强压力波对血管内皮细胞,血管平滑肌细胞释放内皮素,一氧化氮的 …

目的 探讨强压力波对血管内皮细胞及血管平滑肌细胞释放内皮素（ＥＴ）、一氧化氮（ＮＯ）的影响。方法 １５只犬高速投射物致伤，检测致伤前后血浆ＥＴ、ＮＯ浓度，并用肠系膜血管内皮细胞（ＶＥＣ）、血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）联合培养，体外检测强压力波致伤前后培养上清中的ＥＴ－１、ＮＯ浓度。结果 高速投射物致伤犬后血浆中的ＥＴ、ＮＯ浓度显著升高。联合培养血管内皮细胞、平滑肌细胞致伤后ＥＴ、ＮＯ浓度在致伤后１０     

低强度激光照射对大鼠血管平滑肌细胞一氧化氮生成通路的上调作用

目的 观察低强度激光照射(low power laser irradiation,LPLI)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)左旋精氨酸(L-Arg)转运、一氧化氮(NO)生成以及NO合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性的作用,以探讨LPLI血管保护作用的细胞分子机制.方法 取Wistar大鼠主动脉,贴块法培养VSMCs,分别以能量密度0、0.9.2.7和4.5 J/cm2的He-Ne激光(波长632nm)照射,无照射组为对照组.重氮化学反应法测定培养液中NO含量,细胞孵育液中加入3H-L-Arg测定细胞L-Arg的摄入,测定3H-胍氨酸的生成反映NOS活性.结果 能量密度分别为0.9,2.7和4.5 J/cm2的LPLI照射VSMCs,促进细胞NO生成分别较对照组增加-1.3%(P＞0.05)、60.4%(P＜0.01)和78.6%(P＜0.01);细胞NOS活性分别较对照组增加16.9%(P＞0.05)、44.6%(P＜0.01)和53.0%(P＜0.01);而且细胞摄入L-Arg(Vmax值)分别较对照组增加11.0%(P＜0.05),66.7%(P＜0.01)和38.7%(P＜0.01);激光照射对L-Arg跨细胞膜转运的米氏常数(Km值)无明显影响(均P＞0.05).结论 低强度He-Ne激光照射激活大鼠VSMCs的L-Arg/NOS/NO通路,可能为低强度激光扩张血管、改善器官血流等生物学效应的机制之一.     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

诱生型一氧化氮合酶调节体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞中MMP的表达

目的 探讨在体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)中，一氧化氮(NO)的产生及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化对基质金属蛋白酶MMP-2，MMP-9的调节。方法 酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)，α—actin及电镜鉴定SMC后，取3～5代SMC用IL-10诱导iNOS表达，使用不同浓度的选择性iNOS抑制剂氨基胍，通过RT—PCR观察NO调节MMP-2，MMP-9的表达情况。结果 氨基胍抑制IL-1β诱导的SMC表达iNOS后，在一定范围内降低MMP-2 mRNA表达，但对MMP-9的表达无明显影响。结论 用不同浓度的氨基胍抑制IL-1β诱导体外培养的SMC表达iNOS，MMP-2 mRNA的表达在一定范围内呈浓度依赖性增加，提示NO对MMP-2表达的抑制作用可能在NO介导的以血管重构为特征的一系列血管疾病如腹主动脉瘤，经皮血管腔内成形术后再狭窄的病理生理机制中有重要作用，并可能为这些疾病的治疗提供新思路。     

应力致血管平滑肌细胞生长的研究进展

血管重建是机体在生长、发育、衰老以及心血管疾病过程中的一种普遍现象,主要表现是血管壁细胞增殖、肥大、重排、迁移、凋亡和细胞外基质增加等,其中中膜血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）形态和功能改变是高血压病、动脉粥样硬化、血管移植后再狭窄等血管重建相关疾病的主要病理特征。因此,改善动脉重建,特别是中膜VSMC重建已成为心血管疾病防治的重要策略之一。     

射线对血管平滑肌细胞抑制作用的机制

血管腔内放疗预防经皮穿刺冠状动脉血管成形术（PTCA）后再狭窄的临床取得了令人瞩目的疗效。人们认为，射线预防PTCA后血管再狭窄主要是射线对血管平滑肌细胞产生的抑制作用，但是这种抑制作用的机制尚不十分清楚，目前认为最关键的因素是射线抑制了血管平滑肌细胞的迁移和增殖，凋亡在射线抑制再狭窄过程中所起的作用尚存在争议，在这个过程中，射线对巨噬细胞和多种细胞因子的抑制作用也逐步受到人们的重视。     

1．06μm激光血管成形术后动脉平滑肌细胞中的癌基因表达

通过建立兔腹主动脉粥样硬化性狭窄模型进行１．０６μｍ激光血管成形术（ＬＡ），应用系列癌基因片段与地高辛－ｄＵＴＰ随机插入标记，进行血管组织的原位杂交。发现：（１）ＬＡ后血管壁可见ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ等癌基因表达；（２）癌基因表达多位于血管斑块中的ＳＭＣ；（３）ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达迅速而短暂，ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ表达较迟，持续时间较长。结论：激光损伤可诱导动脉ＳＭＣ中的某些癌基因表达。     

510nm激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的初步研究

为了探讨用激光防治血管成形术后再狭窄的可能性，以５１０ｎｍ激光照射体外培养的血管平滑肌细胞，以ＤＮＡ片断末端标记法观察细胞凋亡现象。结果显示，５０和７５Ｊ／ｃｍ２照射后４小时ＳＭＣ出现凋亡现象，２４小时凋亡最为显著，凋亡率分别为９．４％和６．１％。表明激光直接照射能引起平滑肌细胞凋亡。这可能有益于减轻血管内膜的增厚程度     

人血管平滑肌细胞的原代培养及其钙化模型的建立

目的利用β-甘油磷酸盐处理人血管平滑肌细胞（human vascular smooth muscle cells,HVSMCs）制备体外血管钙化模型。方法用组织贴壁法从人胚胎脐带动脉中分离原代人主动脉平滑肌细胞,原代细胞通过抗体α-sm-actin染色鉴定,将传4～6代的细胞分为钙化组和对照组,对照组用正常DMEM培养基培养,钙化组加入10mmol/Lβ-甘油磷酸盐诱导细胞钙化,连续培养10d。茜素红S染色及碱性磷酸酶法鉴定。结果：分离的原代细胞经S-P染色鉴定为阳性,呈淡黄色。钙化组细胞诱导钙化后,细胞增殖缓慢,并形成囊泡结构,茜素红S染色形成红色的钙化结节,钙化组碱性磷酸酶活性较对照组在不同时间点（4,6,8,10d）都有所增加（P〈0.01）。结论：β-甘油磷酸盐体外能够诱导HVSMC钙化,此方法诱导的钙化模型是一种良好的研究血管疾病方面的体外模型。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半胱氨酸（Cys）对人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度（A）值均高于对照组（P〈0.05）,表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组（P〈0.05）,bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。     

腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达

目的　以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,增强VSMC中gax基因的表达。方法　采用位置特异性重组方法构建携带大鼠 gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体(AdCMV gax) ,经 2 93细胞扩增 ,纯化制备高滴度病毒转染液 ;以病毒转染液常规转染VSMC后 ,应用RT PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中 gaxmRNA和蛋白质的表达。 结果　流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示AdCMV gax转染VSMC后 ,VSMC的Gax蛋白表达率明显增高 ,转染后 2 4小时即可达 80 %左右 ,高水平的表达可维持 5天以上 ;AdCMV gax转染前 ,PDGF BB对gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用 ,AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中 gax基因的表达均比转染前显著增高。 结论　腺病毒载体可有效地介导 gax基因转染VSMC ,并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究 gax基因对VSMC生物学行为的影响     

UV-C诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立

应用UV-C垂直照射距离其10cm处的大鼠主动脉SMC,发现经照射后细胞可出现典型的凋亡形态学改变,如细胞变圆、染色质浓缩、细胞膜出泡、凋亡小体等;且提取细胞DNA,其琼脂糖凝胶电泳呈现梯状图谱,从形态学和生化指标方面证明了UV-C可诱导体外血管SMC凋亡。UV-C照射诱导体外SMC凋亡,可作为进一步深入研究SMC凋亡的内在调控机制的一个简便、稳定、可靠的模型。     

氧化低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期分析

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (0x -LDL)引起血管平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡的效应及其凋亡细胞周期分析。方法 :采用电镜、流式细胞仪等观察Ox -LDL诱导VSMCs凋亡的细胞形态学改变及细胞周期变化。结果 :VSMCs在Ox -LDL(2 0mg/L)作用下 ,电镜下见凋亡细胞呈现核固缩凋亡小体的形态学特征。流式细胞仪检测发现Ox -LDL(2 0mg/L)引起细胞凋亡指数明显高于N -LDL(10倍 )。细胞增殖周期分析可见 ,Ox -LDL处理VSMCs 2 4h ,随着浓度的增加 ,G1期细胞百分率逐渐下降 ,而G2 /M期细胞百分率逐渐升高 ,提示Ox-LDL能将细胞阻滞在G2 /M期。结论　OX -LDL能诱导VSMCs凋亡 ,VSMCs的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关。     

一氧化氮对脑缺血及血管性痴呆形成机制的实验研究

 为探讨一氧化氮(NO)参与血管性痴呆(VD)的形成及其作用机制,采用改良的Pulsinelli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血和VD模型,同时采用NO-2/NO-3法(硝酸还原酶法)测定脑缺血早期和痴呆形成过程中以及分别经一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NNA和底物L-Arg干预后海马区NO水平及其动态变化,并对照各组迷宫试验的行为学定量和动态观察.结果:脑缺血早期海马区NO的变化对VD形成有重要的影响.说明NO途径参与了急性脑缺血及其VD形成的全过程,但在不同阶段可能发挥不同作用;一旦VD形成,则不论早期脑部NO水平如何,均使VD成为不可逆的过程.     

UV-C诱导的凋亡SMC形态学变化和形态计量学研究

目的　观察经UV -C照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞 (SMC)形态学变化 ,并探讨二维平面上SMC细胞面积 (CA)、核面积 (NA)及核 /胞面积比 (RA)的变化。方法　应用HE染色技术在光镜下观察凋亡SMC形态变化 ;应用图象分析技术进行形态计量学研究。结果　UV -C照射可诱导SMC发生典型凋亡形态学改变 ,凋亡细胞CA、NA、RA均显著减少 (P <0 0 1) ,不同时间段亦有明显差异。结论　在UV -C诱导体外SMC凋亡的过程中 ,细胞的皱缩可能参与了凋亡的触发机制和 /或推动了凋亡的进程     

体外血管平滑肌细胞培养方法的应用及改进

动脉粥样硬化(AS)的发生发展与动脉中膜SMC的大量聚集和异常增生密切相关。参照传统的主动脉SMC培养方法并加以改进,采取从内剥离中膜法和组织块反复接种法,培养的细胞呈现典型的“峰与谷”结构,免疫组织化学染色显示细胞内SM-Actin表达阳性。此培养方法可作为研究血管SMC生物学行为和AS内在机制的有效模型。