因子设计-效应面法优化紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸纳米粒处方和制备工艺

目的:优化紫杉醇聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)纳米粒处方和制备工艺.方法:以PLGA为载体,采用溶剂扩散法制备紫杉醇PLGA纳米粒,用32满因子设计实验,考察因素PLGA在有机相中的浓度和理论载药量对纳米粒的粒径、载药量和包封率的影响,实验数据分别采用线性方程和二次多项式拟合,根据最佳数学模型绘制效应面并选出最优处方.结果:2个影响因素和3个评价指标之间存在定量关系,最优处方为:紫杉醇的理论载药量为9.09%、有机相中PLGA浓度为2%,制备得到的纳米粒粒径为281 nm,实际载药量为7.73%,包封率为57.43%.结论:采用因子设计-效应面法完成了紫杉醇纳米给药系统的多目标同步优化.     

人参皂苷Rg3 PLGA纳米粒的处方优化及制备工艺研究

目的为了提高人参皂苷Rg3的生物利用度和靶向性,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,研究人参皂苷Rg3 PLGA纳米粒的处方和制备工艺。方法采用纳米沉淀法制备纳米粒,HPLC测定人参皂苷Rg3的含量。以包封率为指标,采用单因素和正交试验法优选处方和工艺。结果人参皂苷Rg3 PLGA纳米粒的最佳处方和工艺条件为:PLGA浓度为10 mg·m L-1,人参皂苷Rg3浓度为3 mg·m L-1,有机相与水相体积比为1:3。制备的纳米粒平均粒径为186.1 nm,包封率为87.29%。结论该工艺方法简便、稳定可行,适用于人参皂苷Rg3 PLGA纳米粒的制备。     

改良自乳化-溶剂扩散法制备甲基莲心碱纳米粒的研究

目的制备甲基莲心碱纳米粒(NEF-NP),并采用正交试验设计对甲基莲心碱纳米粒制备工艺进行优化。方法以包封率和载药量为评价指标,采用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体,丙酮-无水乙醇为有机溶剂,通过正交设计优化改良自乳化-溶剂扩散法制备载NEF的PLGA载药纳米粒的处方工艺。结果优化的最佳处方工艺为:PLGA的浓度为20 mg.mL-1,NEF的投药量为3.3 mg,PVA浓度为1.0%,水相与有机相的体积比为8∶1。最佳条件下制得的纳米粒平均包封率达(70.35±1.16)%,载药量(2.33±1.08)%,平均粒径为(213.5±2.7)nm。结论最佳处方工艺制备的NEF-PLGA纳米粒具有较高的包封率、载药量和较小的粒径。     

盐酸维拉帕米PLGA纳米粒的成型工艺及制剂学性质研究

目的 优化影响盐酸维拉帕米乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒成型工艺的参数,并评价优化工艺后所制纳米粒的制剂学性质.方法 采用O/W超声乳化-溶剂挥发法制备盐酸维拉帕米PLGA纳米粒(VRP-PLGANP),以粒径、包封率和载药量为评价指标,采用单因素试验系统考察PLGA浓度、PLGA/VRP质量比、PVA浓度、有机相中丙酮浓度、外水相pH、内外相(O/W)体积比、探头超声时间、旋蒸时间共8个参数对纳米粒成型工艺的作用规律.结果 用优化处方工艺制备的纳米粒的包封率和载药量分别为65.78%±6.32%和22.75%±1.48%、平均粒径为150.4±6.9 nm、PDI=0.070±0.018(n=3),体外释放规律符合Weibull方程,具有一定的缓释特性.结论 所用方法可用于制备载两亲性药物的PLGA纳米粒.     

利福布汀-PLGA纳米粒的制备

目的:制备利福布汀(RB)-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒,并对制备工艺进行优化。方法:采用改良的自乳化溶剂挥发法制备;通过单因素法考察对包封率影响较大的因素,在此基础上以包封率为指标采用正交设计优化纳米粒的制备工艺并进行验证。结果:对纳米粒包封率影响较大的因素是RB与PLGA投药比、PLGA浓度、混合有机相中丙酮比例及油水相比;上述各因素的最佳水平分别是1:2、40mg·mL-1、70%、1:5。验证试验中所制纳米粒平均粒径为(201±19)nm、包封率为(59.1±5)%、载药量为(15.1±2.4)%。结论:本文的制备方法简单,所得纳米粒粒径小、质量稳定。     

紫杉醇PLGA纳米粒大鼠生物利用度的测定

目的制备紫杉醇PLGA纳米粒,以紫杉醇注射液为参比制剂,进行生物利用度考察。方法以乳化-溶剂挥发法制备紫杉醇纳米粒,用HPLC法测定全血中的药物浓度,计算紫杉醇纳米粒的生物利用度。结果紫杉醇纳米粒外观圆整,平均粒径为99.0nm,Zeta电位58.3mV,平均包封率为56.77%,载药量为7.10%。大鼠口服给药后,紫杉醇纳米粒的绝对生物利用度达到19.5%。结论纳米载药系统的制备有利于促进紫杉醇的吸收,提高了其口服生物利用度。     

沉淀法制备甲基莲心碱聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒

目的:制备甲基莲心碱聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒(Nef-PLGA-NPs)。方法:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体,丙酮为有机溶剂,通过正交试验设计优化沉淀法制备甲基莲心碱PLGA纳米粒的工艺。结果:最佳工艺条件为:PLGA的质量浓度为10 mg.mL-1,Nef的质量浓度为1.0 mg.mL-1,水相与有机相的体积比为20∶1。纳米粒平均包封率为(85.3±0.8)%,平均载药量为(7.75±0.07)%,平均粒径为(82.9±1.2)nm。结论:优化条件下采用沉淀法制备的甲基莲心碱PLGA纳米粒包封率高、载药量大,平均粒径小。     

芍药苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒制备工艺的优化及对心肌细胞的保护作用

目的:优化芍药苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒制备工艺,并探讨芍药苷PLGA纳米粒对H₂O₂诱导损伤的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:首先使用复乳-溶剂挥发法制备芍药苷PLGA纳米粒,采用Plackett-Burman设计实验以及Box-Behnken响应面设计实验对其制备工艺进行优选,得出最佳处方,并对按最佳处方制备的芍药苷PLGA纳米粒进行表征分析、4℃储藏稳定性考察以及体外释放考察;最后通过H₂O₂诱导建立大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤模型,考察芍药苷PLGA纳米粒对心肌细胞的保护作用,CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果:最佳处方：泊洛沙姆浓度为0.4%,给药量为3.1 mg, PLGA为21.4 mg;所得芍药苷PLGA纳米粒包封率为(45.49±0.29)%,载药量为(4.52±0.05)%,粒径为(115.1±3.61) nm,多分散系数(polydiseperse index, PD...     

紫杉醇聚丙交酯乙交酯共聚物纳米粒的制备与体外评价

目的采用聚丙交酯乙交酯共聚物（PLGA）载体制备紫杉醇（TAX）纳米粒,并进行体外评价。方法采用改良的溶剂扩散法制备TAX PLGA共聚物纳米粒,考察不同乳化剂类型和各工艺因素对纳米粒粒径的影响,通过动态激光粒度分析仪、透射电子显微镜（TEM）、扫描电子显微镜（SEM）、差示扫描量热法（DSC）及X线粉末衍射（XRD）初步研究其载药性质,并研究纳米粒冻干粉的体外释放特性。结果优选出制备工艺为：双十二烷基二甲基溴化铵（DMAB）作为乳化剂,浓度为1%（W/V）,聚合物浓度为1%（W/V）,水相与有机相的体积比例为20：10,均质机转速为16 000 r•min 1,药物浓度为0.1%（W/V）。所得纳米粒外观圆整,平均粒径为99.0 nm,Zeta电位58.3 mV,包封率为56.77%,载药量率为7.10%。TAX纳米粒具有缓释性,体外释放分为两相。DSC及XRD表明TAX被有效地包裹在纳米粒中。结论PLGA纳米粒可成为TAX的新型载体。     

胰岛素肠溶PLGA纳米粒的制备及体内外性质的评价

目的制备肠溶胰岛素PLGA纳米粒,并对其理化性质、体外释药以及在正常大鼠体内的降血糖效果进行研究。方法采用改良的乳化溶剂扩散法分别制备了胰岛素PLGA纳米粒和肠溶胰岛素纳米粒(PLGA HP55 NP、PLGA HP50 NP)。通过激光粒度测定仪测定粒径大小,系统考察了肠溶材料HP55的用量及类型对纳米粒性质的影响,以及各种纳米粒在人工胃液、人工肠液中的释药行为和其在正常大鼠体内的降血糖作用,并与PLGA HP50 NP进行了比较。结果制得的最终处方的肠溶纳米粒(PLGA HP55)的粒径为(169±16)nm,胰岛素的载药量为(3.17±0.24)%。肠溶纳米粒在人工胃液中的释药速率明显低于PLGA纳米粒。PLGA纳米粒和肠溶PLGA HP50、PLGA HP55纳米粒均能显著降低正常大鼠的血糖浓度,其在正常大鼠体内24 h相对于皮下注射给药的相对生物利用度分别为(5.46±0.7)%、(6.31±0.64)%和(8.72±0.5)%。结论胰岛素肠溶纳米粒可以有效抑制胰岛素在人工胃液中的释放,与PLGA纳米粒相比显著降低正常大鼠的血糖浓度。其中PLGA HP55纳米粒的降糖作用显著高于PLGA HP50纳米粒。pH值高的纳米粒有望成为胰岛素口服给药的有效载体。     

Characterization of amphiphilic dendrimer modified PEG-PLA nanoparticles prepared by a double emulsion-solvent evaporation method

Drug delivery by nanocarriers requires characterizations of suitable particle size, high drug loading and safety. In this work, we prepared an amphiphilic dendrimer modified PEG-PLA mixed nanoparticles (NPs) by a double emulsion-solvent evaporation (DESE) method. The particle size and drug encapsulation efficacy (EE) were compared to evaluate and optimize the preparation parameters. The mixed NPs had average size ranging from (102±1) nm to (137±5) nm, and the zeta potential turned to positive with incorporation of the amphiphilic dendrimer. The NPs showed different EE of docetaxel (DTX) and paclitaxel (PTX) with higher affinity to more lipophilic PTX. The blank mixed NPs showed little cytotoxicity, and the DTX-loaded NPs could effectively facilitate the antiproliferation activity on PC-3 cells. The NPs could be used as an effective drug delivery system, and its anti-tumor effect is worthy of further study.     

无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒制备及体外评价

目的:制备无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒,研究其理化性质及细胞毒和细胞摄取特性。方法:以聚乳酸-羟基醋酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用无稳定剂修饰的纳米沉淀法制备汉防己甲素纳米粒;通过单因素试验考察不同制备工艺对纳米粒理化性质的影响;通过载药量、包封率、累积释药量等指标考察其载药特性;采用MTT比色法检测其对人肺腺癌细胞株A549的细胞毒性;采用共聚焦显微镜技术考察其细胞摄取特性。结果:无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒平均粒径169.3 nm,与有稳定剂的汉防己甲素PLGA纳米粒相比外观无明显改变。在一定范围内,随着PLGA用量的增加,纳米粒的粒径呈上升趋势;随着投药量的增加,纳米粒的载药量显著增加,包封率下降。在pH7.4的释放介质中,纳米粒释慢释药,96 h累积释药率60.44%。细胞毒试验显示,当培养时间为8 h时,汉防己甲素组的细胞毒性大于汉防己甲素纳米粒组;当培养时间延长至24 h时,汉防己甲素纳米粒组的细胞活性明显低于纯药物组;高剂量的空白纳米粒组始终表现较低的细胞毒性。激光共聚焦电镜断层扫描显示汉防己甲素纳米粒能够较好的被细胞摄取。结论:制备的无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒大小均一,包封率高,体外释药表现出较好的缓释效果,易被细胞摄取,对A549细胞的增殖有明显的抑制作用。     

藤梨根乙醇提取物联合CIK细胞对胃癌细胞SGC-7901杀伤作用的研究

目的观察抗肿瘤中药藤梨根的乙醇提取物与CIK细胞在体外联合对胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用。方法运用倒置显微镜观察体外培养的胃癌细胞SGC-7901在分别加入不同浓度的藤梨根醇提物以及不同效靶比的CIK细胞24、48 h后的形态变化;采用MTT法检测藤梨根醇提物、CIK细胞以及两者联合作用后的胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制率。结果当1 mg/ml的藤梨根醇提物与效靶比为20：1的CIK细胞相联合24 h,杀伤效率高于单用藤梨根醇提物及CIK细胞（P〈0.05）。结论藤梨根醇提物与CIK细胞在一定条件下联合,具有协同杀伤胃癌细胞的作用。     

Improved anticancer delivery of paclitaxel by albumin surface modification of PLGA nanoparticles

Background

Nanoparticles (NPs) play an important role in anticancer delivery systems. Surface modified NPs with hydrophilic polymers such as human serum albumin (HSA) have long half-life in the blood circulation system.

Methods

The method of modified nanoprecipitation was utilized for encapsulation of paclitaxel (PTX) in poly (lactic-co-glycolic acid) (PLGA). Para-maleimide benzoic hydrazide was conjugated to PLGA for the surface modifications of PLGA NPs, and then HSA was attached on the surface of prepared NPs by maleimide attachment to thiol groups (cysteines) of albumin. The application of HSA provides for the longer blood circulation of stealth NPs due to their escape from reticuloendothelial system (RES). Then the physicochemical properties of NPs like surface morphology, size, zeta potential, and in-vitro drug release were analyzed.

Results

The particle size of NPs ranged from 170 to 190 nm and increased about 20–30 nm after HSA conjugation. The zeta potential was about -6 mV and it decreased further after HSA conjugation. The HSA conjugation in prepared NPs was proved by Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy, faster degradation of HSA in Differential scanning calorimetry (DSC) characterization, and other evidences such as the increasing in size and the decreasing in zeta potential. The PTX released in a biphasic mode for all colloidal suspensions. A sustained release profile for approximately 33 days was detected after a burst effect of the loaded drug. The in vitro cytotoxicity evaluation also indicated that the HSA NPs are more cytotoxic than plain NPs.

Conclusions

HSA decoration of PLGA NPs may be a suitable method for longer blood circulation of NPs.     

紫杉醇诱导胃癌BGC-823和SGC-7901细胞凋亡作用的比较

目的研究胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞对紫杉醇诱导凋亡的敏感性。方法用0．1～0．5μmol·L^-1紫杉醇作用于BGC-823和SGC-7901细胞,再用0．3μmol·L^-1紫杉醇对BGC-823和SGC-7901细胞分别作用0、6、12、24、36、48h,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果（1）紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间依赖性及剂量依赖性;（2）中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇的敏感性明显高于低分化的BGC-823细胞株。结论不同分化程度的胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性不同。     

海兔素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的研究海兔素(Aplysin)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法MTT法测定海兔素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞生长状态的变化;HE染色检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测SGC-7901细胞中COX-2mRNA的表达。结果经60、120、240、480mg.L-1海兔素作用24、48h后,SGC-7901细胞的生长增殖均明显受到抑制,呈量效依赖性。延长作用时间,抑制作用差异无显著性(P>0.05);120、240mg·mL-1海兔素作用24h后,细胞生长状态明显下降;经120、240mg·mL-1海兔素处理18h后,细胞凋亡率分别为(15.0±2.12)%和(18.4±2.30)%,与对照组(1.4±0.55)%比较差异均有显著性(P<0.05);60、120、240mg·mL-1海兔素处理24h后,SGC-7901细胞COX2mRNA水平有下调趋势,但差异无显著性(P>0.05)。结论海兔素对人胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

紫杉醇对胃癌细胞survivin 蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达以及细胞凋亡的影响。方法不同浓度紫杉醇处理SGC-7901细胞后,在不同时间点采用Western Blot方法检测细胞中survivin蛋白的表达,同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并分析其与survivin蛋白表达的关系。结果 Western Blot结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后survivin蛋白表达增加,并呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果显示,紫杉醇处理SGC-7901细胞后,细胞凋亡率随时间延长而增加。结论紫杉醇可以诱导胃癌细胞系SGC-7901survivin蛋白表达增加,这可能是导致肿瘤耐药的重要机制。     

载氟尿嘧啶纳米粒的制备及SGC-7901胃癌细胞株的摄取实验

目的:制备载氟尿嘧啶的纳米粒,并考察其体外释放性能和胃癌细胞株对其的摄取能力。方法:以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸乙醇酸-聚赖氨酸-(缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸)环肽(PEAL-cRGD)为载体,用乳化-溶剂蒸发法制备氟尿嘧啶纳米粒,以粒径和包封率为评价指标,通过正交试验设计筛选最优制备工艺,并测定SGC-7901胃癌细胞株对该纳米粒的摄取能力。结果:以最优工艺制备的纳米粒为大小均匀的球形,粒径(172.9±2.3)nm,包封率(75.31±1.91)%,在pH7.4磷酸盐缓冲液中192h累积释放率为(58.63±2.47)%。SGC-7901胃癌细胞株能有效摄取该纳米粒。结论:本研究制备的氟尿嘧啶纳米粒包封率较高,粒径较小,能促进胃癌细胞对氟尿嘧啶的摄取。     

紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

【摘要】目的 体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物（miR-200b mimics）对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法 分别单独应用miR-200b转染细胞（200b组）及50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞（紫杉醇组）,并联合应用上述两者（联合组）,同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果 与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48 h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低（均P< 0.001）。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。     

The preparation and characteristics of sterically stabilized liposomes containing paclitaxel and super-paramagnetic iron oxide nanoparticles

Theranostics, combining therapy and diagnosis, is an appealing approach for chemotherapy. In the present study, we selected paclitaxel (PTX) as a therapeutic agent, super-paramagnetic iron oxide nanoparticles (SPIO) as a diagnostic agent and sterically stabilized liposomes as a carrier to prepare theranostic liposomes. The SPIO were prepared and characterized. Moreover, the sterically stabilized liposomes containing PTX and SPIO (PTX/SPIO-SSL) were prepared. The characteristics of PTX/SPIO-SSL were investigated. The results indicated that prepared SPIO exhibited super-paramagnetic and could be used for MRI. The average particle size of PTX/SPIO-SSL was about 170 nm, with a polydispersity index (PDI) less than 0.3. The zeta potential of PTX/SPIO-SSL was negative. The PTX entrapment efficiency of PTX/SPIO-SSL was more than 98%. The TEM results indicated the spherical structure and dense SPIO content in PTX/SPIO-SSL. The in vitro release of PTX from PTX/SPIO-SSL and PTX-SSL was almost identical at both pH 6.8 and 7.4. In conclusion, the PTX/SPIO-SSL were prepared and characterized in vitro. The anti-tumor and diagnostic activity of PTX/SPIO-SSL should be investigated deeply in future study.