RNAi在肿瘤中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的基因沉默(genesilencing)。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制了该基因的表达。因RNAi所致的基因沉默发生在转录后水平,所以被称为转录后基因沉默(post transcrip     

RNAi技术在泌尿系肿瘤治疗中的应用

肿瘤是由多基因参与并经多阶段演变而形成的疾病.目前有效治疗肿瘤的方法有放疗、化疗和免疫治疗,但恶性肿瘤细胞对这些治疗方法均有抵抗作用.RNA干扰(RNAi)作为公认的科学成就之一,有希望成为一种新颖可靠的恶性肿瘤治疗方法.本文就RNAi在泌尿系肿瘤中的研究进展做一综述.     

RNAi技术在凋亡研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默(PTGS)。dsRNA经Dicer酶降解成21-23nt的siRNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔地降解与之序列相应的mRNA。随着RNAi机制的深入研究与广泛应用,目前该技术已经普遍应用于凋亡研究中,在阐明启动与调控凋亡机制的同时也为基因治疗提供了新靶点。     

RNA干扰及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法,该技术通过双链RNA的介导,可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中,通过RNAi技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。本文综述了小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)的生成和作用机制以及RNAi在肿瘤研究中的应用。     

RNAi技术在肿瘤研究中的进展

RNAi是小双链RNA分子诱导同源基因降解的过程。作为一种简单而有效的基因沉默工具,RNAi技术已成为肿瘤研究领域的新方法。本文就RNAi技术在肿瘤研究中的应用进展予以综述。     

RNAi技术及抗HBV治疗研究进展

RNA干扰L(RNA interference,RNAi)是由21个～23个核苷酸组成的双链RNA(dsRNA)所引发的生物细胞内同源基因转录后沉默的现象,是生物体在进化过程中普遍存在的一种基因调控机制。利用RNAi技术的高效性和特异性抵御病毒感染及其它外源性核酸入侵的研究,已取得了很大进展,针对乙肝病毒感染这一全球性的健康问题,RNAi有着广泛的应用前景。     

RNAi及其在妇科肿瘤基因治疗中的应用

RNA干扰是一种古老而又广泛存在的生理现象，是生物进化过程中一种保守的自我防御机制，有人称之为“基因组的免疫系统”。最初人们是利用无脊椎动物研究RNA干扰的。直到2001年，人们才在哺乳动物细胞中发现被剪切成19—21个核苷酸具有对称性3’突出的双链复合物siRNAs （small interfering RNAs duplex）能特异性抑制靶基因表达，     

短发夹RNA及其在头颈肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种分子生物学上由双链RNA(dsRNA)诱发的特定基因沉默现象。随着该项技术的不断发展,以质粒、病毒为载体表达的短发夹RNA(shRNA)具有更强大的基因沉默作用,可使目的基因在细胞内稳定增殖并获得长效剔除效应。近年来,以shRNA为工具的RNAi技术开始在体内外各项实验中应用并取得突破,包括功能基因组学、药物靶点筛选、细胞信号转导通路分析及疾病治疗等,尤其在肿瘤领域显示出广阔的应用前景。     

RNAi技术在肿瘤研究中的应用

外源性或内源性双链RNA（Double—stranded RNA,dsRNA）在细胞导致与其同源的mRNA分子发生特异性降解,从而干扰相应基因的表达,这种现象被称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）．RNAi主要由长dsRNA分子裂解形成的小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）分子介导,是在RNA水平调节基因表达的一种方式,     

RNA干扰在肿瘤治疗中的靶点研究

RNA干扰是一种转录后基因沉默机制.通过RNA干扰技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,进而为恶性肿瘤的治疗提供一种崭新的手段.本文就RNA干扰的机制、作用靶标及相关的临床应用做一综述.     

RNA干扰技术在肝癌研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种广泛存在的,由外源或内源性的双链RNA(double strands RNA,dsRNA)诱发的同源mRNA特异性沉默,进而抑制其相应基因表达的过程.小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术在沉默癌基因、抑制抗凋亡癌基因、减少过度表达的生长因子和受体、抗血管生成、抑制肝癌细胞化疗耐药、降低肝癌细胞的侵袭转移能力等方面均取得了可喜的研究成果,部分研究已从体外试验过渡到体内试验,为肝癌的临床治疗奠定了基础.但在这一技术广泛应用于临床前,仍存在一些问题,需要进一步的研究.     

RNA干扰技术在哺乳动物中的应用

RNA干扰技术已被广泛应用于线虫、植物和果蝇的基因功能分析中.随着Dicer酶和siRNAs的发现,人们已经能够利用人工合成的siRNAs,或转染siRNAs的表达载体来诱发哺乳动物细胞特定基因的抑制以及将上述方法应用于整体实验中,证明整体哺乳动物也存在RNA干扰现象.     

RNAi抑制促血管形成因子治疗结肠癌的研究

目的：应用RNA干扰技术抑制促血管形成因子基因的表达,观察结肠癌细胞增殖和凋亡的变化及对结肠癌肿瘤生长的影响,为进一步的临床应用研究提供理论基础。方法：利用60只裸鼠建立肿瘤动物模型,并随机分成5组。通过移植瘤内注射pshRNA-Del1和pshRNA-VEGF载体质粒,观察并比较pshRNA-Del1治疗组、pshRNA-VEGF治疗组和联合治疗组对裸鼠移植瘤生长的影响;通过免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67的表达和微血管密度,进一步探讨基于RNA干扰的治疗对结肠癌疗效的影响。结果：RNAi通过抑制基因VEGF和Del1的表达,能显著抑制结肠肿瘤的生长,减低肿瘤的血管密度,减弱肿瘤细胞增殖。结论：协同阻断基因VEGF和基因Del1的表达能显著抑制结肠肿瘤的生长,并在结肠癌的治疗方面具有明显的作用。     

RNA干扰沉默中期因子基因表达诱导肝癌细胞凋亡

目的:探讨RNA干扰(RNA interference)沉默中期因子(midkine,MK)基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:根据中期因子基因mRNA序列特点,设计合成中期因子基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染肝癌SMMC 7721细胞后,分别以实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中期因子表达情况,分别通过检测caspase-3活性和琼脂糖凝胶电泳方法了解肝癌细胞凋亡,以软琼脂集落培养试验检测对各组细胞增殖的影响.结果:中期因子siRNA可有效抑制肝癌细胞中期因子 mRNA和蛋白水平.转染组肝癌细胞caspase-3活性增高,呈浓度和时间依赖性;转染组出现明显的DNA条带.中期因子转染组细胞增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性.结论:采用RNA干扰沉默肝癌细胞中期因子基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导凋亡.     

沉默survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的实验研究

目的探讨survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。方法设计并构建靶向survivin的shRNA真核表达载体（psh-svv）,转染宫颈癌Hela细胞,用实时PCR法检测RNA干扰（RNA interference,RNAi）后survivin mRNA的表达,用Western blot检测survivin蛋白表达,观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用,转染psh-svv对Hela细胞凋亡的影响,裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。结果测序结果证实载体构建成功。转染psh-svv的实验组survivin mRNA表达明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组survivin蛋白表达亦明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组caspase-3活性显著高于其他3组（P〈0.05）。survivin基因沉默后,裸鼠移植瘤生长速度减慢,survivin低表达的实验组小鼠对放射线敏感。结论 psh-svv通过RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞survivin的表达,抑制Hela细胞增殖,诱导凋亡,增加Hela细胞对放射线的敏感性。     

RNA干扰下调YAP基因对甲状腺癌细胞TPC-1功能的影响

目的 检测siRNA沉默Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)后的人甲状腺癌TPC-1细胞功能变化。方法 应用阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的siRNA序列转染至甲状腺癌TPC-1细胞,应用qRT-PCR、Western印迹法检测转染后TPC-1细胞YAP基因及蛋白表达,MTT、平板克隆实验、Transwell小室、划痕实验和流式细胞术分别检测转染对细胞增殖、侵袭、迁移和细胞周期及凋亡的影响。结果转染siRNA后,YAP mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05);TPC-1细胞的增殖、侵袭、迁移能力受到抑制,细胞周期G₀/G₁阻滞,细胞凋亡未明显上升。结论 抑制甲状腺癌细胞YAP表达可有效降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,改变细胞周期分布,但对细胞凋亡无明显影响。     

RNA干扰Bcl-xL基因表达对大肠癌细胞侵袭的影响

 目的 探讨Bcl-xL基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法 应用Bcl-xL基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理人大肠癌HT29细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测Bcl-xI基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boydcn小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。另外,采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA）蛋白变化。结果 转染组癌细胞Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性门转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降,且与浓度相关。结论Bcl-xL基因在大肠癌细胞侵袭中起着重要的作用;以siRNA下调Bcl-xL基因表达,可明显抑制大肠癌细胞恶性侵袭,其机制可能与下调uPA表达有关。