弓形虫主要表膜P30抗原的纯化与鉴定

目的 应用单克隆抗体免疫亲和层析技术提纯弓形虫主要表膜Ｐ３０抗原并进行鉴定。方法 将我们已建立的分泌抗表膜Ｐ３０抗原单克隆抗体的Ｅ３杂交瘤细胞注入ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔,收集腹水,用饱和硫酸胺沉淀和ＤＥＡＥ－－纤维柱层析法提纯单克隆抗体,将其偶联至溴化氢活化的琼脂糖４Ｂ上装柱,经免疫亲和层析技术,从大量的低功率超声粉碎速殖子抗原中分离纯化Ｐ３０蛋白质,并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行鉴定。结果 本次实验约获得了８．１ｍｇ的Ｐ３０蛋白质,且纯度较高。结论 单克隆抗体免疫亲和层析技术可获得一定量的Ｐ３０抗原。     

弓形虫主要表膜P30抗原的免疫保护作用研究

目的 研究弓形虫主要表膜P30抗原免疫小鼠所诱导的免疫性保护作用及免疫保护机制。方法 将单克隆抗体免疫亲和层析分离纯化的P30抗原免疫C57BL／6纯系小鼠,然后用弓形虫RH株速殖子和Fukaya株包衰攻击感染,观察P30抗原免疫对急性弓形虫感染鼠死亡时间及慢性感染鼠脑内包囊形成的影响,同时对感染后不同时间鼠血清特异性抗体水平、IL－2及IFN－r细胞因子水平和脾T淋巴细胞亚群动态变化进行了测试分析。结果 显示P30抗原免疫可在一定程度上延长感染小鼠的存活时间,减少脑内包囊的形成数量,增强小鼠抵抗急慢性弓形虫感染的能力。在感染后不同时期免疫鼠血清中特异性抗休还清瘃IFN－r、IL－2水平均高于同期对照鼠,而且免疫鼠脾CD4^ t CD8^ T淋纠细胞尤其是CD8^ 细胞的数量在感染早期升高较快,至感染后4周达高峰,两者的比值随感染时间的延长而逐渐下降。结论 P30抗原免疫对感染小鼠具有明显的保护作用,是细胞免疫和体液免疫共同作用的结果,尤其是细胞免疫可能发挥着更为重要的作用。     

抗人乳腺癌血清抗原单克隆抗体GB2的制备及鉴定

采用人乳腺癌血清抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经ＥＬＩＳＡ筛选，有限稀释及克隆后获得了一析玢泌特异抗体的杂交瘤细胞株，命名为单克隆抗体ＧＰ２（ＭｃＡｂＧＢ２）。ＭｃＡｂＧＢ２经硫酸铵及ＤＥＡＥ纤维素纯化后效价达１：２×１０＾６，经琼脂糖免疫双扩证明ＭｃＡｂＧＢ２属小鼠ＩｇＧ１亚类。免疫印迹结果表明ＭｃＡｂＧＢ２识别的抗原呈两条区带，分子量分别为１１６ｋｄ及４５ｋｄ     

抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗hMOF的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-hMOF融合蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗hMOF单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳...     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

The hepatocellular carcinoma (HCC) cell line, QGY-7703, derived from a Chinese patient, was used to immunize the BALB/c mice. Fifteen hybridomas producing McAb that reacted with QGY-7703 cells were isolated from 858 hybridomas created in three cell fusions. In further studies two McAb, namely, AQGY1 and A-QGY2, were selected which specifically stained HCC cells grown in vitro. The reactivity of these McAb was not removed by the absorption by homogenates of the normal liver, but was by homogenates of HCC cells. A-QGY1 and A-QGY2 also reacted definitely with HCC cells in liver tissues of HCC patients, but neither with other cells in the tissues nor with nontransformed liver tissues of the same patients. Furthermore these two McAb stained the adult or fetal liver tissues, nor all of the other normal or tumor tissues that had been tested. Blocking and absorbing experiments revealed that A-QGY1 and AQGY2 antigens had no immunohomogenicity with antigens such as HBsAg, HBcAg, HBeAg, AFP and CEA. The specificity of these two McAb may be used potentially for the sero diagnosis, histologic identification, radioimmunoimaging and destruction of human hepatocellular carcinoma.     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

用O型人红细胞免疫的Balb/c小鼠脾细胞和NS--1骨髓瘤细胞融合、克隆后,获得两株杂交瘤细胞株。两株细胞分泌的单克隆抗体都是IgG_s亚类。文中对此类抗体的特性进行探讨。吸收试验表明,这两种单克隆抗体并不是和红细胞H抗原反应,但可能是同ABO各型红细胞上一种共同抗原反应。     

抗人尿激酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人尿激酶受体单克隆抗体，为今后uＰＡＲ病理生理作用及临床铁研究提供新 的手段。方法 利用杂交瘤技术，用经ＰＭＡ刺激的Ｕ９３７细胞与可溶性尿激酶受体（suＰＡＲ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，与ＳＰ２／０细胞融合。结果 获得国内第１组４株抗人尿激酶受体（uＰＡＲ）单抗，分别命名为ＳＺ－９８、ＳＺ－９９、ＳＺ－１００、ＳＺ －１０１。结论 ４株单抗均能与uＰＡＲ牧民性结合?能与Ｕ９３７细胞及经ＰＭＡ作用     

抗钙调素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备及鉴定抗钙调素单克隆抗体。方法 以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB／C小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检测，应用硫酸铵盐析法和离子交换层析法进行抗体纯化。分别采用免疫印迹、免疫酶斑点法鉴定抗钙调素单克隆抗体的性质。结果 脾细胞与骨髓瘤细胞的融合率为85％。阳性克隆率为0．35％，获得两株动物钙调素单克隆抗体，抗体效价为1：1000，对钙调素有较强的专一性。结论 此研究制备出了高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体。     

弓形虫RH株表面抗原P30基因重组质粒的构建及鉴定

目的：构建弓形虫RH株表面抗原P30基因的重组表达质粒,为下一步免疫与诊断研究制备高纯度P30重组蛋白奠定基础。方法：自弓形虫RH株感染小鼠腹水中收集速殖子,用酚／氯仿法提取基因组DNA,用PCR法扩增编码P30的基因片段(经电泳切带纯化),定向插入到PQE-30表达质粒中,转化入TG1宿主菌,在含有青霉素的SOB平板上筛选阳性重组子,采用酶切、PCR扩增和DNA序列分析等方法对插入片段进行鉴定。结果：阳性重组质粒PQE30-P30经Sal HindⅢ双酶切下的插片及PCR扩增产物均与原插入的P30基因片段大小一致为976bp,通过序列测定证实插入片段为编码P30的基因片段。结论：成功构建弓形虫表面抗原P30基因的重组质粒PQE30-P30。     

弓形虫表面抗原P22、P30复合基因在原核细胞中表达的研究

目的：对含有P22，P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达，进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法：用IPTG对工程菌进行诱导表达，表达产物行SDS－PAGE蛋白凝胶电泳及Western-Blot免疫印记检测，结果：蛋白电泳结果显示，阳性重组菌比阴性菌在66．5KDa位置上明显多一条带，此条带可与P30抗体结构并使免疫印记显示阳性结果。结论：含有P22、P30基因片段的质粒组体经诱导表达出融合蛋白，其内的组分蛋白P30具有与其相应抗体结合的能力。     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备基因重组人睫状神经营养因子 (rhCNTF)单克隆抗体。方法利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠 ,取其脾细胞与小鼠NS -1骨髓瘤细胞融合 ,制备 3株抗rhCNTF的单克隆抗体 ,分别命名为CA2 、CA6 和BB11。结果 3株抗体类型均为IgG2a,免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体 ;抗体相加试验表明 3株单抗是针对CNTF两个不同的抗原决定簇。     

Expression of p30, the major surface antigen of Toxoplasma gondii, in baculovirus-insect cell system and the evaluation of immune response induced by p30

T~ gondii is an intiacellular ProtOZOan Par- optima gondii have been idelldried. One Of the s~easite and widely knoWn tO be infective in hUman, agricul- antigens, P30, has been isolated from the taChyAnte andthai and domestic ~s. It was estimated that as many idennded to have potential use as subedt yao.ine[3]. TIsas one ed Of the world population may have serological PIDtein is also PI'eSent in most of T~. p30 isevidence of infectionlll. Because of the POSSilile long in- highly anti…     

Expression of P30 gene of Toxoplasma gondii in Spodoptera frugiperda cell and Argyrogramma agnata larva

ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰ３０ｇｅｎｅｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉｉｎ　ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａｃｅｌｌａｎｄＡｒｇｙｒｏｇｒａｍｍａ　ａｇｎａｔａｌａｒｖａＣｈｅｎＸｉａｏｇｕａｎｇ；（陈晓光）；ＬｉｕＧｕｏｚｈａｎｇ（刘国...     

抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析

目的:原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10蛋白,制备单克隆抗体,并进行功能分析?方法:人工合成炭疽杆菌保护性抗原PA10编码基因并克隆入pUC57载体,酶切鉴定后,将PA10编码基因插入原核表达载体pColdⅡ中,测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和低温条件下诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证产物;用HiTrap IMAC HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步验证?以纯化获得PA10重组蛋白为抗原,常规程序免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并检测所制备抗体的中和活性?结果:获得的PA10重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,最终获得了4株特异性的单克隆抗体(分别命名为2G8?5A8?7B3? 9C9)?经体外炭疽毒素保护试验证实,其中1株单抗(7B3)具有较强的中和活性,其保护率可高达96%?结论:本文成功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原PA10,制备了具有中和活性的抗PA单克隆抗体,为构建人源化的抗PA中和抗体奠定基础,从而有望用于炭疽病的治疗?     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的 :寻找具有保护性的弓形虫功能性表位 ,为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法 :通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株 ,观察了体内、外单克隆抗体的保护性效果 ;用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg ,并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME4 9株抗原的交叉反应。结果 :建立了 7个分泌弓形虫McAb的细胞株 ,Western blot显示 7个McAb可识别 4种不同分子量的抗原 ,体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖。在感染后第 3d即可检测到CAg,未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应 ,但是与弓形虫ME4 9株出现了交叉反应带。结论 :7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力 ,有潜在的诊断价值     

弓形虫重组耻垢分枝杆菌M.S-P30-ROP2载体活疫苗构建及鉴定

目的构建和鉴定弓形虫1330-ROP2复合基因重组耻垢分枝杆菌M．s载体活疫苗。方法用亚克隆技术把P30-ROP2复合基因克隆入大肠杆菌／分枝杆菌穿梭质粒pSTM3，构建重组质粒pSTM3-P30-ROP2，电穿孔法导入耻垢分枝杆菌中，潮霉素筛选、PCR法鉴定阳性转化子，温度诱导表达鉴定。结果获得pSTM3-P30-ROP2重组穿梭表达载体，SDS—PAGE结果显示P30-ROP2复合基因表迭蛋白产物分子量约为66kDa。结论成功构建弓形虫复合抗原基因P30-ROP2重组耻垢分枝杆菌疫苗，为弓形虫病的防治提供了-种新方法。