不同灸法对免疫抑制兔血细胞的影响

目的:观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔外周血细胞的影响。方法:大耳白兔50只随机分为5组,分别为空白组、模型组、隔药饼灸组、艾灸组、假药饼灸组。除空白组外均腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg,连续7 d,造成免疫抑制模型。3个治疗组分别进行隔药饼灸、艾灸、假药饼灸治疗,隔日灸,共灸10次。灸疗结束次日静脉取血,进行血细胞系列的检测。结果:与空白组比较,模型组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均显著降低(P0.01)。与模型组比较,隔药饼灸组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均升高,差异有统计学意义(P0.01);艾灸组RBC明显升高(P0.01);假药饼灸组9项指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论:隔药饼灸对因环磷酰胺所致的免疫功能低下状态具有明显的改善作用。     

不同灸法对免疫抑制兔脾脏指数及细胞因子的影响

目的：观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔脾脏指数及细胞因子 IFN-γ、IL-2及 IL-4的影响。方法将大耳白兔50只随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、艾灸组和假药饼灸组5组。除空白组外,其余4组均腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg ,造成免疫抑制模型。3个治疗组分别给予隔药饼灸、艾灸、假药饼灸治疗,隔日灸,共灸10次。治疗结束次日动物麻醉,取动物脾脏计算其脾脏指数,采用 ELISA 法测定匀浆上清液中 IFN-γ、IL-2、IL-4含量。结果环磷酰胺造模后,脾脏指数与空白组比较显著升高,差异具有显著的统计学意义（P＜0.01）,3个治疗组脾脏指数与模型组比较差异均有显著统计学意义（P＜0.01）,与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白组比较,艾灸组 IFN-γ、IL-4明显降低,模型组、假药饼组IL-4明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较,艾灸组 IFN-γ明显降低,隔药饼灸组IL-4显著升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论不同灸法对免疫抑制兔脾脏指数均有调节作用;隔药饼灸可使因环磷酰胺所致下降的IL-4显著提升。     

不同灸法对免疫抑制兔免疫球蛋白浓度的变化分析

目的 观察隔药饼灸与艾条灸对免疫抑制兔免疫球蛋白浓度变化的影响,并对其作用机理进行分析。 方法 将大耳白兔分为空白组、免疫抑制模型组、隔药饼灸组、艾灸组4组,每组10只,共40只。除空白组外,其余3组腹腔注射环磷酰胺(Cy)60 mg/kg,连续7 d,造成免疫抑制模型,每天上午注射,造完模2 d后,2个治疗组分别进行隔药饼灸和艾条灸,隔日灸,共灸10次。10次结束第2天动物麻醉后进行腹腔静脉取血,观察IgG、IgM和补体C3、C4含量的变化。 结果 与空白组相比,模型组中IgG、IgM、C3均明显降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01)。治疗后,隔药饼灸组中IgG浓度变化最为显著,与空白组、模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);IgM、C3浓度变化与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01);艾灸组中IgG、IgM、C3浓度变化与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),C3含量与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。 结论 不同灸法对环磷酰胺所致的免疫功能低下状态的免疫蛋白浓度均具有明显的提升作用,隔药饼灸效果优于艾条灸,表明了六味地黄汤药物与艾灸的协同作用。      

隔药饼灸不同灸量对免疫抑制兔体质量及细胞因子的影响

目的在前期证实隔药饼灸对免疫抑制调节作用的基础上,继续观察不同艾灸量对免疫抑制兔体质量及细胞因子IFN-γ、IL-2及IL-4的影响变化,以探索该项研究中灸量的最佳效应。方法 50只大耳白兔随机分为空白组、模型组、隔药饼灸3壮组、隔药饼灸5壮组和隔药饼灸7壮组,每组10只。除空白组外,其余各组经磷酰胺腹腔注射造成免疫抑制模型,造模结束后第2天,3个治疗组分别给予隔药饼灸3壮、5壮及7壮的治疗,隔日施灸,共灸10次。结束治疗后第2天动物称质量、麻醉,解剖取脾脏匀浆,酶联免疫法检测上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4含量。结果与模型组比较,隔药饼灸3壮组、5壮组、7壮组实验前后体质量差值均明显升高,差异有显著统计学意义(P0.01);与3壮组比较,5壮组、7壮组体质量差值升高明显,差异有显著统计学意义(P0.01)。隔药饼灸治疗后,与模型组比较,3壮组、5壮组、7壮组组织IL-4含量明显升高(P0.01,P0.05),5壮组、7壮组IFN-γ含量明显升高(P0.01),3壮组组织IFN-γ含量有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。与3壮组比较,5壮组、7壮组IL-4、IFN-γ含量明显升高(P0.05)。结论不同灸量对环磷酰胺所致动物体质量减轻均有程度不同的改善;隔药饼灸5壮组、7壮组对组织中细胞因子IFN-γ、IL-4含量均有明显提升作用。     

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉TLR2、TLR4、NF-κB表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块兔Toll样受体2(toll like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)变化的影响,探讨其可能的作用机制。方法将60只普通级新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、药物组,每组12只。通过高脂饲养+腹主动脉球囊损伤制作兔AS易损斑块模型。采用免疫组化法观察腹主动脉TLR2、TLR4、NF-κB的抗原活性;透射电镜观察腹主动脉超微结构。结果与空白组比较,模型组、直接灸组、隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值均显著升高(P<0.05或P<0.01);与直接灸组相比,隔药饼灸组和药物组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值明显升高(P<0.05或P<0.01)。电镜下观察,模型组较空白组主动脉内皮细胞病变更严重,内皮细胞内含大量脂质;直接灸组、隔药饼灸组、药物组内皮细胞大多形态正常,有少量脂质沉积。结论隔药饼灸稳定AS易损斑块的机制可能是通过降低TLR2、TLR4、NF-κB的抗原活性,下调其表达,以延缓AS的形成。     

隔药饼灸对慢性支气管炎模型大鼠外周血中中性粒细胞的影响

目的:观察隔药饼灸对慢性支气管炎大鼠外周血中中性粒细胞(PMN)的影响,以阐明其作用机制,为隔药饼灸防治慢性支气管炎提供实验依据。方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、核酪口服液组、穴位隔药饼灸4组,每组12只。观察大鼠的一般情况,用流式细胞术检测各组血清中中性粒细胞吞噬指数。结果:与模型组比较,穴位隔药饼灸和核酪口服液组PMN吞噬指数均有降低(P0.05),且穴位隔药饼灸组降低效果更优(P0.05)。结论:穴位隔药饼灸能改善慢支大鼠肺与气管组织损伤情况并控制炎症,其机制可能是通过降低大鼠PMN吞噬指数,起到有效控制炎症作用。     

隔药饼灸对慢性肾衰竭兔肾组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达的影响

目的:观察隔药饼灸对慢性肾衰竭兔肾组织中TGF-β_1、Smad3、Smad7蛋白表达的影响,探讨隔药饼灸抗慢性肾衰竭兔肾纤维化的分子机制。方法:健康新西兰纯种雄性兔45只,随机分为正常对照组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组、氯纱坦钾组。除正常对照组用等量蒸馏水灌胃外,其他兔用腺嘌呤灌胃21 d致兔肾间质纤维化,建立慢性肾衰竭动物模型。除正常对照组和模型组外各组分别进行相应干预,均持续3个月,其中穴位为Ⅰ组(肾俞、脾俞)、Ⅱ组(足三里、关元)交替。干预结束通过免疫组化法检测各组兔肾组织TGF-β_1、Smad3、Smad7蛋白表达。结果:免疫组化染色结果显示,与正常对照组比较,模型组兔肾组织TGF-β_1、Smad3阳性表达明显增加(P0.05),Smad7阳性表达明显降低(P0.05);与模型组比较,隔药饼灸组、直接灸组、氯纱坦钾组肾组织TGF-β_1、Smad3阳性表达均明显下降(P0.05),Smad7阳性表达明显升高(P0.05);隔药饼灸组Smad7阳性表达较直接灸组、氯纱坦钾组升高更明显(P0.05)。结论:隔药饼灸能有效干预慢性肾衰竭兔肾纤维化的形成,其分子机制可能是通过调节TGF-β_1/Smad信号通路发挥抗肾纤维化的作用。     

隔药饼灸对高脂血症合并动脉粥样硬化兔血清TNF-α、INF-γ含量的影响

目的观察隔药饼灸对高脂血症合并动脉粥样硬化兔血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)含量的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用的机制。方法 40只新西兰大耳白兔随机分为5组,每组8只,即正常组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组、辛伐他汀组。通过高脂饲料喂养建立高脂血症合并动脉粥样硬化兔模型,待造模成功后,除正常组外,其余四组均予以相应干预,每天1次,连续干预4周后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔血清中TNF-a、IFN-γ。结果与正常组比较,模型组、直接灸组、辛伐他汀组血清TNF-α、IFNγ的含量升高,且差异具有统计学意义(P0.01或P0.05);与模型组相比,直接灸组、辛伐他汀组、隔药饼灸组中血清TNF-α、IFNγ的含量均明显下降,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05);隔药饼灸组与正常组相比较,隔药饼灸组的血清IFNγ含量有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05),TNF-α与正常组相比含量增多,差异具有统计学意义(P0.05)。结论隔药饼灸对动脉粥样硬化兔血清相关炎性因子TNF-α、IFN-γ的影响是隔药饼灸抗动脉粥样硬化作用机制之一。     

六味地黄汤药饼在隔物灸过程中药饼量衰减变化的分析

目的:通过观察隔药饼灸治疗过程中药饼量的衰减变化为临床隔物灸应用提供保效思路和方法。方法:选用24只大耳白兔,随机分为隔药饼灸1壮组、2壮组、3壮组,每组8只。每组均选取神阙、肾俞(右)和足三里(右)穴,隔日1次,共灸5次,观察艾灸治疗后各穴位药饼的消耗量。用热电偶探针和温度记录仪记录实时温度,最高温度设定为50℃。结果:3组药饼消耗量肾俞高于神阙与足三里(P<0.01);在相同穴位,3壮组药饼消耗量高于2壮组(P<0.01),2壮组高于1壮组(P<0.01)。结论:隔药饼灸在不同穴位药饼消耗量不同,壮数越多,药饼消耗量越多。     

隔药饼灸对慢性支气管炎模型大鼠肺组织TNF-α蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察隔药饼灸对慢性支气管炎大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及其mRNA含量的影响。方法将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、隔纸垫灸组,每组12只。采取改良烟熏法复制慢性支气管炎大鼠模型,观察用隔药饼灸治疗后大鼠的一般情况,并与空白组、模型组、隔纸垫灸组进行对照,大鼠肺组织中的TNF-αmRNA的表达用RT-PCR法检测,肺组织中TNF-α的蛋白表达用Western blot法检测。结果与模型组相比,隔药饼组和隔纸垫组大鼠肺及气管的病理损伤均有好转;隔药饼灸组和隔纸垫灸组都能使慢支大鼠肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白含量表达降低(P0.05),且隔药饼灸组效果更好(P0.05)。结论隔药饼灸能改善慢支大鼠一般症状及气道炎症,提示其机制可能是通过下调TNF-α蛋白及其mRNA的表达达到治疗慢性支气管炎的目的。     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的 为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞.方法 以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1.传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能.结果 hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长.经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织.结论 SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能.     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。     

干细胞来源的胰岛素分泌细胞的研究进展

Ⅰ型糖尿病是由于胰岛β细胞被自身免疫系统攻击、破坏,不能正常释放胰岛素,导致血糖升高.患者需终生注射胰岛素,由于给药过程缺乏理想的血糖感应系统,常导致糖尿病大血管病变、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、神经病变及糖尿病足等慢性并发症的发生,是糖尿病死亡的主要原因[1].为了有效控制血糖,防止糖尿病并发症的发生,提高糖尿病患者的生存质量,目前主要采用两种治疗策略来改进胰岛素的治疗,一是胰岛素输入方式的改进:临床上广泛应用的胰岛素泵就是通过24 h不停地向患者体内输入微量胰岛素,模拟正常胰岛素分泌模式,控制血糖水平,减少并发症的发生.其次是寻找方法替代被患者自身免疫系统破坏的胰岛素分泌细胞,包括胰腺或胰岛移植、对非β细胞进行基因修饰以及对干细胞的诱导分化.70年代初,Lacy等成功地证明了移植胰岛细胞能够改善糖尿病大鼠的高血糖状态,胰岛细胞移植开始蓬勃开展起来.     

肝脏NK/NKT细胞及其生物学意义

对天然杀伤细胞（NK cell）的研究近年受到高度关注。研究发现，肝脏NK/NKT细胞含量在机体天然免疫反应时可增加10倍，可能是机体最大的专职天然免疫的器官，对抵御病理、寄生菌、恶性转化细胞等的侵害具有十分重要的意义。本文就肝脏NK/NKT细胞的功能特点和生物学特性、当前的研究进展及热点问题以及进一步研究的思路和切入点作一述评。     

牙周膜干细胞对脐血单个核细胞分化为破骨样细胞的影响

目的研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制。方法有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞。建立直接共培养和Transwell间接共培养体系。实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1 h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1×10-8mol/L)和前列腺素E2(1×10-6mol/L)。采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞(osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能。结果各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P<0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P<0.01)。结论牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显。     

Periodontal ligament stem cells improve peripheral blood mononuclear cells differentiation into osteoclast-like cells

目的 研究牙周组织改建过程中,牙周膜干细胞对破骨细胞形成的影响,初步探讨静压力和诱导因子对牙周膜干细胞调控破骨细胞形成的作用机制.方法 有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,密度梯度离心法分离脐血,收集单个核细胞.建立直接共培养和Transwell间接共培养体系.实验分组:A组,对照组(单纯共培养);B组,静压力组,共培养后第2天即对共培养细胞施加120 KPa压力,持续作用1h后继续培养;C组,诱导因子组,培养液中加入诱导因子1,25二羟基维生素D3(1 ×10-8 mol/L)和前列腺素E2(1×10-6 mol/L).采用倒置相差显微镜及TRAP染色,骨磨片染色等方法检测破骨样细胞( osteoclast-like cells,OLC)的形成及功能.结果 各组第3、7天OLC计数比较结果显示,施加静压力后,直接共培养组OLC数量明显多于间接共培养组(P＜0.01);而诱导因子组,直接共培养组OLC少于间接共培养组(P＜0-01).结论 牙周膜干细胞能够促进脐血单个核细胞分化为破骨样细胞,且在静压力作用下,两种细胞直接接触时,这种调控作用更为明显.     

肝干细胞－卵圆细胞的研究进展

卵圆细胞是肝脏干细胞的代表细胞,主要存在于幼肝及成人受损的肝脏中,是一种双潜能的肝脏干细胞,多种因素调节其分化,在此过程中动态表达一系列表面标志物。卵圆细胞的分化异常与肝癌的发生关系密切。在体外大量扩增卵圆细胞并使之分化为成熟的 有功能的肝细胞,为终末期肝病、肝脏的组织工程研究及基因治疗开辟了新的途径。 