银杏叶总黄酮通过抑制c-Met介导的上皮-间充质转化对人肺癌细胞迁移和侵袭的影响

摘要：目的:探讨银杏叶总黄酮通过抑制肝细胞生长因子受体（c-Met）介导的上皮-间充质转化对人肺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:体外培养A549细胞进行实验,采用细胞计数试剂盒8 （CCK-8）法确定银杏叶总黄酮对A549细胞的半数抑制浓度,对照组加入无血清RPMI-1640培养基,银杏叶总黄酮低、中、高剂量组加入终浓度为50,100,200μg·ml-1的银杏叶总黄酮,顺铂组给予终浓度为5μg·ml-1的顺铂,继续培养24 h后检测细胞迁移和侵袭能力,同时检测A549细胞内肝细胞生长因子（HGF）、c-Met、磷酸化c-Met（p-c-Met）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和抗波形蛋白（Vimentin）表达水平。结果:随着银杏叶总黄酮浓度增加,A549细胞增殖率降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。当银杏叶总黄酮浓度为200μg·ml-1时,抑制率为52.45%,故选200μg·ml-1作为半数抑制浓度;各剂量组A549细胞内c-Met水平变化不显著,差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组相比,各银杏叶总黄酮组和顺铂组A549细胞迁移能力、细胞侵袭数、HGF、p-c-Met、Vimentin水平降低,E-cadherin水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）,各银杏叶总黄酮组之间呈剂量依赖性,但效果不如顺铂组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:银杏叶总黄酮通过下调c-Met信号,有效抑制A549细胞的上皮-间充质转化,从而发挥抗迁移和侵袭作用,该发现可能为肺癌的治疗提供新的思路。     

整合素αvβ3抑制剂Cyclo-RGDfK对纤连蛋白诱导乳腺上皮细胞间质转化的影响

目的本研究探讨整合素αvβ3抑制剂(Cyclo-RGDfK)对纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A上皮间质转化的影响。方法体外传代培养MCF-10A细胞,采用FN诱导建立上皮间质转化(EMT)模型。Western blot实验检测αv integrin、β3 integrin、上皮标志物E-cadherin和间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达;划痕修复实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 Western blot结果显示FN作用48 h后可明显增强αv integrin、β3 integrin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,在给予Cyclo-RGDfK作用后,FN诱导的N-cadherin和Vimentin表达上调和E-cadherin表达下调被明显逆转;划痕修复实验和Transwell小室实验结果表明,FN能显著增强MCF-10A细胞迁移和侵袭能力,Cyclo-RGDfK能显著抑制FN的诱导作用。结论 Cyclo-RGDfK能抑制FN诱导乳腺上皮细胞MCF-10A的EMT过程,降低细胞的侵袭和迁移能力,其可能是治疗乳腺癌转移的潜在药物。     

木樨草素通过抑制miR-142-3p降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞损伤

摘要：目的:探讨木樨草素对脂多糖（LPS）诱导的肺泡巨噬细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法:采用1 mg·L-1的LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NR8383建立细胞损伤模型,并用不同剂量(0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4μg·ml-1)的木樨草素处理NR8383细胞。实验分为对照组、LPS组(1 mg·L-1)、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素低、中、高剂量组(0.1,0.3,0.9μg·ml-1)、LPS(1 mg·L-1)+anti-miR-NC组、LPS(1 mg·L-1)+miR-142-3p inhibor组、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素(0.9μg·ml-1)+miR-142-3p mimic组;采用MTT法检测木樨草素对NR8383细胞存活率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的水平;qRT-PCR法检测miR-142-3p的表达量;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3蛋白表达量。结果:随着木樨草素浓度的升高,LPS组细胞存活率升高,而对照组细胞存活率无明显变化;与对照组比较,LPS组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+木樨草素低、中、高剂量组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）;与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+miR-142-3p inhibor组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）;与LPS+木樨草素组比较,LPS+木樨草素+miR-142-3p mimic组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）。结论:木樨草素通过抑制miR-142-3p表达可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡,改善炎症反应。     

秦皮乙素经p70S6K/4E-BP1信号通路抑制人结肠癌细胞增殖和迁移的作用机制研究

摘要：目的:探讨秦皮乙素经核糖体蛋白S6激酶/4E结合蛋白-1（p70S6K/4E-BP1）信号通路抑制人结肠癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法:设HCT116细胞组、氟尿嘧啶组(20μg·ml-1)、秦皮乙素低(40μg·ml-1)、高(80μg·ml-1)剂量组,置于CO2培养箱（37℃、5%CO2、2%O2、93%N2）。以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,Transwell Chamber测定迁移水平,RT-PCR法及WEST-BLOT法测定细胞p70S6K、4E-BP1mRNA与蛋白表达水平。结果:氟尿嘧啶组、秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4E-BP1 mRNA和蛋白水平显著低于HCT116细胞组,细胞凋亡率显著高于HCT116细胞组（P<0.05）。秦皮乙素低、高剂量组存活率、穿膜数、P70S6K、4EBP1 mRNA和蛋白水平显著高于氟尿嘧啶组,细胞凋亡率显著低于氟尿嘧啶组（P<0.05）。秦皮乙素低、高剂量组间各指标差异有统计学意义（P<0.05）。结论:秦皮乙素能抑制结肠癌HCT116细胞增殖、迁移,诱导HCT116细胞凋亡,其机制与秦皮乙素抑制p70S6K、4E-BP1mRNA和蛋白表达有关。     

红花黄色素通过活性氧影响TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞生物学特性的机制学研究

摘要：目的:探讨红花黄色素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用噻唑蓝法检测不同浓度(0.15,0.25,0.50,1.00 mg·L-1)红花黄色素对SKOV-3细胞增殖活力的影响,并根据红花黄色素抑制作用结果将SKOV-3细胞分为对照组、红花黄色素组(0.25 mg·L-1)、TGF-β1组(10 ng·ml-1)和红花黄色素+TGF-β1组(0.25 mg·L-1+10 ng·ml-1),采用噻唑蓝法、Transwell小室实验和划痕实验分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,免疫印迹法检测各组细胞中E-钙黏素、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,活性氧检测试剂盒检测各组细胞内活性氧水平。结果:红花黄色素可呈浓度依赖性抑制SKVO3细胞增殖。与对照组相比,10 ng·ml-1TGF-β1处理后SKVO3细胞增殖、侵袭、迁移能力和细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平以及细胞内活性氧水平明显增强（P<0.05）,且细胞中E-钙黏素蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;而0.25 mg·L-1红花黄色素处理后SKVO3细胞则与TGF-β1处理后的结果相反（P<0.05）;与TGF-β1组相比,红花黄色素联合TGF-β1可明显降低TGF-β1对SKVO3细胞的影响（P<0.05）。结论:红花黄色素可抑制TGF-β1诱导的卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制细胞内活性氧水平,减弱其介导的上皮间质转化有关。     

使君子醇提物下调TPT1-AS1抑制肝癌细胞增殖、侵袭迁移

摘要：目的:考察使君子醇提物是否通过下调长链非编码RNA（lnc RNA） TPT1-AS1来抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。方法:采用噻唑蓝（MTT）法检测使君子醇提物(10,50,100μg·ml-1)作用于肝癌HCC9204细胞的存活率,Transwell评估HCC9204细胞侵袭迁移,实时荧光定量PCR测定HCC9204细胞中TPT1-AS1表达,免疫印迹实验（Western blot）分析细胞核相关抗原Ki-67（Ki-67）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白的表达。在HCC9204细胞中转染TPT1-AS1小干扰RNA si-TPT1-AS1,或转染TPT1-AS1过表达质粒pc DNA-TPT1-AS1并使用100μg·ml-1使君子醇提物处理,评价其对细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。结果:50和100μg·ml-1使君子醇提物显著减少HCC9204细胞的存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数、TPT1-AS1表达水平、Ki67、N-cadherin的蛋白表达水平,显著增加E-cadherin的蛋白表达水平（P<0.05）。敲减TPT1-AS1显著降低HCC9204细胞的存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67、N-cadherin的蛋白表达水平,显著提高Ecadherin的蛋白表达水平（P<0.05）。TPT1-AS1过表达逆转了使君子醇提物抑制HCC9204细胞存活、侵袭、迁移、Ki67、N-cadherin蛋白表达的作用,并逆转了其促进HCC9204细胞E-cadherin蛋白表达的作用。结论:使君子醇提物通过下调TPT1-AS1的表达,抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

漏芦乙醇提取物抑制E2F1的表达调控甲状腺癌细胞的生物行为

摘要：目的:研究漏芦乙醇提取物调控E2F1的表达对甲状腺癌细胞活性、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法:采用50,100,150μg·ml-1浓度的漏芦提取物处理甲状腺癌细胞SW579,噻唑蓝（MTT）和细胞克隆实验检测细胞活性与克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法（Western blot）检测P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、转录因子E2F1蛋白表达,实时荧光定量PCR（q PCR）检测E2F1 mRNA表达。在SW579细胞中转染pc DNA3.1-E2F1,并使用漏芦提取物处理,观察过表达E2F1对漏芦提取物作用的细胞活性、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果:与对照组(0μg·ml-1)相比,50,100,150μg·ml-1的漏芦提取物明显减少细胞SW579的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量、E2F1 mRNA、E2F1蛋白表达量,明显提高细胞SW579的凋亡率、P21、caspase-3、E-cadherin蛋白水平（P<0.01）,均呈浓度依赖性。过表达E2F1显著增加漏芦提取物作用的细胞SW579的E2F1表达量、细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量,明显降低细胞凋亡率、P21、caspase-3、E-cadherin蛋白水平（P<0.01）。结论:漏芦乙醇提取物通过下调E2F1的表达,抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

UPLC法同时测定六味能消不同剂型中10种结合和游离蒽醌含量

摘要：目的:建立同时测定六味能消丸（胶囊、片）中5种结合蒽醌和5种游离蒽醌的方法。方法:色谱柱:Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18（3.0 mm×100 mm, 1.8μm）;流动相:甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱;流速:0.3 ml·min-1;柱温:25℃;检测波长:254 nm。结果:大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷分别在0.60～100.60μg·ml-1、0.56～162.40μg·ml-1、0.25～80.01μg·ml-1、0.19～148.80μg·ml-1、0.23～92.77μg·ml-1、0.50～90.96μg·ml-1、0.28～150.67μg·ml-1、0.32～101.93μg·ml-1、0.55～64.49μg·ml-1、0.34～134.22μg·ml-1内线性关系良好;各成分回收率在88.5%～108.66%之间,RSD均小于3%（n=6）。结论:所建方法准确可靠,可以为考察六味能消丸（胶囊、片）质量和工艺参数提供依据。     

冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及miR-16-5p/WEE1信号轴的影响

摘要：目的:探讨冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及微小RNA-16-5p（miR-16-5p）/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（WEE1）信号轴的影响。方法:设A549细胞组、放疗组(6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h)、冬凌草乙素组(20 mg·L-1)、放疗+冬凌草乙素组(冬凌草乙素浓度为20 mg·L-1,并以6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h);培养结束后,CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法测定细胞miR-16-5p、WEE1 mRNA和蛋白水平。结果:与A549细胞组比较,放疗组、冬凌草乙素组、放疗+冬凌草乙素组光密度（OD）值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）;与放疗组、冬凌草乙素组比较,放疗+冬凌草乙素组OD值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）。结论:冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡具有协同作用,其机制可能与冬凌草乙素促进miR-16-5p的表达进而抑制WEE1表达有关。     

蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响及机制研究

摘要：目的:探讨蛇床子素对人肝癌Huh7细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并初步探究其作用机制。方法:采用不同浓度(0,2.5,5,10,20,40μg·ml-1)的蛇床子素干预人肝癌Huh7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50);10μg·ml-1蛇床子素联合不同照射剂量（0,2,4,6,8 Gy）的X射线处理Huh7细胞,MTT检测细胞增殖能力,筛选照射剂量;克隆形成实验检测Huh7细胞放射敏感性变化,分别采用10μg·ml-1蛇床子素、4 GyX射线照射及两者联合干预Huh7细胞,流式细胞术检测Huh7细胞凋亡率,Western Blot检测Huh7细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved caspase-9）的表达水平。结果:蛇床子素对肝癌Huh7细胞增殖有明显抑制作用,IC50为20.14μg·ml-1;与单纯照射组相比,蛇床子素联合不同剂量X射线照射下均能够明显抑制细胞存活率,筛选出4 Gy剂量用于后续放射实验。与单纯照射组相比,蛇床子素联合照射组Huh7细胞的放射敏感性、Huh7细胞凋亡率、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论:蛇床子素能够抑制肝癌Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强细胞对放射的敏感性,其作用机制可能与蛇床子素上调cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达有关。     

夏枯草水提液对甲状腺功能减退大鼠认知功能及PGC-1α/FNDC5/BDNF通路的影响

摘要：目的:探讨血府逐瘀胶囊对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外分离、培养、鉴定输卵管绒毛滋养细胞,分为空白对照组、血府逐瘀胶囊低、中、高(10,30,100μg·ml-1)剂量组、甲氨蝶呤组(0.08 ng·L-1)。采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测侵袭、迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）及Notch通路相关蛋白Notch1、Jagged1、Hey1表达情况。结果:与空白对照组同时间点比较,24和48 h时血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.05）;与同组不同时间点比较,随着培养时间的延长,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.05）。与空白对照组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组绒毛滋养细胞迁移率、侵袭细胞数、MMP-9、N-Cadherin、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达均显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.05）,均呈剂量依赖性（P<0.05）。结论:血府逐瘀胶囊能抑制绒毛滋养细胞增殖、侵袭及迁移,进而治疗异位妊娠,机制可能与抑制Notch信号通路活化有关。     

3种炮制方法对川楝子中6种成分变化的影响考察

摘要：目的:考察不同炮制方法对川楝子中6种成分含量变化的影响。方法:应用HPLC多波长切换梯度洗脱技术,分别测定生品和不同方法（清炒、盐制、醋制）炮制后的川楝子中有效成分含量。色谱柱:Waters Sunfire ODS C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:254 nm（检测芦丁、异槲皮苷和槲皮素）、210 nm（检测川楝素和异川楝素）、322 nm（检测阿魏酸）;柱温:30℃;进样量:10μl。结果:槲皮素、川楝素、异川楝素、芦丁、阿魏酸和异槲皮苷分别在0.51～10.28μg·ml-1、9.02～180.30μg·ml-1、1.55～30.90μg·ml-1、1.31～26.14μg·ml-1、0.52～10.32μg·ml-1和2.49～49.74μg·ml-1范围内线性关系良好（r≥0.999 5）;平均回收率为98.5%～100.5%,RSD为1.04%～1.57%（n=6）。炮制品中川楝素和异川楝素含量较生品明显降低,阿魏酸、槲皮素、异槲皮苷无明显变化。结论:川楝子在3种炮制方法下6种成分含量存在差异,这些差异是否与疗效和毒性相关还有待进一步探讨。     

芹菜素对人肺癌H1975细胞增殖、凋亡、转移及IGF-1R/Akt信号通路的影响

摘要：目的:探讨芹菜素对人肺癌H1975细胞增殖、凋亡和转移及胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法:设H1975细胞组、氟尿嘧啶组(100μg·ml-1)、芹菜素低(100μg·ml-1)、高(200μg·ml-1)剂量组,以上各组每孔设6个平行样,培养72h。MTT法、结晶紫染色测定细胞增殖、克隆形成数目,Transwell细胞培养室评估细胞迁移,流式细胞仪测定凋亡水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法及蛋白免疫印迹（WEST-BLOT）法检测IGF-1R、Akt基因和蛋白表达水平。结果:与H1975细胞组比较,氟尿嘧啶组、芹菜素低、高剂量组的光密度（OD）值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、IGF-1R、Akt mRNA和蛋白降低,凋亡率升高（P<0.05）。与氟尿嘧啶组比较,芹菜素低剂量组的光密度（OD）值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、IGF-1R、Akt mRNA和蛋白升高,凋亡率降低（P<0.05）;芹菜素高剂量组OD值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、IGF-1R、Akt mRNA和蛋白降低,凋亡率升高（P<0.05）。与芹菜素低剂量组比较,芹菜素高剂量组的OD值、存活率、细胞克隆形成数目、穿膜数、IGF-1R、Akt mRNA和蛋白降低,凋亡率升高（P<0.05）。结论:芹菜素能明显抑制人肺癌H1975细胞增殖、凋亡和转移;其机制与芹菜素抑制IGF-1R、Akt mRNA和蛋白的表达,进而抑制了IGF-1R/Akt信号通路的激活有关。     

吉林产五味子酒制品HPLC指纹图谱研究及7个成分含量测定

摘要：目的:建立吉林产五味子酒制品HPLC指纹图谱,并对其所含的7个有效成分进行定量分析。方法:色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）;流动相:乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min-1;检测波长:254 nm。结果:15批酒五味子指纹图谱中共标定18个共有峰,与对照指纹图谱相似度均大于0.90。五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、原儿茶酸和5-羟甲基糠醛在1.42～70.88μg·ml-1（r=0.999 2）、0.39～19.29μg·ml-1（r=0.998 7）、0.42～21.09μg·ml-1（r=0.999 4）、1.14～56.97μg·ml-1（r=0.998 9）、0.57～28.72μg·ml-1（r=0.999 6）、0.31～15.33μg·ml-1（r=0.999 5）、0.97～48.33μg·ml-1（r=0.999 0）范围内线性关系良好;平均加样回收率（RSD）分别为101.6%（1.12%）,96.9%（1.03%）,101.0%（0.66%）,102.7%（1.01%）,103.7%（0.70%）,102.7%（1.21%）,104.2%（1.37%）（n=9）。结论:该研究建立了吉林产五味子酒制品的HPLC指纹图谱,及7个有效成分的含量分析方法,可为五味子的炮制提供参考。     

海莲叶提取物抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡★

目的 研究海莲叶提取物对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。方法 将非小细胞肺癌A549细胞分成Control组（0 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-L组（10 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-M组（20 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-H组（30 μg·mL^-1海莲叶提取物处理）、BSLE-M+Jagged1-Fc组（20 μg·mL^-1海莲叶提取物和Notch信号通路激活剂Jagged1-Fc处理）。采用MTT实验检测细胞增殖，平板克隆实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞凋亡变化，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、vimentin、E-cadherin、MMP-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达变化。结果 与Control组比较，BSLE-L、BSLE-M、BSLE-H组细胞存活率和克隆形成数目依次降低，细胞凋亡率依次升高，细胞侵袭数目、迁移数目依次降低，细胞中Bax、E-cadherin蛋白表达水平依次升高，vimentin、MMP-2、Bcl-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达水平依次降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。与BSLE-M组比较，BSLE-M+Jagged1-Fc组细胞存活率和克隆形成数目显著升高，细胞凋亡率显著降低，细胞迁移和侵袭数目显著升高，细胞中Bax、E-cadherin蛋白表达水平显著降低，Bcl-2、vimentin、MMP-2、Notch-1、NICD-1和Hes-1蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 海莲叶提取物可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移、上皮间质转化（EMT），诱导细胞凋亡，其作用机制与降低Notch信号通路激活水平有关。     

HPLC波长切换法同时测定心舒宁片中有效成分的含量

摘要：目的:建立HPLC波长切换法时测定心舒宁片中槲皮素、葛根素、山柰素、异鼠李素、毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1和冬青素A的含量。方法:采用Inertsil ODS-C18色谱柱（250 mm×4. 6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱,流速为1. 0 ml·min-1,进样量为10μl,柱温为25℃,检测波长为360 nm（槲皮素、山柰素、异鼠李素）、250 nm（葛根素）、210 nm（毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1、冬青素A）。结果:槲皮素、葛根素、山柰素、异鼠李素、毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1和冬青素A的线性范围分别为10. 406～208. 120μg·ml-1,15. 426～308. 520μg·ml-1,2. 358～47. 160μg·ml-1,5. 352～107. 040μg·ml-1,2. 688～53. 760μg·ml-1,6. 620～132. 400μg·ml-1,5. 784～115. 680μg·ml-1,21. 604～432. 080μg·ml-1（r≥0. 999 4）;平均加样回收率为98. 4%～101. 3%（RSD<2. 0%,n=6）;精密度、重复性、稳定性（24 h）试验的RSD<2. 0%（n=6）。结论:所建立的方法稳定、可靠,可用于心舒宁片的质量控制。     

基于HPLC和网络药理学分析经典名方辛夷清肺饮的质量标准研究

摘要：目的:基于HPLC法和网络药理学建立辛夷清肺饮（XQY）的质量标准。方法:采用HPLC建立XQY的指纹图谱,同时测定栀子苷、芒果苷、异阿魏酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸7个成分的含量;继以网络药理学筛选和分析7个定量成分治疗变应性鼻炎的作用靶点和通路,构建“成分-疾病-靶点-通路”网络,预测XQY发挥治疗变异性鼻炎（AR）的质量标志物（Q-Marker）及其作用机制。结果:15批XQY的HPLC指纹图谱相似度均＞0.99,栀子苷、芒果苷、异阿魏酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸的质量分数分别为138.69～224.58μg·ml-1、11.28～21.20μg·ml-1、3.26～5.62μg·ml-1、338.55～725.02μg·ml-1、48.59～90.27μg·ml-1、2.18～4.13μg·ml-1、9.26～18.23μg·ml-1。经网络药理学分析,7个定量成分可预选为XQY治疗AR的Q-Marker,其治疗AR的作用靶点共有115个,主要富集在细胞对生长因子刺激的反应、蛋白激酶结合、炎症反应等生物过程,以及核因子κB（NF-κB）信号通路、环磷鸟苷-蛋白激酶G（cGMP-PKG）信号通路、环磷酸腺苷（cAMP）信号通路等。结论:本研究所建立的整体质量控制方法和预选的Q-Marker具有代表性,可用于评价XQY的质量,同时可为其他经典名方以及中药复方的质量标准研究提供示范。     

HPLC-QAMS同时检测瘀血痹胶囊中10种成分含量

摘要：目的:建立高效液相一测多评法（HPLC-QAMS）同步检测瘀血痹胶囊中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、红花黄色素A、11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸和3-乙酰基-β-乳香酸含量的方法。方法:运用Comatex C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）,流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱。多波长切换检测（0～24 min检测波长为280 nm,检测迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B,24～34 min检测波长为403 nm,检测羟基红花黄色素A、红花黄色素A,34～65 min检测波长为210 nm,检测11-羰基-β-乳香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸、α-乳香酸、β-乳香酸和3-乙酰基-β-乳香酸）。以11-羰基-β-乙酰乳香酸为内参物,建立其他9种成分的相对校正因子（RCF）,并计算各成分含量。采用外标法（ESM）测定瘀血痹胶囊中10种成分含量对一测多评法计算结果的准确性进行验证。结果:测定了12批瘀血痹胶囊中上述成分的含量,10种成分分别在0.99～49.50μg·ml-1,1.16～58.00μg·ml-1,17.58～879.00μg·ml-1,2.39～119.50μg·ml-1,1.36～68.00μg·ml-1,3.65～182.50μg·ml-1,9.28～464.00μg·ml-1,1.77～88.50μg·ml-1,4.09～204.50μg·ml-1,4.78～239.00μg·ml-1（r=0.999 4）范围内有良好的线性关系。平均加样回收率及RSD分别为96.95%（1.08%）,98.30%（1.33%）,100.03%（0.82%）,98.84%（0.76%）,97.12%（1.27%）,99.50%（1.10%）,100.09%（0.65%）,98.05%（1.50%）,97.79%（1.17%）,99.23%（0.96%）（n=9）。一测多评法所测结果与外标法差异无统计学意义。结论:该方法可用于瘀血痹胶囊中10种成分含量的同步测定,达到多指标质量控制的目的。     

桂龙咳喘宁胶囊HPLC指纹图谱研究及7个活性成分的测定

摘要：目的:建立桂龙咳喘宁胶囊的指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价其质量提供依据。方法:采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为235 nm（芍药内酯苷、甘草苷、芍药苷）、275 nm（肉桂酸、甘草素、桂皮醛、甘草酸铵）,柱温为30℃。通过相似度对12批次桂龙咳喘宁胶囊指纹图谱进行质量评价,并对指认的7个指标成分进行定量测定研究。结果:12批桂龙咳喘宁胶囊指纹图谱标定了共有峰21个,通过与混合对照品比较指认了其中7个指标成分,利用相似度软件对12批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.99以上。芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、肉桂酸、甘草素、桂皮醛和甘草酸铵线性范围分别为2.020～40.400μg·ml-1（r=0.999 4）、62.024～1240.480μg·ml-1（r=0.999 8）、7.244～144.880μg·ml-1（r=0.998 6）、1.206～24.120μg·ml-1（r=0.999 2）、1.050～21.000μg·ml-1（r=0.998 6）、0.100～2.000μg·ml-1（r=0.999 0）、15.064～301.280μg·ml-1（r=0.999 8）。结论:所建立的方法灵敏度高,专属性强,可用于桂龙咳喘宁胶囊的质量控制。     

秦艽多糖通过调控STMN1表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨秦艽多糖是否可通过调控微管不稳定性蛋白1（STMN1）表达而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养肺癌细胞A549,随机分为对照组、秦艽多糖低、中、高浓度组(25,50,100μg·ml-1);采用甲基噻唑基四唑（MTT）与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭; pcDNA 3.1-STMN1转染至A549细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测STMN1、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67（Ki67）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量。结果:与对照组比较,秦艽多糖中、高浓度组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,且秦艽多糖各浓度组间的指标差异均有统计学意义（P<0.05）;与高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1组比较,高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1-STMN1组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:秦艽多糖可能通过下调STMN1的表达从而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。