止消通脉宁对转化生长因子-β_1诱导的人肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤连蛋白mRNA表达的影响

目的探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）和纤连蛋白（FN）mRNA表达的影响。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养,分为空白对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β110 ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。空白血清无此作用。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化作用。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的考查淫羊藿苷(Icariin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖以及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响。方法采用体外培养HK-2细胞,分为空白对照组、模型组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1)、淫羊藿苷不同浓度给药组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1+25、50、100、200μg·mL~(-1)淫羊藿苷),培养24 h后给药处理。药物作用72 h后,观察细胞形态变化,并采用MTT法检测细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞FN mRNA的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中FN蛋白的含量。结果与空白对照组比较,模型组的细胞增殖受到明显抑制(P0.01),HK-2细胞的FN mRNA表达显著增加(P0.01),细胞培养液中FN蛋白含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,25μg·mL~(-1)淫羊藿苷可以促进HK-2细胞的增殖(P0.01),并使细胞形态逐渐趋向正常;不同浓度组的淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN mRNA表达以及细胞培养液中的FN蛋白含量均有下调作用,50、100、200μg·mL~(-1)浓度组作用明显(P0.01)。结论淫羊藿苷可能通过促进HK-2细胞增殖与抑制其FN mRNA及蛋白表达,发挥抗TGF-β1诱导的HK-2细胞向成纤维细胞转化的作用。     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞分泌细胞外基质成分的影响

目的观察糖耐康对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)对细胞外基质成分表达的影响,探讨糖耐康治疗肾间质纤维化的作用机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,并分为6组：空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。经糖耐康药物血清干预后,其表达逐步下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

丹参酮ⅡA联合DAPT对UUO模型大鼠肾组织 Notch/Jagged通路相关蛋白表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA配伍γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸-t-丁酯(DAPT)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾组织Notch/Jagged通路相关蛋白NICD、Hey1、Rbp-Jk及ColⅠ表达的影响,探讨其防治肾纤维化的分子机制。方法取24只大鼠结扎右侧输尿管建立UUO模型,随机分为模型组、丹参酮ⅡA组、DAPT组、配伍组,每组6只。另取6只大鼠设为正常组。正常组及模型组给予羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,其余各给药组分别给予丹参酮ⅡA(25 mg/kg)、DAPT(12 mg/kg)、丹参酮ⅡA(25 mg/kg)+DAPT(12 mg/kg)灌胃,2周后处死大鼠取右肾组织。采用Masson染色观察肾组织胶原纤维,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织NICD、Hey1表达,Western Blot技术检测各组大鼠肾组织Rbp-Jk、ColⅠ表达。结果与正常组比较,模型组Masson染色评分升高(P0.05),NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均升高(P0.05)。与模型组比较,各给药组Masson染色评分、NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均降低(P0.05)。与丹参酮ⅡA组及DAPT组比较,配伍组Masson评分、NICD、Hey1、Rbp-Jk、ColⅠ蛋白表达均降低(P0.05)。结论丹参酮ⅡA配伍DAPT可改善UUO模型肾间质病理损害,减轻肾纤维化过程中胶原纤维合成沉积,其机制可能与抑制NICD、Rbp-Jk、Hey1及ColⅠ在肾组织中的表达,影响Notch/Jagged信号途径转导相关。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞CTGF、PAI-1、MMP-9 mRNA表达的影响

目的 观察止消通脉宁药物血清(以下简称“药物血清”)清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA 的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+ 10％低剂量药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+ 10％中剂量药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+ 10％高剂量药物血清).药物干预24h后,荧光定量PCR检测CTGF、PAI-1和MMP-9 mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA表达显著上升,MMP-9 mRNA表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经止消通脉宁药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA表达逐步下降,MMP-9 mRNA表达逐步上升,与单纯TGF-β 1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF、PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关.     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导的 人肾小管上皮细胞纤维化细胞因子的影响

目的 观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化细胞因子的作用,探讨糖耐康防治肾纤维化的作用机理.方法 将HK-2 细胞用含10 %胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3 组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清).药物干预24 h 后,荧光定量PCR 检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经糖耐康药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA 的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子表达有关.     

丹参酮ⅡA对缺血再灌注大鼠心肌Notch信号通路的影响

目的:探讨丹参酮IIA对大鼠心肌缺血再灌注损伤是否有保护作用,其机制是否通过调控Notch信号通路发挥抗氧化应激,进而保护心肌,为丹参酮IIA应用于心肌缺血再灌注损伤治疗提供分子生物学依据。方法:将32只SD大鼠随机分为4组:正常组、I/R组、DAPT+I/R组、丹参酮IIA+I/R组,每组8只。采用麻醉大鼠冠脉结扎再松开法,制备大鼠心肌缺血再灌注模型。正常组:平衡灌注120 min;I/R组:平衡灌注15 min,结扎冠脉30 min,再灌60 min;DAPT+I/R组:平衡灌注15 min,结扎30 min,DAPT灌注20 min,再灌60 min;丹参酮IIA+I/R组:平衡灌注15 min,结扎30 min,丹参酮IIA灌注20 min,再灌60 min。检测各组大鼠心肌组织内活性氧水平及乳酸脱氢酶的含量。用Real-time PCR检测Notch信号通路受体Notch1和下游信号转录分子Hes1及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达。Western blot检测Notch1,Hes1,HIF-1α蛋白的表达。结果:与正常组比较,I/R模型组心肌内ROS水平、LDH含量显著升高(P<0.001),Notch1、Hes1、HIF-1α的mRNA的表达明显增高(P<0.001)及蛋白的表达也增高。与模型组比较,DAPT处理组、丹参酮ⅡA处理组ROS水平、LDH含量、Hes1、HIF-1α的mRNA的表达明显下降(P<0.001),DAPT处理组、丹参酮ⅡA处理组Notch1mRNA的表达下降(P<0.01,P<0.05),与模型组比较,Notch1,Hes1,HIF-1α蛋白的表达也有所下降。结论 :丹参酮ⅡA通过抑制Notch信号通路,继而抗氧化应激反应,发挥对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的人肺动脉内皮细胞Dll4/Notch4信号的调控作用

目的:观察补阳还五汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)Dll4/Notch4信号的调控作用。方法:以53.36 g/(kg·d)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,TGF-β1诱导建立内皮间质转化(EndMT)模型,设立空白组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+TGF-β1)、DAPT组(10%空白血清+DAPT+TGF-β1)、10%含药血清组(10%含药血清+TGF-β1)、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和2.5%含药血清组(2.5%含药血清+7.5%空白血清+TGF-β1)6组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1蛋白的表达,采用免疫共沉淀(Co-IP)法检测各组HPAEC细胞NICD4与CBF1的相互作用。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),且NICD4与CBF1有结合作用;与模型组比较,DAPT组和补阳还五汤各剂量含药血清组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1 mRNA及蛋白表达均降低,NICD4与CBF1的结合被抑制,随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可抑制TGF-β1诱导的HPAEC细胞的Dll4/Notch4信号,这可能是其干预内皮间质转化的机制之一。     

二陈汤加味通过Jagged1/Notch1/Hes1信号通路对慢性阻塞性肺疾病的抗炎机制

目的：观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中Jagged1/Notch1/Hes1信号通路中关键分子表达的影响,探讨二陈汤加味通过Jagged1/Notch1/Hes1信号通路对COPD抗炎的作用及分子机制。方法：将60只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量（5、10、20·kg-1）和γ-分泌酶抑制剂（DAPT）组,每组10只。以烟熏联合气管滴注脂多糖（LPS）的方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃（ig）给药;DAPT组ig DAPT(0.02 g·kg-1);正常组及模型组ig等体积生理盐水。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定各组血清中Notch1、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、白细胞活化黏附分子（ALCAM）和可溶性血管黏附分子-1(sVCAM-1)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中Jagged1、Notch1和Hes1 mRNA表达,免疫组织化学（IHC）法检测大鼠肺组织中Jagged1、Notch1、Notch1胞内段（NICD1）和Hes1蛋白表达。...     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

加味六安煎对咳嗽变异性哮喘豚鼠气道重塑关键通路及因子的影响

目的：研究加味六安煎对咳嗽变异性哮喘（CVA）豚鼠肺组织气道重塑关键因子转化生长因子-β（TGF-β）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达水平及Notch通路关键基因Notch受体1（Notch1）、δ样典型Notch配体1（Delta1）、锯齿状典型Notch配体1（Jagged1）、发状分裂相关增强子1（Hes1）表达的影响，探讨加味六安煎治疗CVA气道重塑的作用机制。方法：将30只雄性豚鼠随机分为正常对照组、CVA模型组、孟鲁司特钠组、加味六安煎低、中、高剂量组，每组5只。除正常对照组外，每组以卵蛋白（OVA）及氢氧化铝[Al(OH)3]腹腔注射致敏后以OVA雾化激发复制CVA模型，各组给予相应药物处理。观察肺组织病理形态，测定肺组织中TGF-β、MMP-9，检测肺组织中Notch1、Delta1、Jagged1及Hes1信使核糖核酸（mRNA）水平。结果：1）CVA模型组肺组织出现炎症细胞浸润，充血水肿，基底膜增厚，部分肺泡塌陷，各观察组中肺组织炎症细胞浸润、充血水肿等均不同程度减轻。2）CVA模型组中TGF-β、MMP-9表达水平较正常对照组升高；加味六安煎中、高剂量组TGF-β、MMP-9表达水平较CVA模型组均降低。3）CVA模型组与正常对照组比较，肺组织Notch1、Jagged1及Hes1 mRNA表达升高，Delta1 mRNA表达水平降低；与CVA模型组比较，加味六安煎高剂量组中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA降低，加味六安煎中、高剂量组中Delta1 mRNA表达升高。结论：加味六安煎可能通过调节Notch关键基因表达，改善T辅助细胞1/T辅助细胞2（Th1/Th2）失衡，减轻气道炎症，进而调节肺组织中TGF-β和MMP-9表达，改善气道重塑。     

肾络通对肾小管间质纤维化大鼠肾素-血管紧张素系统的影响

目的:观察肾络通对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠肾组织肾素血管紧张素系统(RAS)及转化生长因子-β1(TGF-β1)、TGF-β1 mRNA袁达和纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的影响.方法:采用生化、放射免疫法及免疫组织化学、原位杂交等方法观察大鼠肾功能,肾组织肾素活性、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)水平及TGF-β1、FN、LN的蛋白表达和TGF-β1 mRNA表达.结果:肾络通及缬沙坦组肾功能明显改善,肾素活性、ANGⅡ水平有所下降,TGF-β1、FN、LN的蛋白表达及TF-β1 mfRNA减少.结论:肾络通可能通过调节RAS,抑制TGF-β1和TGF-β1 mRNA的表达,减少细胞外基质的沉积,减轻肾小管间质纤维化进程.     

丹参酮ⅡA对小鼠肝纤维化的干预作用

目的 通过观察胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP7）、转化生长因子-β1 (TGF- β1）/Smad3信号通路在丹参酮ⅡA作用的肝纤维化小鼠肝组织中的作用,探讨丹参酮ⅡA护肝作用的新机制。 方法 腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）制备肝纤维化模型。将36只雄性昆明小鼠随机分为5组：正常对照组、4周模型组、4周预防组、6周模型组、3周治疗组。检测血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）和乳酸脱氢酶（LDH）活力,进行HE和Masson染色观察肝组织形态学变化,免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α--SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、纤维粘连蛋白(FN)、TGF-β1、Smad3和IGFBP7的表达;用TUNEL方法检测肝细胞凋亡;Western blot 检测肝组织FN、Smad3和 IGFBP7的含量。 结果 分别与4周和6周模型组比较,4周预防组和3周治疗组血清ALT、LDH含量明显降低,肝组织损伤显著改善,肝细胞凋亡指数降低;肝组织α-SMA、collagenⅠ、FN、TGF-β1、Smad3和IGFBP7的表达亦明显减少;肝组织FN、IGFBP7和Smad3含量减少,各组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 丹参酮ⅡA具有改善肝功能、抑制肝星状细胞活化、减少细胞外基质(ECM)生成、保护肝细胞的作用,其机制可能与阻止TGF-β1/Smad3信号通路,降低肝组织IGFBP7的表达有关。     

糖耐康对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。     

丹皮酚对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的抑制作用及其机制研究

目的:探讨丹皮酚(Paeonolum,Pae)对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的抑制作用及机制。方法:将细胞分为5组:无血清对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+10 mg/L Pae组、TGF-β_1+50 mg/L Pae组、TGF-β_1+100 mg/L Pae组。TGF-β_1作用24 h,后加入相应药物继续培养48 h,用倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,Western blot法检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达的变化,RT-PCR法检测Twist mRNA表达变化。结果:①倒置显微镜下观察:10μg/L TGF-β_1刺激72 h后,HK-2细胞形态发生明显改变,变成长梭形,且细胞间的缝隙变大,Pae各个剂量组作用后,细胞的形态趋向于铺路石状,高剂量组变化最显著。②Western blot结果显示:丹皮酚组能剂量依赖地提高E-cadherin蛋白表达,降低Vimentin蛋白表达。③RT-PCR结果显示丹皮酚能剂量依赖地降低HK-2细胞的Twist mRNA表达。结论:丹皮酚能显著抑制TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化萁作用机制可能与抑制Twist mRNA表达有关。     

血府逐瘀胶囊调控血管新生中Jagged1/Notch信号的作用机制

目的:探讨Jagged1/Notch信号通路在血府逐瘀胶囊调控血管新生中的作用。方法:以2.5%的血府逐瘀胶囊含药血清和空白血清分别干预人微血管内皮细胞(HMEC-1),通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测药物处理细胞12,24,36,48 h时Jagged1 mRNA水平的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物处理细胞12,24,48 h时Jagged1在蛋白质水平的表达;在血府逐瘀胶囊促血管新生最佳药效条件下,使用γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)阻断Notch信号通路,设置DAPT处理组,二甲基亚砜(DMSO)溶剂组和空白组,通过体外成血管实验检测抑制Jagged1/Notch信号对药物诱导HMEC-1体外成血管能力的影响。结果:血府逐瘀胶囊含药血清干预内皮细胞12 h能上调Jagged1在mRNA水平表达(P0.01),药物干预细胞24 h能同时上调Jagged1在mRNA和蛋白水平表达(P0.05);DAPT阻断Notch信号后,药物促体外成血管能力下降。结论:血府逐瘀胶囊可通过调控Jagged1表达,影响Jagged1/Notch信号通路,从而调控血管新生。     

止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。