SE组进行8 w跑台运动,SC组和HC组在鼠笼内自由活动。超声心动图检测左室结构和功能;分离左室后行Masson染色法进行组织病理学观察并获得胶原容积分数(CVF);实时荧光定量PCR检测左室心肌心钠素(ANF)、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和肌质网Ca~(2+)-ATP酶(SERCA2a)mRNA表达量。结果 (1)与SC组比较,SE组大鼠左室出现离心性肥大,心功能提高,α-MHC和SERCA2a mRNA升高(P<0.05);(2)与SC组比较,HC组左室出现向心性肥大,心功能降低,CVF明显增加(P<0.05),心肌α-MHC和SERCA2a mRNA表达下调(P<0.05),ANF和β-MHC mRNA表达上调(P<0.05);(3)与HC组比较,HE组大鼠左室发生离心性肥大,心功能提高,CVF明显减少(P<0.05),心肌α-MHC和SERCA2a mRNA表达上调(P<0.05),ANF和β-MHC mRNA表达下调(P<0.05)。结论长期运动抑制心力衰竭大鼠左室重构并改善心功能,其机制与心肌纤维化程度减轻、胚胎基因表达下调、收缩蛋白表达上调有关。     

补阳还五汤对舒张性心力衰竭大鼠心肌钙转运蛋白表达水平的影响

目的研究补阳还五汤对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠心肌钙转运蛋白L型钙通道(LTCC)、兰碱尼受体(RyR2)、肌浆网上的钙泵(SERCA2a)和受磷蛋白(PLB)mRNA表达的影响,初步探寻补阳还五汤治疗DHF的作用机制和药物干预靶点。方法选择60只雄性SD大鼠,随机分为假手术组和造模组,造模组利用腹主动脉缩窄法建立DHF大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,每组7只。中药组给予补阳还五汤12.72 g/(kg·d)灌胃,西药组给予酒石酸美托洛尔0.004 5 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等量的去离子水灌胃,各组均每日灌胃1次。药物干预8周后,运用聚合酶链式反应法(PCR)检测LTCC、RyR2、SERCA2a和PLB的mRNA转录。结果各组LTCC mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P0.05);与假手术组相比,模型组、中药组RyR2 mRNA表达降低(P0.05),而西药组RyR2 mRNA的表达与假手术组差异无统计学意义(P0.05),中药组、西药组与模型组组间相比差异无统计学意义(P0.05)。模型组、中药组、西药组SERCA2a和PLB mRNA表达与假手术组相比均降低(P0.05),西药组、中药组SERCA2a和PLB mRNA表达与模型组相比均升高(P0.05),中药组与西药组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤可明显提高DHF大鼠SERCA2a、PLB的mRNA转录,有可能通过作用于这两种蛋白改善DHF大鼠左室舒张功能。     

miR-199a/mTOR在自发性高血压大鼠心肌纤维化和左心室肥厚中的作用机制研究

目的研究miR-199a和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)对自发性高血压(SHR)大鼠心肌纤维化和左心室肥厚的影响,并探讨其可能的作用机制。方法正常雄性WKY大鼠作为正常组(n=15),SHR大鼠随机分为SHR组(n=15)与抑制剂组(n=15)。正常组与SHR组大鼠尾静脉注射生理盐水,抑制剂组大鼠尾静脉注射miR-199a抑制剂。采用尾动脉容积法测定三组大鼠血压;超声心动图检测左心室舒张/收缩末期内径(LVEDD/LVESD)、左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、心肌缩短分数(FS)、左心室射血分数(LVEF);右颈总动脉插管记录心功能指标左心室压力最大升高或降低速率(+dp/dt,-dp/dt)、左心室舒张末期内压(LVEDP),测定左心室重量(LVM),并计算左心室质量指数(LVMI);HE染色、Masson染色观察大鼠心肌纤维化程度;实时定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(WB)分析心肌组织中miR-199a和mTOR的mRNA及蛋白表达情况;Pearson评估miR-199a和mTOR相关性。体外培养H9c2细胞,转染miR-199a mimic使其过表达,qRT-PCR、WB检测细胞中miR-199a和mTOR的mRNA及蛋白表达情况;荧光素酶活性检测mTOR是否为miR-199a的靶基因。结果与正常组相比,SHR组LVEDD、LVESD、IVST、LVPWT均升高,差异均有统计学意义(P均0.05);与SHR组相比,抑制剂组LVEDD、LVESD、IVST、LVPWT均降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与正常组相比,SHR组收缩压、LVM、LVMI、LVEDP均升高,+dp/dt、-dp/dt降低,差异均有统计学意义(P均0.05);与SHR组相比,抑制剂组收缩压、LVM、LVMI、LVEDP均降低,+dp/dt、-dp/dt升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。与正常组相比,SHR组病理学评分、心肌胶原纤维比例升高,差异均有统计学意义(P均0.05);与SHR组相比,抑制剂组病理学评分、心肌胶原纤维比例降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与正常组相比,SHR组心肌组织miR-199amRNA表达升高,mTOR的mRNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P均0.05);与SHR组相比,抑制剂组心肌组织miR-199a mRNA表达降低,mTOR的mRNA及蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-199a与mTOR的mRNA和蛋白表达均呈显著性负相关(r=-4.873,P=0.000;r=-5.126,P=0.000)。与空白对照组、阴性转染组相比,miR-199a过表达组miR-199a mRNA表达升高,mTOR的mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与阴性转染组相比,在转染3’UTR-Wt的细胞中,miR-199a过表达组组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而在转染3’UTR-Mut的细胞中,miR-199a过表达组与阴性转染组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-199a表达上调可能与自发性高血压大鼠心肌纤维化和左心室肥厚有关,其机制可能是通过靶向调控mTOR实现。     

缬沙坦对心力衰竭家兔心肌肌浆网钙调控相关蛋白基因的影响

目的探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌肌浆网钙泵(SERCA2)、受磷蛋白(PLB)基因表达的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法18只家兔随机分为3组,假手术组、心衰组和缬沙坦组,每组6只。通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及SERCA2、PLB基因的表达。结果与假手术组比较,心衰组左心室重量指数、心率、左心室舒张末压显著升高(P<0.05),左心室缩短率及LVEF明显降低(P<0.05);与心衰组比较,缬沙坦组左心室重量指数、心率、左心室舒张末压显著降低(P<0.05),左心室缩短率及左心室射血分数明显升高(P<0.05);心衰组SERCA2、PLBmRNA显著低于假手术组(P<0.05),缬沙坦组SERCA2、PLBmRNA显著高于心衰组(P<0.05)。结论缬沙坦长期干预心衰,能够改善心脏舒缩功能,可能与其上调肌浆网的钙调控蛋白SERCA2、PLB基因表达有关。     

miR-1a-3p对异丙肾上腺素造成大鼠心力衰竭心肌细胞线粒体结构变化的影响

目的探讨miR-1a-3p对异丙肾上腺素造成大鼠心力衰竭(心衰)心肌细胞线粒体结构变化的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和miR-1a-3p组,每组各10只。除空白对照组外,其余两组构建心衰模型,miR-1a-3p组予以miR-1激动剂干预。干预后1周行超声心动图检查,测定心肌组织miR-1a-3p以及心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C氧化酶(COX)和NADH脱氢酶亚基1(ND1)表达水平,观察心肌细胞凋亡和心肌组织线粒体超微结构。结果阴性对照组心肌组织miR-1a-3p及心肌线粒体SDH、COX和ND1表达水平均低于空白对照组,左心室收缩末期内径(LVESD)和左室舒张末期内径(LVEDD)大于空白对照组,左心室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)小于空白对照组,心肌细胞凋亡率高于空白对照组(P0.05);miR-1a-3p组心肌组织miR-1a-3p及心肌线粒体SDH、COX和ND1表达水平均高于阴性对照组,LVESD和LVEDD小于阴性对照组,LVFS和LVEF大于阴性对照组,心肌细胞凋亡率低于阴性对照组(P0.05);阴性对照组心肌组织有脂质沉积,肌丝排列紊乱,可见肌丝断裂或溶解,线粒体呈空泡样改变,miR-1a-3p组较阴性对照组好转。结论异丙肾上腺素致心衰大鼠心肌组织miR-1a-3p呈低表达,上调miR-1a-3p有可能通过增加心肌线粒体SDH、COX和ND1表达,抑制心肌细胞凋亡,减轻心肌线粒体结构和功能损害,改善心功能。     

miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡

目的]探讨miR-301影响冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制。 [方法]SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-301激动剂组(agomir miR-301组)、miR-301激动剂对照组(agomir NC组)、Wnt/β-catenin通路抑制剂组(Dkk1组)及agomir miR-301＋Dkk1组,每组10只。除对照组外,其余各组均高脂喂养建立大鼠冠心病模型,连续给药1周后,超声检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)等心功能指标。HE染色观察大鼠心肌组织形态,TUNEL检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-301表达,Western blot检测大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Wnt3a及β-catenin蛋白表达。 [结果]与对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS降低49.2%、49.1%,心肌组织miR-301表达水平降低69.0%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低60.7%、39.7%(P＜0.05),LVEDD、LVESD升高32.2%、99.6%,心肌细胞凋亡率升高1362.6%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高100.0%、114.6%(P＜0.05);与模型组相比,agomir miR-301组大鼠LVEF、FS升高71.4%、71.8%,心肌组织miR-301表达水平升高1935.5%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高102.4%、45.1%(P＜0.05),LVEDD、LVESD降低15.6%、39.2%,心肌细胞凋亡率降低65.0%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低70.2%、78.4%(P＜0.05),而Dkk1可逆转这种现象。 [结论]miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡。     

miR-30a对缺血再灌注损伤大鼠心肌组织的保护作用及机制

目的:研究miR-30a对缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制。方法:SD大鼠, 32只随机分为假手术组、模型组、Ad-control组、Ad-miR-30a组,每组各8只。除假手术组外,各组大鼠均通过结扎左冠状动脉45 min后恢复血流的方法制备心肌缺血再灌注模型,其中Ad-control组和Ad-miR-30a组分别转染Ad-control腺病毒空白载体和Ad-miR-30a腺病毒。采用qRT-PCR法检测各组大鼠心肌组织中miR-30a的相对表达量。UCG法检测左心室舒张末压(LVEDP)左心室内压峰值(LVSP),左心室压力上升和下降最大变化速率(±dp/dt_(max))等指标,评价miR-30a对大鼠心功能的影响。通过原位细胞凋亡(TUNEL)法检测各组大鼠心肌细胞的凋亡情况。蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织中Cleaved caspase-3、Caspase-3、 Bax、Bcl-2等蛋白的表达变化。结果:与假手术组相比较,模型组和Ad-control组大鼠miR-30a的相对表达量明显降低(P0.05),Ad-miR-30a组miR-30a的相对表达量显著提高(P0.01)。miR-30a的过表达能显著上调因为缺血再灌注损伤而下降的LVSP,±dp/dt_(max)值(P0.05),同时明显下调LVDEP值(P0.05),显著降低心肌细胞凋亡率(P0.05),显著降低心肌组织中的Cleaved caspase-3/Caspase-3、 Bax/Bcl-2的蛋白表达水平的比值(P0.01)。结论:miR-30a通过抑制心肌细胞凋亡显著改善缺血再灌注损伤,有可能成为缺血性心血管疾病的新治疗靶点。     

地尔硫(艹卓)对自发性高血压大鼠左心室舒张功能的影响及其可能机制

目的:观察地尔硫(艹卓)对自发性高血压大鼠(SHR)左心室舒张功能的影响,并探讨这种影响是否与肌浆网钙ATP酶(SERCA2)蛋白的表达、活性及心肌纤维化相关. 方法:将22只12周龄SHR随机分为地尔硫(艹卓)组(25 mg·kg-1·d-1,SHR-D),苯那普利组(10 mg·kg-1·d-1,SHR-B)和SHR空白对照组(蒸馏水灌胃,SHR-C);另设WKY大鼠7只为正常对照组(WKY).灌胃法给药18周后测定左心室心功能,计算左心室/体重比(LVW/BW),Western印迹杂交测定左心室心肌SERCA2的表达,无机磷比色法检测心肌肌浆网Ca2 ATPase活性.饱和苦味酸天狼星红染色分析胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA),估计心肌纤维化程度. 结果:SHR-D组和SHR-B组的LVEDP显著低于SHR-C组,SHR-D组和SHR-B组之间差异无统计学意义(P＞0.05).与SHR-C组相比,SHR-D组与SHR-B组的-dp/dtmax/MAP增加.地尔硫(艹卓)和苯那普利治疗明显增加SERCA2蛋白的表达(SHR-D:0.38±0.07,SHR-B:0.42±0.06,SHR-C:0.47±0.07)与活性(SHR-D:8.2±0.07,SHR-B:10.5±1.95,SHR-C:6.3±0.75).SHR-D组左心室内膜及心肌小动脉周围的胶原减少,其作用类似于SHR-B组. 结论:地尔硫(艹卓)可改善SHR左心室舒张功能,其机制可能与增加SERCA2蛋白的表达及活性,抑制心肌纤维化有关.