树突状细胞与角膜移植免疫耐受

树突状细胞是专职的抗原提呈的细胞,其功能受发育阶段的影响,在移植免疫中起关键作用。既能激活T细胞参与排斥反应;也能在诱导免疫耐受方面发挥重要的作用,尤其在器官移植领域中。本文就树突状细胞功能作用与诱导角膜移植免疫耐受的关系进行综述。     

树突状细胞的培养与鉴定

目的研究利用磁珠分离方法获取单核细胞,用细胞因子GM—CSF和IL-4联合诱导使之分化为树突状细胞（dendritic cells,DCs）的方法,并对培养的细胞从形态,表型,功能等三个方面进行鉴定,从而探索出一套较成熟的DCs的培养方法。方法通过密度梯度离心的方法获取白细胞悬液中的白膜层,然后通过磁珠分离的方法,收集高纯度的单核细胞。在细胞因子GM—CSF和IL-4的刺激下,将细胞培养至7天左右,收集细胞进行流式分析,并进行淋巴细胞增殖实验,鉴定细胞是否为树突状细胞。结果在倒置显微镜下观察,细胞培养第7天,大部分细胞呈单个悬浮,并有明显的毛刺样突起。流式分析发现细胞高表达DC表面特异性抗原CD80,CD86,HIA—DR,并且不再表达单核细胞表面抗原CD14,细胞纯度约为93．12％。淋巴细胞增殖实验显示DCs可明显刺激初始型淋巴细胞增殖。结论通过磁珠分离的方法获得单核细胞并利用GM-CSF和IL-4细胞因子诱导可成功培养出纯度高的树突状细胞。     

升麻糖蛋白的分离纯化及鉴定

从中药升麻中提取升麻多糖,经DEAE纤维素(DEAE-52)柱层析得CF-Ⅰ、CF-Ⅱ、CF-Ⅲ三个组分。CF-Ⅰ经Sepharose CL-4B凝胶层析柱纯化后,琼脂糖凝胶电泳和Superdex-200柱层析证明其为均一组分。红外和紫外光谱鉴定其成分是一种糖蛋白,不含核酸和色素。气相色谱测定其单糖组分有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖,它们的摩尔比为11.94∶2.18∶1.38∶1;Superdex-200FPLC法测定其分子量为5.8×105,比色法测其总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量分别为78%、14.4%、23%。高碘酸氧化和Sm ith降解推测CF-Ⅰ多糖的结构主要以1→4、1→6糖苷键连接而成的。     

四君子汤多糖分离纯化对IEC-6细胞迁移药效活性的影响

目的：本研究对四君子汤多糖进行提取和分离纯化,观察不同多糖样品对小肠上皮细胞（IEC?6）迁移的影响,从而进行多糖纯化过程的药效活性追踪,为探讨四君子汤多糖药效物质基础提供参考。方法：①四君子汤水提醇沉得到四君子汤多糖1;经Sevag法去蛋白得到四君子汤多糖2;经DEAE?52纤维素柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖3a;经Sephadex G?100葡聚糖凝胶柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖4a和多糖4b;并以苯酚?硫酸法检测各多糖样品糖含量（以葡萄糖计）。②凝胶渗透色谱法（GPC）检测四君子汤多糖3a、多糖4a和多糖4b纯度。③在IEC?6细胞迁移模型上,观察四君子汤多糖不同样品促进细胞迁移的药效活性。结果：4种多糖样品（四君子汤多糖1、2、3a、4b）糖含量分别为71.35%、75.45%、81.00% 和98.50%,其促进细胞迁移的最低有效剂量分别为200、100、50、30mg·L^?1;表明纯化步骤最多的多糖4b糖含量最高、药效最优,且GPC 法测得其为均一性多糖组分。结论：四君子汤多糖经不同纯化步骤后,糖含量和纯度提高,药效活性随之增强,研究结果为探讨四君子汤促进细胞迁移的药效物质基础研究提供参考。     

枸杞多糖对人树突状细胞成熟的影响

目的：研究枸杞多糖对人树突状细胞（DC）表面标志及功能成熟的影响。方法：通过密度离心法分离人外周血单核细胞,采用细胞因子体外培养7d后,实验组加入枸杞多糖（100ug／m1）,空白对照组加等量RPMI1640,两组分别同时作用48h,观察细胞的形态变化及用免疫细胞化学法检测其表面标志的表达。通过混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。结果：用枸杞多糖刺激的人DC表达MHC-Ⅱ、CD83、CD86和促进T细胞的增殖的能力比空白对照组增加。结论：枸杞多糖可以促进体外培养的人DC的成熟,促进DC诱导的免疫应答启动。     

姬松茸多糖的分离纯化及其初步鉴定

目的：从姬松茸中分离纯化多糖并对其进行初步鉴定。方法：将姬松茸粗多糖配成均匀的5％糖溶液反复冻融离心,Sevage法除蛋白,H2O2脱色,DEAE-纤维素和Sepharose CL-4B凝胶柱色谱,酚-硫酸法检测糖峰的存在。采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝G-250法对多糖和蛋白质含量进行测定。结果：从姬松茸粗多糖分离得到AB-Ⅰ、AB—Ⅱ-b和AB-Ⅲ-b3个组分,分别为淡黄色、黄色、褐色粉末,经鉴定后均为单一分子量组分,总糖含量分别为91．8％,90．4％,89．2％,蛋白质含量分别为7．1％,8．8％,9．3％。结论：有效分离纯化出姬松茸多糖单一组分,这为姬松茸多糖的应用奠定了一定的实验基础。     

何首乌根际土壤真菌的分离纯化与鉴定

建立何首乌根际土壤真菌菌种库,为筛选具有生物转化活性菌株提供菌种资源,为确定适用于何首乌栽培的菌肥组成提供理论依据。通过纯培养的方式分离、纯化何首乌根际土壤中的真菌菌株,经过分子生物学鉴定确定该真菌的种属,其中根霉属真菌能产生一系列的有机酸,从而对何首乌的生长起到保护和促进生长作用。     

藤茶多糖AGP-3的分离纯化与结构的初步鉴定

目的 对藤茶水溶性多糖进行分离纯化得到AGP-3组分,并对其结构进行初步的鉴定,为藤茶多糖结构与生物活性关系的研究奠定基础.方法 采用DEAE-Sephadex A-25、Sephadex G-200和HPLC对藤茶多糖分离纯化,并通过IR、GC、1HNMR和13CNMR分析对藤茶多糖AGP-3组分的结构进行了初步鉴定.结果 AGP-3重均分子量(Mw)为1.02×105 Da,含中性糖质量分数57.6%、糖醛酸32.3%、蛋白质3.5%.结论 藤茶多糖分离组分AGP-3为一种含蛋白质的复合多糖.     

岷当归两个多糖组分的分离、纯化与鉴定

从岷当归Angelica sinensis(Oliv)Diels中分离得到两个糖组分X－C－3Ⅲ和X－C－3－Ⅳ,凝胶色谱法测得分子量分别为85000和65765,水解后利用硅烷化和毛细管气相色谱法分析确定X－C－3－Ⅲ和X－C－3－Ⅳ的糖基组成为半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸,摩尔比分别为24．3：15．8：4．2：3．1：52．6和12．6：10．7：7．2：8．3：61．2。     

当归中一种杂多糖的分离纯化与结构鉴定

 目的研究从当归[Angelica sinensis(Oliv)Diels]中分离纯化获得的均一多糖ASDII-3-3的结构。方法采用糖组成分析、甲基化分析以及NMR确定该多糖的结构。结果该均一多糖相对分子质量为44000,主要由阿拉伯糖和半乳糖组成,此外尚含有少量的鼠李糖、甘露糖和木糖;其中阿拉伯糖的连接方式为端基和1,5连接;半乳糖的连接方式为1,4和1,4,6连接;鼠李糖为1,2连接,甘露糖为端基,木糖为1,4连接。结论该均一多糖为首次从当归中分离获得的一种新的杂多糖。     

以树突状细胞为标靶的哮喘中西医认识及治疗手段

哮喘是以气道高反应及慢性气道炎症为特征的异质性疾病,最终可导致气道重塑等不可逆器质性损害。哮喘发病机制极为复杂,涉及多种炎性细胞、细胞因子、趋化因子和炎性反应递质等,并受环境因素和表观遗传因子调控。随着近年分子生物学和遗传学研究的不断深入,树突状细胞(DC)作为一类有众多表型及不同功能亚群的生物系统,被发现是参与哮喘发病的重要细胞,在启动哮喘免疫反应和维持免疫耐受方面发挥着关键作用。DC具有摄取、加工和提呈抗原,激活初始T淋巴细胞,介导免疫应答及免疫耐受等重要功能,直接影响着哮喘的发生发展。糖皮质激素至今仍被证实是预防哮喘发作的最有效药物,但其引发的不良反应备受关注;而中医药多靶点治疗哮喘的机制研究已引起越来越多国内外专家学者的重视,DC无疑是探索哮喘发病机制和探索安全有效的免疫疗法及研发天然中药产品的一个重要研究靶点。现从DC的研究概况、DC与哮喘发病的中西医认识及其相关性、主要研究工作等整理论述,以期为今后阐释中医药防治哮喘的作用机制及新药研发提供部分思路。     

大孔树脂在甘草活性成分分离纯化中的应用

甘草为我国常用药材,其活性成分的分离纯化一直是研究的热点。本文主要介绍大孔树脂在分离纯化甘草皂苷类成分、甘草黄酮类成分及甘草多糖中的应用,并提出相关研究建议：加强大孔树脂分离纯化除甘草酸以外的甘草活性成分的研究;不同类的活性成分通过一个大孔树脂柱完成分离;大孔树脂法与其他分离纯化方法联用方面的研究;建立相关的树脂分离纯化工艺模型的,进而指导工业化生产。     

枸杞多糖对H22荷瘤小鼠脾脏有核细胞CD11c+、CD80+表达的影响

目的观察枸杞多糖(LBP)对H22荷瘤小鼠脾脏有核细胞CD11c 、CD80 表达的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,用LBP连续灌胃治疗两周后,小鼠脱颈处死,分离各组小鼠脾脏有核细胞,流式细胞仪检测CD11c 、CD80 的表达情况。结果肿瘤模型组及荷瘤LBP用药组,CD11c 、CD80 及双阳性细胞比例均较正常对照组升高,其中CD80 及双阳性细胞比例升高,差异具有显著性;双阳性细胞比例升高在荷瘤LBP高剂量组与肿瘤模型组间亦具有显著性差异。正常用药组与正常对照组比较,CD80 表达升高,差异具有显著性。结论LBP可以增强H22荷瘤小鼠脾脏中以DC细胞为主的抗原递呈细胞的功能,提示其抗肿瘤免疫作用机制可能与此有关。     

西洋参茎叶总皂苷中分离纯化拟人参皂苷F11工艺

目的:优选从西洋参茎叶总皂苷中分离纯化拟人参皂苷F11的最佳工艺.方法:以拟人参皂苷F11(PF11)提取率为指标,建立HPLC-ELSD检测PF11的方法,并优选AB-8大孔吸附树脂纯化西洋参茎叶总皂苷中PF11的工艺.结果:最佳工艺为西洋参茎叶总皂苷过10倍量AB-8大孔吸附树脂柱,流速5 mL·min-1,依次用7.5 BV 30％～33％乙醇,8 BV 35％～40％乙醇进行洗脱,收集35％～40％乙醇洗脱液,回收乙醇,蒸千,得PF11粗品纯度＞50.0％.结论:大孔吸附树脂分离拟人参皂苷F11方法简单、快速、可行.     

Aqueous extracts from Menyanthes trifoliate and Achillea millefolium affect maturation of human dendritic cells and their activation of allogeneic CD4+ T cells in vitro

Ethnopharmacological relevance: Menyanthes trifoliate and Achillea millefolium have been used in traditional medicine to ameliorate chronic inflammatory conditions. The aim of this study was to identify the effects of ethanol and aqueous extracts of Menyanthes trifoliate and Achillea millefolium on maturation of dendritic cells (DCs) and their ability to activate allogeneic CD4⁺ T cells.

Materials and methods

Human monocyte-derived DCs were matured in the absence or presence of lyophilised aqoueous or ethanol extracts from Menyanthes trifoliate or Achillea millefolium and their expression of surface molecules analysed with flow cytometry and cytokine secretion measured by ELISA. DCs matured in the presence of aqueous extracts from Menyanthes trifoliate and Achillea millefolium were co-cultured with allogeneic CD4⁺ T cells and the expression of surface molecules by T cells and their cytokine secretion and cell proliferation determined.

Results

Maturation of DCs in the presence of aqueous extracts from Menyanthes trifoliate or Achillea millefolium did not affect expression of the surface molecules examined but reduced the ratio of secreted IL-12p40/IL-10, compared with that by DCs matured in the absence of extracts. Allogeneic CD4⁺ T cells co-cultured with DCs matured in the presence of aqueous extract from Menyanthes trifoliate secreted less IFN-γ, IL-10 and IL-17 than CD4⁺ T cells co-cultured with DCs matured without an extract. Maturation of DCs in the presence of aqueous extract from Achillea millefolium decreased IL-17 secretion but did not affect IFN-γ and IL-10 secretion by allogeneic CD4⁺ T cells.

Conclusions

Aqueous extract from Menyanthes trifoliate induces a suppressive phenotype of DCs that has reduced capacity to induce Th1 and Th17 stimulation of allogeneic CD4⁺ T cells, whereas aqueous extract from Achillea millefolium reduces the capacity of DCs to induce a Th17 response.     

基于“调气解毒”理论探讨肺瘤平膏调控脂质代谢逆转肿瘤相关树突状细胞功能的机制研究

目的：体外模拟肿瘤微环境,构建瘤相关树突状细胞(TDCs)模型,探究肺瘤平膏含药血清改善脂质堆积,逆转TDCs功能的效应机制。方法：制备肺瘤平膏及空白含药血清,通过分离、诱导并与路易斯(Lewis)肺癌细胞共培养获得TDCs,通过流式细胞仪检测肺瘤平膏干预下的TDCs的脂质含量和表型变化,基于Luminex技术定量检测TDCs白细胞介素-12p70、γ干扰素的分泌;构建TDCs与T细胞共培养体系,探究肺瘤平膏含药血清对TDCs调节混合淋巴细胞增殖和T细胞亚群的影响。结果：肺瘤平膏含药血清作用后的TDCs,脂质含量小于空白血清对照组(P<0.01),CD80、CD86表达水平高于空白血清组(P<0.05),白细胞介素-12p70、γ干扰素的分泌高于空白血清组(P<0.05);肺瘤平膏含药血清作用后的混合细胞增殖能力较空白血清增强(P<0.05),肺瘤平膏含药血清能够提高干预后TDCs与T细胞共培养CD4⁺、CD8⁺表达比例(P<0.05),降低调节性T细胞的表达。结论：肺瘤平膏含药血清能够有效地降低TDCs中的脂质...     

参附注射液联合细胞因子对人慢性髓性白血病细胞来源树突状细胞诱导生成的影响

目的：观察不同浓度参附注射液（SFI）联合细胞因子（GM-CSF/IL-4）对慢性髓性白血病（CML）来源树突状细胞（DC）成熟与功能的影响。方法：采用CML患者的单个核细胞（MNC）,体外诱导扩增DC,在培养体系中分别添加不同浓度的SFI（终浓度分别为：低浓度9.38 mg/mL;中浓度37.50、75 mg/mL;高浓度150、300 mg/mL生药浓度）、GM-CSF/IL-4及不同浓度SFI联合细胞因子,通过观察细胞形态、细胞表面分子表达水平、细胞功能的变化,对所获得的细胞进行鉴定。结果：体外单用SFI不能诱导CML细胞分化为DC;细胞因子诱导的CML-DC存在表型及功能障碍;而在含有细胞因子的培养体系中添加SFI,对CML-DC有促进成熟和抑制增殖的双向调节作用,添加高浓度SFI可抑制DC的生长甚至导致细胞死亡,添加中浓度SFI能获得较多成熟CML-DC,可提高其细胞表面共刺激分子的表达水平,并可改善其刺激淋巴细胞增殖的能力及IL-12的含量。结论：适当浓度的SFI可影响CML-DC的分化和成熟,并可改变DC细胞表面免疫分子的表达,增强其功能;SFI最佳诱导浓度为75 mg/mL,且75 mg/mL SFI与GM-CSF/IL-4联合应用有协同作用。     

益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4~+CD25~+T细胞表达的影响

目的 观察益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏和母胎界面CD4+CD25+ T淋巴细胞表达的影响。     

补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞、Foxp3及B7-H3的影响

目的:研究补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)、转录因子Foxp3及共刺激因子B7-H3表达的影响。方法:建立32只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型后,将32只造模后小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组及综合组,每组各8只,单笼饲养。模型组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;中药组以0.4 m L中药液灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;化疗组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L;综合组以0.4 m L中药液灌胃14 d,在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L。给予药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量等,流式细胞术检测各组小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞的比例、Foxp3以及B7-H3的含量。结果:补肾益肺解毒法可改善肺癌小鼠的行为体征,增加饲料消耗量、体质量和去瘤体质量,减少移植瘤重量,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。补肾益肺解毒法治疗可显著降低Lewis肺癌小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾益肺解毒法通过降低CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。     

桂枝茯苓胶囊对子宫内膜异位症大鼠脾脏 CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性的影响

目的:观察桂枝茯苓胶囊对子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性的影响。方法:改进制作大鼠子宫内膜异位症动物模型,ig桂枝茯苓胶囊0.256,1.024 g.kg-1,28 d后取脾脏,分离淋巴细胞,采用流式细胞分析术测定大鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞数;将分离的NK细胞与K562细胞共孵育后,MTT法检测其杀伤活性。结果:低剂量组CD4+T淋巴细胞数比模型组提高19.0%,NK细胞杀伤活性提高54.1%,具有显著意义。结论:桂枝茯苓胶囊可显著提高CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性。