缝隙连接细胞间通讯与肿瘤转移

缝隙连接（ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｓ，ＧＪｓ）是细胞之间的一种连接方式，参与离子和其它小分子信号物质的转运，缝隙连接细胞间通讯（ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ）对细胞的生长，增殖和分化起重要的调控作用，并影响肿瘤的浸润和转移过程，它对于阐明肿瘤的转移机理及防治肿瘤转移有重要意义。     

大肠癌细胞与血管内皮细胞间缝隙连接通讯及Cx43蛋白表达的研究

目的:通过建立大肠癌细胞与血管内皮细胞间缝隙连接细胞间通讯(GJIC)模型,检测癌细胞与血管内皮细胞间GJIC以及缝隙连接蛋白Cx43表达的情况,分析其与肿瘤转移的关系.方法:采用细胞培养、免疫组化技术及激光漂白后荧光恢复技术,检测单独培养的内皮细胞间以及共培养的人大肠癌细胞系LoVo细胞、HT29细胞与内皮细胞之间GJIC的状况及Cx43的表达.结果:相邻接触的内皮细胞在激光漂白后出现荧光恢复现象,低转移能力的HT29细胞与内皮细胞共培养组荧光恢复明显减缓;高转移能力的LoVo细胞与内皮细胞共培养组荧光恢复更慢.Cx43免疫组化染色显示,单独培养的内皮细胞的细胞膜呈弥漫强阳性着色;HT29细胞与内皮细胞共培养组阳性细胞数量和着色强度明显低于单独内皮细胞培养组;LoVo细胞与内皮细胞共培养组的细胞几乎无Cx43阳性表达.结论:血管内皮细胞与大肠癌细胞粘附后,细胞间的GJIC减少,Cx43的表达降低,且高转移能力的LoVo细胞与血管内皮细胞间的GJIC减少尤其明显,Cx43的表达显著降低甚至缺失.表明肿瘤细胞与血管内皮细胞粘附后,其间的缝隙连接细胞间通讯将发生改变,从而影响恶性肿瘤的转移.     

缝隙连接通讯抑制剂对Cx43cDNA转染后化疗旁观者效应的影响

背景与目的:有研究通过转染Cx43cDNA观察到C6细胞化疗过程中存在旁观者效应,并推测缝隙连接细胞间通讯可能为化疗旁观者效应机制之一,本研究旨在探讨脑胶质瘤化疗旁观者效应与缝隙连接细胞间通讯功能的关系。方法:(1)质粒扩增,提取纯化及酶切鉴定:氯化钙法将质粒转入JM109菌株扩增,提取纯化后酶切鉴定;(2)基因转染:LipofectAMINE2000介导C6细胞质粒DNA转染,G418筛选,半定量RT-PCR及划痕荷载染料传输实验(SLDT)鉴定。(3)将转染后细胞分为实验组和对照组:将VM-26处理细胞与VM-26未处理细胞按不同比例在无VM-26环境混合培养,培养液中加入缝隙连接细胞间通讯功能抑制剂18α-次甘草酸(AGA)为实验组,不加AGA为对照组,以MTT法及流式细胞仪技术观察AGA对Cx43cDNA转染后化疗旁观者效应的影响。结果:(1)获得转染了相应质粒的细胞株C6-Cx43及C6-Non;(2)C6-Cx43细胞Cx43mRNA表达显著增加,染料传输能力较C6-Non明显增强;(3)C6胶质细胞缝隙连接细胞间通讯功能低下;(4)当转染Cx43cDNA,明显上调C6细胞缝隙连接细胞间通讯功能后...     

肿瘤细胞多药耐药的分子机理与临床化疗的关系

肿瘤细胞多药耐药的分子机理与临床化疗的关系中国医学科学院肿瘤医院刘立新综述，孙燕，审校半个世纪以来，化学治疗已逐渐发展并成为肿瘤综合治疗中的主要手段之一。联合应用几种作用机理不同的药物，可使某些常见肿瘤的疗效明显提高，但化疗仍存在很多问题，其中肿瘤细...     

肿瘤细胞的间隙连接

间隙连接是细胞信号传导的重要途径，在细胞的协调生长步伐等方面的作用不容忽视。肿瘤细胞的形成和癌症的治疗都与其有关，特别是癌症基因治疗中的旁观者效应(bystander effect)与间隙连接胞间通讯(GJIC)密切相关。现综述近年来有关间隙连接在肿瘤细胞的形成和治疗等方面的研究进展。     

沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响

  目的  观察沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对PC-3细胞中Cx43表达水平的影响。   方法  将处于对数生长期的前列腺癌PC-3细胞分别给予递增浓度的沙利度胺(0、12.5、25、50、100μg/mL)处理24 h和48 h。采用CCK-8法检测不同浓度沙利度胺对PC-3细胞的增殖抑制影响, Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况, RT-PCR法检测Cx43mRNA的表达及Westernblot检测Cx43蛋白的表达。   结果   沙利度胺浓度在25~100μg/mL能明显抑制PC-3细胞体外增殖, 随着时间、浓度增加, 抑制率相应升高。不同浓度组沙利度胺处理PC-3细胞24~48 h后, Cx43 mRNA和蛋白有不同程度的升高(P < 0.05)。   结论  沙利度胺可通过抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡, 产生抗肿瘤作用。沙利度胺可上调前列腺癌PC-3细胞Cx43mRNA及蛋白的表达水平, 并可能促进前列腺癌PC-3细胞的细胞缝隙连接通讯功能的恢复, 从而抑制肿瘤生长。      

细胞凋亡检测用于肿瘤细胞株对化疗敏感性的研究

目的 评价Annexin-V荧光标记FACScan法、TUNEL法细胞凋亡检测在肿瘤细胞株化疗药物敏感性研究中的应用。方法 将DDP、MMC、5－FU、EPI按血浆峰浓度（PPC）、1／10PPC、1／5PPC、5PPC、10PPC与结肠腺癌LoVo和Ls-174-t细胞温育24及48h，用FACScan法、TUNEL法检测细胞凋亡，用MTT比色法检测细胞生长抑制率，并提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果 LoVo与Ls-174-t细胞经化疗药物诱导48h后，FACScan检测的细胞凋亡率在PPC时最高，TUNEL法检测的凋亡率与MTT法检的细胞增殖抑制率呈正的直线相关（P＜0．05）。结论 Annexin-V荧光标记FACScan法检测细胞凋亡既能优选出敏感的药物，又能寻找合适的药物浓度，是目前优选有效化疗药物种类及剂量的一个可探索、选用的方法。     

肿瘤细胞耐药基因研究进展

化疗是肿瘤有效治疗手段之一，有关资料统计，90％以上肿瘤患者死网或多或少都与耐药有关。因此研究肿瘤耐药起因、检测和判断哪些是耐药病人进而找出克服耐药方法，提高患者治疗率和生存率是当今肿瘤治疗迫切需要解决的重要课题。“八五”期间，我国把抗癌药耐药基因的研究列为攻关课题，承担单位是中国医学科学院血液学研究所，参加单位有中国医学科学院肿瘤研究所和北京市肿瘤研究所，下面介绍主要研究成果。一、基础研究方面1．建立耐药细胞株进行耐药基因表达的基础乃至临床研究都需要建立多药耐药（MDR）细胞系，一是为了建立检测耐…     

共轭亚油酸对正常动物细胞和肿瘤细胞间通讯传递的影响

细胞间隙连接通讯（gap junctional intercellular communication,GJIC)对细胞的正常增殖分化和代谢功能以及组织自身稳定等起着重要调节作用。而肿瘤组织和肿瘤细胞的GJIC表达减弱或消失。本文目的：采用c9,tll-CLA来探讨其对人体肿瘤细胞（SGC－7901细胞的MCF－7细胞GJIC的影响以及在促癌物（TPA）存在下,对CHL细胞GJIC的影响。方法：采用划痕标记染料示踪技术（SLDT）;c9,t11-CLA剂量为25μmol/L,50μmol/l,100μmol/L,阴性对照为96％乙醇（0.1%v/v) 。结果：（1）荧光染料荧光黄（luciffer yellow,LY)划痕标记SGC－7901细胞和MCF－7细胞3min后,在阴性对照组中,LY黄色荧光仅分布在伤沿细胞列内,说明SGC－7901细胞无间隙通讯功能。当用c9,tll-CLA作用SGC－7901细胞和MCF－7细胞24h t 48h时,可见（24h 100μmol/L的MCF－7细胞）24h 200μmol/L和48h100μmol/L,200μmol/L剂量组的肿瘤细胞有一定的细胞间隙通讯功能,可见LY沿伤沿列传向邻近的细胞;（2）LY划痕标记CHL细胞3min后,在阴性对照组中,LY黄色荧光分布在伤沿细胞列和邻近的2－3列细胞内,表示CHL细胞有间隙通讯功能,而单独使用TPA剂量组,LY仅分布伤沿细胞内,表示CHL细胞间隙通讯功能被完全阻滞。在TPA存在时,c9,tll-CLA作用CHL细胞24h和48h时,各个剂量组不同程度地恢复CHL细胞间隙通讯功能,当CLA剂量为200μmol/L24h时,LY荧光染料已从伤沿传递至2列细胞,48h时,细胞间隙通讯功能基本上与阴性对照组相近。结论：c9,tll-CLA可提高SGC－7901细胞和MCF－7细胞的GJIC的功能,并且不同程度的拮抗TPA对CHL细胞GJIC的抑制效应。     

新辅助化疗对乳腺癌肿瘤细胞的影响及其临床意义

目的:探索新辅助化疗对人体乳腺癌的作用机制及其临床应用的意义。方法:选取同期经病理确诊可手术的女性乳腺癌100例,分成新辅助化疗组和对照组各50例进行配对研究。新辅助化疗组术前接受CMF或CAF方案化疗2个疗程,对照组术前不接受任何抗肿瘤治疗。手术标本常规病理检查,同时应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化LSAB法,分别检测乳腺癌组织中肿瘤细胞的凋亡指数(AI)和肿瘤组织的增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:新辅助化疗组CR4例(8.0%),PR28例(56.0%),SD18例(36.0%),无恶化病例,总有效率为64.0%。新辅助化疗组AI(7.5%±2.9%),PCNA表达的阳性率(33.7%±6.8%);对照组AI(4.8%±2.1%),PCNA表达的阳性率(51.5%±10.2%)。AI与PCNA表达的阳性率均呈负相关,与化疗的疗效呈正相关。结论:乳腺癌新辅助化疗的总有效率(CR+PR)为64.0%;在人体乳腺癌组织中,新辅助化疗的作用机制除化疗药物的细胞毒作用外,还有可能通过诱导肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖发挥抗肿瘤作用。     

能量可控陡脉冲对乳腺癌细胞缝隙连接的影响

目的:研究能量可控陡脉冲(energy controllable steep pulse,ECSP)对细胞缝隙连接蛋白Cx43的影响.方法:处理组用不同剂量参数组合的ECSP对乳腺癌MDA-MB-231细胞处理5 min后继续培养48 h,对照组不予任何处理.2组均采用间接免疫荧光细胞化学法测定和激光共聚焦显微镜观察连接蛋白Cx43 的定位.采用Western印迹法检测细胞内Cx43 蛋白的含量,RT-PCR检测Cx43 mRNA的表达.结果:对照组乳腺癌细胞间连接处有散在的明亮点状标记.ECSP处理2、3、4组经ECSP处理(条件分别为:电压100 V,频率100 Hz;电压100 V,频率200 Hz;电压150 V,频率100 Hz)后,继续培养的乳腺癌细胞间连接处标记斑点较对照组增多.Western印迹分析表明:ECSP处理2、3、4组Cx43蛋白条带亮度明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR扩增产物中,ECSP处理2、3、4组的Cx43基因条带亮度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).ECSP 处理1、5组(条件分别为:电压100 V,频率50 Hz;电压200 V,频率200 Hz)经ECSP处理后继续培养的乳腺癌细胞间连接处标记斑点与对照组无明显差异(P>0.05).ECSP处理1、5组Cx43蛋白条带与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR扩增产物中,ECSP处理1、5组Cx43基因条带亮度与乳腺癌对照组比较,差异亦无统计学意义(P>0.05).结论:低能量可控陡脉冲可增强体外培养的乳腺癌细胞缝隙连接通讯功能,从而达到治疗恶性肿瘤的目的.     

肿瘤细胞和TIL对化疗药物敏感性的测定

目的：探讨ＭＴＴ法应用于肿瘤细胞化疗敏感性检测的意义,及化疗与肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＴＩＬ）过继免疫治疗的合理应用。方法：应用ＭＴＴ法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和化疗对ＴＩＬ的毒性。结果：肿瘤细胞和ＴＩＬ细胞数都与生成的甲Ｚａｎ（ｆｏｒｍａｚａｎ）的光密度（ＯＤ）值呈线性正相关。肿瘤细胞对化疗药物的敏感性存在较大个体差异。ＥＡＤＭ与ＤＤＰ,ＤＤＰ与ＭＭＣ联合化疗存在协同作用,ＥＡＤＭ与５－ＦＵ联合化疗存在拮抗作用。化疗药物对ＴＩＬ的毒性作用大于对肿瘤细胞的杀伤用用。结论：ＭＴＴ法应用于肿瘤细胞化疗敏感性检没紧指导临床个体化治疗,具有筛选敏感性化疗药物和避免非敏感性化疗对机体抗肿瘤免疫细胞毒性的双重积极意义。ＴＩＬ过继免疫治疗与化疗不宜同时应用。     

肿瘤细胞浸润转移与内皮细胞的相关性

癌细胞的转移是一个复杂的生物学过程,除癌细胞的恶性程度及癌细胞扩散能力外,还与宿主本身的防御系统密切相关。其中,癌细胞侵入血管或淋巴管,形成血行性和淋巴行性转移,以及内皮细胞在癌细胞转移时所发牛的变化,已日益引起人们的重视。 一、癌转移过程中血管内皮细胞功能的变化     

肿瘤细胞耐药性的胞外影响机制

近年来发现，细胞外因素对肿瘤细胞的耐药性有重要影响，甚至可以决定肿瘤细胞耐药性能否产生，胞外因素包括细胞外基质，氧状况，细胞间的相互作用以及肿瘤所处的器官环境等，通过调节细胞外因素，可能是克服肿瘤耐药性的一种新途径。     

依托咪酯对神经胶质瘤细胞缝隙连接通讯的影响

背景与目的：细胞缝隙连接(gap junction,GJ)通讯能增强放疗或化疗药物对肿瘤细胞的细胞毒性作用。以往研究发现部分麻醉药物能够改变GJ功能从而影响肿瘤细胞对放疗的敏感性。该研究拟观察依托咪酯对神经胶质瘤细胞由缝隙连接蛋白Cx43组成的缝隙连接功能的影响,为麻醉药对化疗敏感性影响的机制研究提供线索。方法：采用磺酰罗丹明B法观察依托咪酯对神经胶质瘤细胞的抑制作用;细胞接种荧光法观察依托咪酯对神经胶质瘤细胞GJ功能的影响。结果：0.1、0.5、1和5μmol/L依托咪酯在作用4 h时间内均对细胞生长无抑制作用,将不影响细胞缝隙的数量;取药物浓度接近血药浓度的依托咪酯作用细胞4 h,与对照组相比,0.1μmol/L依托咪酯作用细胞4 h后,神经胶质瘤细胞GJ通讯的荧光传递功能无明显变化;而0.5和1μmol/L依托咪酯作用细胞4 h后,神经胶质瘤细胞的荧光传递功能明显减弱。结论：依托咪酯能抑制神经胶质瘤细胞Cx43组成的GJ功能。     

辛伐他汀对肝癌细胞间缝隙连接功能的影响研究

背景与目的：肝癌的发生、发展过程中伴随着细胞间缝隙连接(gap junction,GJ)功能的下降,恢复或增强肿瘤细胞间的GJ可以抑制肿瘤细胞的恶性转化和生长增殖。本研究拟通过观察辛伐他汀对肝癌细胞间GJ功能的影响,寻找能够增强GJ功能的药物,从而为肝癌的治疗提供新策略和新手段。方法：采用磺酰罗丹明B法观察辛伐他汀对大鼠肝癌细胞Hep3b的抑制作用;细胞接种荧光法和划痕标记/染料示踪技术观察辛伐他汀对GJ功能的影响。结果：1、5和10 μmol/L辛伐他汀在24 h作用时间内均对细胞生长无抑制作用,将不影响GJ的数量;取5、10 μmol/L辛伐他汀作用细胞4 h后,与对照组相比,GJ的荧光传递功能明显增强;与对照组相比,5、10 μmol/L辛伐他汀作用细胞4 h后,荧光黄染料(lucifer yellow,Ly,Sigma)传输范围随着辛伐他汀浓度的升高逐渐增大。结论：辛伐他汀可以增强肝癌细胞GJ功能。     

转染Cx43cDNA对胶质瘤细胞生长影响的观察

背景与目的：缝隙连接与肿瘤的发生、发展、转移和凋亡密切相关。本研究观察转染Cx43cDNA对C6细胞缝隙连接细胞间通讯功能（gap iunctional intercellular communication，GJIC）功能及生长影响情况。方法：①通过氯化钙法将质粒转入JM109菌株，筛选阳性菌落扩增，用Wizard Pure Fection质粒DNA纯化系统试剂盒进行提取及纯化，最后用Ecor Ⅰ、Hind Ⅲ内切酶进行酶切鉴定；②基因转染：通过Lipofect AMINE2000介导对C6细胞进行质粒DNA转染，用G418筛选浓度筛选出转染成功细胞：③用半定量RT—PCR检测转染后c6细胞Cx43mRNA表达的改变；④划痕荷载染料传输实验（scrape loading dye transfer test，SLDT）检测转染前后GJIC的改变；⑥以MTT法检测转染细胞培养72h后的A值，观察转染Cx43cDNA对C6细胞生长抑制情况；⑥用流式细胞仪技术检测转染细胞培养72h后细胞凋亡率，观察转染Cx43cDNA对C6细胞凋亡的影响。结果：①转染了Cx43cDNA的C6-Cx43细胞Cx43mRNA表达显著增加；②C6-Cx43细胞染料传输能力较空载质粒转染细胞C6-Non明显增强；⑧MTT法检测表明同C6-Non相比，C6-Cx43细胞A值较低，两者差异有显著性（P〈0．01）；④流式细胞仪检测发现C6-Cx43与C6-Non细胞凋亡率无显著性差异（P〉0．05）。结论：①转染Cx43cDNA可上调c6细胞GJIC水平。②转染Cx43cDNA可显著抑制C6细胞生长，但细胞凋亡并未增加。