慢病毒介导的microRNA-155过表达对肝癌细胞HepG2增殖的影响

摘要： 目的 通过构建慢病毒 （LV） 介导的miRNA-155 （miR-155） 过表达载体, 探讨上调miR-155对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。方法 针对目标序列合成特异性miR-155过表达片段并克隆入慢病毒载体pGCSHL-GFP, 将重组miR-155-hRNA-LV和阴性对照空病毒载体转染HepG2细胞, 建立稳定过表达miR-155的细胞系。细胞设过表达组 （H组）、 阴性对照组 （negative control, NC组） 和正常组 （normal, N组）。实时荧光聚合酶链式反应 （qRT-PCR） 方法检测各组miR-155和PTEN的表达水平; Western blot检测各组PTEN、 CyclinD1、 CyclinA1+A2蛋白表达情况; 细胞增殖-毒性检测 （CCK-8） 细胞增殖情况。结果 H组miR-155表达量明显高于其NC组及N组, 靶基因PTEN的表达量低于NC组及N组 （均P＜0.05）。H组PTEN蛋白的表达量明显低于NC组和N组, 而CyclinD1、 CyclingA1+A2蛋白的表达量明显高于NC组和N组 （均P＜0.05）。CCK-8结果显示3组12 h时吸光度值开始出现差异, 24 h、 48 h、 72 h H 组吸光度值均明显大于NC组和N组 （P＜0.05）, 但后2组差异无统计学意义。结论 过表达miR-155可促进肝癌细胞系HepG2细胞增殖。     

地榆正丁醇萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制

目的：利用正丁醇溶剂提取地榆中的鞣质（15.36％）,研究其萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的正丁醇萃取层作用于人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和细胞内活性氧（ROS）的含量。结果 HepG2细胞经不同浓度（100,150,200,250,300μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用48 h,细胞增殖明显受到抑制,其IC50为222.87μg·mL-1。不同浓度（200,400,600μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用于HepG2细胞48 h后,细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量均明显高于空白组（P〈0.05）,且随着地榆正丁醇萃取层浓度的增加,HepG2细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量也逐渐升高。结论地榆正丁醇萃取层可以浓度依赖性方式抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖并促进其凋亡,这可能与其促进细胞内ROS的产生有关。     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin的构建及其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin并探讨其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数（MOI）LV-hTERT-tumstatin感染肝癌细胞HepG2及正常肝细胞L02,荧光显微镜下观察转染情况,MTT法检测两种细胞增殖情况,流式细胞术检测两种细胞凋亡情况。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin转染后在肝癌HepG2细胞中特异表达,在L02细胞中无表达。肝癌细胞HepG2的生长抑制率随MOI增加而逐渐增加,L02细胞生长无明显变化。慢病毒治疗组HepG2细胞凋亡率达（48.39±3.32）%,明显高于空白对照组（3.96±0.94）%（P〈0.05）,而对L02细胞作用不明显（P〉0.05）。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin可靶向抑制肝癌HepG2细胞增殖和促进HepG2细胞凋亡。     

Akt1和Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1侵袭和迁移的影响

目的:观察蛋白激酶B1(Akt1)和蛋白激酶B2(Akt2)基因转染人胃黏膜上皮细胞系GES-1后对其侵袭和迁移的影响。方法:采用脂质体法将分别含Akt1和Akt2基因全长cDNA序列的p-LXSN-Akt1(Akt1组)和p-LXSN-Akt2(Akt2组)质粒转染到GES-1细胞,以转染p-LXSN空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,并经抗生素G418筛选抗性克隆,蛋白印迹(Westernblot)鉴定各组细胞Akt1、Akt2及基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达水平;Transwell法分析转染后细胞的侵袭能力;用免疫荧光法观察转染后GES-1细胞丝状肌动蛋白(F-actin)的变化。结果:Akt1组和Akt2组均获得了稳定表达Akt1和Akt2基因的GES-1细胞模型;2组MMP-2蛋白表达均高于空载组和对照组(P<0.01)。Transwell法显示Akt1和Akt2组GES-1细胞侵袭能力均明显增加(P<0.01)。免疫荧光发现Akt1和Akt2组F-actin的聚集均增加。结论:Akt1、Akt2基因均可以通过增加细胞侵袭力和迁移力,导致GES-1细胞恶性转化。     

慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的 shRNA 沉默肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结肠癌 SW480 细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带 PRL-3 shRNA 的慢病毒载体转染结肠癌SW480 细胞,建立稳定沉默 PRL-3 的细胞株,real-time PCR 检测转染后 PRL-3 mRNA 的相对表达水平。采用 MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用 Transwell 侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果 稳定沉默 PRL-3 的细胞株构建成功,转染组 PRL-3mRNA 的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）,空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 shRNA 转染 SW480 细胞 72 h 后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染 120 h时最明显（P＜0.05）。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降（P＜0.05）。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加（P＜0.05）。结论 结肠癌 SW480 细胞转染 PRL-3 shRNA 可减少 PRL-3 的表达,有效抑制 SW480 细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3 可能成为治疗结肠癌的靶基因。     

阿魏酸对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的:研究阿魏酸对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法:采用CCK-8法筛选阿魏酸的给药浓度;采用Western blot法筛选白细胞介素6(IL-6)诱导磷酸化信号转导蛋白及转录激活子3(p-STAT3)蛋白高表达的HepG2细胞模型的最佳造模浓度.将HepG2细胞分为空白对照组、模型组、阿魏酸组(0.5...     

慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究

【摘要】目的构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和apelin基因的重组质粒pUbi-apelinFLAG-pSV40-EGFP并进行慢病毒包装,探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数（MOI）值及目的基因表达情况。方法化学合成目的基因片段并扩增。采用In-Fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接,转化入感受态DH5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同MOI值转染人脐带间充质干细胞,根据转染效率得到最佳MOI值,并采用Real-timePCR及Western blot方法检测目的基因表达情况。结果通过PCR扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284bp的目的基因片段,与慢病毒质粒载体连接后形成pUbi-apelin-FLAG-pSV40-EGFP重组质粒,测序结果与预期完全符合,并成功包装慢病毒颗粒。最佳MOI值为20,转染效率为（90.32±3.61）%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mRNA及蛋白的表达。结论重组质粒慢病毒载体pUbi-apelin-FLAGpSV40-EGFP可有效转染人脐带间充质干细胞,并可持续高表达apelin基因     

慢病毒载体介导的长链非编码RNA Rpph1沉默对胆囊癌GBC-SD细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Rpph1对胆囊癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响和潜在机制.方法 以人胆囊上皮细胞HGBEC为对照,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996和NOZ中ln?cRNA Rpph1的表达.将GBC-SD细胞分为对照组、si-con...     

慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术对HepG2细胞的体外效应

目的 观察针对hTERT的siRNA对肝癌HepG2细胞的体外抑制效应.方法 将逆转录表达载体中的针对hTERT的siRNA序列亚克隆至慢病毒表达载体pWPT-GFP中,经293T细胞包装,收集病毒上清,感染肝癌细胞株HepG2.采用半定量RT-PCR法、TRAP法及MTT法,分别检测hTERT基因表达、端粒酶活性、肿瘤细胞生长抑制情况等.结果 限制性内切酶酶切分析表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的干扰RNA的慢病毒表达载体;以293T包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,感染效率可达99%以上;在稳定表达pWPT-hTERT-siRNA的肝癌细胞中,hTERT mRNA表达水平、肿瘤细胞的体外增殖受到抑制.结论 慢病毒介导的siRNA转染能明显抑制恶性肝癌细胞的生长.     

慢病毒转染调控FoxM1表达对人肝内胆管细胞癌增殖、侵袭及MMPs表达的影响

目的 通过实验探讨慢病毒转染调控FoxM1表达对人肝内胆管细胞癌（ICC）增殖、侵袭能力及基质金属蛋白酶（MMP）-9和MMP-2表达的影响。方法 Western blot检测ICC细胞株HCCC-9810、RBE及SSP-25的FoxM1蛋白表达水平,选取表达量较低者作为上调FoxM1细胞株,较高者作为下调细胞株;将分别携带FoxM1质粒和shRNA的慢病毒载体转染目标上调和下调ICC细胞株,建立稳定上下调FoxM1的细胞株（Western blot验证）;MTT法检测转染后细胞增殖力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;qPCR检测各组稳定转染细胞株MMP-9及MMP-2mRNA表达水平。结果 SSP-25的FoxM1蛋白表达最高,HCCC-9810最低,由此选取SSP-25作为下调FoxM1表达目标细胞株,HCCC-9810作为上调FoxM1表达目标细胞株。慢病毒转染成功构建稳定上调（HCCC-9810-FoxM1组）及下调FoxM1细胞株（SSP-25-shFoxM1组）;HCCC-9810-FoxM1组增殖及侵袭能力明显高于HCCC-9810-Control组（均P&...     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

<正>姜黄素是从姜科黄属植物姜黄根茎中提取的一种植物多酚,具有广泛的药理作用,如抗氧化、抗凝、抗人类免疫缺陷病毒、抗菌、解痉、抗肿瘤、抗突变等作用[1]。因其能抑制多种肿瘤细胞系的生长[2],成为当今的研究热点之一。本实验对姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外增殖和凋亡的作     

白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖影响的量效与时效关系;应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3酶活性。结果白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖且诱导其凋亡;100μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞24、48或72h显著抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间依赖性。白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性增加SMMC-7721细胞caspase-3活性。结论白藜芦醇可抑制人肝癌细胞株洲C-7721的增殖,诱导细胞凋亡,其机制与增强细胞内caspase-3活性有关。     

阿司匹林对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响

目的 研究阿司匹林对人乳腺癌癌细胞株MCF-7增殖和凋亡的影响.方法 MTT法、FCM法、电镜等技术.结果 MTT法显示阿司匹林对人乳腺癌MCF-7细胞有较强的抑制作用;FCM法细胞的凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加;电镜可见典型的细胞凋亡形态学特征.结论 阿司匹林能够显著抑制MCF-7细胞增殖及诱导凋亡.     

姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响,为胆囊癌的临床治疗提供新的思路。方法姜黄素与QBC939共同孵育后,采用MTT方法测定QBC939的增殖情况并计算抑制率,用流式细胞仪评估凋亡率,同时以蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测姜黄素对凋亡相关蛋白Caspase 3表达水平的影响。数据比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果姜黄素处理组细胞生长明显受抑并存在显著凋亡,Western blot结果显示Cas-pase 3表达量远大于对照组。结论姜黄素可显著抑制胆囊癌细胞株QBC939的增殖,这种变化可能与其诱导的Cas-pase 3的高表达及促进凋亡有关。     

慢病毒介导CK18基因沉默对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响

摘要：目的 检测靶向沉默细胞角蛋白18（CK18）基因对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡、侵袭运动的影响,并探 讨其潜在的分子机制。方法 建立 CK18 稳定沉默的 BT549 细胞株,分为 3 组,以 CK18（CK18-sh21、CK18-sh22、 CK18-sh23及CK18-sh24）靶向沉默的细胞为实验组CK18-shRNA,加入空载体的为阴性对照（sh-Con）组,未处理为 空白对照（Wt）组。采用蛋白印迹法（Western blot）对细胞系进行CK18表达鉴定。采用CCK-8法、平板克隆形成法检 测 CK18 表达缺失对细胞增殖能力的影响;通过流式细胞技术（PE–Annexin V 双染法）检测 CK18 基因沉默后对 BT549细胞凋亡的影响;通过PI-FACS 法检测沉默CK18对BT549细胞周期的影响;采用划痕试验、Transwell法检测 CK18沉默对细胞运动及侵袭能力的影响;采用Western blot检测与侵袭转移相关的分子E-钙黏蛋白（E-cadherin）和 波形蛋白（vimentin）表达情况。结果 建立了CK18沉默的BT549细胞系,CK18的表达被显著抑制,CK18-sh23组相 对sh-Con组抑制率最高,可达73%。与Wt组、sh-Con组相比,CK18-shRNA细胞增殖能力在24 h、48 h和72 h降低, 克隆形成能力下降,细胞运动、侵袭能力下降,细胞凋亡率和G2期细胞比例均增加（P＜0.05）。与sh-Con组和Wt组 比较,CK18表达降低能促进E-cadherin表达,抑制vimentin表达（P＜0.05）。结论 CK18基因沉默能有效抑制人乳 腺癌BT549细胞的增殖、运动、侵袭,诱导细胞的凋亡,并阻滞细胞周期;CK18还可能通过诱导EMT发生参与乳腺癌 BT549细胞的侵袭转移过程。     

慢病毒载体介导的bFGF基因转染兔BMSCs的实验研究

摘要： 目的 观察在体外培养条件下, 慢病毒载体介导的碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF） 基因转染对兔骨髓基质干细胞 （BMSCs） 生物学特性的影响。方法 采用密度梯度离心法及贴壁筛选法获取 BMSCs; 利用慢病毒载体将 bFGF 基因转染到 BMSCs 中, 根据转染条件分为 bFGF 转染组、 空病毒组、 未转染组, 转染后分别对 3 组细胞的形态 bFGF mRNA 及蛋白表达、 细胞增殖情况、 细胞周期及碱性磷酸酶 （ALP） 活性进行观察。结果 采用密度梯度离心法和贴壁筛选法, 成功获得高纯度的 BMSCs。载有 bFGF 基因的慢病毒转染 BMSCs 后, 细胞形态无明显变化, 而 bFGF mRNA 与蛋白表达均明显增强、 细胞增殖曲线上移、 增殖期细胞比例增大、 ALP 活性明显增高, 与空病毒组及未转染组比较, 差异均有统计学意义 （P＜0.05)。结论 利用慢病毒载体将兔 bFGF 基因导入体外培养的 BMSCs, 目的基因获得稳定表达, 并且自身过表达的bFGF 可以促进BMSCs 的增殖与成骨分化。     

千金藤素调控肝癌细胞 HepG2增殖和凋亡的实验研究

目的探讨千金藤素对肝癌细胞 HepG2增殖、凋亡的影响和机制。方法 2020年 1—6月,从上海通派生物科技有限公司购入肝癌细胞 HepG2,用千金藤素( 20 μmol/L)处理肝癌细胞 HepG2,MTT方法测定增殖活性, PI单染法检测细胞周期, Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 p21、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、核因子 κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。用 NF-κB信号激活剂和千金藤素联合处理肝癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡变化。结果千金藤素处理后的肝癌细胞增殖活性下降,细胞 G0/G1期比例［(65.81±3.73)%比( 50.61±4.17)%］升高,细胞凋亡率［(13.47±1.58)%比( 2.18±0.12)%］升高,细胞中 p21、Bax、cleaved-caspase-3蛋白水平升高, cyclin D1蛋白水平下降, NF-κBp65蛋白水平( 0.19±0.02比 0.36±0.05)降低。 NF-κB信号激活剂处理可以提高千金藤素条件下肝癌细胞增殖活性( 0.46±0.03比 0.35±0.04)减少 G0/G1期比例,降低细胞凋亡率,降低细胞中 p21、Bax、cleavedcaspase-3蛋白表达水平,提高细胞中 cyclin D1和 NF-κBp65蛋,白水平。结论千金藤素抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱     

马钱苷对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响及机制研究

目的:研究马钱苷对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:运用CCK-8法检测不同质量浓度(10、25、50、100、150、200、300、400μg/mL)的马钱苷作用24、48 h对HepG2细胞增殖活性的影响。将HepG2细胞分为对照组和马钱苷低、中、高浓度组(50、100、150μg/mL),加药作用24 h后,采用Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布情况;采用Western blotting法检测各组细胞中G1/S-特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9蛋白的表达水平。结果:马钱苷对HepG2细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖趋势。与对照组比较,马钱苷低、中、高浓度组细胞出现核固缩、碎裂等凋亡现象,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);细胞主要阻滞于S期;马钱苷低、中、高浓度组细...     

曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG 2 的影响

目的观察曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度的曲马多（0．1,1,10,100,1000,10000,100000,um01．L^-1）,对照组RPMI-1640培养液中不加曲马多,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测曲马多对HepG2细胞增殖活性的影响,采用流式细胞技术检测曲马多对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst3328染色方法分析鉴定曲马多对HepG2细胞凋亡的影响。结果曲马多浓度≥1000μmol．L^-1时。细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0．05）;随着曲马多浓度的增加,G0／G1期比例逐渐增高,（S＋G2）／M期逐渐降低;用Hoechst33258染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,曲马多浓度≥10000μmol．L^-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞数占细胞总数的比例较对照组显著增加（P〈0．05）。结论曲马多在临床常用剂量范围内对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,浓度≥1000μmol．L^-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,浓度≥10000μmol．L^-1时可引起人肝癌细胞株HepG2凋亡。