通过HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体鉴定发现CD_8抗原有不同的表位

用间接免疫荧光法、免疫组化技术鉴定了HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体(单抗)对各种正常组织、细胞系和各种白血病患者细胞的反应性,证明其反应模式与CD8单抗相似。HIT_(8a)、HIT_(8b)识别的胸腺细胞上抗原分子量分别为 59和60KD(未还原),也与CD8近似。然而,竞争抑制试验显示,9个国际命名的 CD8单抗中只有5个可以完全抑制 HIT_(8a)、HIT_(8b)-FITC与靶细胞结合,4个无作用。证实HIT_(8a)和 HIT_(8b)是 CD8样抗体,识别同一抗原位点。但也揭示 CD8抗原有不同表位。本文对此进行了讨论。     

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６￣１．２×１０＾－３，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状     

细胞表面抗原单克隆抗体的筛选

本文采用固定细胞ELISN,间接免疫光和SPA花环三种方法同时检测抗白血病细胞表面抗原单克隆抗体.结果证明固定细胞ELISA法阳性率最高.SPA花环法较低,间接免疫荧光法是筛选细胞表面单抗的最好方法. 采用双抗体夹心法检测杂交瘤上悬液中免疫球蛋白分泌情况。结果提示双抗体夹心法阳性者用三种筛选方法证明可为阴性.提示这种抗体可能是非特异性抗体.不与细胞表面抗原反应。     

二株单克隆抗体识别人类由不同位点编码的类Ia抗原分子

用人的急性淋巴细胞白血病细胞株(Reh cell line)作免疫原,得到二株抗人的类Ia抗原单克隆抗体:H4和3A4。它们对带有类Ia 抗原的所有细胞都有补体依赖的细胞毒反应。二者免疫沉淀法试验结果也都表示它们识别的抗原是由分子量为 35 K和 28 K的 α链及β链组成。这和 Ia抗原一致。但在细胞毒滴度相同条件下,H4可明显抑制 MLC反应,而3A4无抑制作用,H4单克隆抗体的 F(ab’)_2 断片也对3A4的细胞毒无抑制作用。顺序免疫沉淀研究结果证明H4和3A4这二个单克隆抗体是和不同的抗原分子起反应,提示人类可能存在二种以上类Ia抗原,分别由不同的基因位点编码。从这二个单克隆抗体对 MLC抑制反应的不同,进一步推测 D和 DR基因可能也不相同。     

应用单克隆抗体分析甲状腺球蛋白的抗原性

应用自制的10种抗人甲状腺球蛋白(HTg)单克隆抗体(McAb)对HTg 进行抗原性分析。7种McAb同时结合人和狗的甲状腺球蛋白(Tg),3种 McAb仅结合 HTg。根据竞争结合抑制试验的结果,可将McAb 分成反应性不同的5个组,其中8种 McAb对2-ME 处理的HTg的结合力显著下降,2种 McAb对 SDS 解聚及热变性HTg的结合力下降。Graves′病,桥本氏甲状腺炎等抗HTg自身抗体可抑制6种McAb对HTg的结合。这些结果提示:1.HTg分子上至少存在着5个抗原区域,一些抗原决定簇决定着种属特异性,另一些可能为哺乳动物共有。2.抗HTg McAb可以识别依赖二硫键的抗原决定簇。3.与抗HTg自身抗体反应的一些抗原决定簇,可能分布在一定的抗原区域内。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

用单克隆抗体在体外进行抗原调变的研究

本实验观察了单克隆抗体55及79对人普通型急性淋巴母细胞性白血病抗原(CALLA)的特异性调变作用,以及抗体浓度、孵育温度及时间对调变作用的影响。此外,发现不仅非T、非B淋巴母细胞Nalm-1可发生CALLA调变,T细胞HPB-ALL,B细胞Daudi及正常人外周血多形核细胞表面CALLA也可发生调变。调变后的Nalm-1细胞对抗CALLA抗体依赖补体的细胞毒作用有明显抵抗力。本文对抗原调变的生物学意义也进行了讨论。     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化 IgM,经断链后获得(Fo)_5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgM McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的 McAb对人 IgM 呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA 中可达10~(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5、M_(12)、M_(23)、M_(25))的抗原结合力大小,表明M_(12)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析,证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该 16种McAb除 M_(22)为 IgA外,余均属 IgG1亚类。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的研制和初步应用

本文采用体细胞杂交瘤技术和酶联免疫吸附试验筛选技术,获得了6株持续分泌抗人甲状腺球蛋白 McAb 的杂交瘤细胞系。这6种 McAb 对人 T_3/T_4、及家兔、小牛、大鼠的甲状腺球蛋白均无交叉反应,但其中4种 McAb 对狗甲状腺球蛋白有不同程度的交叉反应,包括2种 McAb对人甲状腺微粒体也有交叉反应,余2种 McAb 均无交叉反应。将所得杂交瘤细胞接种 BALB/c鼠腹腔,获得高效价的腹水 McAb。本文还以这些 McAb 用免疫组化法,研究和检测病理甲状腺组织中甲状腺球蛋白的可能性进行了初步探索,并讨论了其临床意义。     

鼠抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

采用Ｊｕｒｋａｔ细胞Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备１株抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１,它能特异性识别Ｊｕｒｋａｔ,Ｒａｊｉ,ＴＨＰ－１细胞膜表面５０ＫＤ左右的蛋白,并能与ＳｒＦａｓ标准蛋白反应,其识别的细胞膜蛋白与单抗特异性抗人Ｆａｓ ＰｃＡｂＮ－１８相一致。ｌｅｑ     

人源抗HBsAg单克隆抗体组合文库的建立

应用固相抗原筛选法，建立了人抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体组合文库。以液相ＨＢｓＡｇ包被酶标板，对抗ＨＢｓＡｇ血清阳性供者文库经多次筛选，扩增，建立起针对ＨＢｓＡｇ的组合抗体子文库。     

结肠癌单克隆抗体的制备和鉴定

用1高碘酸处理结肠癌组织,然后免疫小鼠制备单克隆抗体.获得2株产生高效价、针对结肠癌抗原的抗体杂交瘤细胞株C_8和C_(102)。经免疫组织化学染色后知其抗原定位于结肠癌腺体的上皮细胞及其分秘物.由Immunoblotting知其抗原的分子量为20万道尔顿.初步研究表明,C_8和C_(102)是特异性较强的针对结肠癌的单克隆抗体(IgG2b).经高碘酸(或胰酶)处理证明,其相应抗原决定基部分是蛋白质而不是多糖.     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST SYNTHESIZED SHORT PEPTIDES CORRESPONDING TO HUMAN AA AMYLOID PROTEIN

Monoclonal antibodies (McAbs) were raised against the synthesized short peptides corresponding to37–47 residues in amino acid sequence of human AA protein. The McAbs reacted immunohistochemically to amyloid tissues from cow, mouse, swan, and human AA amyloidosis. We concluded that the McAbs were useful for identification of AA type amyloidosis of various species, and that the37–47 residues were effective antigenic sites in AA protein. ACTA PATHOL. JPN. 37:1135–1142, 1987.     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

分泌抗骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

用人体骨肉瘤细胞株HOS-8603脾内一次性免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞 NSO融合,经ELISA和 FIA筛选,获得2株分泌抗人体骨肉瘤单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(OS-MAb_1)和OS-MAb_2)。用ABC 免疫酶标法检测发现(OS-MAb_1)杂交瘤细胞所分泌的 McAb,除对人体骨肉瘤组织呈阳性反应外,对部分骨巨细胞瘤、软骨肉瘤和尤文氏肉瘤组织呈阳性反应,而对其它肿瘤组织和正常成人及胎儿组织呈阴性反应。同位素~(125)I标记该抗体,在荷人骨肉瘤裸鼠体内定位,发现72小时起到96小时肿瘤放射性影像清晰,放射性积聚高于其他部位。显示OS-MAb_1株所分泌的抗人体骨肉瘤McAb作为定位诊断和导向治疗载体的可能性。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

单克隆抗体斑点试验检测血吸虫卵抗原

靶抗原为血吸虫卵糖蛋白的单克隆抗体SM21-3标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中虫卵抗原。12份感染兔血清全部呈阳性反应;12份正常兔血清呈阴性反应。8份感染 10 0条及8份感染10条尾蚴的治疗前兔血清呈阳性反应;治疗后1月,血清抗原水平有不同程度下降;治疗后3月,部分血清转为阴性,其余几份均呈弱阳性反应。检测血吸虫病人血清80份,阳性66份,阳性率为82.5％;检测正常人血清60份,未见阳性反应。上述结果表明本方法具有较好的敏感性与特异性,而且方法简单易行,肉眼观察结果,适于现场应用。     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。     

一次细胞融合制备分泌抗狂犬病毒单抗杂交瘤及分泌抗独特型单抗杂交瘤的实验研究

根据独特型与抗独特型的免疫网络与免疫调节学说，利用狂犬病毒作为免疫原，设计了不同的动物免疫方案，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞经一次融合，同时获得了分泌抗狂犬病毒单克隆抗体杂交瘤及分泌狂犬病毒抗独特型单克隆抗体杂交瘤，为抗独特型抗体的制备开辟了一条简捷经济的途径。