子宫内膜三维模型上小鼠囊胚着床的扫描电镜观察

目的　观察胚胎与体外子宫内膜三维模型共培养时 ,子宫内膜上皮细胞与胚胎的超微结构变化。　方法　将妊娠第 4天的小鼠囊胚在已建立的体外子宫内膜三维模型上进行培养 ,扫描电镜 (SEM )观察胚胎着床时子宫内膜上皮细胞及胚胎的超微结构。　结果　小鼠囊胚能正常脱透明带、粘附和扩展。电镜扫描显示体外培养的子宫内膜可形成胞饮突 ,但数量比体内子宫内膜少 ,胚胎粘附于胞饮突上。　结论　体外子宫内膜三维模型可形成胞饮突 ,且胞饮突可能直接参与了囊胚与子宫内膜的粘附。     

子宫内膜异位症子宫内膜及输卵管细胞对鼠胚胎发育的影响

目的探讨子宫内膜异位症(内异症)子宫内膜及输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响。方法小鼠2细胞期胚胎202个与卵巢巧克力囊肿患者术中切除的子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养(实验组),314个与非卵巢巧克力囊肿患者子宫内膜及输卵管上皮细胞共培养作为对照。结果体外培养72~96h后,与对照组输卵管上皮细胞及子宫内膜共培养时有25.7%和26.2%的2细胞期胚胎发育到扩张期囊胚,与实验组输卵管上皮细胞共培养有25.9%发育到扩张期囊胚,二者无显著差异(P>0.05),而子宫内膜仅为11.1%,二者有显著差异(P<0.05)。结论内异症患者的输卵管上皮细胞对鼠早期胚胎体外发育无影响;子宫内膜对胚胎发育有明显的抑制作用,这可能与内异症的生育率降低有关。     

精液对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响

目的探讨精液成分对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响。方法(1)子宫内膜细胞蜕膜化后分别加入人精子及精浆共培养,观察蜕膜化的间质细胞生长情况并测定培养液中泌乳素(PRL)含量。(2)内膜培养8 d后,加入小鼠2-细胞期胚胎继续培养,观察胚胎的发育情况及内膜细胞生长情况。(3)建立假孕鼠模型,观察精液在胚胎移植中的作用。结果(1)精浆组子宫内膜间质细胞蜕膜化程度明显优于精子组和对照组,PRL分泌量有显著性差异(P<0.05),而精子组和对照组无明显差异。(2)精浆能促进8细胞以后的胚胎在子宫内膜细胞上的卵裂、囊胚形成、孵化、粘附和扩展性生长(P<0.05)。(3)胚胎移植过程中精子对植入率没有影响。结论(1)精浆能促进子宫内膜间质细胞蜕膜化,促进PRL的分泌。(2)精浆能促进胚胎在子宫内膜细胞共培养体系中的发育。(3)精浆与精液对囊胚着床作用可能相同,而精子在胚胎植入过程中没有作用。     

不同时期子宫内膜搔刮对IVF/ICSI妊娠结局的影响

目的探讨不同时期子宫内膜搔刮治疗对IVF/ICSI患者妊娠结局的影响。方法回顾性分析2015年12月至2016年12月在深圳中山泌尿外科医院生殖中心行子宫内膜搔刮治疗后IVF/ICSI新鲜胚胎移植的99名患者的临床资料。根据内膜搔刮时间及次数不同分为3组:促排卵前一月经周期的黄体中期行1次搔刮者为干预组1,共43例;促排卵前一月经周期的增生早期及黄体中期行2次搔刮者为干预组2,共25例;对照组不予任何处理,共31例。比较3组患者的基础资料、胚胎移植情况及妊娠结局。结果 3组患者的基础资料比较均无显著性差异(P0.05),Gn使用情况、获卵数、HCG日内膜厚度、移植胚胎数、囊胚移植比例等比较亦无显著性差异(P0.05)。干预组1和干预组2治疗后的胚胎种植率(分别为43.4%、46.0%)、临床妊娠率(分别为65.1%、64.0%)及活婴出生率(分别为55.8%、56.0%)均略高于对照组(分别为32.4%、61.3%和51.6%),但尚无显著性差异(P均0.05)。结论在促排卵前一月经周期的黄体中期行1次或是在增生早期及黄体中期行2次子宫内膜搔刮治疗,均不能明显改善IVF/ICSI患者新鲜胚胎移植后的妊娠结局。但该结果仍需扩大样本量后进一步探讨验证。     

胚胎干细胞培养体系对早期胚胎发育的影响

目的利用胚胎干细胞(ES)培养体系(饲养细胞+添加条件培养基的胚胎干细胞培养液)培养早期胚胎,建立并优化移植前早期胚胎培养系统,为提高胚胎的着床率与临床妊娠率及植入前遗传学诊断奠定基础。方法将获取的521枚胚胎根据培养液及饲养细胞的不同分为10组,分别比较各组胚胎的体外发育率。结果ES培养体系显著优于传统的胚胎培养体系(P<0.05)。ES培养体系中用SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苷亚系(STO)作饲养细胞培养效果优于小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养细胞,两种饲养细胞效果均显著优于用输卵管上皮细胞(OEC)作为饲养细胞(P<0.05)。结论ES培养体系可以显著提高早期胚胎的发育率,培养体系中STO饲养细胞较MEF饲养细胞有更好的效果。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ＜０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可以促进胚胎体外发育，能在体外获得数量较多的高质量胚胎。     

胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的　探讨胰岛素对小鼠体内外来源早期胚胎体外发育的影响。　方法　用添加不同浓度胰岛素和胰岛素+葡萄糖的CZB培养液对小鼠体内外来源胚胎进行体外培养 ,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化。　结果　小鼠 2 细胞胚胎体外培养 10 2h后 ,0 .0 5 μg/ml胰岛素添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数均显著高于其他各浓度添加组。葡萄糖加入显著提高了这一效应。添加 0 .0 5 μg/ml胰岛素和葡萄糖的CZB培养液同样显著提高体外受精 (IVF)胚胎的孵化囊胚率和囊胚细胞数。　结论　添加胰岛素和葡萄糖培养液对体内或IVF小鼠胚胎发育具有相同的促进作用。     

培养液成份变化对胚胎发育的影响

培养液成份对胚胎发育影响重大。培养液的设计理念是尽可能接近生理条件下的培养环境。序贯培养液分为卵裂期培养液和囊胚期培养液,设计依据是胚胎在不同发育阶段对培养条件有不同的成份需要。单一培养液不同于序贯培养液,将同一混合成份的培养液覆盖了从卵裂期到囊胚期的胚胎体外培养过程,其设计思路是"让胚胎选择"自身需要的营养物质。研究培养液对胚胎发育的影响,需要深入了解能量底物及缓冲系统在支持细胞内稳定性方面的作用。卵裂期胚胎以丙酮酸、乳酸代谢为主,当胚胎发育到桑椹胚期以后,葡萄糖的消耗量急剧增加。而囊胚培养液中存在的过量乳酸盐,增加了囊胚非整倍体率的发生。培养液中使用缓冲液,可以稳定胞内pH,维持胚胎持续发育。培养液对人类胚胎发育的影响非常复杂,选择合适而必要的成份,可减少体外操作对胚胎的应激。     

三种移植策略在反复种植失败患者冻融胚胎移植周期中的应用比较

目的通过比较序贯移植、内膜机械刺激与囊胚移植三种移植方案在反复种植失败(RIF)患者冻融胚胎移植周期中的应用结果,为临床选择RIF的干预策略提供参考。方法回顾性分析2016年6月至2017年12月在我院因反复种植失败拟再次行冻融胚胎移植患者共228例,研究组按照移植方案不同分为三组:A组(序贯移植组):移植1枚卵裂期胚胎+1枚囊胚(40例);B组(内膜机械性刺激组):根据胚胎移植时间及数量的不同分为两个亚组,B1组:子宫内膜机械性刺激+1枚囊胚移植(52例);B2组:内膜机械性刺激+2枚卵裂期胚胎移植(47例);C组(囊胚移植组):移植1枚囊胚(40例)。对照组为移植2枚卵裂期胚胎(49例)。结果 A组临床妊娠率(67.52%)、种植率(41.25%)显著高于对照组(分别为36.73%、21.43%,P均0.05);B1组种植率显著高于对照组(44.23%vs 21.43%,P0.05);多胎率、早期流产率、异位妊娠率各组间无统计学差异(P0.05)。结论 RIF患者选择序贯移植、内膜机械性刺激+囊胚移植及囊胚移植三种移植策略均有改善妊娠结局的趋势;三者中序贯移植较传统卵裂期胚胎移植相比,可显著提高临床妊娠率和种植率;序贯移植可以降低因囊胚培养失败无胚胎移植的风险,但同时可能增加多胎率的风险。临床上需要根据患者的具体情况选择个体化移植策略。     

激素替代治疗解冻移植周期中体外培养时间对卵裂期胚胎移植临床结局的影响

目的研究体外培养时间对激素替代治疗-冻融胚胎移植(HRT-FET)周期中解冻优质卵裂期胚胎临床结局的影响。方法回顾性分析2016年1月1日至2017年12月31日期间在我院生殖中心实施HRT-FET助孕治疗的270个周期的临床资料。根据解冻后不同的体外培养时间分为两组:正常解冻组(168个周期):移植当天早上解冻,解冻后体外培养2~3h移植;提前解冻组(102个周期):移植前1d解冻,体外培养17~18h后移植。比较两组患者的临床妊娠率、种植率、早期流产率。结果两组患者的女方年龄、不孕年限、体重指数(BMI)及子宫内膜厚度等一般资料比较均无显著性差异(P0.05)。提前解冻组与正常解冻组的临床妊娠率(58.82%vs.58.33%)、胚胎种植率(38.73%vs.39.58%)、早期流产率(11.67%vs.9.18%)比较均无显著性差异(P0.05)。结论 HRT-FET周期中,延长解冻后优质卵裂期胚胎的体外培养时间不能显著改善临床结局。     

人类白细胞抗原-G与早期胚胎生长发育和着床

人类白细胞抗原-G(HLA-G)是人类组织相容性抗原复合物,在母胎免疫耐受中起作用。近年的研究发现,HLA-G在着床前胚胎表达。我们和国际上其他的临床研究显示,分泌可溶性HLA-G的胚胎在体外受精和胚胎移植中的临床妊娠率和种植率较高。进一步的研究发现,HLA-G与胚胎的免疫耐受、生长、着床相关的粘附和浸润相关,并通过MEK1/2信号传导通路促进人绒毛膜促性腺激素的分泌。我们还发现,子宫内膜细胞与可溶性HLA-G结合,并表达其受体;可溶性HLA-G还促进子宫内膜细胞与滋养细胞的粘附;白血病抑制因子和miR-152参与HLA-G在滋养细胞表达的调控。HLA-G表达和功能相关的分子机制研究显示,HLA-G在胚胎生长和着床上起重要作用,可能是胚胎发育潜能的标志分子。     

体外受精-胚胎移植周期中第3天移植胚胎细胞数与妊娠率的相关性

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中第3天移植的不同细胞数目的胚胎,其妊娠率有无差别;并进一步分析哪些分裂阶段的胚胎不适合于体外培养后第3天移植。方法以2004年1月至2006年6月在本中心接受IVF-ET治疗的788对夫妇,共792个周期为研究对象。ET后4周B超测到胎心搏动视为妊娠。将所有移植胚胎按细胞数目的不同分为4组:移植胚胎细胞数≤4(a组);移植胚胎细胞数为5~6(b组);移植胚胎细胞数为7~9(c组);移植胚胎细胞数≥10(d组)。通过计数胎心数标定每一组胚胎的种植率,分析4组胚胎种植率有无差异。结果c组胚胎其种植率(34.0%)显著高于其他3组(P<0.05);其中8细胞胚胎的种植率最高(34.8%),其次是9细胞胚胎(34.3%)和7细胞胚胎(31.6%),再次是10细胞的胚胎(14.3%),最后是5~6细胞胚胎(8.7%);在对所移植的胚胎全部种植或全部不种植的周期分析中,移植≤4细胞胚胎或移植≥11细胞胚胎发生种植的可能性为0。结论在IVF-ET周期中第3天移植7~9细胞的胚胎其妊娠率显著高于移植其他细胞数的胚胎;选择胚胎时应首选8细胞的胚胎,然后是9、7、10细胞的胚胎,最后是5~6细胞胚胎;体外培养第3天≤4或≥11细胞胚胎不适合移植。     

玻璃化冻融胚胎移植323个周期临床分析

目的探讨辅助生殖技术中影响玻璃化冻融胚胎移植结局的相关因素。方法对304例共323个周期的相关资料进行回顾性统计学分析,根据患者年龄、胚胎发育时期、移植日子宫内膜厚度、移植过程是否顺利和解冻后胚胎复苏程度进行分组,比较各类分组的胚胎种植率和临床妊娠率。结果受精第2天冷冻者与受精第3天冷冻者的胚胎种植率和临床妊娠率差异无统计学意义（P〉0．05）;子宫内膜厚度和移植过程是否顺利组间胚胎种植率及临床妊娠率均无显著性差异（P〉0．05）;不同年龄和冷冻胚胎复苏程度对胚胎种植率和临床妊娠率有显著影响（P〈0．05）。结论在冻融胚胎移植周期,患者年龄和解冻后胚胎质量对妊娠的成功率起主要作用,准备适宜的子宫内膜厚度能提高临床妊娠率。     

卵裂球受损对冻融胚胎移植周期临床结局的影响

目的探讨卵裂球受损对冻融胚胎移植周期临床结局的影响。方法回顾分析181个冻融胚胎移植周期,了解胚胎级别与冷冻受损的关系,分析受损程度(完整存活、受损率≤20%和>20%组)和移植平均≥6、<6细胞胚胎对妊娠率和种植率的影响。结果1、2、3级胚胎存活率差异显著(P<0.05),损伤率差异非常显著(P<0.001)。完整存活胚胎、受损率≤20%及>20%胚胎组的临床妊娠率、种植率均存在显著性差异(P<0.05,P<0.01),移植≥6细胞胚胎组的临床妊娠率、种植率显著高于<6细胞胚胎组(P<0.05)。结论胚胎卵裂球受损率评价胚胎受损程度优于胚胎存活率。在冻融胚胎移植周期,胚胎质量、移植时胚胎细胞期和受损程度是影响妊娠率和种植率的胚胎学因素。     

时差成像系统对IVF-ET结局的改善及其优选模型初探

目的比较时差成像(time-lapse imaging,TLI)系统与常规胚胎培养的胚胎结局和临床妊娠结局,探讨基于TLI技术的胚胎优选模型的临床应用价值。方法回顾性分析2019年6~11月在我院行体外受精/卵泡浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕的610个周期患者资料。按胚胎培养方式的不同分为常规培养组(n=543)和TLI组(n=67),常规培养组通过胚胎形态学评分优选胚胎,TLI组结合胚胎形态学和动力学方法优选胚胎。比较两组患者女方年龄、不孕年限、BMI、激素水平、胚胎结局、种植率和临床妊娠率等临床资料;再将两组根据女方年龄、获卵数和可用胚胎数进行分组,比较各亚组间种植率和临床妊娠率的差异。结果两组患者间的一般资料和获卵数、正常受精数、可用胚胎数、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05);TLI组的卵母细胞利用率显著高于常规培养组(37.15%vs.35.30%)(P<0.05)。进行新鲜周期移植的两组患者在移植日的子宫内膜厚度和移植个数上均无显著性差异(P>0.05),TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组略有增高,但无显著性差异(P>0.05)。亚组分析显示,不同年龄段,TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组均略有提升,但无显著性差异(P>0.05);获卵数≥10个或D3可用胚胎数/移植个数>3时,TLI组的临床妊娠率和种植率较常规培养组均有增高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论TLI系统可显著提高卵母细胞利用率,TLI优选模型是一种简单的胚胎优选方案;获卵数>10个或D3可用胚胎数/移植胚胎数>3时,TLI胚胎优选方案的种植率和临床妊娠率较常规优选方案可能有所改善。     

淋巴细胞对子宫内膜蜕膜化及胚胎着床的影响

目的　探讨淋巴细胞对子宫内膜蜕膜化及胚胎着床的影响。　方法　分离育龄妇女增殖晚期子宫内膜间质细胞 ,加入雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)使蜕膜化后 ,加入人非孕及早孕外周血淋巴细胞与小鼠第 4天胚胎共培养 ,观察间质细胞及胚胎的孵化、粘附、扩展生长情况 ,并测定培养液中泌乳素 (PRL)含量。　结果　早孕淋巴细胞对子宫内膜蜕膜化有明显促进作用 ,特异性促进PRL分泌 (P <0 .0 5 )。淋巴细胞能促进胚胎在子宫内膜间质细胞的孵化、粘附、扩展性生长 ,早孕组胚胎扩展生长率显著高于非孕组 (P <0 .0 5 )。　结论　早孕淋巴细胞可能通过促进E2 、P激素调节蜕膜化的子宫内膜分泌PRL而促进胚胎着床。     

PCOS高雄激素血症患者降调节后行冻融胚胎移植的临床结局观察

目的探讨降调节对多囊卵巢综合征(PCOS)高雄激素血症患者冻融胚胎移植(FET)周期临床结局的影响。方法回顾性分析2012年1月至2016年4月在我院不孕不育科行FET的PCOS高雄激素血症患者139例的临床资料,根据内膜准备方案不同分为常规雌孕激素替代组(HRT组,n=76)和降调节雌孕激素替代组(降调节HRT组,n=63),观察两组患者雌激素使用时间和剂量、子宫内膜厚度及分型、血清激素水平及临床妊娠结局等。结果两组患者的胚胎移植(ET)日子宫内膜厚度、移植胚胎数、优质胚胎率、早期流产率、异位妊娠率比较均无显著性差异(P0.05);降调节HRT组补佳乐使用时间[(13.67±1.91)d]及总剂量[(81.55±10.80)mg]显著小于HRT组[分别为(15.28±2.47)d和(94.25±14.17)mg](P0.01);降调节HRT组的ET日A型内膜占比(77.78%)、临床妊娠率(69.84%)及胚胎种植率(47.29%)均显著高于HRT组(分别为57.89%、51.31%、32.47%)(P0.05)。结论对于PCOS高雄激素血症患者,降调节后雌孕激素替代法准备内膜可以减少雌激素使用时间及用量,改善子宫内膜分型,有效提高胚胎种植率和临床妊娠率。     

Luminex液相蛋白芯片用于研究着床窗期子宫内膜和早孕蜕膜基质细胞的细胞因子的表达谱

目的探索着床窗期子宫内膜和早孕期蜕膜基质细胞的细胞因子谱表达及其对胚胎着床和早期妊娠的可能影响。方法获取着床窗期子宫内膜基质细胞(ESC)和早孕期蜕膜基质细胞(DSC)进行体外培养,采用Luminex液相蛋白芯片技术检测细胞培养上清液中15种细胞因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、颗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白因子-1(MCP-1)、受调节激活的正常T细胞排泌的因子(RANTES)和γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的含量变化,比较两者表达的差异。结果DSC分泌多种细胞因子,与ESC相比,其中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IP-10、GM-CSF、G-CSF、MIP-1α、RANTES表达下调,有极显著差异(P<0.001);IL-4表达上调,有显著差异(P<0.01);MCP-1、IL-2和IL-12表达无明显变化。不同时期表达的细胞因子之间存在复杂的相关关系。结论从着床窗期子宫内膜到早孕期蜕膜基质细胞表达的细胞因子谱的水平发生变化,可能对调控胚胎着床和维持早期妊娠起着重要作用。