HPV与头颈部肿瘤的关系

头颈部肿瘤是第六大常见的肿瘤,约占全部肿瘤的6%。早在1983年Syrianen就提出HPV参与头颈部肿瘤的形成。近二十多年来,人们更加认识到了头颈肿瘤尤其是头颈部鳞状细胞癌与HPV的关系,本文就HPV与头颈部肿瘤的关系作一综述。     

HPV与头颈部肿瘤的关系

头颈部肿瘤是第六大常见的肿瘤,约占全部肿瘤的6%。早在1983年Syrianen就提出HPV参与头颈部肿瘤的形成。近二十多年来,人们更加认识到了头颈肿瘤尤其是头颈部鳞状细胞癌与HPV的关系,本文就HPV与头颈部肿瘤的关系作一综述。     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因突变分析

背景与目的：高危型人乳头状瘤病毒16和18(human papillomavirus type16 and 18,HPV16,HPV18)是宫颈癌主要病因之一,尤其以HPV16最为常见,其中HPV16E6是主要癌基因之一。在一些地区,特定的E6基因突变株是宫颈癌发生的危险因素。新疆南部维吾尔族聚居区足宫颈癌高发区,我们已在前期的研究中发现该地区HPV16E6基因发生突变。本研究旨在检测该突变在新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌组织中的分布规律,并探讨其与该地区宫颈癌高发的关系。方法：从35例中国新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌活检标本中提取组织DNA作为模板,PCR扩增HPV16E6全长基因,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16E6基因的突变。结果：PCR检测结果表明宫颈癌组织中HPV16E6阳性率为82．86％(29／35);26例中E6分离片段的测序和序列分析表明,15例(57．69％)分离株E6基因与原型相同,另有11例(42．31％)E6基因突变,其中9例(34．62％)分离株发生了L83V突变,2例(7．69％)分离株发生rL83V／D63E突变。结论：中国新疆南部地区HPV16E6基囚发生变异,其原型和变异型在该地区维吾尔族宫颈癌患者巾的分布规律可能与该地区宫颈癌高发存在一定关系。     

基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗对Hela细胞的杀伤作用研究

目的：构建基于人乳头状瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）16型的肿瘤疫苗，并检测其对Hela肿瘤细胞的杀伤活性。方法：利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白，在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP和白喉毒素（Diphtheriatoxin，DT）A链（DT—A）的双表达质粒，形成伪病毒疫苗。透射电镜观察病毒样颗粒（virus-likeparticle，VIJP）的结构，并转染Hela肿瘤细胞，荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率和对Hela肿瘤细胞的杀伤能力。结果：透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP，在转染Hela肿瘤细胞后，荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达和对Hela肿瘤细胞的杀伤作用。结论：基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗能成功转染Hela肿瘤细胞并产生杀伤活性，为肿瘤的基因治疗提供了依据。     

FHIT基因在肺癌中的缺失与HPV感染的研究

目的　探讨肺癌发生的分子生物学机制。方法　采用逆转录 -巢式聚合酶链反应 (reverse tapepolymerasechainreaction)的方法对 42例肺癌及 10例正常肺组织中的FHIT(Fragilehistidinetriad)基因的缺失情况进行检测 ,并用PCR技术检测了肺癌组织中人乳头状瘤病毒 (humanpapillomavirus ,HPV)的DNA片段。 结果　 66.7% (2 8/4 2 )肺癌组织中检测到FHIT基因的缺失 ,而正常组织中未检测到FHIT基因的缺失 ,二者差别有显著意义 (P <0 .0 1)。 42例肺癌组织中有 8例检测到HPV的片段 ,阳性率为 19% (8/4 2 ) ,正常组织中未检测到HPV的片段 ,且在 8例HPV阳性的标本中均有FHIT基因缺失。结论　 (1)FHIT基因的缺失在肺癌的发生中起一定的作用。 (2 )FHIT基因的缺失与肺癌的不同病理分型、分化程度、临床分期无关。与吸烟有一定的相关性。 (3 )HPV的感染与肺癌的发生有一定关系 ,且与FHIT基因缺失有正相关关系。     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16型E6基因变异分析

目的:新疆维吾尔族妇女宫颈癌的发生主要与人乳头状瘤病毒16(HPV16)感染相关,特定的HPV16 E6突变株具有更高的致癌危险性.本研究通过检测维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16 E6基因突变情况,探讨其与维吾尔族妇女宫颈癌高发的关系.方法:从140例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡包埋组织中提取DNA作为模板,PCR 扩增HPV16 E6 全长基因,PCR 产物直接测序,进行突变分析.结果:本组维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16的阳性率是73.6%(103/140),91例E6基因测序及分析结果表明,维吾尔族妇女宫颈癌组织中存在HPV16 E6变异株,其中49例(53.8%)分离株发生L83V突变,4例(4.39%)发生D25E突变,2例(2.20%)发生D64E/L83V突变,36例(39.6%)与野生型相同.结论:新疆维吾尔族妇女宫颈癌患者HPV16 E6基因发生变异,主要以L83V突变为主,HPV16变异株在维吾尔族妇女宫颈癌患者中的分布可能与维吾尔族妇女宫颈癌高发存在一定关系.     

肿瘤基因治疗转导载体聚乙烯亚胺

基因治疗的关键之一是载体,聚乙烯亚胺(PEI)是重要的肿瘤基因治疗转导载体,在非病毒载体的研究中有重要的地位。聚乙烯亚胺有较强的结合DNA和黏附细胞的能力,具有较高的转导效率。尽管在体外聚乙烯亚胺转染真核细胞取得了很大的进步,但应用于体内基因转导仍然面临着如解剖大小的限制等一系列障碍。     

肿瘤基因治疗转导载体聚乙烯亚胺

基因治疗的关键之一是载体,聚乙烯亚胺（PEI）是重要的肿瘤基因治疗转导载体,在非病毒载体的研究中有重要的地位。聚乙烯亚胺有较强的结合DNA和黏附细胞的能力,具有较高的转导效率。尽管在体外聚乙烯亚胺转染真核细胞取得了很大的进步,但应用于体内基因转导仍然面临着如解剖大小的限制等一系列障碍。     

HPV16感染及其E7蛋白表达与宫颈癌关系的研究

目的：探讨人砂状瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）及其Ｅ７蛋白表达与宫颈癌的关系。方法：运用ＰＣＲ技术探查６７例宫颈中ＨＰＶ１６感染率,并运用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＰＶ１６感染吕颈癌中Ｅ７蛋白表达情况。结果：ＨＰＶ１６在宫颈癌中的检出率为５０．７５％（３４／６７）,ＨＰＶ１６感染与宫颈癌临床分期和病理组织分级无关（Ｐ〉０．０５）,在ＨＰＶ１６感染的宫颈癌中,其Ｅ７蛋白阳民生表达率为８５．３０％（２９／３４     

HPV与宫颈癌

人乳头瘤病毒(HPV)的感染已被证实与宫颈癌的发生有密切关系.超过2/3的宫颈癌与HPV16或HPV18感染有关.HPV预防性疫苗研制的成功则是子宫颈癌预防研究的里程碑.     

人NIT1基因原核表达载体的构建和鉴定

背景与目的目前已知FHIT基因为抑癌基因，其结构和功能的异常与肺癌的发生、发展有密切关系，而且可能与NIT1基因存在功能上的相关性。但是．FHIT基因与NIT1基因调控肺癌发生发展的分子机制尚未明了。本研究旨在构建人NIT1基因原核表达载体．为进一步研究人肺癌细胞株中NIT1基因和FHIT基因的关系打下基础。方法应用RT—PCR法获得NIT1基因cDNA．定向克隆到融合表达载体pET-32a中．作双酶切和测序鉴定。结果①克隆的cDNA片断包含了人NIT1基因翻译区的全部序列，翻译区序列与GenBank登录的人NIT1 cDNA序列完全一致。②对构建的原核表达载体做双酶切．获得了预期的目的条带。结论通过RT—PCR和定向克隆的方法．成功构建了人NIT1基因的原核表达载体，为研究人NIT1蛋白的表达和进一步研究人肺癌细胞中NIT1基因和抑癌基因FHIT的关系奠定了基础。     

CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF RETROVIRAL VECTOR EXPRESSING HUMAN INTERLEUKIN-17 GENE

ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＡＮＤＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＲＥＴＲＯＶＩＲＡＬＶＥＣＴＯＲＥＸＰＲＥＳＳＩＮＧＨＵＭＡＮＩＮＴＥＲＬＥＵＫＩＮ１７ＧＥＮＥＣａｏＸｕｅｔａｏ曹雪涛ＨｕａｎｇＸｉｎ黄欣ＷａｎＴａｏ万涛ＺｈａｏＺｈｏｎｇｌｉａ...     

EB病毒BHRF1基因慢病毒载体的构建及功能鉴定

目的:构建并制备能够有效表达EB病毒BHRF1基因的重组慢病毒载体,观察BHRF1表达对人胚肺成纤维细胞(KMB17)凋亡的影响。方法:采用RT-PCR法,从B95-8细胞扩增EBV BHRF1基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒。将纯化后的重组慢病毒直接感染293T和KMB17细胞,荧光显微镜、实时定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测BHRF1在细胞中的表达水平。流式细胞仪检测BHRF1表达对凋亡诱导剂或无血清培养诱发KMB17细胞凋亡的影响。结果:重组慢病毒介导BHRF1在293T和KMB17细胞内获得表达,能有效地抑制KMB17细胞的凋亡。结论:成功构建了表达BHRF1基因的重组慢病毒载体。     

结直肠癌HPV16型感染和Ag-NOR的关系及预后价值

目的 探讨结直肠癌HPV16型感染和Ag-NOR的关系及预后价值.方法 应用多聚酶链反应(PCR)和Southern blot检测50例结直肠癌HPV16型DNA序列和应用胶质银染技术检测其核仁组成区嗜银蛋白(Ag-NOR),并结合临床随访和病理学资料评估其相互关系和预后价值.结果 结直肠癌组Ag-NOR平均计数(8.10±2.58)明显高于正常结直肠粘膜组(1.69±0.23);结直肠癌不同病理分期或分化程度比较,Ag-NOR计数差异均有显著性(P＜0.05);Ag-NOR计数≥8与＜8的结直肠癌患者Kaplan-Meier生存曲线比较,差异有显著性(P＜0.001).结直肠癌HPV16型DNA阳性者Ag-NOR计数(10.27士2.08)明显高于HPV16型DNA阴性者(6.49±1.54)(P＜0.05).两者5年生存率分别为14.3%和53.9%,差异有显著性(P＜0.05);两者Kaplan-Meier生存曲线比较,差异有显著性(P＜0.001).结论 Ag-NOR计数和HPV16型DNA可作为评价结直肠癌预后的参考指标.     

Indole-3-carbinol prevents cervical cancer in human papilloma virus type 16 (HPV16) transgenic mice.

Mice that express transgenes for human papillomavirus type 16 under a keratin 14 promoter (K14-HPV16 mice) develop cervical cancer when they are given 17beta-estradiol chronically. We asked whether the antiestrogenic phytochemical indole-3-carbinol (I3C), found in cruciferous vegetables, administered at physiological doses, would prevent the cervical-vaginal cancer that is promoted in these mice by high doses of estrogen. We compared mice that were fed a control diet with those that were fed a diet supplemented with 2000 ppm I3C. In the group fed the control diet, at a dose of estradiol of 0.125 mg per 60-day release, 19 of 25 transgenic mice developed cervical-vaginal cancer within 6 months, and the remainder had dysplasia. Only 2 mice of 24 in the group fed the I3C supplemented diet developed cancer, and the remainder had dysplasia or hyperplasia. I3C reduced dysplasia in the nontransgenic mice. Similar results were obtained at a higher dose of estradiol (0.250 mg per 60-day release), and I3C helped to prevent morbidity associated with retention of fluid in the bladder that frequently occurred with the higher estradiol dose. Additionally, I3C appeared to reduce skin cancer in transgenic mice. These data indicate that I3C is a useful preventive for cervical-vaginal cancer and, possibly, other cancers with a papillomavirus component.     

ILK基因RNAi慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:进一步研究整合素连接激酶(ILK)的功能,构建ILK基因RNAi慢病毒载体,并对其在肺腺癌A549细胞株中干扰效率进行鉴定.方法:针对ILK基因RNAi有效靶序列,合成4对oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切的质粒pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,用shILKi-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293 T细胞,包装产生慢病毒,以293 T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度.获得重组慢病毒后感染人肺癌A549细胞,荧光显微镜观察GFP及Real-time PCR检测ILK在A549细胞中的表达.结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了ILK-shRNA慢病毒载体shILKi-LV.包装并浓缩慢病毒,滴度分别为6×108、6×108、5×108和4×108 pfu/mL;将病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察80％细胞表达绿色荧光,Real-time PCR检测ILK mRNA表达明显下降,其中染shILKFKD-1的A549细胞中ILK2-△△Ct值为0.058,shILKi-KD-2、3和4的ILK2-△△Ct值分别为0.162、0.072和0.119,尤以ILKsiRNA-1抑制最明显.结论:成功构建shILKi-LV病毒载体并建立了A549-shILKi细胞模型,为ILK在肺癌信号转导通路中的研究提供了工作基础.     

人ＳＴＡＴ３基因ｓｉＲＮＡ真核表达质粒的构建及鉴定

目的：构建针对人ＳＴＡＴ３基因的ｓｉＲＮＡ真核表达质粒,检测其在细胞水平对ＳＴＡＴ３基因表达的抑制效果。方法：用ＤＮＡ重组技术将针对人ＳＴＡＴ３基因ｍＲＮＡ序列不同位点设计的３个ｓｉＲＮＡ序列克隆到真核表达质粒ｐＲＮＡＴ-Ｕ６.１／ｎｅｏ中构建重组体ｐＲＮＡＴ-Ｕ６.１-ｓｉＲＮＡ,重组质粒经ＰＣＲ检测及测序分析,用脂质体转染重组质粒至人食管癌Ｅｃａ-１０９细胞,Ｇ４１８筛选获得阳性克隆,ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＳＴＡＴ３基因ｍＲＮＡ和蛋白的表达,筛选最佳沉默效率的ｓｉＲＮＡ。结果：ＰＣＲ检测及测序分析结果均提示重组质粒构建正确。ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证实ｐＲＮＡＴ-Ｕ６.１-ｓｉＲＮＡ３具有最佳的沉默效率。结论：成功构建人ＳＴＡＴ３基因ｓｉＲＮＡ真核表达质粒,并证实其能够从ｍＲＮＡ和蛋白水平抑制ＳＴＡＴ３基因的表达。     

人乳头状瘤病毒18型阳性肿瘤疫苗的构建及体外活性鉴定

目的: 制备人乳头状瘤病毒（human papilloma virus, HPV）18型阳性的肿瘤疫苗，并观察其体外活性。方法:利用昆虫杆状病毒(简称Bac to Bac)表达系统，将HPV18L1基因重组入穿梭质粒pFastBacHtb，构建HPV18 L1Htb，通过转座反应,将目的基因片段重组入杆状病毒基因     

Survivin靶向microRNA表达载体的构建和鉴定

目的：设计并构建Survivin靶向的microRNA表达载体，观察其对Survivin基因的抑制作用。方法：以Survivin为靶基因，根据pPRIME载体要求，设计针对Survivin的microRNA序列，PCR扩增获得目的片段并克隆到载体中，序列正确的载体脂质体转染Hela细胞，RT—PCR和Western blotting检测其对Survivin的抑制作用。结果：用Xho I和EcoR I双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确，后者在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制Hela细胞中Survivin的表达。结论：Survivin靶向microRNA表达载体构建成功，并能抑制靶基因的表达，为其在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。