大黄素对急性胰腺炎胰腺组织TGF_(β1)表达的影响

目的 :通过分析中药大黄素对大鼠急性胰腺炎治疗前后胰腺组织细胞转化因子 β1(TGFβ1)的表达、DNA合成及总蛋白含量的影响 ,从胰腺再生角度探讨大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制。方法 :以雨蛙肽 (caerulein)腹腔注射诱导大鼠急性胰腺炎模型 ,并于大黄素治疗前后 6、2 4、4 8、72及 96h处死大鼠。同时应用RT PCR技术检测治疗前后胰腺组织TGFβ1mRNA表达 ,同位素体外掺入法测定胰腺组织DNA合成以及Lowry′s法测定胰腺组织总蛋白含量。 结果 :大黄素治疗后血清淀粉酶显著下降。正常胰腺组织、胰腺炎诱导后 6h未见TGFβ1mRNA表达。TGFβ12 4h后出现表达 ,72h时达高峰。大黄素治疗后 6h即可检测到TGFβ1mRNA表达 ,且 2 4、4 8h时表达均较非治疗组显著增强 ,并于 4 8h时达最大值。同时胰腺炎诱导后 72h ,胰腺组织DNA合成显著下降 ,大黄素治疗后 96hDNA合成明显增加 ,胰腺炎诱导后 4 8h胰腺组织总蛋白含量下降 ,大黄素治疗后 96h显著增加。结论 :大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制可能是通过诱导细胞因子TGFβ1基因表达增强 ,调控细胞增殖和分化 ,刺激多种细胞外基质成分合成 ,增加胰组织DNA合成和蛋白含量 ,参与胰腺细胞修复、再塑过程。     

大黄诱导急性胰腺炎大鼠早期腺泡细胞凋亡的研究

目的:探讨大黄素治疗急性胰腺炎(AP)的作用机理。方法:SD大鼠32只,随机分为对照组、急性胰腺炎模型组、大黄素治疗组,用雨蛙素制作大鼠AP模型,大黄素组分成二个亚组,分别在模型制作后1h、12h腹腔内注射大黄素2.5mg/kg,2h后重复1次,测定24h后各组大鼠血清TNF-α、IL-6,并取胰腺组织作病理学检查,同时应用TUNEL技术分析大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的变化。结果:发现造模1h后大黄素给药组血清TNF-α、IL-6水平明显降低,胰腺组织病变程度减轻,胰腺腺泡细胞凋亡指数较模型组高(P<0.05)。造模12h后大黄素给药组与模型组无显著差异。结论:早期给予大黄素可明显抑制大鼠TNF-α、IL-6的释放,诱导胰腺腺泡细胞凋亡,从而改善大鼠AP的病情发展。     

热休克蛋白70与重症急性胰腺炎严重程度的关系

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)与重症急性胰腺炎严重程度之间的关系。方法在重症急性胰腺炎大鼠模型复制成功后1 h、5 h、10 h,分别收集胰腺组织和血清;采用RealTime-PCR方法分别测定胰腺组织中HSP70 mRNA的表达情况,采用碘-淀粉比色法测定血清中淀粉酶水平,采用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果在模型复制成功后1 h、5 h、10 h,胰腺组织HSP70 mRNA的表达呈明显下降趋势,大鼠血清中淀粉酶和TNF-α呈明显升高的趋势。结论在重症急性胰腺炎的发生过程中,胰腺组织HSP70表达逐渐下降,而胰腺组织的损伤程度逐渐加重,HSP70的低表达可能促使胰腺炎病情更加严重。     

大黄厚朴组分配伍对大鼠AP的治疗作用及其机制的影响

目的:研究大黄厚朴中大黄素、芦荟大黄素、厚朴酚、和厚朴酚4种主要成分配伍组方对急性胰腺炎(acute pancueatitis,AP)大鼠的治疗作用及其可能的机制。方法:采用均匀设计法将4种组分配成C~H 6个配伍方。采用牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管法,建立急性胰腺炎大鼠模型。大鼠术后15 min给药,24 h腹主动脉取血,测定血清中淀粉酶,胰脂肪酶,白细胞介素-6(IL-6),IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化。另取胰腺、肺组织行病理切片检查,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:各治疗组大鼠血清淀粉酶、胰脂肪酶,IL-6,TNF-α含量与模型组比较,均有显著下调(P0.05,P0.01);IL-10含量亦有所下降,但仅H组统计有显著降低(P0.01)。病理检查结果显示,模型组大鼠胰腺组织大量片状坏死,胰腺腺泡结构不清;肺泡腔明显变小,肺泡上皮出现增生,间隔显著增大;而各治疗组胰腺和肺组织病灶坏死明显有所减轻。各治疗组肺组织中NF-κB蛋白表达与模型组比均显著下调。结论:大黄厚朴4种药效成分大黄素、芦荟大黄素、厚朴酚、和厚朴酚配伍组方对大鼠急性胰腺炎有明显治疗作用,其机制可能与NF-κB蛋白调节,炎症因子介导有关。     

柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠JNK/P38MAPK信号通路的影响

目的:通过JNK/P38MAPK信号通路探讨柴黄清胰活血颗粒治疗重症急性胰腺炎的作用机制。方法:将实验大鼠分为假手术组、模型对照组、柴黄清胰活血颗粒1.6 g/kg组,每组16只,以3.5%牛磺胆酸钠制备重症急性胰腺炎(SAP)模型。各组灌胃相应药物或生理盐水。每4 h给药1次。术后12 h及24 h分别采集各组8只大鼠动脉血与胰腺组织并检测相关指标。结果:与假手术组比较,模型组血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)活性均升高,胰腺组织中IL-1β、TNF-α的阳性量明显升高、MKK4、MKK7、JNK、MKK3、MKK6、P38蛋白的表达均上调,IL-1βmRNA、TNF-αmRNA表达亦明显上调;与模型组相比,柴黄清胰活血颗粒血清中AMY、LIP的活性均明显下降,24 h比12 h活性更低,胰腺组织12 h、24 h IL-1β、TNF-α的蛋白表达均明显下调,MKK4、MKK7、JNK、MKK3、MKK6、P38蛋白表达均明显下调,IL-1βmRNA、TNFαmRNA表达明显下调。结论:柴黄清胰活血颗粒可能通过JNK/P38MAPK信号通路作用于重症急性胰腺炎模型大鼠。     

大黄素对大鼠急性坏死型胰腺炎的干预作用

目的：观察大黄素对急性坏死型胰腺炎（ANP）大鼠全身炎症反应时血浆细胞因子白介素-1β（IL-1β）、TNF-α、IL-10表达的影响.方法：大鼠通过胰腺被膜下均匀注射3%牛磺胆酸钠制备ANP模型,小肠内灌注大黄素25mg/kg和5mg/kg,术后12、24、48h采血5ml,观察血浆IL-1β、TNF-α和IL-10表达情况.结果：ANP组淀粉酶较正常组高,且随时间而加重;在各时间点,大黄素治疗组淀粉酶较ANP模型组明显下降;ANP组血浆IL-1β、TNF-α、IL-10较正常组高,大黄素治疗组可见IL-1β、TNF-α、IL-10较ANP模型组明显下降.结论：大黄素减轻急性坏死型胰腺炎大鼠全身炎症反应时的多器官损伤的机制可能是大黄素负性调节细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-10的表达.     

三七总皂苷对大鼠急性重症胰腺炎钙超载中CaMKⅡ-γ表达的影响

目的探讨三七总皂苷是否降低胰腺炎大鼠胰腺组织中钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ-γ(CaMKⅡ-γ)基因和蛋白水平的表达,降低细胞钙超载的程度,减轻急性重症胰腺炎时胰腺组织的损伤。方法雄性SD大鼠120只,随机分为3组:假手术(SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)组、三七总皂苷干预(PNS)组。检测3组大鼠的血清淀粉酶(AMS)、细胞内Ca2+浓度、胰腺组织内CaMKⅡ-γmRNA及CaMKⅡ-γ蛋白的表达量、并对大鼠胰腺石蜡切片进行病理评分。结果 SAP组及PNS组在术后4h、8h、12h和24h的血清淀粉酶、胰腺组织CaMKⅡ-γmRNA的表达量、胰腺组织CaMKⅡ-γ蛋白表达量、胰腺组织病理评分及胰腺细胞内Ca2+浓度均明显高于SO组(P均0. 05),其中SAP组在术后8h、12h的胰腺组织CaMKⅡ-γmRNA及CaMKⅡ-γ蛋白表达量均明显高于PNS组(P均0. 05),SAP组在术后8h、12h、24h的胰腺组织病理评分及胰腺细胞内Ca2+浓度均明显高于PNS组(P均0. 05)。结论 1. CaMKⅡ-γ在大鼠SAP模型中高表达,其与大鼠胰腺炎钙超载的发生有关。2.三七总皂苷可以通过降低CaMKⅡ-γ在胰腺组织内的表达,减轻胰腺细胞钙超载的程度,对胰腺组织起到保护作用。     

大黄素对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠FGL2凝血酶原酶的影响

目的观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠肺组织FGL2凝血酶原酶的影响。方法采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸建立SAP肺损伤大鼠模型,分别以大黄素高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、低剂量(10 mg/kg)进行干预,在造模3、6、12 h 3个时相点分批处死大鼠,采用qRT-PCR检测大鼠肺组织FGL2、TNF-αmRNA表达,免疫组化技术检测肺组织中FGL2蛋白表达,ELISA法检测肺组织TNF-α及TXB2、6-Keto-PGF1α水平。结果模型组大鼠3、6、12 h 3个时相点肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较假手术组同一时相点明显增高(P 0.05或P 0.01),应用大黄素高、中、低剂量干预后,肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较模型组同一时相点显著下降(P 0.05或P 0.01)。结论重症急性胰腺炎肺损伤时大黄素可以通过下调FGL2凝血酶原酶减轻胰腺炎肺损伤程度,这可能是大黄素抗SAP肺损伤的重要作用机制。     

重症急性胰腺炎大鼠舌组织小窝蛋白表达及大黄素干预的实验研究

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠舌组织小窝蛋白(Caveolin-1,Cav-1)表达及大黄素的调节作用。方法采用5%的牛磺胆酸钠逆行胆胰管注入制作大鼠重症急性胰腺炎模型。将SD雄性大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP模型组(SAP组)、大黄素治疗组(emodin组)。emodin组于造模术后即予大黄素(10 mg/kg,每日2次)灌胃;SAP组及SO组予等量生理盐水灌胃。造模5天后各组选取8只大鼠处死,留取标本,采用透射电镜进行组织形态学分析,Western blot、实时定量PCR等检测Cav-1蛋白及mRNA表达水平。结果透射电镜结果显示,与SO组比较,SAP组舌组织血管内皮细胞吞饮小泡明显增多;emodin组较SAP组明显减少。与SO组比较,SAP组舌组织中Cav-1蛋白及mRNA表达均上调,其中蛋白表达水平差异有统计学意义(P0.05);emodin组较SAP组Cav-1蛋白及mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SAP大鼠舌组织Cav-1表达升高,大黄素干预可明显下调Cav-1的蛋白及mRNA表达。     

剔毒护肝方对肝星状细胞表达Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的影响

目的：探讨剔毒护肝方抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并传代培养，用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞72h，测定培养上清中Ⅰ型胶原含量及TGF-β1活性，提取细胞总RNA，RT-PCR法分析Ⅰ型胶原，TGF-β1mRNA的表达。结果：剔毒护肝方药物血清能显著降低肝星状细胞培养上清中的Ⅰ型胶原含量及TGFβ1活性，并能抑制Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的表达。结论：剔毒护肝方抗肝纤维化的机理之一是抑制肝星状细胞自分泌TGFβ1，并通过TGFβ1生成的减少，下调细胞Ⅰ型胶原的基因转录。     

苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究

目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱(matrine)对大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western-blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-29细胞前后COX-2 mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2(PGE2)水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-29细胞COX-2 mRNA、蛋白表达及PGE2合成水平,但对COX-1无影响。当苦参碱2．0mg／ml处理时,COX-2 mRNA表达在处理后6h和9h时抑制率均为100％;细胞培养液PGE2合成水平在9h时抑制率为63．9％;COX-2蛋白表达在12h和24h时抑制率分别为48％和100％。结论苦参碱具有选择抑制HT-29细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在一定浓度和时间范围内,表现出时效与量效关系．     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并伟代培养。用扶正化阏９方给 正常大鼠灌胃，药物血清，温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率，ＥＬＩＳＡ 培养上清的Ｉ型胶原含量，免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法分析Ｉ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细     

脑溢安颗粒对脑出血大鼠脑内细胞间粘附分子-1表达和中性白细胞浸润及神经细胞损伤的影响

目的：探讨脑溢安颗粒(简称脑溢安)对脑出血后脑内炎症损伤的影响。方法：采用胶原酶诱导的大鼠脑出血模型,分组处理,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学和组织学方法检测术后不同时间各组出血侧脑内细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达、脑微血管内皮细胞上ICAM-1蛋白表达、中性白细胞浸润和神经细胞损伤情况。结果：正常组和假手术组大鼠术侧脑内检测到低水平ICAM-1 mRNA表达及少量ICAM-1阳性微血管,未见中性白细胞浸润和受损神经细胞。模型组大鼠出血侧脑内ICAM-1mRNA表达在术后4h显著升高,24h达到高峰,96h仍保持较高水平,168h恢复正常水平;ICAM-1阳性微血管数在术后4h显著增多,48h达到峰值,持续至168h;中性白细胞浸润和神经细胞损伤在术后4h也明显增多,均于48h达到高峰,之后逐渐下降。脑溢安组大鼠出血侧脑内ICAM-1mRNA表达水平和ICAM-1阳性微血管数显著降低,中性白细胞浸润,神经细胞损伤明显减轻。结论：脑溢安具有抗脑出血后脑内炎症损伤作用。其作用机制可能与抑制ICAM-1介导的中性白细胞浸润有关。     

不同时间电针对急性脑出血大鼠氧化应激反应的影响

目的观察不同时间点针刺治疗对急性脑出血大鼠氧化应激反应的影响。方法Wistar雄性大鼠随机分为7组,正常组、模型组（模型1组、模型2组、模型3组、模型4组）、3h电针组和72h电针组,采用胶原酶Ⅶ诱发大鼠尾壳核脑出血模型。3h电针组和72h电针组分别于造模后3h、72h时开始针刺,每日1次,共针刺5次。检测血红素氧合酶-1（Heme0xygenase-1,HO-1）和血红素氧合酶-2（Heme0xygenase-2,HO—2）。结果造模后脑组织内见大量脑出血,神经纤维缠结、断裂：3h电针组脑组织仍可见泡沫细胞浸润及出血：72h电针组脑组织内坏死灶明显缩小、小胶质细胞浸润、极少量出血。正常大鼠脑组织均有HO—1和HO—2表达,脑出血大鼠HO-1表达明显增高,并与时问变化有-定联系。3h电针组、72h电针组HO-1均降低,两组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。造模后5d大鼠脑组织内未出现HO-2表达,造模后8d出现表达,3h电针组、72h电针组均出现HO—2表达,72h电针组较3h电针组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论电针可以改善急性脑出血后脑组织出血状况,降低脑出血后氧化应激反应,对急性脑出血后神经元损伤有-定的修复作用。脑出血后72h电针比3h电针疗效好,提示急性期脑出血早期应该慎重选择电针治疗。     

清胰汤和汉防己甲素对香猪重症急性胰腺炎的治疗作用及血药浓度测定

目的：探讨中药复方清胰汤及汉防己甲素(Tet)单独或联合应用时对香猪重症急性胰腺炎的治疗作用及其机制,并测定血清大黄素、血浆Tet的含量,比较血药浓度与疗效之间的关系。方法：采用胰管逆行加压推注牛磺脱氧胆酸钠诱发香猪重症急性胰腺炎模型,然后将动物随机均分4组,分别接受相应药物治疗;并在造模前后不同时间采集各组动物门静脉和腔静脉血,检测血清淀粉酶活性及白细胞介素1、6(IL-1、IL-6)含量;用高效液相色谱检测其血清大黄素及血浆Tet的含量;光镜观察制模后96h胰、肺等组织病理变化及动物死亡情况。结果：与对照组比较,清胰汤和Tet均可降低重症急性胰腺炎香猪的死亡率(联合组动物全部存活),减轻其胰腺及胰外器官的病理性损伤,显著降低不同时间点血清淀粉酶活性及门静脉、腔静脉血清IL-1、IL-6的含量(P<0．05或P<0．01),且联合组各时间点血浆Tet含量显著高于单用药组(P<0．05或P<0．01)。结论：清胰汤及Tet可通过多个环节治疗重症急性胰腺炎,二者联合应用可提高血药浓度,并在疗效上体现出协同效应。     

Soy Isoflavone Glycitin (4'‐Hydroxy‐6‐Methoxyisoflavone‐7‐D‐Glucoside) Promotes Human Dermal Fibroblast Cell Proliferation and Migration via TGF‐β Signaling

Glycitin is a soy isoflavone that exhibits antioxidant, antiallergic, and anti‐osteoporosis activities. We investigated the effects of glycitin on dermal fibroblast proliferation and migration. Treatment of primary dermal fibroblasts with glycitin increased cell proliferation and migration. In addition, treatment with 20 μM glycitin for 24 h induced the synthesis of collagen type I and type III at both the mRNA and protein levels. Fibronectin was also increased by 20% after treatment. Matrix metalloproteinase‐1 collagenase was decreased in the media after 24‐h incubation with glycitin, and the synthesis of transforming growth factor‐beta (TGF‐β) mRNA increased approximately twofold in cells following glycitin treatment. Phosphorylation of Smad2 and Smad3 increased after 1 h of glycitin treatment, and phosphorylation continued for 24 h. Furthermore, the phosphorylated form of AKT was increased in glycitin‐treated cells after 3 h and remained higher for 24 h. Thus, glycitin treatment produces anti‐aging effects including increased total collagen in the culture media, decreased elastase, and decreased β‐galactosidase. Together, these results indicate that glycitin stimulates TGF‐β secretion, and the subsequent autocrine actions of TGF‐β induce proliferation of fibroblasts, ultimately protecting skin cells from aging and wrinkling. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

大黄素抗大鼠脑缺血损伤及对炎性因子反应的影响

目的:评价大黄素抗脑缺血损伤作用,并从细胞因子水平及表达方面探讨其抑制炎性级联反应机制。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄素组(低、中、高剂量)。线栓法制备局灶性脑缺血6 h模型。观察神经症状积分、脑组织含水量、梗死面积变化,放射免疫法测定脑组织TNF-α,IL-1β,TGF-β水平,免疫组织化学法测定TNF,VCAM-1表达,原位杂交法测定VCAM-1-mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经症状积分和脑含水量及梗死面积增加,脑组织TNF-α和IL-1β水平增高、TGF-β水平降低,TNF和VCAM-1的表达增强(P<0.01);大黄素各组神经症状积分和脑含水量及梗死面积明显降低,以低剂量组尤为显著;大黄素低剂量组和川芎嗪组TNF-α和IL-1β水平及TNF,ICAM-1表达明显降低(P<0.01),TGF-β水平增高(P<0.01),大黄素低剂量组较川芎嗪组尤为显著。结论:由多种细胞因子介导的炎性级联反应增强和TGF的保护作用减弱是脑缺血损伤的重要机制。大黄素抗脑缺血损伤作用机制可能是通过抑制脑组织炎性级联反应和提高脑保护因子如TGF水平而实现的。     

黄芪对新生鼠缺氧缺血脑损伤后皮质的治疗作用

目的 探讨新生儿围产期缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)时皮质区神经细胞损伤的机制和黄芪对皮质区的神经保护作用。方法建立新生大鼠H1BD模型,分假手术组(Sham组)、模型组、黄芪治疗组。于缺氧后不同时间点取脑,分别行组织病理学检查并计数皮质区神经细胞死亡率、免疫组化检测结扎侧皮质区半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达、半定量逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测caspase-3 mRNA表达．结果 模型组结扎侧皮质caspase-3 mRNA和蛋白表达于缺氧缺血(HI)后6h轻度升高,24h达高峰,48h后下降,5天和7天时恢复至基础水平。黄芪治疗组HI后结扎侧皮质神经细胞死亡率明显降低、caspase-3 mRNA和蛋白的表达峰值降低了45％(mRNA)、40％～43％(蛋白)。结论 黄芪对未成熟脑HIBD后皮质部位有明显的神经保护功能,此功能与抑制caspase-3的表达有关。     

Effect of acute pancreatitis on the pharmacokinetics of Chinese herbal ointment Liu-He-Dan in anaesthetized rats

Ethnopharmacological relevance

Chinese herbal preparation of Liu-He-Dan ointment has been adapted for acute pancreatitis in external application for many years in West China.

Aim of the study

To investigate the effect of acute pancreatitis on the pharmacokinetics of Liu-He-Dan ointment in rats while it was used externally on belly.

Materials and methods

Twelve male Sprague-Dawley rats were randomly divided into acute pancreatitis model group (n=6) and normal group as a control (n=6). Chinese herbal Liu-He-Dan ointment was used externally on belly. Emodin, rhein, aloe emodin, physcion and chrysophanol in plasma and pancreas (at 48 h) were detected and quantified by liquid chromatography–tandem mass spectrometry. Amylase in plasma were determined with iodide process.

Results

Among the five components, only emodin, aloe emodin and physcion from Liu-He-Dan were detected in plasma and pancreas. The absorption of each component was tended to decrease in acute pancreatitis group after topically management with Liu-He-Dan ointment on rats’ abdomen. The T_max, C_max and area under curve (AUC) of each component were distinctly lower in AP group than those in normal group (p<0.05). However, the T_1/2α and mean retention time (MRT) of emodin lasted longer in acute pancreatitis group than those in normal group (p<0.05). There was no statistical difference in the MRT of aloe emodin and physcion between the two groups. Emodin could be detected in all rats’ pancreas at 48 h in both groups, while its mean pancreatic concentration was higher in acute pancreatitis model group than in normal group (0.91±0.68, 0.41±0.36, respectively). Physcion could be detected in pancreas of most acute pancreatitis models, but not in normal rats. Aloe emodin was found in all pancreas from acute pancreatitis models while only one in normal group. The level of amylase in Liu-He-Dan group was obviously lower than that in the AP model group (p=0.0055).

Conclusion

We concluded that acute pancreatitis may significantly affect the pharmacokinetics of Liu-He-Dan while external applied on belly, which indicated the dosage modification in AP. However, acute pancreatitis seems to promote the distribution of the detected components into pancreas. The ointment could help relieve the disease of pancreatitis.     

大黄素对人结肠癌HT-29细胞体外增殖的抑制作用

目的观察大黄素对人结肠癌细胞株HT-29体外增殖的抑制作用。方法取对数生长期的HT-29细胞,按每孔5×103个细胞接种于96孔板,贴壁24 h后换液,分为对照组和实验组(分别含有12.5μM、25μM、50μM、100μM大黄素),共5组。每组均设6个复孔,于37°C、5%CO2孵箱中分别培养24 h、48 h和72 h。采用MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果①MTT比色法显示,处理24 h时,与对照组比较,大黄素50μM、100μM组细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05),而大黄素12.5μM、25μM组抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,处理48 h及72 h后大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理48 h及72 h后的抑制率与同浓度组处理24 h比较,抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理72 h后的抑制率与同浓度组处理48 h比较抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。②倒置显微镜观测显示,对照组多为类圆形成团生长,经各浓度大黄素处理后,细胞体积缩小、间隙变大,细胞数减少。③流式细胞仪检测显示,对照组G2/M期细胞比率明显高于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组G0/G1期细胞比率明显高于大黄素25μM、50μM、100μM浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与12.5μM大黄素组G0/G1期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞比率明显低于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组HT-29细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④与对照组比较,大黄素各浓度组Caspase-3酶蛋白活性显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抑制人结肠癌细胞株HT-29体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞HT-29细胞周期,并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。