大黄素诱导白血病U937细胞凋亡及机制初探

目的研究中药大黄素(Emodin)对人髓系白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响,探讨bcl-2/bax比值变化和procaspase-3(CPP32)的激活在其中的作用。方法MTT法绘制细胞生长曲线;克隆形成试验观察大黄素对U937细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测、DNA倍体分析及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡;PCR及检测大黄素作用前后bcl-2/bax基因及蛋白表达的变化;流式细胞术测定大黄素作用前后caspase-3活性变化及检测CPP32的蛋白表达的变化。结果大黄素能抑制U937细胞增殖,作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为30μmol·L-1;线粒体膜电位、亚G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的检出证实大黄素能诱导U937细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用后G0/G1期细胞比例较对照组增高,S期比例下降,且与药物浓度呈正相关。大黄素作用后U937细胞bcl-2/bax基因及蛋白的表达水平比值下降,被激活的caspase-3阳性细胞增多,CPP32蛋白表达水平下降,并呈时效关系。结论大黄素能通过诱导凋亡来抑制U937细胞增殖,bcl-2/bax比值的降低及CPP32的活化可能参与了大黄素抑制U937细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

TFAR19蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFAR19协同米非司酮(MIF)对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFAR19真核表达载体,用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L-1MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24~96h的吸光度(A)值。在转染TFAR19的细胞中加入20mol·L-1MIF培养24、48h,MTT比色法检测细胞增殖,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFAR19真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明,与对照组相比,5、10μmol·L-1MIF组的A值差异无统计学意义(P>0.05),20、50和100μmol·L-1MIF组的A值差异有统计学意义(P<0.01),MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性;转染PCI-neo-TFAR19并加入20 mol·L-1MIF后,与对照组及单独应用MIF组相比,细胞生长明显受到抑制(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征(细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等)。结论TFAR19蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡,有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。     

大黄素体外抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖的实验研究

目的探讨大黄素对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法采用倒置显微镜观察细胞生长,DAPI染色观察凋亡细胞;CCK-8法检测不同浓度的大黄素作用不同时间对BIU-87细胞增殖的抑制作用;JC-1检测线粒体跨膜电位并衡量线粒体去极化的比例以及caspase-9活性检测探讨大黄素抑制BIU-87细胞增殖的作用机制。结果不同浓度(10,20,40,60,80μmol·L-1)的大黄素均可抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,且抑制率呈浓度依赖和时间依赖关系;大黄素作用BIU-87细胞24、48、72小时后半数抑制浓度(IC50)分别为:(46.27±2.32)μmol·L-1、(34.79±1.75)μmol·L-1、(25.58±1.24)μmol·L-1。随大黄素作用时间以及剂量的增加,BIU-87细胞凋亡率增加,线粒体跨膜电位逐渐下降,作用12小时后caspase-9活性随药物浓度增加而增加。结论大黄素能有效地抑制人膀胱癌BIU-87细胞的增殖,其可能机制为通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究

目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT(野生型Smad3基因)、Smad3 EPSM(Smad3L区磷酸化位点突变)、Smad3 3S-A(Smad3C区磷酸化位点突变)3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β_1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β_1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β_1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β_1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G_0/G_1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G_2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β_1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。     

苦参碱对人前列腺癌PC-3M细胞周期与凋亡的影响

目的研究苦参碱(MR)对人前列腺癌PC-3M细胞周期与凋亡的影响。方法稳定培养PC-3M细胞株系,经0(空白组)、30、60、120μM浓度MR给药72 h后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MR对PC-3M抑制率,碘化丙啶(PI)染色检测细胞形态学的变化,免疫组织化学法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达,Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化蛋白水平。结果与空白组比较,MR给药后有效抑制PC-3M的细胞增殖(P<0.01),并促进癌细胞凋亡。同时,MR能显著减少Cyclin D1的表达以及下调内源性p-ERK1/2水平(P<0.01)。结论苦参碱可发挥有效的抗癌作用,推测其机制为抑制癌症细胞增殖并介导细胞凋亡,以及抑制内源性ERK1/2/Cyclin D1通路。     

吉西他滨联合大黄素对胰腺癌 SW1990细胞多耐药基因?1、 miRNA?1271及上皮-间充质细胞转化的影响

目的探究吉西他滨联合大黄素对胰腺癌 SW1990细胞生长的抑制作用及对多耐药基因 ?1(MDR?1)、 miRNA?1271和上皮-间充质细胞转化( EMT)的影响。方法将胰腺癌 SW1990细胞分为大黄素组( 40 μmol/L)、吉西他滨( 20 μmol/L)、吉西他滨联合大黄素组及对照组(生理盐水),流式细胞仪检测细胞凋亡, MTT法检测细胞增殖, Transwell小室模型检测胰腺癌细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应( qRT?PCR)检测 MDR?1、miRNA?1271及 EMT相关标志物( TWIST1、ZEB1、E?cadhcrin) mRNA表达,流式细胞仪检测 MDR?1编码的 P糖蛋白( P?gp)阳性率,蛋白质免疫印迹法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白［B淋巴细胞瘤 2(Bcl?2)及其相关 X蛋白( Bax)、胱天蛋白酶 3(Caspase?3)及 Survivin］及 EMT相关标志物蛋白含量。结果联合组可显著抑制胰腺癌 SW1990细胞增殖和侵袭, SW1990细胞凋亡率显著更高,与其他三组比较差异有统计学意义( P＜0.05)。联合组 MDR?1 mRNA显著降低, miRNA?1271及 E?cadhcrin mRNA显著升高,且与其他组比较差异有统计学意义( P＜0.05)各组 TWIST1、ZEB1 mRNA水平比较差异无统计学意义( P＞0.05)。联合组可以显著抑制 Bcl?2、Caspase?3及 Survivin表达,上调,Bax表达,降低 Bcl?2、Bax比值,其效果明显高于吉西他滨组和大黄素组( P＜0.05)。联合组 E?cadhcrin蛋白表达显著高于其他组, P?gp、TWIST1、ZEB1蛋白表达显著低于其他组( P＜0.05)。结论大黄素能够下调 MDR?1降低胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性,并能通过提高 miRNA?1271抑制胰腺癌细胞 EMT转化。     

微 RNA-509-3p/干扰素刺激基因 15轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的探究微 RNA(miR)-509-3p/干扰素刺激基因 15(ISG15)轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法 2022年 1―9月,将喉癌 M4E细胞分为 Con组、 miR-NC组、 miR-509-3p组、 pcDNA-ISG15组。逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)检测细胞中 miR-509-3p表达;细胞计数试剂盒( CCK8)检测细胞增殖能力; Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率; Matrigel体外成管实验检测血管生成能力;蛋白质印迹法检测细胞中 ISG15、VEGF蛋白表达;萤光素酶活性报告检测 miR-509-3p和 ISG15的靶向关系。结果与喉上皮细胞 NP69中 miR-509-3p表达(1.01±0.13)μg/L相比,喉癌细胞 SCC-40、SCC-2、M4E中 miR-509-3p表达［(0.61±0.08)(0.45±0.07)(0.18±0.07)μg/L］均降低,且 M4E细胞中 miR-509-3p表达低于 SCC-40、SCC-2细胞( P<0.05)。与 Con组相比, miR-50、9-3p组细胞中、miR-509-3p表达增加［( 1.17±0.05)μg/L比( 118±0.03)μg/L)］; Con组细胞中 miR-509-3p表达与 miR-NC组相比差异无统计学意义( P>0.05)。与 Con组相比, miR-509-3p组细胞增殖( 1.71±0.02比 3.09±0.07)、侵袭( 55.33±2.52比 150.67±2.52)、迁移( 30.58±2.08比 98.33±1.53)、形成小管数量( 61.28±2.15比 135.62±2.54)及细胞中 ISG15(0.24±0.03比 1.11±0.13)、 VEGF(0.35±0.02比 0.99±0.04)蛋白表达均降低,细胞凋亡率［( 18.76±0.18)%比( 5.61±0.08)%］增加( P<0.05); Con组细胞增殖、侵袭、迁移、形成小管数量、凋亡率及细胞中 ISG15、VEGF蛋白表达和 miR-NC组相比差异无统计学意义( P>0.05);与 miR-509-3p组相比, pcDNA-ISG15组细胞增殖( 3.25±0.06)、侵袭( 144.00±2.65)、迁移( 89.34±5.13)、形成小管数量( 131.56±2.08)及细胞中 ISG15(0.83±0.05)、 VEGF蛋白(0.89±0.03)表达增加,细胞凋亡率降低( 6.85±0.06)%(P<0.05)。结论过表达 miR-509-3p可抑制喉癌细胞血管生成及 VEGF蛋白表达。     

大黄中游离蒽醌对HK-2细胞系的毒性作用研究*

目的:观察大黄中大黄素等游离蒽醌对人近曲小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用及毒性作用机制。方法:体外培养HK-2细胞,利用MTT法评价大黄素等对HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对细胞形态和LDH释放率的影响,利用TUNEL染色检测大黄素等对HK-2细胞凋亡的影响,细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)生成的检测采用流式细胞技术,分别以DCFH-DA和罗丹明-123为荧光探针。结果:大黄素、大黄酸和大黄素甲醚作用HK-2细胞48 h后,明显抑制细胞增殖,其IC50值分别为130.65,82.97和76.02μmol.L-1,芦荟大黄素轻微抑制HK-2细胞增殖,大黄酚作用不明显。大黄素、大黄酸和大黄素甲醚能够导致细胞皱缩和空泡化,LDH漏出率增加以及促使细胞凋亡,3种蒽醌均使细胞的线粒体膜电位降低,而ROS生成减少,80μmol.L-1大黄素预处理细胞能够明显降低H2O2引起的ROS升高。结论:大黄素、大黄酸和大黄素甲醚可能是大黄中主要的肾毒性物质,能够引起HK-2细胞的凋亡,其机制可能涉及线粒体膜电位途径,但是不包括ROS生成途径。     

大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caspase-3表达的影响

目的研究大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caco-2细胞Caspase-3表达的影响。方法对LPS诱导的Caco-2炎症细胞模型,采用不同浓度的大黄素干预处理,用RT-PCR和westernblot法检测Caspase-3表达的情况。结果 LPS诱导的Caco-2细胞Caspase-3的表达升高,不同浓度大黄素作用于LPS诱导的Caco-2细胞24h后,Caspase-3mRNA和蛋白表达随大黄素浓度的增加而下降。结论大黄素抑制Caco-2炎症细胞模型凋亡因子Caspase-3的表达,抑制Caco-2细胞凋亡。     

熊果酸对人上皮性卵巢癌 SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究熊果酸(UA)对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将处于对数生长期人上皮性卵巢癌SKOV3细胞随机分为5组:正常对照组、熊果酸(40、20、10 mg·L-1)干预组和顺铂(40 mg·L-1)干预组(阳性对照组)。药物干预48 h后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增值抑制率;通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、观察细胞凋亡并计算细胞凋亡率;通过RT-PCR技术检测细胞Bax mRNA和bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blot法检测细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达并进行半定量分析。结果 较正常对照组,熊果酸(40、20 mg·L-1)干预组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);熊果酸(40、20 mg·L-1)干预组细胞中bcl-2 mRNA表达显著下调、Bax mRNA表达显著上调,Bax/bcl-2表达比值显著升高(P<0.01),caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 熊果酸具有抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖并促进其凋亡的作用,其作用机制可能与熊果酸能够有效下调bcl-2 mRNA表达、上调Bax mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值以及上调caspase-3蛋白表达有关。     

丹酚酸 A对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制研究

目的探究丹酚酸 A对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制。方法该研究起止时间为 2018年 5月至 2019年 5月。购买华拓生物生产的 HGMC人肾小球系膜细胞,分为 A组、 B组、 C组、 D组、 E组五组, A组细胞不添加任何药物, B组、 C组、 D组、 E组细胞均加入 10 mg/L LPS培养, 1h后 C组、 D组、 E组分别加入低剂量丹酚酸 A(10 mg/L)、中剂量丹酚酸 A(20 mg/L)、高剂量丹酚酸 A(40 mg/L)处理 24 h后做后续试验。检测细胞增殖、凋亡、细胞周期分布以及磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路指标表达量。结果与 A组相比, B组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率降低, S期、 G2/M期细胞分布率升高;与 B组相比, C组、 D组、 E组 G0/G1期细胞分布率、细胞凋亡率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低;与 C组相比, D组、 E组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低(均 P<0.05);与 D组相比, E组细胞凋亡率(37.59±4.62)%、G0/G1期细胞分布率(86.95±11.62)%升高, S期、 G2/M期细胞分布率分别为     

大黄素下调ILK/PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌CACO-2细胞增殖的机制研究

目的探讨大黄素对人结肠癌CACO-2细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养人结肠癌CACO-2细胞,用不同浓度的大黄素(10,20,40,80μmol·L^-1)处理不同的时间(24,48,72 h)。采用MTT检测结肠癌CACO-2细胞的增殖活力,流式细胞术细胞周期的变化;JC-1检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测细胞内ILK(整合素蛋白激酶)、p-PI3K和p-Akt的蛋白水平的表达。结果与空白对照组和DMSO对照组比较,大黄素可显著地抑制CACO-2细胞的增殖,并且存在显著的剂量-时间依赖性(P<0.01);流式细胞术结果表明,大黄素可使细胞的增殖阻滞于G0/G1期;JC-1染色结果显示大黄素可显著降低线粒体膜电位(P<0.01);Western blot结果显示大黄素能够显著降低细胞内ILK、p-PI3K和p-Akt蛋白的表达(P<0.01),且具有浓度-时间依赖性(P<0.01)。结论大黄素对人结肠癌CACO-2细胞表现成明显的抗癌作用,其机制与大黄素抑制ILK/PI3K/Akt信号通路进而抑制癌细胞增殖、诱导细胞周期阻滞于G0/G1期、促进凋亡有关。     

山茱萸多糖对胃癌细胞增殖和凋亡的机制

目的探讨山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法用不同剂量山茱萸多糖灌胃接种AGS细胞的裸鼠,检测裸鼠体内肿瘤体积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;胃癌细胞AGS分为对照组、山茱萸多糖低、中、高剂量组、si-NC组、si-ELF3-AS1组、山茱萸多糖+pcDNA组、山茱萸多糖+pcDNA-ELF3-AS1组。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测lncRNA ELF3-AS1表达水平。结果山茱萸多糖处理的裸鼠体内移植瘤体积减少,细胞凋亡指数升高(P<0.05)。山茱萸多糖处理胃癌细胞AGS后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高,ELF3-AS1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。胃癌细胞AGS中ELF3-AS1表达水平升高(P<0.05)。抑制ELF3-AS1表达后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高(P<0.05)。ELF3-AS1过表达逆转了山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用。结论山茱萸多糖可能通过下调ELF3-AS1抑制胃癌AGS细胞增殖,促进AGS细胞凋亡。     

扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖以及凋亡的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况.根据MTT结果,将给药后细胞分为低、中、高3个浓度实验组(2.5,5.0,和10.0μmol·L-1异藤黄酚,处理48 h);未给药细胞作为空白组.用流式细胞术检测CB3细胞凋亡的情况,蛋白质印迹法检测异藤黄酚作用...     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响

目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。     

吲哚-3-原醇对人肺癌细胞株A549的促凋亡和增殖抑制作用

目的探讨吲哚-3-原醇(Indol-3-carbinol,I3C)对肺腺癌细胞株A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的A549细胞分别用不同浓度的I3C处理(0、25、50、100μg/m L)。细胞培养72 h后,采用M TT观察I3C对A549细胞的增殖抑制作用;Annexin V-PI/FITC检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞中PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2、Cleavage-PARP、Clevage-Caspase3蛋白的变化。结果 I3C可以呈浓度依赖性地诱导A549细胞的增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-PARP、Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论 I3C可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导A549细胞增殖抑制和凋亡。     

大黄素甲醚通过调控miR-21表达抑制乳腺癌细胞生存、促进其凋亡

目的观察大黄素甲醚对乳腺癌细胞存活及凋亡的作用并探讨其机制。方法 CCK-8试验检测不同浓度梯度及不同培养时间大黄素甲醚处理的HCC1937、MCF-7细胞存活率,流式细胞术检测不同浓度梯度大黄素甲醚干扰后HCC1937、MCF-7细胞凋亡率。qRT-PCR检测大黄素甲醚干预的HCC1937、MCF-7细胞的miR-21表达。Western blot检测大黄素甲醚、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor干预的HCC1937、MCF-7细胞PD-CD4蛋白表达。结果 CCK-8检测显示,与空白对照组比较,给予不同浓度梯度大黄素甲醚培养48 h的HCC1937、M CF-7乳腺癌细胞的细胞存活率均降低(P <0. 05),5μmol/L大黄素甲醚处理的HCC1937、M CF-7乳腺癌细胞,在培养48、72、96 h后,细胞存活率均下降(P <0. 05)。流式细胞术检测显示,与空白对照组比较,给予不同浓度梯度大黄素甲醚培养48 h的HCC1937、MCF-7乳腺癌细胞的凋亡率均升高(P <0. 05)。qRT-PCR检测显示,与空白对照组比较,5μg/ml大黄素甲醚干预的HCC1937、MCF-7细胞miR-21表达降低(P <0. 05)。West-ern blot检测显示,与空白对照组比较,5μg/ml大黄素甲醚干预的HCC1937、MCF-7细胞PDCD4蛋白表达升高;与阴性对照组比较,给予miR-21 mimics干扰的HCC1937、MCF-7细胞PDCD4蛋白表达降低(P <0. 05),给予miR-21 inhibitor干扰的HCC1937、M CF-7细胞PDCD4蛋白表达升高(P <0. 05)。结论大黄素甲醚通过下调miR-21调控PDCD4蛋白表达杀伤乳腺癌细胞。