遗传性P77PMC癫痫大鼠海马基因表达谱的研究

目的利用cDNA表达阵列构建遗传性癫痫大鼠海马基因表达谱,寻找其中的差异表达基因,为从分子水平探讨癫痫的发病机理打下基础。方法采用32P-α-dATP逆转录标记探针与cDNA阵列杂交,构建P77PMC大鼠和Wistar大鼠海马基因表达谱,用图象分析仪分析两者基因表达谱差异。结果在P77PMC大鼠海马中共发现有15个差异表达基因,其中12个基因表达上调,3个基因表达下调。并用逆转录-聚合酶链反应进一步证实了结果的可靠性。结论P77PMC大鼠与正常Wistar大鼠海马中存在多个差异表达基因,这些差异表达的基因可能在癫痫的发生中具有重要作用。     

听源性惊厥易感大鼠上丘突触素P38表达的研究

目的：探讨听源性惊厥易感大鼠上丘突触密度的变化情况。方法：免疫细胞化学方法和计算机图像分析技术。结果：P77PMC听源性惊厥易感大鼠上丘浅层和深层的P38免疫反应产物校正光密度值均显著高于正常Wistar大鼠,结论P77PMC大鼠上丘突触密度的改变可能与听源性惊厥易感性密切相关。     

遗传性癫痫大鼠海马脑源性神经营养因子蛋白的异常变化

目的本研究通过分析比较遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常大鼠(Wistar)海马中BDNF蛋白表达与定位差异,进一步阐明癫痫发病机制。方法以正常Wistar大鼠为对照组,应用PCR技术,筛选阳性自发性癫痫大鼠TRM作为实验组;通过Western blot技术分别对TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白进行半定量检测;免疫组织化学技术分别测定TRM及Wistar大鼠海马中BDNF蛋白的定位表达变化。结果与Wistar大鼠相比,TRM大鼠的海马中BDNF蛋白表达无明显变化;BDNF蛋白在海马DG区和CA1区定位表达减少。结论与Wistar大鼠相比,TRM大鼠海马DG区和CA1区BDNF蛋白定位表达减少,表明癫痫的发作可能与BDNF蛋白在海马区定位的异常变化有关。     

遗传性癫痫大鼠海马NOs、SOD、MDA、LDH的异常变化

目的比较遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马与正常Wistar大鼠海马的一氧化氮合酶(NOs)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的变化,进一步揭示癫痫的发病机制。方法应用Western Blot法检测TRM海马区NOs蛋白的表达;应用试剂盒检测TRM海马区LDH和SOD的活性以及MDA的含量。结果与正常Wistar大鼠相比,遗传性癫痫大鼠海马中NOs表达水平升高,MDA含量和LDH活性升高(0.01),SOD活性无变化。结论 NOs、LDH、MDA的异常变化可能与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展相关。     

遗传性癫痫大鼠小脑中p-CaMKⅡ、p-ERK和p-p38蛋白表达的异常变化

目的研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常Wistar大鼠小脑中p-Ca MKII、p-ERK以及pp38蛋白含量的变化,进一步阐明癫痫发病机制。方法应用PCR技术,鉴定基因突变鼠(TRM),确定癫痫阳性大鼠。以Wistar大鼠作为正常对照模型,通过Western blot技术分别测定TRM及Wistar大鼠小脑内p-Ca MKII、pERK以及p-p38的蛋白表达量。结果与正常大鼠相比,TRM大鼠小脑p-Ca MKII蛋白和p-p38蛋白表达量升高,而pERK蛋白表达量没有明显变化。结论 TRM大鼠小脑内p-Ca MKII和p-p38蛋白表达上调,表明Ca MKII与MAPK信号通路可能参与癫痫的发病机制。     

Ca_V1.2和钙调蛋白在自发性遗传性癫痫大鼠小脑中的异常表达

目的研究自发性遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)小脑组织中CaV1.2与钙调蛋白(Calmodulin,CaM)蛋白表达与共定位情况。方法应用Westernblot技术检测CaV1.2与CaM蛋白表达,应用免疫荧光技术定位CaV1.2与CaM蛋白的分布,应用激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]。结果 TRM大鼠小脑内CaV1.2的蛋白表达低于正常iWistar大鼠(P<0.05),而CaM的蛋白表达高于正常Wistar大鼠(P<0.05);荧光定位显示CaV1.2与CaM共定位的阳性细胞比率较之正常组表达降低(P<0.01)。与正常的Wistar大鼠相比,急性分离的TRM大鼠小脑神经元中[Ca2+]明显增强。结论 TRM大鼠小脑内CaV1.2和CaM蛋白表达异常可能是癫痫的发病机制之一。     

遗传性癫痫大鼠海马ERK与p38蛋白的异常变化

目的研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38蛋白的表达。方法以正常Wistar大鼠为对照组,PCR技术鉴定基因突变癫痫模型鼠TRM。提取大鼠海马组织后,应用免疫印迹法,检测大鼠海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38的蛋白表达。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM鼠海马中pERK与p-ERK/ERK蛋白表达量升高,而ERK蛋白表达量不变;TRM鼠海马中p-p38与p-p38/p38蛋白表达量高于正常Wistar大鼠,而p38蛋白表达量不变。结论 TRM鼠海马中p-ERK与p-p38表达上调,可能与TRM癫痫发病机制相关。     

听源性惊厥点燃后听觉核团和前脑结构内一氧化氮合酶阳性神经元的形态学观察

为探讨一氧化氮在听源性惊厥点燃中的作用．用NADPH-d组织比学方法和体视学分析,研究厂Wistar种系的听源性惊厥易感大鼠（P77PMC）惊厥和点燃后听觉核团内NOS阳性神经元的分布及差异。结果显示：（1）P77PMC大鼠一次惊厥后,听觉核团和前脑结构内可见广泛的NOS阳性神经元,其分布类似于正常大鼠;（2）点燃后,听觉核团和前脑结构内NOS染色增深,NOS阳性神经元增加。特别是在下丘和嗅周皮质．除NOS阳性神经元明显增多外．其分布亦发生改变。本研究提示,听源性惊厥可诱导NOS表达增加,这种增加可能对于保持神经元增高的易感性有关。     

慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠海马钙离子浓度和c-fos表达的改变

目的:观察慢性强迫游泳应激模型大鼠海马区[Ca2+]i和c-fos/Fos的变化,探讨慢性应激抑郁症与海马相关的发病机制。方法:选用雄性成年Wistar大鼠80只,将大鼠随机分为正常对照组(n=19)、急性对照组(n=12)和模型组(n=49),建立慢性强迫游泳应激抑郁模型,通过糖水偏好实验和开场实验对大鼠进行行为学测试。采用荧光分光光度法测定海马内[Ca2+]i浓度,免疫印迹技术和逆转录-聚合酶链式反应检测Fos和c-fos的表达变化。结果:与正常对照组大鼠相比较:(1)模型组大鼠相对糖水消耗量、糖水偏好百分比、直立次数和体重增长率均降低(P0.01,P0.05);(2)模型组大鼠各个时间点海马神经元[Ca2+]i增高(P0.01);(3)模型组大鼠海马Fos在应激后(0.5,1,2,4h)表达增强(P0.01),c-fosmRNA在应激后(0.5,1,2,4h)转录增强(P0.01)。与急性对照组相比较,模型组Fos蛋白表达高峰提前,表达量降低(P0.05)。结论:海马[Ca2']i及c-fos/Fos的表达变化,可能参与了抑郁症的发病过程。     

高压氧治疗对癫痫大鼠血清白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α水平及海马神经元Bax及Bcl-2表达的影响

目的：探究高压氧治疗对癫痫大鼠血清白细胞介素（IL）1β、IL-2、IL-8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表 达及海马神经元细胞凋亡基因表达的影响。方法：采用随机数字法将36 只成年健康SD大鼠进行编号,1 ～ 12 号 实验动物为空白对照组,剩余动物接受匹罗卡品建立癫痫模型,根据Racine 评分作为完成标准,随机选取12 只 接受高压氧治疗,利用ELISA 法检测实验动物血清IL-1β、IL-2、IL-8、TNF-α 表达水平,利用免疫印迹和免疫 荧光染色检测实验动物海马神经元细胞凋亡蛋白Bax 和Bcl-2 表达。结果：与空白对照组相比,癫痫模型组大鼠 血清IL-1β、IL-8、TNF-α 表达水平均显著升高,IL-2 表达水平明显降低;经过高压氧治疗后,与癫痫模型组相比, 实验大鼠血清IL-1β、IL-8、TNF-α 表达水平显著降低,IL-2 表达水平明显升高。免疫印迹和免疫荧光染色结果 显示,与空白对照组相比,癫痫模型组促凋亡蛋白Bax 表达显著升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2 表达显著下降,经过 高压氧治疗后,Bax 蛋白水平显著下调,而Bcl-2 蛋白水平显著上调。结论：高压氧治疗可减少癫痫大鼠血清IL- 1β、IL-8、TNF-α 的表达,增加IL-2 的表达, Bax 蛋白水平显著下调而Bcl-2 蛋白水平显著上调,因此本研究可作 为高压氧治疗癫痫病作用机制之一。     

惊厥对神经元缝隙连接蛋白基因表达的影响

神经元之间的缝隙连接蛋白Cx32是形成电突触的结构基础,电突触参与惊厥时神经元的同步化放电过程。为探讨惊厥对脑内神经元Cx32基因表达的影响,以遗传性癫痫易感大鼠P77PMC为模型,采用原位杂交的方法观察P77PMC大鼠听源性惊厥后脑内Cx32基因表达的变化。原位杂交结果显示：惊厥后在大脑皮层,海马脑区Cx32mRNA表达呈时间依赖性上调,惊厥后4h表达量明显增加,24h达高峰,结果提示：惊厥能上调神经元Cx32mRNA表达,从而可能使神经元之间的电突触联系增加,有利于神经元的同步化放电,加重惊厥的发生发展。     

戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素和神经营养因子-4表达的变化及灵芝孢子粉的干预作用

目的: 观察戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素(N-cadherin)和神经营养因子-4(NT-4)表达的变化及灵芝孢子粉的干预治疗作用,研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的作用机制。方法: 健康雄性Wistar实验大鼠30只,随机分为正常对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉治疗组,每组10只。模型组和治疗组均用致痫亚惊厥剂量的戊四氮(PTZ)腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。在低温条件下迅速取脑,通过免疫组化和Western blotting检测皮质和海马区N-cadherin和NT-4的变化。结果: 实验性癫痫大鼠模型制作成功,灵芝孢子粉组和癫痫模型组实验动物均达到点燃标准,与癫痫模型组动物相比,灵芝孢子粉组大鼠潜伏期明显延长, 但持续时间无显著差异。免疫组化和Western blotting检测实验结果表明:癫痫模型组实验大鼠脑海马和皮质N-cadherin含量比正常对照组增高(P<0.01);灵芝孢子粉组N-cadherins含量比癫痫模型组下降(P<0.01)。同时癫痫模型组大脑海马和皮质NT-4含量比正常对照组增加(P<0.05);灵芝孢子粉组NT-4含量比癫痫模型组增加(P<0.01)。结论: 灵芝孢子粉能够降低N-cadherin的表达,调整病变神经元兴奋性,起到抗癫痫作用,还能增强NT-4的表达从而减轻癫痫发作对神经系统的损伤。     

听源性惊厥上调惊厥易感大鼠脑内NR1基因的表达

N-甲基-D-门冬氨酸受体（NMDA或NR）功能的变化与癫痫的发生和发展密切相关．本文用原位杂交技术探讨了遗传癫痫易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间NRI亚基基因表达状况，证明：大脑皮层，海马齿状回，CA1、CA2、CA3及下丘NR1mRNA表达呈时间依赖性增高，下丘在惊厥后2h即出现NR1mRNA高表，而大脑皮层和海马各区域24h达高峰．听源性惊厥后这些区域NR1mRNA表达的上调可能与神经网络兴奋性增高及癫痫易感性的保持有关。     

听源性惊厥易感大鼠点燃后海马结构内生长相关蛋白的表达

用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了Wistar大鼠的听源性惊厥易感大鼠（P77PMC）惊厥和点燃后海马结构内生长相关蛋白表达的差异、结果显示：（1）P77PMC大鼠一次惊厥后，海马结构内有广泛的生长相关蛋白免疫反应产物沉积，其分布呈板层样；（2）P77PMC大鼠点燃后，生长相关蛋白免疫反应产物的分布特征与一次惊厥后相比较，无明显变化，但是，海马CA3区苔藓纤维层生长相关蛋白免疫反应产物的光密度值显著增加（P＜0．01）。结果表明，听源性惊厥点燃能够诱导海马结构内生长相关蛋白表达增加。本文还对生长相关蛋白表达增加的生物学意义进行了讨论．     

神经肽Y在自发性癫痫大鼠海马内过表达

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中,神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)的表达变化。方法 RT-PCR检测自发性癫痫大鼠和正常对照组Wistar大鼠海马中NPY mRNA表达,ELISA试剂盒法检测NPY蛋白浓度变化。结果自发性癫痫大鼠海马中NPY mRNA表达水平和NPY蛋白的浓度比正常对照组Wistar大鼠明显上调(P0.01)。结论 NPY mRNA和蛋白过表达可能与自发性癫痫发生机制有关。     

STIM1在KA致痫大鼠大脑皮质内的表达上调

目的研究基质相互作用分子1(stromal interaction molecule l,STIM1)在海人酸(Kainic acid,KA)致痫大鼠大脑皮质中的表达变化,探讨其与癫痫发病的关系及意义。方法 48只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NS组)24只和海人酸致痫组(KA组)24只,海人酸致痫组给予侧脑室注射KA 2μg/kg(7μl左右)制作KA致痫模型,正常对照组给予侧脑室注射等量生理盐水,观察记录各组大鼠癫痫发作的行为学表现,并于癫痫发作后不同时间点(48h、72h)随机取12只大鼠伤侧皮层脑组织,用半定量RT-PCR、Western blot和免疫组织化学技术检测STIM1的mRNA和蛋白的表达。结果 KA致痫组大鼠于造模后5min左右出现典型痫性发作,达Ⅳ~Ⅴ级,持续数小时;海人酸致痫组STIM1mRNA和蛋白表达水平在各时间点均较对照组显著增高(P0.05)。结论 STIM1在KA致痫大鼠皮层脑组织中过表达可能参与癫痫的发病机制。     

尼莫地平对癫痫太鼠海马P75NTR和P513蛋白表达的影响

目的：探讨尼莫地平（NM）对戊四氮（PTZ）点燃癫痫持续状态（SE）大鼠海马P75NTR和P53蛋白表达的影响,以期为临床应用尼莫地平治疗癫痫提供充分的理论依据。方法：动物分为正常对照组,PTZ组和NM组,模型诱导成功后,观察大鼠行为学改变,并取脑常规HE染色,并用免疫组化方法分别检测各组大鼠海马神经元凋亡相关基因P75NTR和P53的表达。结果：PTZ组大鼠有典型的SE发作,其海马P75NTR和P53表达较对照组明显增加（P〈0．05）,与PTZ组比较,NM组大鼠海马P75NTR和P53表达均减少（P〈0．05）。结论：NM有神经保护作用,其机理可能与抑制癫痫大鼠海马凋亡相关基因的发生有关。     

寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究.寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法 检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化. 结果 免疫电镜结果 显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上.寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异( P <0.01). 结论 HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关.     

过度扩张对血管内皮细胞与中性粒细胞粘附性的影响

目前认为 ,内膜增生并不局限于粥样斑块部位 ,而突出表现在正常血管段 ,它是对球囊扩张或成形术的一种非特异性反应[1 ] ,即环向过度牵张对内皮细胞 (ＥＣ)的作用。因此 ,本研究通过一种模拟血管持续过度扩张的体外细胞模型 ,对内皮细胞粘附分子的表达 ,以及其与中性粒细胞的粘附性进行了研究 ,旨在探讨在过度环向牵张条件下 ,上述病变发生的分子机制。1　材料和方法1.1　材料　成年ＳＤ大鼠 1只 (雄性 ,体重 30 0 ｇ左右 )由上海第二军医大学动物实验研究中心提供。出生婴儿脐静脉由上海长海医院妇产科提供。ＰａｒａｆｉｌｍＴＭ 为美国Ｎ…     

遗传性癫痫大鼠海马内电压门控性钠离子通道四种亚型的表达及分布

目的探讨遗传性癫痫大鼠(Tremor rat,TRM)大脑海马中,电压门控性钠离子通道Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亚型(Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6)的表达及分布。方法 Western blot检测TRM(n=7)和Wistar大鼠(n=7)海马中Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6的蛋白表达情况。免疫荧光法进一步分析TRM及Wistar大鼠海马CAI、CA3和DG区中这四种亚型的分布与定位。结果相较于正常大鼠,TRM海马中Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6蛋白表达均明显上调(P0.01)。此外,这四种VGSC亚型在TRM海马CAI,CA3区神经元及DG区颗粒细胞中分布广泛,且主要定位在细胞膜上。结论 Na_v1.1、Na_v1.2、Na_v1.3与Na_v1.6在TRM大鼠海马中出现显著高表达,可能与遗传性癫痫发生机制有关。