柴胡皂苷D通过下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长

目的探究柴胡皂苷D通过调控miR-517a对胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的影响.方法采用MTT试剂盒检测U-87细胞和正常星形细胞的存活率;Q-PCR检测miR-517a表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;CCK-8试剂盒检测细胞增殖;蛋白免疫印迹试剂盒检测cleaved caspase-3、Ki67、MMP-2、Cyclin D1蛋白水平.建立裸鼠移植瘤模型,检测各组肿瘤重量;免疫组化检测Ki67、VEGF表达.结果柴胡皂苷D对正常星形细胞存活率无影响,降低U-87细胞存活率,下调miR-517a表达,促进细胞凋亡,上调cleaved caspase-3蛋白表达,抑制细胞迁移、侵袭、增殖,下调MMP-2、Cyclin D1、Ki67蛋白表达;抑制体内移植瘤生长,降低Ki67、VEGF阳性表达率.结论柴胡皂苷D具有下调miR-517a调节胶质瘤细胞体外和体内移植瘤生长的作用.     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Ki67反义多肽核酸抑制肾癌生长的体外及动物实验研究

为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠移植瘤内注射AS-PNAs(10.0μmol/L)连续4d后,第3、6、12天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积、Ki67表达、细胞凋亡。结果发现,AS-PNAs处理组786-0细胞Ki67表达明显降低,3H-TdR掺入率明显降低,细胞凋亡率明显增加,与随机PNAs对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。动物实验AS-PNAs处理组小鼠肿瘤体积明显缩小,Ki-67抗原表达明显降低,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。Ki67基囚AS-PNAs在体外及动物体内均有抑制增殖、促进凋亡作用,是一种有前途的反义治疗药物。     

miR-127-3p 靶向MAPK4 对肝癌HepG2 细胞株生物学特性的影响

目的:探究miR-127-3p与MAPK4的靶向关系及其对肝癌HepG2细胞生长转移能力的影响。方法:生物信息预测miR-127-3p与MAPK4间靶向关系,荧光素酶实验验证, qRT-PCR检测两者在肝细胞中的基因表达。miR-127-3p mimic及pcDNA-MAPK4(pc-MAPK4)分别或同时转染HepG2细胞,qRT-PCR检测miR-127-3p表达,BrdU及Hoechst检测细胞增殖及凋亡,Transwell及划痕实验检测侵袭及迁移,Western blot (WB)检测Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、MMP-9、VEGF、MAPK4、MAPKAPK5、HSPB1表达。miR-127-3p mimic转染HepG2细胞后,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录肿瘤体积,免疫组化及Tunel检测其增殖凋亡水平,WB检测MMP-9及MAPKAPK5表达。结果:与HL-7702比较,HepG2中miR-127-3p表达下调而MAPK4上调。HepG2中,miR-127-3p mimic上调miR-127-3p并下调MAPK4表达及MAPK4 wt荧光素酶活性,pc-MAPK4上调MAPK4并减弱miR-127-3p mimic的作用;miR-127-3p mimic减少BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,增加凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,pc-MAPK4增加BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,减少凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,减弱miR-127-3p mimic的抑增殖促凋亡作用;miR-127-3p mimic减少侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达,pc-MAPK4增加侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达并减弱miR-127-3p mimic的抗侵袭迁移作用;miR-127-3p mimic降低MAPKAPK5及HSPB1磷酸化比值,pc-MAPK4升高其比值并减弱miR-127-3p mimic的影响。miR-127-3p mimic减小HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤体积,减少组织中Ki67阳性细胞、MMP-9表达及MAPKAPK5磷酸化比值并增加凋亡细胞。结论:miR-127-3p靶向MAPK4可抑制肝癌HepG2细胞生长及转移。     

人参皂苷Rh4诱导肝癌细胞HepG2的凋亡及分子机制

目的:探讨人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10、20和40μmol/L)人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞活力的抑制作用;用流式细胞术检测定细胞凋亡率;通过Hoechst 33258和TUNEL染色观察人参皂苷Rh4诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的形态学变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9的表达情况。结果:人参皂苷Rh4能够明显促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,且呈剂量依赖性;TUNEL和Hoechst 33258染色实验结果表明,人参皂苷Rh4作用24 h后,细胞呈现明显皱缩、肿胀、破裂等凋亡形态;Western blot分析结果表明,随着人参皂苷Rh4给药浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和caspase-9的表达逐渐升高。结论:人参皂苷Rh4可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2以及上调Bax、cleaved caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。     

穿心莲内酯对口腔鳞状细胞癌体内外抑制作用的实验研究北大核心CSCD

目的:研究穿心莲内酯在体内外对口腔鳞状细胞癌(OSCC)生长的抑制作用。方法:穿心莲内酯浓度梯度处理CAL-27细胞,CCK8检测OSCC细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测克隆形成率,RT-PCR检测PCNA和P21表达水平,Hoechst观察细胞形态,Western blot检测caspase-9、caspase-3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和TGF-β1蛋白表达水平。OSCC细胞系CAL-27皮下注射裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67、caspase-3和Vimentin表达水平。结果:与0μmol/L穿心莲内酯组比较,15μmol/L、30μmol/L穿心莲内酯处理组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成率显著降低(P<0.05),PCNA mRNA表达水平下调,P21 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),caspase-9、caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组比较,50 mg/kg和100 mg/kg穿心莲内酯组肿瘤重量明显下降(P<0.05),caspase-3细胞阳性率显著增高,Ki67和Vimentin细胞阳性率显著减少(P<0.05)。结论:穿心莲内酯在体内外均能抑制OSCC细胞生长。     

罗哌卡因对结肠癌细胞增殖和裸鼠人结肠癌皮下瘤生长的影响

目的:探究罗哌卡因对结肠癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法:罗哌卡因处理细胞,CCK8 检测细胞活性,确定用药浓度;肿瘤成球实验检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot 检测细胞增殖、凋亡标记蛋白及细胞周期标记蛋白的表达。复制结肠癌Xenograft 模型,统计肿瘤生长情况及裸鼠存活率,Tunel 法检测细胞凋亡情况。结果:根据CCK8 实验结果确定罗哌卡因给药浓度分别为20、50、100 μg/ ml。罗哌卡因能显著抑制癌细胞集落形成(17.80±0.51,P<0.001) 和增殖标记蛋白Ki67 (0.32±0.68,P<0.01) 、PCNA(0.14±0.24,P<0.01) 的表达,并体现量效关系。罗哌卡因还可明显促进癌细胞凋亡(12.80±1.24,P<0.01) 和凋亡标记蛋白caspase-3(1.76±1.43,P<0.001)、caspase-9 (1.61±1.26,P<0.001) 的表达。同时,罗哌卡因能诱导细胞发生G2 期阻(40.5%,P<0.01) ,促进周期标记蛋白p53 的表达(1.16±0.65,P<0.01) ,抑制Cyclin A 的表达(0.12±0.12,P<0.05) 。此外,罗哌卡因可显著抑制肿瘤生长(1 247.60±1.37,P<0.01) ,提高结肠癌裸鼠的生存率及诱导肿瘤组织细胞凋亡(78.00±1.45,P<0.001) ,且具有量效关系。结论:罗哌卡因能抑制结肠癌细胞增殖和结肠癌皮下瘤的生长。     

下调去甲基化酶FTO抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的 探究去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(FTO)抑制对人肝癌细胞系HepG2增殖的作用机制。方法 将肝癌细胞系HepG2分为对照组(转染空质粒)、FTO组(转染FTO过表达质粒)、si-FTO组(转染si-FTO)、si-FTO+si-FoxO1组(同时转染si-FTO和si-FoxO1)。RT-qPCR检测细胞中FTO相对表达量;用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Dot blot检测m⁶A甲基化水平;蛋白质印迹检测细胞中FoxO1蛋白表达。结果 通过人类癌基因库(TCGA)分析肝癌患者总体生存期发现FTO高表达提示更短的生存期(P<0.05)。和正常肝细胞系HL7702相比,HepG2细胞中FTO表达明显升高(P<0.05)。和对照组相比,si-FTO组细胞中FTO相对表达量明显降低,FTO组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05);和si-FTO组相比,si-FTO+si-FoxO1组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05)。si-FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m^6...     

miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

HIPK2基因对缺氧复氧诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)对缺氧复氧(H/R)诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:通过Lipofectamine~(TM)2000将靶向HIPK2基因的小干扰RNA(siRNA)转染NRK-52E细胞,并设置正常对照组(control组)和阴性对照组(HIPK2-NC组),Western blot法检测转染48 h的效率;细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和Ca~(2+)荧光强度;Western blot法检测Ki67、cleaved caspase-3、caspase-12、Bcl-2、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:靶向HIPK2的siRNA转染NRK-52E细胞后,HIPK2的蛋白表达显著低于control组(P0.05)。与control组比较,H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、Ca~(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著升高(P0.05);与H/R组比较,HIPK2-siRNA+H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率、Ca~(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著降低(P0.05)。结论:抑制HIPK2基因表达可促进H/R诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞生长,降低凋亡率,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路相关蛋白水平有关。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响

目的 探究异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响。 方法 单独或联合 给予异氟醚及顺铂处理膀胱癌 5637 细胞, 将细胞随机分为 4 组: 对照组、 异氟醚组、 顺铂组和异氟醚 + 顺 铂联合处理组。 BrdU 染色检测 BrdU 阳性细胞数; 流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布; Transwell 检测侵袭细胞数; 划痕愈合实验检测划痕愈合率; Western 印迹检测 Ki67、 PCNA、 Bax、 Bcl-2、 cleaved caspase-3 和 caspase-3 蛋白表达; 结果 与顺铂组相比较, 异氟醚 + 顺铂联合处理组 BrdU 阳性细胞数和 Ki67、 PCNA 蛋白表达降低, G0 / G1期比率和 S 期细胞数降低, G2 / M 期比率升高, 细胞凋亡率和 Bax / Bcl-2、 cleaved caspase-3 / caspase-3 比值升高, 侵袭细胞数、 划痕愈合率降低, 均有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 异氟醚可通过抑制细胞增殖、 侵袭、 迁移, 诱导细胞凋亡, 提高 5637 细胞对顺铂的敏感性。     

膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响。方法 采用Western blotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h、48h、72h进行细胞计数以绘制细胞增殖曲线,转染后48h进行MTT实验以检测细胞增殖活力;免疫组织化学法检测cyclinD1和Ki67的表达,Western blotting法检测cyclinD1的表达情况。结果 转染了靶向膜联蛋白A7的siRNA后48h的HepG2细胞,细胞计数和MTT实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组显著降低（P<0.05）;cyclinD1和Ki67蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组（P<0.05）。 结论 膜联蛋白A7低表达可能对HepG2细胞的增殖具有一定的抑制作用。     

桔皮素对人非小细胞肺癌细胞生长及侵袭的影响

目的:探讨桔皮素(TGN)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长和侵袭的影响及其分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分别用不同浓度的TGN处理,MTT比色法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭,RT-PCR分析MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平,Western blotting检测Ki67、Cyt C、caspase-3、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9、Akt、p-Akt以及p-PI3K表达水平。结果:桔皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖(P0.05),同时伴随有增殖标记分子Ki67表达水平的下调。分析发现,桔皮素诱导细胞中Cyt C、caspase-3和cleaved caspase-3的表达上调(P0.01),加速A549细胞的凋亡。此外,桔皮素作用后,A549细胞中侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达量下降,且侵袭数目随桔皮素浓度增加而减少。进一步研究表明,桔皮素作用后A549细胞中p-Akt和p-PI3K表达水平降低(P0.05),阻断PI3K/Akt信号通路后,不同浓度TGN对细胞活性影响没有变化。结论:桔皮素能抑制A549细胞生长及侵袭,促进细胞凋亡,可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活起作用。因此,本研究将为非小细胞肺癌的防治提供新的研究方向。     

NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。