片仔癀对局灶性脑梗死大鼠水通道蛋白4(AQP4)表达的影响

目的探讨片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层水通道蛋白4(AQP4)表达的影响及其分子作用机制。方法制备MCAO大鼠模型,将SD大鼠随机分为7组:假手术组,模型组,片仔癀大、中、小剂量组,尼莫地平组和脑得生组。造模前给药3d,造模后给药至第7天取材,采用免疫组织化学法观察各组大鼠大脑皮层AQP4的表达情况。结果与假手术组相比,各造模组AQP4的表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组AQP4的表达均显著下降(P<0.05);与尼莫地平组和脑得生组相比,片仔癀各剂量组AQP4的表达水平有所下降(P<0.05)。结论片仔癀可减少局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4的表达,减轻脑水肿,从而起到脑保护的作用。     

依达拉奉对创伤性脑水肿大鼠AQP4表达的影响

目的 探讨依达拉奉对创伤性脑水肿大鼠AQP4表达的影响。方法采用Wistar大鼠建立颅脑创伤模型,分成治疗组和模型组,并用假手术处理大鼠作为对照组。治疗组腹腔注射依达拉奉3mg／kg,每12h注射一次;模型组给予相同体积的生理盐水。分别于给药后6h、12h、1d,3d、5d处死各组大鼠,取出脑组织,测定脑含水量及AQP4mRNA表达水平。结果与模型组相比,12h后各个时间点治疗组脑组织含水量明显低于模型组（P均〈0．05）;模型组脑组织AQP4mRNA表达在3d达高峰,然后维持高水平表达,明显高于对照组（P〈0．05）;治疗组在6hAQP4mRNA表达水平最高,然后持续回落,5d时与对照组表达水平接近。结论依达拉奉可明显抑制脑水肿引发的AQP4表达上调,减轻脑水肿形成。     

高脂血症大鼠下颌下腺水通道蛋白2和4的表达

目的观察水通道蛋白(AQP)2和AQP4在高脂血症大鼠下颌下腺内表达的变化。方法雄性SD大鼠20只,随机分为对照组和高脂血症组;高脂血症组给予高脂饮食构建高脂血症动物模型;2个月后,取下颌下腺,分别进行苏木素-伊红(HE)和免疫组织化学染色。结果与对照组比较,高脂血症组大鼠下颌下腺腺泡轻度萎缩,直径变小;AQP2和AQP4主要表达在纹状管中,两组AQP2表达差异无统计学意义(P0.05),AQP4在高脂血症组表达明显下降(P0.05)。结论高脂血症可致大鼠下颌下腺形态学结构异常,AQP4表达下降,可能导致唾液分泌减少。     

左金丸及拆方对胃溃疡大鼠胃黏膜愈合和表皮生长因子受体表达的影响

[目的]探讨左金丸及其拆方对胃溃疡（GU）愈合的影响、机制及配伍依据。[方法]建立乙酸性GU大鼠模型，54只动物随机均分成模型组、黄连组、吴茱萸组、左金丸组，并设立空白组和假手术组，每组9只，观测各组大鼠溃疡指数（UI）和表皮生长因子受体（EGFR）的表达。[结果]①黄连组、吴茱萸组、左金丸组UI显著低于模型组（P〈0．01），且依次降低（P〈0．01，〈0．05）；②溃疡形成后模型组GU边缘EGFR表达显著高于空白组（P〈0．01），左金丸组显著高于模型组（P〈0．01），各治疗组间比较差异无统计学意义。[结论]左金丸及其拆方均有促进溃疡愈合的作用。显著性上调EGFR的表达可能是左金丸促进溃疡愈合的重要机制之一。     

地塞米松对脑出血大鼠模型脑组织AQP4表达的影响及意义

目的观察地塞米松对脑出血（ICH）大鼠模型脑组织水通道蛋白4（AQP4）表达的影响及意义。方法32只大鼠脑尾状核部位立体定向注入胶原酶建立ICH模型,随机分为观察1、2、3组和对照组各8只后单笼饲养,观察1、2、3组分别腹腔注射地塞米松1、15、30mg/kg,均为2次/d,连续3d;对照组常规饲养。检测各组脑含水量、血脑屏障通透性及脑组织AQP4蛋白及mRNA表达。结果用药3d后观察1～3组血脑屏障通透性、AQP4蛋白及AQP4 mRNA含量均低于对照组（P均〈0.05）,且AQP4蛋白及其mRNA表达与地塞米松呈剂量依赖性关系;观察1组脑含水量较对照组降低（P〈0.05）。结论地塞米松能降低ICH模型大鼠脑组织AQP4表达,此可能为其早期小量使用减轻脑水肿的机制之一。     

四君子汤加味治疗胃黏膜肠上皮化生38例

2000年10月～2003年8月,我们采用四君子汤加味治疗胃黏膜肠上皮化生（肠化）38例,疗效显著。现报告如下。     

泽泻汤加味方对高盐高血压大鼠的降压疗效及对肾功能的保护作用

目的 观察泽泻汤加味方对高盐高血压大鼠的降压疗效及肾功能的保护作用.方法 用3周龄雄性Wistar大鼠8％高盐饲料饲养22周造成高血压模型,分模型组、缬沙坦组、泽泻汤加味方高剂量组、泽泻汤加味方中剂量组,加上正常组,每组10只,共5组.在第23周,除正常组外,对各组大鼠施相应干预措施.干预8 w后,全自动生化仪测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24h尿蛋白(ALB);放免法测尿β2-微球蛋白(β2-MG).结果 在各时间段,中药高剂量组与缬沙坦组降压疗效相当(P＞0.05).与正常组比,其余四组的BUN升高(P＜0.01);其余四组的Scr无显著性差异(P＞0.05).与模型组比,泽泻汤加味方高剂量组的24h尿ALB明显降低(P＜0.01);泽泻汤加味方中剂量组的尿β2 -MG降低(P＜0.05).结论 泽泻汤加味方对高盐高血压大鼠具有一定的降压作用,且对其肾功能亦有保护作用.     

丹红注射液对大鼠脑外伤后AQP4表达及神经元凋亡的影响

目的观察丹红注射液对大鼠脑外伤后水通道蛋白4(AQP4)表达及神经元凋亡的影响,探讨丹红注射液对脑外伤的治疗作用。方法健康雄性Wistar大鼠150只,随机分为对照组和治疗组,每组75只,每组又分为伤后6h、12h、24h、48h、72h5个亚组,每个亚组15只。采用Feeney法建立自由落体脑损伤动物模型,治疗组大鼠致伤后1h腹腔内注射丹红注射液1.5mL/kg,对照组相同时间腹腔内注射同体积生理盐水。在预定时间点每亚组随机抽取5只大鼠应用干湿重法测定大脑半球含水量,余下10只大鼠经心脏灌注后取脑制作石蜡切片分别行HE染色、免疫组织化学法测定AQP4表达、TUNEL法测定神经元凋亡。结果对照组大鼠脑含水量、AQP4表达及神经元凋亡在伤后6h即开始增加,伤后24h～48h达到高峰,72h时明显下降;与对照组比较,丹红注射液治疗组大鼠脑含水量、AQP4表达及神经元凋亡在相应各时间点均明显降低,在外伤后12h及24h时差别有统计学意义(P<0.01)。结论丹红注射液可减少大鼠脑损伤后脑水肿、AQP4的表达及神经元的凋亡,对脑损伤有明显的治疗作用,在外伤后12h～24h时治疗作用最为显著。     

泽泻汤加味方最佳组方配伍降压作用机制的研究

目的探讨泽泻汤加味方最佳组方配伍降压作用与机制。方法采用4%NaCl高盐饲料自然喂养法复制高血压大鼠模型,设计三因素三水平正交设计试验,根据降压作用,确定泽泻汤加味方最佳组方配伍。以最佳组方水煎剂,分高、中、低剂量组灌胃干预高盐高血压大鼠,设置正常空白组、模型空白组、复代文组对照,测定尿量、血压;28 d后,经大鼠腹主动脉取血,分别采用放射免疫分析法、酶联免疫吸附法、自动生化分析法,测定大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血清内源性哇巴因(EO)、醛固酮(ALD)含量及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性。结果泽泻汤加味方降压效果最佳组方为泽泻21 g、炒白术9 g、泽兰和石菖蒲各15 g。给药后第1、4、7天,各给药组尿量较模型空白组增加,复代文组>中药高剂量组>中药中剂量组>中药低剂量组(P<0.01或P<0.05)。除正常空白对照组外,各模型组血压均下降,下降程度复代文组>中药高剂量组>中药中剂量组>中药低剂量组>模型空白对照组。泽泻汤加味方能降低高盐饮食高血压大鼠血浆AngⅡ、血清EO、ALD含量,提高Na+-K+-ATP酶活性。结论泽泻汤加味方具有一定的降压作用,与其降低循环AngⅡ、ALD、EO及提高细胞膜Na+-K+-ATP酶活性直接相关。     

左金丸及其拆方对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜HSP70基因表达的影响

[目的]阐明左金丸及其拆方对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜HSP70基因表达的影响。[方法]建立CAG大鼠模型,并随机分为模型、替普瑞酮、黄连、吴茱萸、左金丸组,设立空白和假手术组,治疗1月后,各组取三只,实时定量PCR法测定各组大鼠胃黏膜中Hsp70mRNA表达量,Western blot法测定Hsp70/Hsp72蛋白表达量,余大鼠HE法观察胃黏膜病理变化。[结果]模型组与其他各组比较,其胃黏膜体积构成比明显下降(P0.01)。各治疗组均可以提高胃黏膜体积构成比,但各组间无差异。吴茱萸及左金丸组与模型组相比可以显著增高HSP70mRNA水平(P0.05)。在蛋白水平,各治疗组蛋白的表达高于模型组,但与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。[结论]中药吴茱萸及左金丸可以改善萎缩性胃炎大鼠胃黏膜的萎缩状态,诱导热休克蛋白70基因表达可能是其治疗萎缩性胃炎的作用机制之一。     

大鼠AQP4基因表达载体的构建及在体内表达的观察

目的　克隆大鼠AQP4基因并构建其融合蛋白表达载体 ,以便载体在体内进行AQP4基因干预。方法　采用逆转录构建大鼠脑cDNA文库、聚合酶链反应 (PCR)扩增大鼠AQP4基因片断 ,选用绿色荧光蛋白 (GFP)为报告基因 ,将其构建到pcDNA3.1 Zeo(+)真核表达质粒中 ,同时在AQP4、GFP基因之间插入IRES片段 ,以构建AQP4 GFP融合蛋白。在脑立体定位仪下将经预先处理过的AQP4 GFP表达质粒注射到大鼠脑内 ,荧光显微镜下观测基因表达 ,免疫组织化学检测脑内AQP4表达水平的变化。结果　 (1)扩增出长度为 993bp的片段 ,为AQP4序列的全段 ,测序结果与基因Bank(U14 0 0 7)上报道的大鼠AQP4M1型基因序列相同。 (2 )注射实验质粒和对照质粒后 12h于注射点局部均可观察到GFP阳性细胞 ,高峰出现在 2 4h ,至 72h荧光明显减弱。转染实验质粒 2 4h后可明显提高脑内AQP4表达的水平。结论　克隆的大鼠AQP4基因和构建的AQP4表达质粒 ,在体内获得表达 ,该质粒可以用于干预体内AQP4基因表达的相关研究。     

过量氟对大鼠成釉细胞KLK4蛋白表达的影响

目的研究燃煤型过量氟对大鼠切牙成釉细胞激肽释放酶-4(KLK4)表达的影响。方法 30只SD大鼠按体重均等雌雄各半原则随机分为五组:即高氟空气饲养房间内食物氟2.1 mg/kg(A)、10 mg/kg(L)、25 mg/kg(M)、40 mg/kg(H)组,阴性对照(C)组,饲养16周后处死大鼠,免疫组化染色观察切牙成釉细胞KLK4的表达情况,采用Imageproplus6.0测量阳性区域积分光密度值和SPSS17.0软件包统计分析数据。结果 KLK4在切牙成熟期成釉细胞中大量表达,除A组外其余各组表达明显弱于C组,差异有统计学意义(P0.05)。结论燃煤型的过量氟可能抑制KLK4在大鼠切牙成釉细胞中表达。     

艾灸预处理对应激性溃疡大鼠胃黏膜HSP70蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察艾灸足三里和梁门穴预处理对应激性溃疡大鼠胃黏膜热休克蛋白70(HSP70)及其基因表达的影响,探讨艾灸足阳明经穴保护胃黏膜的作用机制.方法:将60只大鼠完全随机分为空白组(A)、模型组(B)、艾灸足三里等穴组(C)和对照组(D)4组,采用水浸-束缚应激法(WRS)制备应激性溃疡模型.按Guth法计算胃黏膜损伤指数(UI),用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和放射免疫法分别检测处理后大鼠胃黏膜HSP70,HSP70mRNA的表达和内皮素(ET)、前列腺素E2(PGE2)的含量.结果:SU大鼠胃黏膜损伤指数B组与A、C组(P=0.000,P=0.001),D组与A、C组(P=0.001)有显著性差异,艾灸足三里等穴可使SU大鼠胃黏膜损伤指数明显下降.胃黏膜PGE2含量A组与B、D组比较差异显著(P=0.011,P=0.028),C组与B、D组比较差异显著(P=0.020,P=0.048),经艾灸预处理的大鼠胃黏膜PGE2含量均有不同程度升高.ET含量B组与A组之间有显著差异(P=0.040),经艾灸预处理的大鼠ET含量下降显著,B组与C组相比差异显著(P=0.020).造模后胃黏膜的HSP70蛋白和mRNA表达均有不同程度的增强,B组与A组相比有显著性差异(P=0.039,P=0.008);经艾灸预处理后HSP70蛋白和mRNA显著增强,C组与B、D组比较有统计学意义(蛋白:P=0.003,P=0.035;mRNA:P=0.000,P=0.001).结论:艾灸足三里、梁门穴能通过增强HSP70的蛋白和基因表达,达到对胃黏膜的保护作用,并有一定的穴位特异性.     

AQP4、AQP9在便秘小鼠结肠黏膜中的表达

目的检测便秘模型小鼠升、降结肠黏膜水通道蛋白4、9(AQP4、AQP9)mRNA表达情况,探讨AQP4、AQP9与便秘之间的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测便秘组及对照组小鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4 mRNA、AQP9 mRNA表达。结果对照组及便秘组小鼠升、降结肠均有AQP4 mRNA、AQP9 mRNA表达;便秘组升结肠中AQP4 mRNA表达量高于对照组,两组升结肠中AQP9 mRNA表达差异不显著;便秘组降结肠中AQP9 mRNA表达低于对照组,AQP4 mRNA表达高于对照组。结论便秘患者结肠AQP4 mRNA表达上调,AQP9 mRNA表达下调,AQP4、AQP9含量的增减会影响肠道水分的吸收与分泌,可能与便秘的发生、发展有一定的关系。     

高脂血症大鼠肝脏中牛磺胆酸钠转运蛋白的表达状况

目的:本研究以牛磺胆酸钠转运蛋白(Na+/taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp)为研究对象,通过分析Ntcp在高脂血症大鼠模型肝脏中的表达状况,寻求新的高脂血症治疗措施.方法:取♂Wistar大鼠(体质量150 g±5 g)60只,随机均分为实验组及对照组.喂食90 d,建立高脂血症模型,喂食期间定期取血检测胆固醇及胆汁酸含量,建模成功后,分别取两组大鼠肝脏组织.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-polymerase chain reaction,RTP C R)技术检测肝脏组织的N t c p基因表达的状况.应用免疫组织化学SP(streptavidinperosidase)法检测肝脏组织的Ntcp蛋白表达的状况.结果:实验组胆固醇及胆汁酸含量提高明显.电泳结果显示:两组肝脏组织都出现了位于425 bp的内参β-actin基因的扩增带和位于325 bp的Ntcp基因扩增带,实验组Ntcp基因扩增带亮度减弱;免疫组织化学结果显示:实验组Ntcp表达阳性率为23.6%,对照组N t c p表达阳性率为75.2%,差异有统计学意义(χ2=9.858,P0.05).结论:实验组大鼠的Ntcp基因的表达明显减弱,提示我们Ntcp基因可能会成为高脂血症及其相关疾病新的药物治疗靶点.     

化瘀理肺方对肺纤维化大鼠Smad3表达的影响

目的研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化肺组织形态学的影响及可能作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,经气管内注入博莱霉素（5 mg/kg）建立肺纤维化模型,对照组注入生理盐水0.25 ml作为正常对照,造模后第2 d开始分别给予化瘀理肺方药物灌胃（中药组,13410 mg/kg）、生理盐水灌胃（对照组、模型组）、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（激素组,25 mg/kg）进行干预,后于给药后的14 d、28 d分别处死,取肺组织行HE染色观察病理变化情况,免疫组化法测定肺组织中Smad3蛋白的表达情况。结果中药组肺泡炎和纤维化程度明显低于模型组和激素组,中药组Smad3蛋白表达明显少于模型组和激素组（P〈0.01）。结论化瘀理肺方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠有一定预防性治疗作用,可能部分通过调节Smad3蛋白表达发挥作用。     

AQP1、AQP4表达与乙肝肝纤维化进展的相关性研究

目的探讨慢性乙肝患者水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白4(AQP4)在肝组织中的表达与肝纤维化程度之间的相关性及意义。方法选取61例在我院行肝脏穿刺活检的慢性乙肝患者的活检样本,对样本进行HE染色,应用Scheuer系统评估所有患者的纤维化分期和炎症分级。免疫组化法测定肝组织中AQP1、AQP4的表达及定位情况。培养人的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),采用细胞免疫组化方法进行AQP1、AQP4免疫组化染色。对肝组织免疫组化切片进行平均光密度值(IOD)半定量分析,采用Kruskal-Wallis秩和检验对不同肝纤维化分期及炎症分级的IOD值进行显著性差异分析,采用Kendall检验进行相关性分析。结果在肝纤维化S0期,AQP1主要表达在动脉、门脉血管的内皮细胞和胆管上皮细胞,随着纤维化进展,AQP1大量表达在增殖的动脉毛细血管内皮细胞、胆管上皮细胞,并随着纤维化进展表达量增加;AQP4在胆管上皮细胞和HSC表达,随着肝纤维化进展和HSC活化,其表达增加。在细胞水平发现,AQP4在HSC明显表达。AQP1和AQP4的表达随肝纤维化分期及炎症分级进展而逐渐增加,与肝纤维化分期及炎症分级呈正相关(P0.05)。结论 AQP1、AQP4与乙肝肝纤维化的进展关系密切,AQP1可能与肝纤维化病理性动脉毛细血管生成有关,而AQP4可能参与HSC的活化从而参与乙肝肝纤维化过程中细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的生成。     

还脑益聪方对老年认知障碍大鼠学习记忆及脑组织β淀粉样蛋白和Tau蛋白表达的影响

目的探讨补肾益气、活血解毒中药-还脑益聪方颗粒剂对认知功能障碍的自然衰老大鼠学习记忆功能及脑组织β淀粉样蛋白及Tau蛋白等表达的影响。方法以Morris水迷宫试验检测SD老年大鼠的空间学习记忆能力,将学习记忆减退的50只老年大鼠结合体质量,分层随机方法分成为模型(老年认知障碍)对照组、阳性对照药(盐酸多奈哌齐片,0.49 mg/kg)组、还脑益聪颗粒剂小剂量(3.78 g生药/kg)组、中剂量(7.56 g生药/kg)组、大剂量(18.90 g生药/kg)组,每组10只,学习记忆能力正常老年大鼠10只为老年正常对照组给予等量水,连续灌胃14 w。给药结束后,行Morris水迷宫试验,测试老年大鼠空间学习记忆能力,免疫组织化学方法观察海马组织CA1区早老蛋白-1(PS-1)、β淀粉样肽和Tau蛋白激酶(TTBK1)的表达,积分光密度值(IOD)。结果与正常组比较,模型组老年大鼠穿台次数显著减少(P<0.05),第四象限游泳路程显著缩短(P<0.01)。给药14 w后,还脑益聪方各剂量组第四象限游泳路程显著延长(P<0.01),还脑益聪方大剂量组第四象限游泳时间显著延长(P<0.05)。模型组老年大鼠海马CA1区TTBK1阳性表达明显增多,PS-1表达水平增强,β淀粉样沉积增多。经治疗后,TTBK1、PS-1和β淀粉样肽的阳性表达明显减少,和模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论还脑益聪方可抑制脑组织β淀粉样蛋白和Tau蛋白的沉积,保护脑组织海马形态的完整性,从而改善老年认知障碍大鼠空间学习记忆能力。