基于分子对接和实验验证的五味子乙素在人肝微粒体中的代谢酶表型研究北大核心CSCD

目的:基于分子对接和肝微粒体体外实验分析参与五味子乙素(Sch B)代谢的CYP450酶,确定其在人肝微粒体中的代谢表型。方法:首先利用分子对接方法从人体内9种重要的CYP450酶筛选出与Sch B亲和力强的药物代谢酶,其次采用体外人肝微粒体温孵体系,结合CYP450亚酶特异性抑制剂实验验证参与Sch B代谢的CYP450亚型。结果:分子对接研究结果发现CYP2A6、CYP2C8、CYP2C19、CYP2E1等代谢酶具有较高的得分,表明这些酶可能与Sch B具有较强的结合。体外抑制实验结果显示甲氧沙林(CYP2A6特异性抑制剂)、盐酸噻氯吡啶(CYP2C19特异性抑制剂)和4-甲基吡唑(CYP2E1特异性抑制剂)在一定程度上抑制了人肝微粒体对Sch B的代谢,表明CYP2A6、CYP2C19、CYP2E1可能在参与Sch B代谢中发挥重要作用,并对其与Sch B的结合模式进行分析。结论:本研究初步探索了参与Sch B代谢的CYP450酶亚型,为进一步研究Sch B的体内代谢及五味子的临床合理配伍提供参考。     

谷红注射液对CYP450酶的抑制和诱导作用的体内外研究

目的 考察谷红注射液对体外及体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶的影响。方法 人肝微粒体“Cocktail”探针底物法进行体外酶抑制实验,检测7种探针底物代谢产物的相对生成量,计算半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）,评估谷红注射液（0.05%～10%）对7种CYP450亚酶抑制作用。人原代肝细胞体系进行体外酶诱导实验,分别检测酶活性及其m RNA表达水平,评估谷红注射液对CYP450酶诱导作用。采用整体动物法进行体内酶活性实验,检测7种特异性探针底物血浆药物浓度,评估谷红注射液（0.9、3.6 mL/kg）对大鼠7种CYP450亚酶活性的影响。结果 谷红注射液对人肝微粒体CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的IC50值分别为1.98%、7.95%、2.85%、5.39%、4.92%、7.76%和3.41%,均大于0.5%（理论临床最大血药浓度值）;人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达增加>2倍,且前两者呈浓...     

大黄素在人肝微粒体中的体外代谢研究

目的:研究大黄素对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的影响以及在人肝微粒体中的代谢产物和参与酶亚型,为临床合理用药提供参考。方法:采用LC-MS/MS检测方法,建立6种混合探针底物的Cocktail体外方法,快速评价大黄素对CYP450同工酶活性的影响。同时在人肝微粒体孵育体系中加入大黄素和CYP450各亚型酶的特异性抑制剂,检测大黄素的代谢清除率,鉴定大黄素在人肝微粒体中代谢产物和代谢酶表型。结果:大黄素对CYP2D6和CYP2C19有强抑制作用,IC50分别为1.0060μmol·L-1和0.5370μmol·L-1。大黄素在人肝微粒体中有1个氧化代谢产物,参与代谢的酶亚型为CYP1A2、CYP2E1和CYP2C19。结论:大黄素对CYP2D6和CYP2C19有抑制作用,提示在临床上需注意大黄素的用药剂量以及与其他被CYP2D6和CYP2C19代谢的药物合用时的相互作用。     

HK-5的体外代谢研究

目的考察HK-5在人、SD大鼠、比格犬、小鼠和猴肝微粒体中的代谢稳定性;测定人肝微粒中HK-5代谢表型。方法采用LC-MS测定HK-5在五个种属肝微粒体中孵育不同时间点后的剩余浓度;在人肝微粒体中使用化学抑制剂对各CYP亚酶特异性抑制,比较化学抑制剂对HK-5的抑制率。结果 HK-5在5个种属的肝微粒体中体外代谢半衰期(T1/2)分别为42.5,38.3,70.7,70.0,60.9 min,肝微粒体固有清除率(CLint)分别为0.033,0.036,0.020,0.020,0.023ml·(min·mg蛋白)-1,体内固有清除率(CL'int)分别为32.7,64.8,29.7,78.8,34.2ml·(min·mg)-1。HK-5在SD大鼠肝微粒体和人肝微粒体代谢速率相近,相对较快;在猴、比格犬和小鼠肝微粒体中代谢速率相近,均比较慢;代谢速率存在一定的种属差异。代谢表型实验中发现HK-5在人肝微粒体中主要经CYP3A4,CYP2D6和CYP2A6三种亚酶催化代谢。结论 HK-5在人和SD大鼠肝微粒体中有相近的T1/2和CLint,后期体内代谢实验可选用SD大鼠进行研究;HK-5由多种CYP亚酶代谢,代谢性药物相互作用发生概率降低。     

364 78种生药提取物对人肝脏微粒体 CYP3A4和CYP2D6的抑制作用

探讨了78种生药提取物对人肝脏微粒体的药物代谢酶细胞色素P450（CYP）CYP3A4和CYP2D6的抑制作用。     

黄酮类化合物对人肝微粒体甲氧试卤灵去甲基酶活性的抑制

体内外试验结果显示,黄酮类化合物能调节代谢、降解异物,对肿瘤有预防作用,其重要机理之一是通过与细胞色素 P-450系统的相互作用,抑制或激活某些能将致癌物前体转化为致癌代谢产物的异构酶。CYP1A2是细胞色素 P-450家族中 CYP1A 亚族的成     

黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响

探讨黄连和黄芩配伍代谢性相互作用的机制.大鼠连续ig黄连、黄芩及药对提取物7d诱导肝药酶后,采用cocktail探针底物与肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时检测肝微粒体中5种探针底物代谢消除率,评价各给药组对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响.与空白组相比,黄连对CYP2D6,CYP1A2呈显著抑制作用;黄芩对CYP1 A2,CYP2E1,CYP2C9具有显著抑制作用.黄连、黄芩按1∶1配伍后仅对CYP1 A2显示抑制作用,对CYP2D6,CYP3A4则呈显著的激活作用;而黄连、黄芩按2∶1配伍后对代谢酶的激活作用消失,表现为对CYP1A2,CYP2C9的显著抑制.结果表明黄连与黄芩对P450酶主要表现为抑制作用,二者按一定比例配伍后作用特点发生改变,呈现出激活和抑制的双重性,且与配伍比例相关.推测黄连与黄芩配伍对代谢酶的抑制和诱导作用是其发挥减毒增效作用的原因之一.     

甘草、芫花合用对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

目的:为了阐明基于药物代谢酶的中药十八反产生相反作用的机制,选择相反药对甘草、芫花作为研究对象,研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2酶活性的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性.结果:甘草、芫花合用后CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性增加,与对照组比较有显著差异(P＜0.05～0.001).结论:两药合用对药物代谢酶的影响可能会使某些药物毒性成分在体内代谢特征发生改变,对药物的疗效或毒性产生影响,从而产生基于药物代谢酶的中药间相互作用.     

基于计算药理学的复方丹参滴丸对氯吡格雷代谢酶的影响

目的:研究复方丹参滴丸对参与氯吡格雷代谢酶人源肝羧酸酯酶CES1、细胞色素CYP450 3A4、CYP4502C19、CYP450 1A2、CYP450 2B6的影响,对其作用效应进行整体分析。方法:选择了上述5个氯吡格雷代谢相关靶点,构建组方化学成分分子配体,采用计算药理学方法探讨配体与5个代谢酶间相互作用特征。结果:分别以1MX1(CES1)、3NXU(CYP450 3A4)、4GQS(CYP450 2C19)、2HI4(CYP450 1A2)、3IBD(CYP450 2B6)为受体,THA、RIT、OXU、Chlorzoxazone、CPZ评价得分为阈值,组方中分别有29、8、31、51、44个化合物分子与代谢酶蛋白CES1、CYP450 3A4、CYP450 2C19、CYP450 1A2、CYP450 2B6间存在一定的结合效应,分析对接的结果与文献cocktail法得出的结论完全一致。结论:复方丹参方可在整体层面上抑制氯吡格雷代谢酶CES1、CYP450 3A4、CYP450 2C19、CYP450 1A2、CYP450 2B6。     

78种生药提取物对人肝脏微粒体CYP3A4和CYP2D6的抑制作用

探讨了78种生药提取物对人肝脏微粒体的药物代谢酶细胞色素P450(CYP)CYP3A4和CYP2D6的抑制作用。材料与方法:①制备78种生药提取物的甲醇可溶性组分,添加剂量为1.65mg/mL。②从16人(男性11人,女性5人)获取的人肝微粒体储存于-80℃备用。微粒体中CYP的含量为0.385nmol/mg蛋白质。③分别以红霉素N-去甲基作用和右美沙芬O-去甲基作用作为人肝微粒体CYP3A4和CYP2D6活性的指标。用酶免疫测定法检测78种生药提取物对人肝微粒体CYP3A4和CYP2D6的抑制活性。结果:①31种生药提取物对人肝微粒体红霉素N-去甲基作用的抑制活性大于50%,其…     

黄连碱在人肝微粒体中的代谢

目的研究黄连碱在人肝微粒体中的代谢情况。方法通过酶促动力学实验计算酶促动力学参数,通过检测CYP450亚酶专属性抑制剂对黄连碱代谢的影响,推测参与黄连碱代谢的CYP酶亚型,并推断代谢产物的结构。结果黄连碱在人肝微粒体中代谢的米氏常数Km为6.802 7μmol/L,最大代谢速率Vmax为0.054 76 nmo L/(mg protein·min),肝清除率Clint为0.008 m L/(mg·min),奎宁、甲氧沙林、酮康唑均在一定程度上抑制了黄连碱的代谢,黄连碱在人肝微粒体中的代谢产物为黄连碱脱去一个亚甲基结构。结论 CYP2D6、CYP2A6、CYP3A4可能参与黄连碱的代谢,代谢产物为脱亚甲基黄连碱。     

气虚血瘀模型大鼠脾代谢酶活性变化的实验研究

目的观察气虚血瘀模型大鼠脾脏中主要的Ⅰ、Ⅱ相药物代谢酶活性的变化。方法取24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组和模型组,每组12只。采用连续两周冰水游泳至力竭同时节食的方法制作气虚血瘀大鼠模型,空白对照组自由饮食且不强制游泳。观察两组大鼠的一般状态和体重变化,检测其全血黏度和血浆比黏度,并观察脾脏的胞浆液和线粒体中主要的6种Ⅰ相代谢酶(CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6及CYP3A4)和2种Ⅱ相代谢酶[尿苷二磷酸葡醛酸转移酶1(UGT1)、雌激素硫酸转移酶(SULT1E1)]的活性改变。结果模型组大鼠毛发枯槁、精神萎靡、有便溏现象;与空白对照比较,模型组大鼠体重降低(P0.01),全血黏度升高(P0.01),脾脏胞浆液中CYP2C8、CYP2C19、CYP2D6活性均降低(P0.05,P0.01);线粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4活性均降低,UGT1活性性升高(P0.01)。结论气虚血瘀模型大鼠脾脏中的药物代谢酶特别是Ⅰ相代谢酶的活性发生改变,该改变可能与脾功能下降相关。     

基于CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制研究

目的探讨CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制。方法采用"Cocktail"探针药物法测定CYP1A2和CYP3A4酶活性,使用高效液相色谱仪检测血浆中咖啡因和咪达唑仑两种特异性探针药物的浓度。应用CO示差还原法测定大鼠肝微粒体中CYP450酶含量,通过反转录聚合酶链式反应来检测CYP1A2和CYP3A4 mRNA的表达。结果附子对CYP1A2和CYP3A4酶活性及CYP450酶含量无影响;甘草、附子配伍甘草和四逆汤对CYP1A2和CYP3A4酶活性有诱导作用并且显著增加CYP450酶含量;与对照组比较,甘草组、附子配伍甘草组和四逆汤全方组对CYP3A4 mRNA的表达有不同程度诱导作用。甘草组和四逆汤全方组对CYP1A2 mRNA表达有显著诱导作用,附子配伍甘草组对CYP1A2 mRNA表达无显著影响。结论实验研究表明甘草、附子配伍甘草、四逆汤全方能够诱导CYP1A2和CYP3A4酶活性,显著增加CYP450酶含量;附子配伍甘草对两种酶活性的影响可能由甘草对酶基因表达影响引发,使酶活性增强,从而加快附子毒性成分在体内代谢,从肝药代谢酶角度阐明甘草在四逆汤中对附子起主要减毒作用。     

桔梗皂苷D经CYP的代谢活化在抑制A549细胞活性中的作用研究

目的 探究细胞色素P450酶(CYP450s)对桔梗皂苷D的代谢活化及对人非小细胞肺癌细胞株(A549细胞)的活性影响。方法 构建稳定表达CYP1A1、CYP1A2、CYP2B6、CYP2E1的人非小细胞肺癌A549细胞系,分别加入不同浓度(0,1,2,4μmol/L)的桔梗皂苷D孵育24 h后,采用CCK-8法检测各A549细胞系活性;将桔梗皂苷D与CYP1A1、CYP1A2、CYP2B6、CYP2E1重组代谢酶进行体外孵育120 min,超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)法检测药物浓度变化,并使用分子对接模型对桔梗皂苷D与CYP450s的结合位点和结合力进行预测分析。结果 成功构建稳定表达CYP1A1、CYP1A2、CYP2B6、CYP2E1的A549细胞系,Western blot及PCR均能检测出目的条带。随着桔梗皂苷D浓度的增加,与另外3组细胞系相比,高表达CYP1A1组A549细胞活性被明显抑制(P均<0.05);与另外3组代谢酶相比,桔梗皂苷D与CYP1A1体外孵育120 min后含量显著降低(P均<0.05);分子对接模型显示,桔梗皂苷D与CYP1A1有...     

利福布汀的代谢研究

 目的通过亚细胞、器官和整体动物3种水平的代谢实验,研究了利福布汀(rifabutin,RBT)自身代谢以及RBT被连续给药后对自身代谢及肝细胞色素P450酶系的影响,为临床的合理用药提供有益的指导。方法36只Wistar大鼠随机分为6组,每组6只。3种水平的实验研究各有空白对照组和RBT给药组(口服灌胃300 mg·kg^-1·d^-1×7 d)。亚细胞代谢研究利用制备的肝微粒体,体外温孵CYP1A2,CYP2D6,CYP2C9,CYP2E1及CYP3A等几种重要亚酶的特异性底物,通过比较其代谢产物的生成速率来评价RBT对这些亚酶的影响;器官代谢研究采用大鼠原位肝脏灌流方法,整体实验动物代谢研究通过颈静脉插管手术,器官与整体代谢都是比较其代谢参数的差异。结果连续口服7 d RBT之后,酶蛋白水平和总体CYP450活力分别为空白对照组的84.60%和410.0%。CYP3A及CYP2D6亚酶活性分别为空白对照组的184.0%及155.7%。器官和整体动物水平都表明RBT连续给药组显著加快了自身药物的代谢,t_1/2分别为空白对照组的58.96%和71.00%,并且器官水平显示AUC也仅为空白对照组的49.06%。结论RBT代谢存在自身诱导,连续服用RBT之后,不仅自身的代谢将会被改变,那些经CYP3A及CYPD2D6代谢的合用药物的代谢也将被改变。     

中药中CYP酶抑制成分的发现

随着中药以及中药与西药联合用药的广泛普及,其产生的药物-药物相互作用(drug-drug interaction,DDI)被认为是引起治疗效果减弱或药物毒副作用的主要原因。CYP酶负责大量药物的代谢,CYP3A4和CYP2D6是CYP酶的最主要的2个亚型,负责代谢超过80%以上经CYP代谢的药物。由于CYP酶的抑制是导致DDI最重要的一个因素。因此,发现中药中CYP3A4和CYP2D6的潜在抑制剂对于预防不良DDI的发生有重大意义。该文建立了一种快速且成本较低的CYP3A4和CYP2D6抑制成分的计算预测方法,即支持向量机(SVM)和分子对接技术,用来预测和筛选药物。首先利用SVM分别建立2个靶点的12个定性模型,并挑选最优的模型来预测在中药化学成分数据库(TCMD)的化合物。随后利用分子对接技术建立对接模型,通过分析药物与靶点相互作用的关键氨基酸,与SVM模型结合,发现CYP3A4和CYP2D6的潜在抑制剂。根据分子模拟的结果,astin D和表小檗碱(epiberberine)分别对CYP3A4和CYP2D6存在抑制作用。astin D只存在于紫菀的astins家族,而表小檗碱是中药黄连的活性成分,因此,这些潜在抑制剂的来源中药紫菀和黄连,应当在药物联合用药过程中警示DDI的发生。该计算方法利用SVM和分子对接模型为筛查中药中CYP酶抑制剂成分提供技术支持。该研究也有助于认识目前存在于中药中CYP酶介导的DDI,为进一步开展药物联合用药的预警提供研究思路。     

探针药物评价藤黄酸对肝细胞色素P450酶亚型的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究藤黄酸对大鼠肝细胞色素P450(CYP450)的影响。方法将SD大鼠随机分组,藤黄酸组给予藤黄酸0.5%CMC-Na溶液(2mg·mL-1),以0.5%CMC-Na为空白对照,在一定的时间点采集血样,通过HPLC检测探针药物在大鼠体内的代谢情况,以评价藤黄酸对肝细胞色素P450酶的影响。结果藤黄酸组中咖啡因和氨苯砜的代谢情况与空白组没有显著性差异,但氯唑沙宗的代谢加快,t1/2缩短。结论藤黄酸对代谢酶CYP1A2及CYP3A4的影响不明显,但对代谢酶CYP2E1具有诱导作用。     

利血平诱导的急性抑郁模型大鼠体内CYP450亚酶的活性变化

目的:运用Cocktail探针法测定利血平诱导的急性抑郁模型大鼠体内6种细胞色素P450(CYP450)亚酶活性变化,从药物代谢相互作用的角度探寻抑郁症的发病机制。方法:建立利血平诱导的急性抑郁模型,大鼠随机分为空白组(记为A组),模型组(记为C组)和西药文拉法辛组(记为H组),适应1星期后,H组连续给药2周,A组和C组给予清水2周,第21天C组和H组按4 mg·kg~(-1)腹腔注射利血平注射剂,A组注射等体积生理盐水,第22天禁食不禁水12 h,第23天各组大鼠按10 m L·kg~(-1)灌胃给予混合探针药物。选取茶碱、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、右美沙芬、奥美拉唑以及咪达唑仑作为大鼠CYP1A2,CYP2C6,CYP2D1,CYP2D2,CYP2E1和CYP3A2的探针底物,采用LC-MS/MS测定大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数。结果:造模后甲苯磺丁脲在大鼠体内浓度显著升高、代谢减慢;咪达唑仑在大鼠体内浓度显著降低、代谢加快。给予抗抑郁文拉法辛后,茶碱、氯唑沙宗和咪达唑仑在大鼠体内浓度显著升高、代谢减慢。结论:利血平诱导的急性抑郁模型状态对大鼠CYP2D1和CYP2D2有中强抑制作用,对CYP3A2有中强诱导作用;给予文拉法辛后对模型大鼠CYP1A2,CYP2C6,CYP2E1,CYP3A2为中强抑制作用。     

表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9亚型活性的影响。结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据。     

中药有效成分与提取物对CYP1-3家族肝药酶的影响

目的 从抑制与诱导两方面综述中药有效成分、提取物及其制品与CYP1-3家族中CYP450酶相互作用的研究成果,以期为中药、草药药物相互作用研究与临床合理用药提供参考。方法 以“中药”“肝药酶”“细胞色素P450”“药物相互作用”等为关键词,组合查询近10年来在中国知网、维普网、PubMed等数据库中的相关文献,归纳中药有效成分、中药提取物及其制品与CYP1-3家族中CYP450酶相互作用的研究成果。结果 研究发现,Ⅰ相代谢反应中的杂原子氧化、还原、水解、脱甲基、脱氢、羟化等代谢途径绝大部分由CYP 3个基因家族CYP1、CYP2、CYP3的6种同工酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4）主导,这6种酶分别约代谢4%、18%、5%、30%、2%、50%的临床药物。结论 研究中药有效成分、提取物及其制品与CYP1-3家族中各亚型的相互作用,对于指导临床联合用药、提高临床用药的安全性有着重大意义。