产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌临床菌株耐药表型与基因型

目的调查临床分离鉴定的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药表型与基因型的关系。方法以琼脂稀释法测定67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的MIC;应用PCR扩增其SHV、TEM和CTX-M型β-内酰胺酶编码基因,并对部分菌株的PCR产物进行克隆测序以确定其基因亚型。结果67株除未检出对亚胺培南耐药株外,对其他10种抗菌药物的耐药率在10.45%～89.55%,多重耐药率为74.63%;其中60株对氨基糖苷类耐药株和44株对β-内酰胺类耐药株的交叉耐药率各为88.33%和40.91%;67株SHV、TEM和CTX-M基因型检出率分别为91.04%、56.72%、28.36%,对其中7株克隆测序发现存在SHV-12、TEM-1及CTX-M-3基因亚型。结论67株产ESBLs肺炎克雷伯菌对除亚胺培南以外的大多数抗菌药物,呈现明显的多重耐药和交叉耐药,其中7株同时产SHV-12和CTX-M-3型超广谱和TEM-1型广谱β-内酰胺酶。     

新生儿科产ESBLs菌株基因型分析

目的了解新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分离菌株基因型情况.方法用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证方法,对我院新生儿科病房分离的非重复的45株大肠埃希菌和肺炎克雷白菌进行ESBLs确证.分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物对ESBLs阳性菌株进行聚合酶链反应(PCR),然后DNA测序.结果45株细菌中,检出ESBLs阳性菌19株,检出率为42.2%.19株ESBLs菌中2株携带TEM-1基因,14株携带SHV-12基因,1株SHV-59型,10株CTX-M14型,并有多基因携带状况,2株TEM、CTX-M基因同时阳性,7株SHV、CTX-M基因同时阳性.结论SHV-12型ESBLs是新生儿科病房最常见的ESBLs,其次为CTX-M14,耐药菌存在严重多重耐药.     

肺癌患者术后感染超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌分离株基因分型和耐药性

目的 探究肺癌患者术后感染超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株基因分型和耐药性,为临床治疗ESBLs肺炎克雷伯菌用药提供指导。方法 收集2019年1月-2021年7月于武汉市肺科医院行胸腔镜肺段切除术后感染患者肺炎克雷伯菌分离株100株,分析菌株对常用抗菌药物的耐药率,双纸片扩散法进行ESBLs表型筛选及确证,聚合酶链式反应(PCR)检测产ESBLs菌株的耐药基因,将PCR阳性产物进行测序并确定基因型别。结果 100株肺炎克雷伯菌中检出35株产ESBLs菌株,占35.00%,主要来源于痰液;产ESBLs肺炎克雷伯菌对氨苄青霉素、头孢菌素的耐药率高于90%; 35株产ESBLs肺炎克雷伯菌主要耐药基因型为TEM、CTX-M和SHV,其中CTX-M型中,CTX-M-1有10株,CTX-M-9有12株,未检测出CTX-M-2、CTX-M-8及CTX-M-25型,所有TEM型均为TEM-1,SHV型均为SHV-12。结论 胸腔镜肺段切除术后感染肺炎克雷伯菌菌株产ESBLs检出率较高,产ESBLs肺炎克雷伯菌对替加环素、美罗培南及亚胺培南较敏感,且携带的基因型以CTX-M型、TEM...     

温州地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因型研究

目的 研究温州地区分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的基因型.方法 随机挑取经全自动微生物分析仪鉴定的产ESBLs肺炎克雷伯菌35株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌29株;用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸和头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸双纸片扩散法对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,采用聚合酶链反应(PCR)法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBLs基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别,同时采用PCR法检测整合酶基因.对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 47株经双纸片扩散法确定为ESBLs阳性株中,经仪器法确定为阳性的为35株,仪器法的敏感性为73.4%;在17株经双纸片法确定为ESBLs阴性的菌株中,经仪器法确定为ESBLs阴性的有12株.仪器法的特异性为70.1%;TEM型、SHV型和CTX-M型阳性率分别为90.0%、86.7%和90.0%;整合酶基因阳性率为93.3%,经测序.所有TEM型为TEM-1 ESBLs;26株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12的有16株、SHV-11的有6株、SHV-2的有2株及SHV-Ⅰ型2株,在27株CTX-M型中,CTX-M-14型有18株、CTX-M-15型9株.结论 温州地区肺炎克雷伯菌临床分离株的ESBLs基因主要为CTX-M型和SHV型,CTX-M-14和SHV-12是主要的基因型.     

湖南地区SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的 了解湖南地区产SHV型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的检出情况,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法 收集、鉴定分离菌株,进行ESBLs检测;PCR扩增blaSHV基因;对PCR产物测序确定其基因型;并通过随机扩增多态性DNA(RAPD)进行菌株同源性分析.结果 171株多药耐药的肠杆菌科中共有26株菌携带blaSHV基因,PCR产物经测序共检出5种基因型:9株携带SHV-28、7株携带SHV12、7株携带SHV-1、2株携带SHV-11和1株携带SHV-5;RAPD结果显示,19株肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,5株阴沟肠杆菌分别为不同的RAPD类型.结论 SHV-12是湖南地区主要流行的SHV型ESBLs,并且在产SHV型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中存在菌株间的克隆传播,未发现产SHV型ESBLs的大肠埃希菌.     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌相关耐药基因监测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌中常见的β-内酰胺酶基因的分布情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测了77株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM、SHV和CTX-M等三种β-内酰胺酶基因,并进行了DNA测序。结果 50株产ESBLs的大肠埃希菌中,41株TEM基因阳性(82.0%),7株SHV基因阳性(14.0%),16株CTX-M基因阳性(32.0%),21株菌两种以上基因型同时阳性。27株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,21株TEM基因阳性(77.8%),24株SHV基因阳性(88.9%),3株CTX-M基因阳性(11.1%),16株菌两种以上基因型同时阳性。结论产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中携带多种β-内酰胺酶基因,且以TEM和SHV型较为流行。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的分子流行病学研究

目的调查北京医院住院患者2002年1～8月期间产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率、耐药情况和各种基因型的流行分布. 方法采用浓度梯度法对86株大肠埃希菌和132株肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物进行最低抑菌浓度测定,采用酶抑制剂增强法对产ESBLs菌株作确认试验;等电点测定及PCR扩增对产ESBLs菌初步分型,然后对PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型,并做结合实验. 结果肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌产ESBLs细菌阳性率分别为18.9%和29.1%, ESBLs菌合计的阳性率为22.9%;ESBLs阳性菌对抗生素的耐药率明显高于ESBLs阴性菌;在50株产ESBLs阳性菌株中,TEM型31株(62%)均为TEM-1型;CTX-M型26株(52%),其中CTX-M-14型11株,CTX-M-22型9株,CTX-M-24型 5株,CTX-M-13型1株;SHV型22株,占44%,SHV-1型5株,SHV-12型5株(4株菌被结合实验结果证实含有SHV-12型基因的质粒),SHV-2a型3株(2株菌含有该型基因质粒),2株SHV-2(2)型(2株菌含有该型基因质粒),未分出亚型7株,同时结合实验也证实不含有SHV型基因的质粒. 结论 CTX-M型和SHV型是北京医院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

ICU肺部感染患者分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌基因亚型及同源性

目的 分析重症监护病房(ICU)肺部感染患者分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因亚型及同源性。方法 选取2018年12月-2020年12月从南通大学第二附属医院ICU收治的96例肺部感染患者。检测痰液标本中病原菌特征,聚合酶链式反应(PCR)分析产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌基因亚型,重复序列PCR(Rep-PCR)和多位点序列分型(MLST)分析同源性。结果 96例患者痰液标本中共分离134株病原菌,其中33株大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率为48.48%,42株肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株检出率为40.48%;产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对哌拉西林、头孢唑林、头孢他啶等常用抗菌药物的耐药性均高于非产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌(P<0.05);16株产ESBLs大肠埃希菌基因型共检出1种TEM-1、3种CTX-M和3种SHV,以CTX-M-14亚型和SHV-77亚型最为多见,且属于8种不同ST型,以ST131型为主;17株产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型共检出1种TEM-1、3种CTX-M亚型和4种SHV亚型,以SHV-1...     

临床产ESBLs细菌的耐药特征和基因分型的研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的流行和耐药特点,初步对产ESBLs细菌进行基因分型,确立耐药基因的位点和种类.方法收集分离鉴定菌株,通过K-B法药敏实验初筛以确认产ESBLs菌株,并对ESBLs基因进行初步分型.结果分离到产ESBLs细菌88株,检出率为38.9%,其中肺炎克雷伯菌阳性率为43.1%、大肠埃希菌阳性率为33.3%;产ESBLs细菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类耐药率约为90%～100%,加用酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦后耐药率降为18.7%～46.8%;PCR初步分型结果表明:大多数产ESBLs细菌携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因,其中单独携带TEM型基因的占42%,单独携带SHV型基因的占12.5%,携带两种基因的占31.8%.结论产ESBLs细菌具有多重耐药的特点;产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌大都携带TEM和(或)SHV型β-内酰胺酶基因,其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶.     

一种新型β-内酰胺酶OKP-B-13的发现

目的鉴定一种新型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因亚型并分析其耐药性。方法分析11种抗菌药物对该菌株的最低抑菌浓度(MIC),并以碱裂解法抽提菌株的质粒DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增产ESBLs株质粒的TEM、SHV、CTX基因,对其扩增产物进行DNA序列分析。结果TEM基因和CTX-M基因的PCR扩增结果均显示为阴性,SHV基因的PCR扩增获得862 bp产物;DNA测序未能在GenBank数据库查询到与之相一致的核苷酸序列,该基因编码的氨基酸序列与OKP型β-内酰胺酶为最相近,存在4~18个氨基酸差异,与SHV-1同源性为90%;此新型β-内胺酶被命名为OKP-B-13(GenBank注册号AY825330)。结论发现了一种新型的产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶-OKP-B-13,其酶特性有待进一步研究。     

血培养产ESBLs分离株耐药基因初步分型及最低抑菌浓度检测

目的 了解我院导致菌血症的革兰阴性杆菌病原菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率、基因型分布及耐药性。方法 由临床血液培养标本中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌58株，采用ESBLs表型确证试验筛选出ESBLs阳性菌株，应用PCR法扩增产酶菌株的bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因，进行初步基因分型。琼脂稀释法测定11种抗生素对所有产ESB[鼻菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果 共检出19株ESBLs阳性株，总检出率为32．8％；其中8株检出bla(TEM)基因、7株检出bla(sHV)基因、14株检出bla(CTX-M)基因；所有产：ESBLs株对亚胺培南敏感，其MIC≤1μg／ml。结论 血液感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯ESBLs检出率较高，bla(CTX-M)是最常见基因型。     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶基因分型及耐药相关性研究

目的了解温州地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的基因分布及其与耐药的相关性。方法对临床分离的常见革兰阴性杆菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌)的产ESBLs菌株进行基因分型,并对其耐药相关性进行分析。结果温州地区产ESBLs大肠埃希菌以携带CTX-M-9中的CTX-M-14型基因为主,且大多合并携带TEM-1型广谱酶基因;肺炎克雷伯菌以CTX-M-14和多亚型的SHV型基因型为主,亦大多合并携带TEM-1型广谱酶基因;在阴沟肠杆菌和鲍氏不动杆菌中ESBLs基因携带变化较大,阴沟肠杆菌中主要携带CTX-M-14、SHV-56型ESBLs基因及TEM-1型广谱酶基因,另外发现主要有VEB-1型基因携带;鲍氏不动杆菌中主要以特异的TEM-128和PER-1型基因携带为主,不同ESBLs基因携带菌株显示了较大的临床耐药差异。结论温州地区的革兰阴性杆菌存在ESBLs基因的多样性分布特征,不同的基因型ESBLs可能与介导不同的β-内酰胺类抗菌药物耐药相关。     

新生儿产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药性和基因型分析研究

目的:分析了解新疆地区新生儿科分离的产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase,ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因分布情况。方法:采用K-B法测定病原菌对19种抗菌药物的耐药率,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、CTXM-1、CTXM-9等4种β-内酰胺酶基因,并对部分产物进行测序分析。结果:100株产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率在10%以下;但对大多β-内酰胺类抗生素全部耐药。基因型分析显示有72株携带TEM基因,79株携带SHV基因,58株携带CTX-M-1基因,42株携带CTX-M-9基因;91%的菌株同时携带两种及两种以上ESBLs基因型。结论:新生儿产ESBLs的肺炎克雷伯菌耐药严重,新疆地区新生儿以同时携带多种ESBLs基因型为主。     

215株产ESBLs菌株bla(SHV)基因检测

本文探讨本地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBk)菌株bla(sHV)基因的携带情况和临床分布特点。用NCCLS推荐的表型确证试验分析并挑选出临床标本中产ESBk的大肠埃希菌151株和肺炎克雷伯菌64株，用bla(SHV)基因通用引物进行聚合酶链反应(PCR)，并进行分析。结果显示，产ESBLs肺炎克雷伯菌bla(SHV)基因携带率高，而产酶大肠埃希菌则极少携带bla(SHV)基因，SHV型产酶株广泛分布于各临床科室，需引起重视。     

合肥市产超广谱β-内酰胺酶菌株TEM型耐药基因分布

目的了解1999-2000年合肥市多所医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中，TEM型β-内酰胺酶基因型分布。方法酶抑制剂增强的肉汤稀释法筛选出产ESBLs细菌，PCR扩增其TEM型β-内酰胺酶编码基因片段，克隆人pGEM-Teasy载体，双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定TEM基因型。结果98株产ESBLs菌株中有79株产TEM型β-内酰胺酶，其中TEM-1型75株和TEM-10型4株。结论合肥市产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中存在2种TEM型β-内酰胺酶，在国内首次报道一种新的β-内酰胺酶(TEM-10)。     

耐含酶抑制剂抗菌药物的肺炎克雷伯菌耐药表型及基因型研究

目的研究含酶抑制剂抗菌药物头孢哌酮/舒巴坦(CFS)和(或)哌拉西林/他唑巴坦(TZP)耐药的肺炎克雷伯菌耐药性和耐药基因。方法收集浙江大学医学院附属第一医院细菌室2006年4~6月分离非重复肺炎克雷伯菌75株,用琼脂稀释法检测12种抗菌药物的最低抑菌浓度,用含1μg/ml头孢噻肟平板法和纸片确证试验做为表型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)筛选;采用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物测序、等电聚焦电泳检测其等电点、接合试验等方法明确基因型。结果75株肺炎克雷伯菌中共检测到CFS和(或)TZP耐药20株,表现为多药耐药且均检出β-内酰胺酶基因,其中15株(75.0%)携带CTX-M型基因,14株(70.0%)携带≥2种基因,3株(15.0%)产KPC-2碳青酶烯酶肺炎克雷伯菌高度耐药;11株(55.0%)产ESBLs同时产TEM-1型广谱酶,4株(20.0%)同时携带CTX-M、TEM和SHV基因。结论酶抑制剂耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因,表现为多药耐药。     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。方法收集产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床菌株30株,应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法,分别对其TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER编码基因进行分析。结果在30株菌株中有26株为CTX-M型,占86.67%;其中CTX-M-9型共计16株占61.5%,CTX-M-1型8株占30.8%,CTX-M-2型7株占26.9%;同时产CTX-M-1型及CTX-M-2型共4株占15.4%,产CTX-M-2型及CTX-M-9型1株占3.8%,产CTX-M-1型及CTX-M-9型1株占3.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要临床流行基因型是CTX-M-9型。     

近4年产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌基因型分布及耐药性变化

目的了解我院近4年产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的基因型分布及耐药性性变化. 方法采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证试验,筛选出我院2000年6月～2003年8月产ESBLs肺炎克雷伯菌64株;应用PCR及DNA测序方法检测所有产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因.应用琼脂稀释法测定11种抗菌药物对所有产酶株最低抑菌浓度(MIC). 结果 64株肺炎克雷伯菌产生的ESBLs 以SHV-12和CTX-M-14为主要基因型,在产酶株中的检出率分别51.6%和46.9%,2000年只检出SHV-12基因,2001年共检出9种基因型, 2002年共检出10种基因型, 2003年共检出8种基因型;2000年未发现携带多个基因的菌株,2001年多基因携带率达50%, 2002年多基因携带率达51.6%, 2003年多基因携带率达63.6%,2001～2003年3年间多基因携带率差异无显著性;2000年的6株菌均对头孢他啶和氨曲南的耐药,对氨苄西林/舒巴坦也有较高耐药性,对其他药物很敏感,2001～2003年间的产ESBLs肺炎克雷伯菌除对亚胺培南100%敏感外,对其余10种抗菌药物出现不同程度的耐药. 结论我院肺炎克雷伯菌临床分离株中的ESBLs基因型主要为SHV-12和CTX-M-14,且携带多种β-内酰胺基因产酶株检出率高,所有产酶株均对亚胺培南敏感.     

肿瘤患者医院感染产ESBLs大肠埃希菌临床分布与基因分析

目的了解本地区肿瘤患者医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的临床分布及基因型,以指导临床医师合理选择抗菌药物。方法对2014年3月-2016年10月医院恶性肿瘤患者临床标本中分离出的338株产ESBLs大肠埃希菌的分布进行分析,同时随机抽取其中60株应用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增产ESBLs大肠埃希菌常见的β-内酰胺酶基因:TEM、CTX-M和SHV。结果分离的498株大肠埃希菌中,产ESBLs 338株,占67.87%;科室分布以妇瘤科为主,共94株占27.81%;PCR扩增显示,60株产ESBLs大肠埃希菌中,TEM55株,占91.67%,CTX-M1 42株,占70.00%,CTX-M13 42株,占70.00%,SHV24株占40.00%;且携带≥两种耐药基因53株占88.33%。结论本地区肿瘤患者医院感染产ESBLs大肠埃希菌主要分布在妇瘤科及胃肠科等科室;基因型以TEM、CTX-M1、CTX-M13型为主。     

产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药性与基因型分析

目的 分析医院急诊科3年内产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型,以指导临床用药.方法 采用ESBLs表型确证试验筛选产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌,提取产ESBLs菌的质粒DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增产ESBLs株质粒TEM、SHV、CTX-M1、CTX-M9和OXA5种基因,并对其扩增物进行DNA序列分析,测定大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性.结果 共检出143株大肠埃希菌与77株肺炎克雷伯菌,其中84株为产ESBLs菌,占38.2％;ESBLs研究菌株全部携带TEM型、77.4％携带CTX-M9型基因;同一菌株携带2、3、4个基因的菌株比例分别为44.8％、33.3％和7.1％;产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌为多药耐药菌,其中对青霉素类、第一、二、三代头孢菌素类、磺胺类和氟喹诺酮类耐药率高达80.0％～100.0％;碳青霉烯类对产ESBLs细菌仍保持较高的抗菌效果.结论 产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药基因,以TEM型和CTX-M9型为主,携带＞2个耐药基因的产ESBLs菌株比例较高;产ESBLs大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对含酶抑制剂的抗菌药物、碳青霉烯类抗菌药物仍保持较高的敏感性,研究中发现美罗培南耐药菌株,应引起临床重视.