HPLC法同时测定曲马氨酚片中盐酸曲马多和对乙酰氨基酚的含量

目的建立同时测定曲马氨酚片中盐酸曲马多和对乙酰氨基酚含量的HPLC测定法。方法色谱柱为DiamasilC18柱 ,流动相为乙腈 0 0 0 5mol·L-1NH4H2 PO4(含 0 0 1mol·L-1三乙胺 ,pH3 2 ,V∶V =1∶4 3 ) ,检测波长为 2 1 5nm ,柱温为 3 5℃ ,流速 :1 0mL·min-1,进样 1 0 μL。结果盐酸曲马多和对乙酰氨基酚分别在质量浓度 9 92～ 49 60mg·L-1和 85 3 4～ 42 6 70mg·L-1内呈良好的线性相关性 ,相关系数r分别为 0 9999和0 9998。方法精密度RSD分别为 0 7%和 0 1 % (n=6) ,平均回收率分别为 1 0 0 1 %和 1 0 0 0 % ,方法RSD分别为 0 1 %和 0 1 % (n=9)。结论可同时测定盐酸曲马多和对乙酰氨基酚的含量 ,可用于多批样品的质量控制。     

HPLC法同时测定四环素可的松眼膏中四环素和醋酸可的松的含量

目的:建立一种同时测定四环素可的松服膏中四环素和醋酸可的松含量的HPLC法。方法:采用依利特HYPERSILBDS-C_(18)(300mm×4.0mm,5μm)为色谱柱,0.01mol·mL~(-1)十二烷基硫酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(60:40,V/V)为流动相,检测波长254nm,流速0.8mL·min~(-1),柱温40℃。结果:四环素在9.99～249.80μg·mL~(-1)浓度范围内有良好的线性关系(r-1.0000),回收率为(102.39±0.72)％(RSD=0.71％,n=9),最低定量限为13.0ng;醋酸可的松在10.20～255.00μg·mL~(-1)浓度范围内有良好的线性关系(r=1.0000),回收率为(99.59±1.59)％(RSD=1.60％,n=9),最低定量限为7.1ng。结论:本方法简便,灵敏,准确,适合于四环素可的松眼膏的质量控制。     

高效液相色谱法测定小儿体内利多卡因、布比卡因的浓度

目的建立测定人血浆中利多卡因、布比卡因浓度的高效液相色谱方法.方法色谱柱Waters Spherisorb C8(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-1/15 mol·L-1磷酸盐缓冲液(2179,v/v),紫外检测波长230 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果利多卡因在0.112～2.973 mg·L-1范围内,浓度与峰面积之比线性关系良好(r=0.999 8),最低检测限为2ng,平均回收率为100.78%～102.65%,日内、日间RSD分别小于4.7%和6.7%.布比卡因在0.102～2.555 mg·L-1范围内,浓度与峰面积之比线性关系良好(r=0.998 7),最低检测限为2ng,平均回收率为100.73%～102.01%,日内、日间RSD分别小于5.8%和7.3%.结论本方法适用于利多卡因、布比卡因的临床药动学研究.     

HPLC测定双塞通片中二羟基丙基茶碱的含量

目的　建立双塞通片中二羟基丙基茶碱的含量测定方法。方法　采用HPLC法 ,色谱柱为HypersilODS2柱 (2 5 0mm×4 .6mm ,5 μm) ,以甲醇 - 0 .0 1mol·L-1磷酸二氢钾溶液 (含 0 .1%三乙胺 ,用磷酸调pH 3.0 ) (2 5∶75 )为流动相 ,流速为 1.0ml·min-1,柱温为室温 ,检测波长 2 73nm。结果　二羟基丙基茶碱在 0 .2 0 0 2～ 1.0 0 1mg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0 .9998) ,日内精密度RSD =0 .10 % (n =9) ;日间精密度RSD =0 .13% (n =5 )。平均回收率为 99.7% ,RSD =0 .2 2 % (n =9)。结论　所用方法快速简便、灵敏、准确、精密度好 ,可用于双塞通片的质量控制。     

高效液相色谱法测定注射用盐酸纳洛酮的含量

目的建立注射用盐酸纳洛酮的含量测定方法。方法采用HPLC外标法。色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.005mol·L-1庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.8)-甲醇(60∶40);流速为1.0mL·min-1;检测波长为240nm;柱温为30℃。结果盐酸纳洛酮在10~400mg·L-1的质量浓度范围内与峰面积线性关系良好,r=1.0000,平均回收率为100.5%,RSD为0.8%(n=9)。结论该方法可用于盐酸纳洛酮的含量测定。     

HPLC测定注射用尼莫地平的含量及有关物质

目的建立测定注射用尼莫地平含量及有关物质的方法。方法采用HPLC法,用DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-乙醚(70∶30∶9),检测波长238 nm,柱温为室温;流速1.0 ml.min-1。结果尼莫地平在4.0~40.0μg.ml-1范围内,峰面积和浓度呈良好的线性关系(r=0.9998),最低检测限为0.376 ng,方法精密度RSD=0.35%(n=6),平均回收率为99.8%(n=9)。结论所建方法准确、灵敏、简便、快速,可用于注射用尼莫地平的含量及有关物质的测定。     

HPLC法测定复方滴眼液中氯霉素和盐酸丁卡因的含量

目的建立高效液相色谱法测定复方滴眼液中氯霉素和盐酸丁卡因含量的方法。方法色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm;5μm),流动相为0.01mol·L-1醋酸铵(pH3.5)-甲醇(40:60),检测波长为290nm。结果氯霉素和盐酸丁卡因分别在0.075～0.225mg·ml-1和0.05～0.15mg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程分别为C=47.6A+198.6,r=1.000和C=38.4A+232.8,r=1.000;平均回收率分别为100.4%(n=9);平均回收率为99.5%(n=9);精密度实验RSD均为0.1%,重现性试验RSD分别为0.31%和0.53%,结论本法简单、准确、重现性良好,可同时测定氯霉素盐酸丁卡因滴眼液中的氯霉素和盐酸丁卡因。     

HPLC法测定恩普洛胶囊中丙磺舒的含量

目的　测定恩普洛胶囊中丙磺舒的含量。 方法 　高效液相色谱法 ;C8柱 (5μm.4.6× 15 0 mm) ;流动相为水 -乙腈 -1.0 mol· L- 1 磷酸二氢钾溶液 -1.0 mol· L- 1 醋酸溶液 (90 9∶ 690∶ 10∶ 1) ;流速 1.0 ml· min- 1 ;检测波长 2 5 4nm。结果 　丙磺舒在 2 5～ 2 0 0μg· ml- 1 范围内呈良好线性关系 (r=0 .99999) ,重现性良好 ,RSD=0 .1% (n=8) ,平均回收率 10 0 .0 % ,RSD=0 .5 % (n=9)。 结论 　本法操作简便 ,结果准确 ,重现性好     

RP-HPLC测定乌拉地尔注射液的含量

目的 :建立反相高效液相色谱法测定乌拉地尔注射液的含量。方法 :采用LichrospherC18色谱柱 ,水 甲醇 1mol·L-1醋酸钠 冰醋酸 ( 4 6∶4 0∶10∶4 )为流动相 ,2 68nm为检测波长。结果 :成功分离乌拉地尔及其杂质 ,乌拉地尔浓度在 18～ 2 80 μg·ml-1范围内 ,峰面积与其浓度呈良好的线性关系 (r=0 9998) ;方法平均回收率为 10 0 0 % ;日内精密度RSD =0 6% (n =6) ,日间精密度RSD =0 9% (n =6)。结论 :该法快速 ,简便 ,能准确测定制剂中乌拉地尔的含量     

高效液相色谱法测定磺胺嘧啶银凝胶的溶出度

目的建立测定磺胺嘧啶银凝胶体外溶出度的高效液相色谱方法.方法采用Nova-Pak C18(4.6 mm×250 mm,4 μm)为色谱柱,以乙腈-30 mmol·L-1醋酸钠缓冲溶液(pH 4.5)(1090,v/v)为流动相,柱温为30℃,流速为1.0mL·min,检测波长265 nm.结果在0.2～10mg·L-1浓度范围内线性关系良好,r=0.999 7,平均回收率为100.6%,RSD为1.31%(n=5),最低检测限为0.1 mg·L-1,日内精密度RSD为1.73%(n=5).日间精密度RSD为2.20%(n=5).样品在48 h内稳定.结论本法测定磺胺嘧啶银凝胶体外溶出度,方法简便、快捷、准确,重现性好,可满足对磺胺嘧啶银新制剂质量评价的要求.     

Comparison of inhibitory effects between acetaminophen–glutathione conjugate and reduced glutathione in human glutathione reductase

Acetaminophen overdose is the most frequent cause of acute liver injury. The main mechanism of acetaminophen toxicity has been attributed to oxidation of acetaminophen. The oxidation product is very reactive and reacts with glutathione generating acetaminophen–glutathione conjugate (APAP‐SG). Although this conjugate has been recognized to be generally nontoxic, we have found recently that APAP‐SG could produce a toxic effect. Therefore, the aim of our study was to estimate the toxicity of purified APAP‐SG by characterizing the inhibitory effect in human glutathione reductase (GR) and comparing that to the inhibitory effect of the natural inhibitor reduced glutathione. We used two types of human GR: recombinant and freshly purified from red blood cells. Our results show that GR was significantly inhibited in the presence of both APAP‐SG and reduced glutathione. For example, the enzyme activity of recombinant and purified GR was reduced in the presence of 4 mm APAP‐SG (with 0.5 mm glutathione disulfide) by 28% and 22%, respectively. The type of enzyme inhibition was observed to be competitive in the cases of both APAP‐SG and glutathione. As glutathione inhibits GR activity in cells under physiological conditions, the rate of enzyme inhibition ought to be weaker in the case of glutathione depletion that is typical of acetaminophen overdose. Notably, however, enzyme activity likely remains inhibited due to the presence of APAP‐SG, which might enhance the pro‐oxidative status in the cell. We conclude that our finding could reflect some other pathological mechanism that may contribute to the toxicity of acetaminophen. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

谷胱甘肽转移酶抑制剂的高通量筛选

谷胱甘肽转移酶(glutathione Stransferase,GST)是一组具有多种生理功能的同工酶家族,广泛分布于动植物体内,作为机体的II相解毒酶,参与机体的解毒作用[1].研究表明,GST的酶活性水平与肿瘤的耐药性密切相关[2～4].因此,GST可能是治疗耐药肿瘤的潜在药物作用靶点. 目前已知的GST抑制剂大多因毒性较大,限制了临床应用.研究发现,一些动植物体内含有对GST有抑制剂作用的成分[5～8].为了广泛寻找GST特异性抑制剂,本研究旨在建立一种快速、高效、稳定、经济的高通量筛选方法,以GST为靶点,通过高通量筛选技术,对自然界广泛存在着的抑制GST活性的物质进行筛选,以期为开发安全有效的、提高耐药肿瘤临床化疗敏感性的药物提供新的技术方法.     

Different effects of nine clausenamide ennatiomers on liver glutathione biosynthesis and glutathione S-transferase activity in mice

AIM: To study the effects of nine synthetic clausenamide with different stereo structures on liver glutathione (GSH) biosynthesis and glutathione S-transferase (GST) activity in mice. METHODS: The nine test compounds were racemic mixtures and their ennatiomers of clausenamide, neoclausenamide and epineoclausenamide. Mice were administered clausenamide 250 mg/kg once daily for 3 consecutive days, ig, and were killed 24 h after the last dosing. The mouse liver cytosol GSH and GST were determined with related biochemical methods. RESULTS: Nine clausenamides exhibited different effects on liver GSH and GST. Of nine clausenamides, only (+) and (+/-)clausenamide markedly increased liver cytosol GSH content. The mechanism of increasing liver GSH content of (+)clausenamide is mainly due to stimulating the key limiting enzyme gamma-glutamylcysteine synthetase (gamma-GCS) activity for GSH biosynthesis. The other test clausenamides had no such effect on liver GSH. All of the nine clausenamides induced a significant increase of GST activity. CONCLUSION: The effects of clausenamide ennatiomers on liver GST and GSH varied with the alterations of their spatial structures. (+)Clausenamide stimulated liver GSH biosynthesis through enhancing gamma-GCS activity.     

血栓通联合还原型谷胱甘肽治疗肝硬化的疗效观察

目的探讨血栓通联合还原型谷胱甘肽治疗肝硬化的临床效果。方法将肝硬化患者52例随机分为观察组和对照组,各26例。对照组给予综合治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予血栓通联合还原型谷胱甘肽治疗,比较2组治疗效果。结果观察组总有效率为96.15%高于对照组的65.38%,差异有统计学意义(P<0.05)。除对照组白蛋白(ALb)水平外,2组治疗后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)及球蛋白(GLb)指标均优于治疗前(P<0.05);且观察组治疗后所有指标明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组患者均未见明显的药物不良反应。结论血栓通联合还原型谷胱甘肽治疗肝硬化的临床效果明确,值得推广应用。     

二醋吗啡依赖患者血细胞胎盘型谷胱甘肽S-转移酶mRNA的表达

定量RT-PCR检测33例二醋吗啡依赖患者和19例正常对照血细胞中的胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（GST-π）表达水平,同时用银染法检测患者T细胞的核仁机化区（NOR)面积比（Ag-NOR）. 结果表明二醋吗啡依赖患者血细胞中GST-π表达水平明显高于正常对照,但与性别,吸毒时间和吸毒方式无关.     

The in vitro enzymatic conjugation of glutathione with L-thyroxine

Enzymatic-reaction of glutathione (GSH) with l-thyroxine formed a GSH-l-thyroxine conjugate, shown by disappearance of GSH from the in-cubation mixture at fixed intervals and by the use of Chromatographie techniques.     

谷胱甘肽-S-转硫酶法快速测定红细胞GSH和其氧化产物

红细胞谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）及蛋白结合谷胱甘肽（PSSG）是反映氧化溶血的指标。Ellman试剂测定GSH干扰多。高效液相层析测定GSH及其衍生物受仪器和效率限制。谷胱甘肽-S-转硫酶（GST）法测定GSH干扰少，但从未用于测定红细胞GSH或其衍生物。本尝试改进GST法并用于测定红细胞GSH及其衍生物。     

微粒体谷胱甘肽转移酶的纯化

本文采用N—乙基顺丁烯二酰亚胺活化、Triton X—100增溶、羟基磷灰石和离子交换柱层析从Wistar大鼠肝脏中提纯了微粒体谷胱甘肽转移酶。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带。氨基末端为丙氨酸。由不同角度鉴定酶制备物的纯度,认为它达到了均一,提纯倍数为28,回收率38％,比活性为15μmol·min~(-1)·mg~(-1),符合进一步进行性质研究的要求。它的最适pH为6.8,最适温度为30℃。     

HPLC法测定注射用还原型谷胱甘肽含量

目的　建立HPLC法测定注射用还原型谷胱甘肽含量。方法　采用HPLC法 ,色谱柱为DiscoverC18(2 5 0mm×4 6mm ,5 μm) ,流动相为磷酸盐溶液 -甲醇 (96∶4 ) ,流速为 1ml·min-1,检测波长为 2 10nm。结果　还原型谷胱甘肽在 1 2～7 2 μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。 结论　该法简便、准确 ,可作为该药品的含量测定方法