大鼠体神经-内脏神经吻合后脊髓前角运动神经元GAP-43及TAU的表达变化及生物学意义

目的研究大鼠体神经-内脏神经吻合以及体神经一体神经吻合术后生长相关蛋白（GAP-43）与微管相关蛋白（TAU）在脊髓前角运动神经元中的表达变化规律与差异．进一步探讨影响异类神经元再生的相关因子。方法建立大鼠人工体神经-内脏神经吻合动物模型（模型组）和体神经-体神经吻合动物模型（模型对照组）,用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分别观察正常组和模型对照组、模型组术后3、7、14、28、60和90d时脊髓腰4（L4）运动神经元的GAP-43与TAU的mRNA表达水平变化。结果模型组和模型对照组大鼠L4运动神经元中GAP-43和TAumRNA表达水平术后第3天时开始均较正常动物增高。7d时模型组GAP-43mRNA达高峰,持续高表达状态至28d后逐渐降低,至90d降至正常水平,而模型对照组在14d时达高峰,持续高表达,90d降至正常水平。TAU在正常动物L4运动神经元中表达较少,在模型组14d时表达达高峰,模型对照组在28d达高峰,90d时降至正常水平。结论大鼠人工体神经-内脏神经反射弧建立后脊髓L4前角运动神经元GAP-43及TAU持续高表达状态,提示异类神经元再生和突触重建过程的进行,其表达变化过程与异类神经元成功再生的过程极为吻合。而大鼠人工体神经-内脏神经及体神经一体神经吻合后GAP-43和TAu表达趋势上的差异可能与神经再生过程中的微环境差异和支配靶器官的改变有关。     

生长相关蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马中的表达变化

目的 研究7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后海马神经组织生长相关蛋白(growth-associated protein,GAP-43)及其mRNA的表达变化.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBD模型,并以正常新生大鼠为对照.以免疫组织化学和RT-PCR法检测不同时相点海马组织GAP-43及其mRNA的表达.结果 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达较同日龄正常大鼠明显增高,表达高峰分别在损伤后第2周和第3周.结论 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达增高,可能与海马损伤后修复有关.     

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。     

产前束缚应激下调子代大鼠海马生长相关蛋白43的表达

目的：通过检测产前束缚应激子代大鼠脑内海马中生长相关蛋白（GAP-43）的表达,探讨该应激降低大鼠空间学习记忆能力的原因。方法：选用SD大鼠20只,正常饲养7d,使其怀孕,并完全随机分为应激组（n=10）和对照组（n=10）,在母鼠怀孕的13～19d,白天使母鼠钻入一直径7cm,长19cm的圆柱形容器中,实施束缚应激。对照组则正常饲养。待母鼠生产后,于仔鼠出生后1、7和30d时将其处死．取脑组织应用Western Blotting方法检测海马中GAP-43的表达。均有显著性．另外30d两组在处死前先进行Morris水迷宫实验。结果：Morris水迷宫实验中,应激组与对照组相比,寻找站台的潜伏期有明显的延长（P〈0．05）。策略方面,应激组多选择随机式,对照组多选择直线式,差异有统计学意义（P〈0．05）。仔鼠应激组脑海马GAP-43的表达在1和7d高于对照组,在30d时低于对照组（P〈0．叭）。结论：产前束缚应激刺激早期可使GAP-43反应性升高,但长期看,会下调子代大鼠脑海马GAP-43的表达,使神经元轴突发育异常．最终导致子代大鼠认知缺损。     

Nogo-A基因敲除鼠视神经损伤后修复的实验研究

目的评价Nogo—A基因在视神经损伤后修复机制中的作用。方法Nogo-A基因敲除联合视神经损伤鼠为实验组（20只）,C57BL／6小鼠联合视神经损伤作为对照组（20只）。制备视网膜、视神经冰冻切片,采用免疫荧光技术检测视网膜神经节细胞和视神经中生长相关蛋白（GAP）43的表达。进行视网膜神经节细胞体外培养,进行GAP-43染色,采用图像分析系统计算细胞轴突长度。结果视神经中GAP-43表达：夹伤后1、3、7d对照组中表达少量GAP-43,实验组中GAP-43表达明显高于对照组（t=2．12,3．56、2．63,均P〈0．01）。GAP-43抗体染色可见着色在体外培养RGC轴突,实验组3d有较长轴突生长,对照组3d有较短轴突生长。RGC于培养1、3及7d,经自动图像分析系统处理,得出细胞突起长度,实验组突起长度明显高于对照组（F=41．36、31．23,均P〈0．01）。结论Nogo—A基因在抑制视神经损伤后轴突再生机制中起重要作用。     

视网膜神经节细胞轴突再生相关神经胶质酸性蛋白和生长相关蛋白-43基因研究

目的 探索视神经移植后,再生的视网膜神经节细胞中基因表达的变化.方法 将39只Listed Hooded大鼠分为正常对照组、神经截断组和截断+移植组.采用外周神经缝接模型,用免疫组化技术检测GFAP、GAP-43在各组不同时期表达的变化.通过采用RT-PCR技术检测大鼠视网膜中13个基因的mRNA浓度的变化,使用ANOVA进行统计比较.结果 视网膜切片显示了神经截断组GFAP有明显的表达上调;截断+移植组的GFAP表达下调,GAP-43在不同时点在GCL出现不同程度的表达上调.Real-time PCR结果,5d后,视网膜中的GFAP、GAP-43表达在截断组和截断+移植组与对照组相比有显著的增加.在其后的时点,GAP-43的表达在两个实验组都比对照组有显著降低.结论 再生的视网膜可能调节GFAP合成.再生的RGCs表达GAP-43.GAP-43上调的结果为神经再生提供了依据.     

GAP—43在发育大鼠中枢神经系统的表达

目的：研究神经生长相关蛋白质（GAP－43）在发育大鼠中枢神经系统的表达及其意义。方法：选取生后5,15,30d正常雄性新生鼠,应用免疫细胞化学ABC法结合图像分析对其大脑皮质,海马及小脑皮质GAP－43表达进行研究。结果：生后5d,GAP-43主要分布在神经元,生后15,30d,则分布在神经纤维网中,神经元胞体（包括锥体细胞,颗粒细胞和浦肯野细胞等）不染色;图像分析显示不同日龄新生鼠不同脑区GAP－43灰度值无显著性差异。结论：GAP－43是轴突生长,延伸的重要因 子。     

神经节苷脂对脑外伤大鼠大脑皮质和海马区GAP-43表达的影响

目的观察神经节苷脂（GM1）对脑外伤大鼠大脑皮质和海马区神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响,探讨GM1促进脑外伤神经修复的可能机制。方法选择出生10周雄性SD大鼠200只,随机分为假手术组60只,无脑外伤,术前腹腔注射生理盐水3 d。脑外伤模型140只,分为模型组70只,术前腹腔注射生理盐水3 d;GM1组70只,术前腹腔注射GM13 d。应用酶联免疫法检测大鼠大脑顶叶皮质和海马区GAP-43于0～24 h不同时间点的表达情况,并在术后1～5 d不同时间点进行行为学检测。结果 （1）GM1组大鼠大脑顶叶皮质0～16 h和海马区0～24 h GAP-43的表达均明显低于模型组（P〈0.01）,而与假手术组比较,大鼠顶叶皮质区8～24 h GAP-43的表达,差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）GM1组大鼠大脑顶叶皮质GAP-43的表达,术后随着时间的增加而升高,至24 h已达模型组水平。（3）假手术组的行为学表现1～5 d均优于模型组和GM1组（P〈0.01）,GM1组在术后2～5 d运动能力逐步增强,行为学表现优于模型组（P〈0.05）。结论预防性使用GM1有效地促进大鼠大脑皮质GAP-43的表达升高,降低脑外伤大鼠脑损伤程度,从而发挥其对实验性脑外伤大鼠的神经保护作用。     

早期干预对脑损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的 研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠学习记忆能力及脑细胞中神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法 选用SD大鼠建立宫内HIBD动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组和对照组，每组12只。HIBD干预组采取早期触摸和丰富环境刺激，HIBD非干预组与对照组常规饲养。干预28d后，通过三等臂Y型迷宫试验检测大鼠学习记忆功能，而后取大鼠额皮质和海马组织，用免疫组织化学染色法检测GAP-43表达情况。结果 HIBD非干预组学习与记忆能力明显低于对照组（P〈0．01），HIBD干预组Y迷宫测试成绩则优于HIBD非干预组（P〈0．01）。同时，HIBD非干预组额皮质和海马神经元GAP-43阳性系数高于对照组（P〈0．01），而HIBD干预组GAP-43的表达又明显高于HIBD非干预组（P〈0．01）。结论 早期干预具有改善HIBD大鼠认知能力的效果，其促进HIBD脑功能修复的作用与增加脑组织GAP-43的表达有关。     

二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠神经保护的作用机制

目的：探讨二苯乙烯苷（tetrahydroxystilbene glucoside,TSG）对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用机制。方法：雄性SD大鼠96只,随机分为4组：对照组,模型组,小剂量［60 mg/(kg·d)］TSG组,大剂量［120 mg/(kg·d)］TSG组,每组24只。TSG或生理盐水灌胃7 d后应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,术后6,24,48 h及7 d观察动物神经行为学变化并评分,免疫组织化学法检测神经生长因子（NGF）、生长相关蛋白(GAP)-43和蛋白激酶A催化亚基(PKAc)蛋白的表达。结果：神经功能评分显示模型组各时间点均有明显的神经功能缺损症状,除6 h时间点外,两个剂量TSG治疗组其余各时间点神经功能评分明显低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,两个剂量TSG组各时间点NGF,GAP-43及PKAc蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。NGF,GAP-43及PKAc蛋白表达两两之间呈正相关。结论：TSG可能通过诱导大鼠脑缺血-再灌注损伤后NGF蛋白表达上调,激活PKA通路,增加轴突再生标志物GAP-43蛋白的表达,从而起到神经保护作用。     

大鼠坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43 表达的影响

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的调节。方法大鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,对照组注射生理盐水,动物存活7d或14d,用Western blot与RT-PCR观察GAP-43在脊髓腰骶膨大部前角的表达。结果与对照组相比,注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角内GAP-43蛋白与其mRNA的表达明显下降,上述改变在统计学上均有显著意义(P<0.01)。结论大鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角内GAP-43表达的调节。     

坐骨神经损伤后生长相关蛋白表达的免疫组化研究

目的：探讨周围神经在损伤后远侧端生长相关蛋白（GA9－43）的表达。方法：切除SD大鼠－侧坐骨神经5mm,造成坐骨神经缺损伤模型,两周后用免疫组化法检测损伤远侧端神经组织中GAP－43的表达,结果：损伤神经远侧端雪旺细胞表可见棕色阳性产物,而正常神经组织中未见阳性反应产物。结论：损伤神经远侧端雪旺细胞中可见GAP－43表达,在正常神经组织中GAP－43低表达或无表达。     

丙泊酚干预对大鼠视神经损伤的影响及机制研究

目的探讨大鼠视神经损伤后丙泊酚干预对损伤视神经及视网膜神经节的影响及机制。方法 SD大鼠67只,随机取20只为正常组,不予任何处理。余行视神经钳夹法造模,造模成功42只纳入实验。随机分为:模型对照组和丙泊酚组,各21只/组。造模后4 d,以TUNEL法检测大鼠视网膜和视神经细胞凋亡,造模后7 d,RT-PCR、Western-blot检测视网膜和视神经节细胞组织Caspase-3、BCL-2基因和蛋白表达。造模后14 d,行闪光视觉诱发电位检测,处死大鼠取眼球,观察各组大鼠视网膜和视神经的病理形态,行视网膜神经节细胞计数。结果造模后4 d,丙泊酚组视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于模型对照组(P0.05),造模后7 d与模型对照组相比,丙泊酚组Caspase-3的表达显著降低(P0.05);BCL-2的表达显著升高(P0.05)。造模后14 d,荧光金阳性RGC数:模型对照组最少,丙泊酚组较多,正常组最多,且各组之间差异有统计学意义(P0.05)。丙泊酚组大鼠闪光视觉诱发电位伏期较模型对照组大鼠短(P0.05)、波幅明显高于模型对照组(P0.05)。结论丙泊酚干预通过减少大鼠视神经钳夹后RGCs的凋亡,降低视网膜Caspase-3的表达,升高BCL-2的表达,对视神经损伤起到保护作用。     

大鼠视神经切断后视网膜Muller细胞及小胶质细胞变化特点

目的观察视网膜Muller细胞和小胶质细胞在大鼠视神经切断后的变化特点．方法应用大鼠视神经完全横断模型,随机分为术后1d、3d、7d、14d4个损伤组和假手术组（每组n=5）;分别用Muller细胞和小胶质细胞特异性标记物谷氨酰胺合成酶（GS）和OX-42,进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（sP）法染色,以显示视网膜Muller细胞和小胶质细胞的变化．结果在视神经切断后,大鼠视网膜Muller细胞GS阳性产物立即增粗、深染,并与周围细胞紧密联系在一起,3d达高峰,14d明显减弱;小胶质细胞OX-42的阳性产物表达在视神经切断后7d明显增强,14d达高峰．结论视神经切断后大鼠视网膜Muller细胞反应性增生,小胶质细胞被激活,但反应高峰晚于Muller细胞,其作用有待进一步研究．     

MK-801与七叶皂苷纳联合应用对损伤脊髓细胞的保护作用

目的探讨N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801与七叶皂苷钠联合应用对损伤脊髓细胞的保护作用。方法60只大鼠随机分为治疗组、对照组和正常组,采用改良Allen背侧打击法、损伤脊髓。治疗组给予MK-801与七叶皂苷钠,对照组给生理盐水。受伤后1d、3d检测脊髓组织SOD活性及MDA食量,并用免疫组化方法检测脊髓组织内神经生长和修复相关GAP-43,MAP-2和CyclinD1的表达情况。结果对照组SOD活性降低,MDA含量增高(P<0.05),神经组织呈破坏性改变,损伤区周GAP-43、MAP-2和CyclinD1表达增高(P<0.05),治疗组可减轻脊髓组织损害,并增强GAP-43和MAP-2的表达(P<0.01),抑制CyclinD1的表达。结论脊髓损伤后MK-801与七叶皂苷钠联合应用可减轻脊髓组织水肿,清除自由基,抑制细胞凋亡和蛋白水解,对损伤脊髓细胞有明显保护作用,并促进神经组织的修复。     

Effects of Continuous Sciatic Nerve Block by Tetrodotoxin on Growth Associated Protein-43 Expression in Dorsal Root Ganglions of Normal and Sciatic Nerve Injury Rats

Growth associated protein-43(GAP-43) is considered to be one of the most useful molecular markers for the neural development,nerve regeneration,and neuroplasticity     

大鼠脊髓半切损伤后突触分化诱导基因产物SynDIG1的表达增强

目的 探讨大鼠脊髓半切损伤后(spinal cord injury, SCI) 突触分化诱导基因产物(synapse differentiation induced gene 1,SynDIG1)的表达变化及意义.方法 SD大鼠随机分成对照组和脊髓损伤组(n=75),切断大鼠脊髓一半作为实验模型,只咬除椎板而不损伤大鼠脊髓作为对照模型.在手术后7、14、21、28、35天采集损伤区域的脊髓组织,用免疫荧光和免疫印迹技术检测各组各时间点SynDIG1的蛋白表达,并且与半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、神经生长蛋白43(GAP-43)等神经元特异性标志物做免疫荧光双标技术检测.结果 在脊髓损伤后第7天就发现神经元有SynDIG1表达,在第28天达到高峰,随后维持在较高水平.通过免疫荧光双标技术发现脊髓损伤后SynDIG1与GAP-43存在共表达.结论 脊髓损伤后中期神经元大量表达SynDIG1,激活了神经生长因子,促进神经元再生,有利于神经系统的修复.