T细胞TCR CDR3受体库的高通量测序分析概况

T细胞是机体免疫功能的执行者,T细胞受体(TCR)是T细胞表面识别抗原的分子,也是T细胞产生免疫应答的第一个关键分子。TCR由胚系基因于胸腺中进行V(D)JC基因重排而形成,发育成熟的T细胞迁移至外周组成多样性的T细胞库,其中最能代表T细胞应答特征的分子为TCR高变区CDR3,在外周形成一个多样性的T细胞CDR3受体库(rep-ertoire),对TCR CDR3受体库研究,将为T细胞生理和病理特征的全面解析提供基础。     

基于超抗原的肿瘤基因治疗研究进展

超抗原是一些细菌的外毒素和病毒编码的蛋白质分子 ,它的一端与抗原提呈细胞上的主要组织相容性复合体Ⅱ类分子相结合 ,另一端识别TCR的Vβ片段 ,不需加工处理 ,能激活比普通抗原更多的T细胞。超抗原抗肿瘤的机制包括T细胞的直接杀伤作用和细胞因子的作用。基于超抗原的肿瘤基因治疗模式有单用单克隆抗体片段导向的超抗原抗肿瘤、超抗原基因转染抗肿瘤、超抗原基因联合其他基因抗肿瘤和膜锚定超抗原瘤苗抗肿瘤。基于超抗原的肿瘤基因治疗是一种新的肿瘤生物治疗模式 ,将为肿瘤的治疗带来新的希望     

超抗原对TCR Vβ组分具有不依赖于MHC-Ⅱ类分子的特异性

超抗原与TCR的特异性Vβ组分相结合,激活所有带有Vβ组分的T细胞。超抗原对T的刺激作用有赖于MHC-Ⅱ类分子阳性APC的存在。本文拟探讨超抗原是否必须借助MHC-Ⅱ类分子或能够直接被TCR组分所识别。作者以前的研究表明,链球菌超抗原(pep M5)对T细胞的刺激需要APC的辅助,当加入PMA和细胞因子或交联     

T细胞受体基因转导的研究和应用

T细胞受体（TCR）作为T细胞识别抗原的分子,在免疫应答和免疫调节中发挥重要的作用。利用转基因技术,将识别特定抗原的TCR基因转导到正常T细胞中,使其强制性表达了识别特异抗原TCR,从而达到发挥特异性免疫效应的目的,为产生有效的特异性免疫治疗开辟了一条新途径。     

自身免疫模型小鼠T细胞受体可变区β链(TCR Vβ)偏向取用研究进展

T细胞是机体的主要免疫细胞,且在适应性免疫中起到主要作用。而T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性受体,是识别抗原的主要部位;TCR具有多样性和特异性,其中,最具多样性的是T细胞受体β链可变区(TCR Vβ),TCR Vβ的研究可为临床疾病的诊断和治疗提供新的思路和方向。TCR Vβ家族在各种疾病的动物模型的研究中具有重要的意义和应用价值,本文将对Vβ亚家族偏向取用在小鼠模型中的研究进展进行综述。     

TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物的争议问题探讨

T细胞抗原受体(TCR)是T细胞表面的特征性标志分子,其与CD3分子组成的TCR-CD3复合体,是进行抗原识别,发挥细胞免疫重要功能的基础.一般认为,TCR必须识别抗原肽-MHC分子复合物才能活化T细胞,其中CD4+T细胞识别MHCⅡ类抗原,CD8+T细胞识别MHC Ⅰ类抗原.TCR分子是由两条不同肽链构成的跨膜蛋白,肽链的种类有α、β、γ、δ四种,根据组合的差异,可分为TCRαβ+T细胞和TCRγδ+T细胞,其中TCRαβ+T细胞在发挥特异性细胞免疫过程中发挥重要作用.有关TCRαβ分子识别抗原肽-MHC分子复合物的基本分子机制已形成了经典的免疫学理论,但其中有关MHC分子限制性、CD4及CD8分子的辅助性以及TCR分子α链与β链在识别过程中的地位及作用等问题还存在不少存有争议的地方,本文将介绍相关领域的研究进展,并结合自己的综合分析,对TCRαβ分子识别抗原肽-MHC复合物过程中的一些争议问题进行探讨.     

肿瘤抗原特异性 TCR 基因筛选

抗原特异性T 细胞受体修饰T 细胞(TCR-T)的过继性疗法已成为肿瘤生物治疗的研究热点,成功获得肿瘤抗原特异性的TCR 基因是肿瘤TCR-T 细胞治疗的重要前提。本文将聚焦于基于多细胞RT-PCR 扩增、基于单细胞RT-PCR 扩增和基于TCR 基因CDR3 片段长度多态性分析等几个方面简要介绍肿瘤特异性TCR 基因的筛选。     

人T细胞抗原受体基因的命名

<正>人T细胞抗原受体(TCR)是由二硫键连接的二条多肽链(αβ或γδ)经组成的异二聚体,属lg基因超家族,每条链具有与lg分子相似的V区、D区(仅对β和δ链)J区和C区.根据TCR的不同,可将T细胞分为αβ~+T细胞和γδ~+T细胞.人外周血中95%的T细胞为αβ~+TCR,其配体是MHC-抗原肽复合物;而γδ~+TCR一般仅表达于CD4~-CD8T细胞,这些γδ~+T细胞识别的抗原结构目前尚不清楚,但在机体抗感染免疫和抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用.从胸腺内的发育过程来看,αβ~+T细胞和γδ~+T细胞可能来源于同一祖先,而且γδTCR的表达要早于αβTCR,分别相当于妊娠第九周和第十周.     

一种新的免疫抑制性受体TIGIT

T细胞表面具有很多重要的膜分子,它们对于T细胞的活化、增殖和分化以及效应功能的发挥具有重要的作用。根据功能的不同,主要可以分为以下几类:(1)TCR-CD3复合物,使T细胞能够识别抗原提呈细胞上抗原肽-MHC分子复合物,并向细胞内传递活化信号;(2)CD4分子和CD8分子:分别辅助CD4+和CD8+T细胞的TCR识别抗原和参与T细     

免疫球蛋白超家族——细胞间表面识别结构

免疫球蛋白超家族是一个庞大的蛋白质家族,主要由免疫球蛋白(Ig)、T 细胞抗原受体(TCR)及 MHC Ⅰ、Ⅱ类抗原等组成,它们在结构上与免疫球蛋白有极大的相似性,编码此类蛋白的基因可分为多基因家族和单基因家族,此类蛋白的主要功能是介导细胞间的相互识别,目前对此类蛋白的进化过程尚未完全阐明。     

肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究

目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点.方法采用RT-PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ 24个基因片段,分析其TCR Vβ基因的表达情况,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现 10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因;9例GVHD患者外周血仅表达2～8个TCR Vβ亚家族,其中7例均表达Vβ3.对6例GVHD患者的基因扫描显示,均存在克隆性T细胞生长.结论移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制,部分基因片段呈选择性扩增.GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达,并有克隆性T细胞生成.     

以T细胞介导为主的自身免疫性疾病的干预策略

以T细胞介导为主的自身免疫性疾病包括寻常型银屑病、白塞病、自身免疫性甲状腺病、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病和多发性硬化症等。针对这类疾病发病机理, 人们不断调整治疗策略, 从传统的系统免疫抑制到近期的病理性T细胞生物靶向治疗, 以期达到最高疗效、最小副作用的目的,最大程度地降低对人体的损伤。1　T细胞识别抗原的分子基础人T细胞受体(Tcellreceptor, TCR)是由两条多肽链(αβ或γδ) 组成的异二聚体, 是T细胞识别抗原的主要分子。TCRαβ T细胞占末稍血成熟T细胞的 90% ~95%。αβ肽链又可分为V(variable)区、D(dive…     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体(TCR)Vβ 24个亚家族基因CDR3长度,可确定T细胞的克隆性.对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR Vβ T细胞出现倾斜性分布和克隆性生长的情况.肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR Vβ T细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖.这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的,对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗,清除肿瘤患者微小残留病变,具有重要的意义.     

T淋巴细胞抗原受体的抗体

T淋巴细胞的抗原受体在结构上与B淋巴细胞的典型抗原受体相似。T淋巴细胞受体是一种异源双体(heterodimer),具有可变区(V)和恒定区(C),都有相应的基因片段所编码。在个体发育过程中,编码V区的基因片段重新排列,形成成熟的受体链。抗原特异性的巨大差别是由于V区片段的多种选择翔各片段之间高度多样组合的结果。     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的 通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增，了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点．方法 采用RT—PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个基因片段，分析其TCR Vβ基因的表达情况，GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性．结果 经24个Vβ引物所分别进行的RT—PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况，发现10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同，病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建，仅表达5-22个亚家族基因；9例GVHD患者外周血仅表达2—8个TCR Vβ亚细胞生长．结论 移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制，部分基因片段呈选择性扩增．GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达，并有克隆性T细胞生成．     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.     

TCR/CAR修饰的T细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展和优化策略

过继性T细胞疗法在治疗癌症方面已显示出非凡潜力,特别针对B细胞恶性肿瘤。体外重定向工程T细胞主要使用2种不同策略。一种方法是向T细胞中引入全新设计的合成结构-嵌合型抗原受体(CAR),包含抗体片段(单链抗体scFv可变区)、跨膜结构域(带铰链/间隔区)和信号转导多重元件。另一种是利用T细胞受体(TCR)众所周知的能力:识别与主要组织相容性复合体(MHC)结合的特异性抗原肽,向T细胞中转入靶向癌症相关肽/人类白细胞抗原复合物(HLA)的TCR。虽然已有许多报道描述了这2种方法,但本综述重点关注最新进展。伴随早期成功,CAR也很快暴露出其合成结构亟待优化配置问题,而且对实体瘤的疗效还不理想。在诸多重要特征中,CAR/抗原复合体大小和化学计量的重要性逐渐显现。最近,在TCR介导的突变多肽(新抗原)作为T细胞反应靶点的T细胞免疫治疗研究表明,新抗原也许能为TCR介导的过继性T细胞疗法提供新契机。     

细胞表面识别结构与T细胞介导的混合杀伤作用

细胞介导的细胞毒作用是细胞免疫应答过程中的重要效应功能之一。各种效应细胞所介导的细胞毒作用具有不同程度的特异性。最令人注目的是抗原特异性T细胞介导的细胞毒作用受到T细胞受体(TCR)对位于靶细胞MHC编码的表面蛋白中的抗原肽片段的识别的限制。虽然经典的自然杀伤细胞(NK)介导的细胞毒作用是MHC非限制性的,但这种杀伤作用也需要一定的靶细胞特异性。除可介导抗     

乙肝疫苗无应答者CD4~+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征的研究

目的:研究乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征,分析乙肝疫苗有应答者和无应答者TCR Vβ基因单克隆改变的差异性。方法:采用多引物PCR技术扩增80例乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因22个家族的CDR3区基因片段,对PCR产物分别应用琼脂糖凝胶电泳和基因扫描两种方法检测。结果:80例乙肝疫苗接种者中有58例产生抗体,有22例未产生抗体。TCR Vβ基因单克隆改变主要集中在Vβ2、Vβ8、Vβ9、Vβ11和Vβ17五个家族上,乙肝疫苗无应答组这五个Vβ基因单克隆改变频率明显低于乙肝疫苗有应答组(P<0.01或P<0.05)。结论:CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化改变是影响机体对乙肝疫苗免疫应答效果的重要因素之一。