二次PCR检测HL60细胞系PML—RARα融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲα。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｓｔｅｒ－ＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ６０细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ６０细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０＾－６个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测     

二次PCR检测HL_（60）细胞系PML－RAR_α融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲ_α。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｏｓｔｅｒＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ_（６０）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ_（６０）细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０￣（－６）个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测ＡＰＬ微量残留白血病细胞一种灵敏、有效的手段。     

急性早幼粒细胞白血病PML-RAR_αmRNA的检测和临床意义

应用热启动ＲＴ ＰＣＲ 方法检测急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ，与传统“巢式”ＰＣＲ 比较，仅需１ 对引物而获１０－ ４ 的敏感性。对７ 例ＡＰＬ患者，分别在诊断时及缓解后进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ的动态监测。这些患者分别接受如下治疗：２ 例仅给予全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 治疗；其余５ 例接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗。所有缓解后患者均进一步接受强化治疗。每月均对骨髓及外周血标本进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ 的检测，发现仅予ＡＴＲＡ 可获血液学缓解，但不能达到ＰＣＲ 缓解，骨髓及外周血仍存在ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ；而接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗获缓解后，骨髓及外周血ＰＣＲ 结果均阴性，显示了对恶性克隆的有效根除。２ 例患者ＰＣＲ 结果持续阳性，并在６ 个月后复发。ＰＣＲ方法不仅可评价化疗效果，指导临床用药，更可以预测复发。     

RT-PCR检测氧化砷治疗APL复发患者的PML-RARα融合基因

目的：探讨急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）患者在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗过程中，ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的变化。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术动态观察１４例ＡＰＬ复发患者在Ａｓ２Ｏ３治疗过程中，骨髓单个核细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本的改变。结果：检测的１１例诱导缓解患者中，９例存在阳性ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本，随访的６例患者中，３例呈现ＰＭＬ－ＲＡＲα转阴，但２例分别在缓解后５、７个月转阳。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本可能在一定程度上为氧化砷的疗效及预后判断提供依据     

急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因异构体的临床意义

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体及其临床关系。方法：用逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测２１例初诊ＡＰＬ患者细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因转录本，并分析其对临床特征的可能不同影响。结果：在ＡＴＲＡ诱导治疗过程中，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体ＡＰＬ组的早期死亡和复发率（４／８）（５０％）高于长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组（２／１３）（１５．４％）；与长型异构体相反，存活期２月至２年患者含短型异构体的比例（７５％）大于存活期２年以上组（３３．３％）；未观察到患者血液学参数改变与不同ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体有关。结论：与长型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组ＡＰＬ患者相比，短型ＰＭＬ－ＲＡＲα异构体组的预后可能更差。     

NB4细胞PML—RARα融合基因表达对维甲酸诱导分化作用的影响

目的研究急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞ＰＭＬ－ＲＡＲα（早幼粒细胞白血病基因－维甲酸受体基因α）融合基因的表达对维甲酸诱导分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与维甲酸治疗作用间的关系。方法用反义核酸来阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达并用逆转录－聚合酶链式反应检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能。通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ（硝基四氮唑蓝）还原试验进行判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果反义核酸阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα表达后使维甲酸对ＮＢ４细胞的生长抑制作用增强，Ｓ期细胞由５２％降至２９％，同时ＮＢＴ还原能力提高，细胞表面标志变化明显，提示对维甲酸敏感性增加。结论ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达不仅与ＡＰＬ的发病有关，而且钝化了维甲酸对ＡＰＬ细胞的诱导分化作用。     

PML-RAR_α融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ），早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα），肯定了２例与急非淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ。１５例缓解在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型。８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此融合基因均为阴性。     

灵芝多糖（GL—B）对肿瘤坏死因子α和γ干扰素产生及其mRNA表 …

探讨灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞,肿瘤坏死因子α,脾细胞γ干扰素的产生及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法;采集小鼠ＰＭ和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定ＴＮＦα,ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮγ;ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果;ＧＬ－Ｂ２５－４００ｍｇ．Ｌ＾－１使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα活性升高,并呈剂量依赖关系,２４ｈ在高峰,７２ｈ后开始减少。     

维甲酸和三氧化砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞组织因子表 …

目的 探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）在体内外对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞组织因子（ＴＦ）表达的意义。方法 利用复钙时间测定、ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法,分别检测了ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３治疗前后ＡＰＬ患者（２３例）骨髓单个核细胞的促凝活性、ＴＦ抗原及其ｍＲＮＡ的转录水平,同时还检测了使用ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３处理ＡＰＬ细胞株ＮＢ４－Ｒ１细胞以及转染ＰＭＬ－ＲＡＲａ融     

PML—RARa融合基因检测方法学的建立

应用筑巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２３例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）早幼粒白血病基因ＰＭＬ维甲酸受体α融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲａ）肯定了２例与急淋白血病Ｍ２不易鉴别的不典型ＡＰＬ，１５例缓在２年以内ＡＰＬ此融合基因均阳性，其中Ｌ型８例，Ｓ型７例，Ｌ型中尚发现一个变异型，８例缓解在３年以上ＡＰＬ，此融合基因４例阳性，其中Ｌ型３例，Ｓ型１例，Ｌ型１例已有复发倾向，而缓解超过４年ＡＰＬ此     

急性髓细胞性白病融合基因异构体分型与bcl—2表达,临床预 …

采用免疫组化、原位杂交方法,测定２８例急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）患者的抗凋亡基因ｂｃｌ－２蛋白／ｍＲＮＡ表达水平,并分析ＡＰＬ融合基因异构体分型与ｂｃｌ－２基因表达、临床预后的关系。结果表明,异构体之间的ｂｃｌ－２蛋白／ｍＲＮＡ表达水平差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。提示ＰＭＬ－ＲＡＰα转录构型不影响临床特征和预后。     

RT-PCR检测急性早幼粒白血病 bcl-2 mRNA表达

应用聚合酶链反应方法，测定２０例急性早幼粒白血病患者的抗调亡基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平，并分析基因与急性早幼粒白血病ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因异构体的关系。结果表明，异构体之间的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本构型不影响临床特征和预后     

RT—PCR检测急性早幼粒白血病bcl—2mRNA表达

应用聚合酶链反应方法，测定２０例急性早幼粒白血病患者的抗凋亡基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平，并分析基因与急性早幼粒白血病ＰＭＬ－ＰＡＲα融合基因异构体的关系。结果表明，异构体之间的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达水平差异性无显著性（Ｐ〉０．０５），提示ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本构型不影响临床特征和预后。     

幽门螺杆菌在不同培养基上生长情况的比较

探讨灵芝多糖（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄｕｍ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｂ, ＧＬ－Ｂ）对小鼠腹腔巨噬细胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ,ＰＭ）、肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｌｐｈａ, ＴＮＦα）、肿细胞 γ干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ,ＩＦＮγ）的产生及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法;采集小鼠ＰＭ和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定ＴＮＦα。ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮγ;ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：ＧＬ－Ｂ２５～４００ｍｇ·Ｌ~（－１）使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性升高,并呈剂量依赖关系,２４ ｈ达高峰,７２ ｈ后开始减少。 ＧＬ－Ｂ对小鼠 ＰＭ的 ＴＮＦα ｍＲＮＡ表达有显著促进作用。ＧＬ－Ｂ１２．５～２００ｍｇ~（－１）明显增加正常小鼠脾细胞培养上清中ＩＦＮγ产生。２４ｈ内随培养时间的延长而增加,４８ ｈ后开始减少。ＧＬ－Ｂ对ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达有促进作用。结论：灵芝多糖ＧＬ－Ｂ明显促进小鼠ＰＭ及脾细胞 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ ｍＲＮＡ的表达,增加 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ的产生。     

急性髓细胞白血病细胞IL-2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病细胞有ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达分别为２８例（６８．３％）和３２例（７８．０％），ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ同时表达者２１例（５１．２％）。ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞对ｒｈＩＬ－２的体外反应呈不均一性，表现为细胞增殖、受抑或不反应，８例中仅１例Ｍ５型患者细胞呈增殖反应。本研究表明ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒ基因表达是一普遍现象，这些细胞在体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性，大多表现为无反应或受抑。     

头孢地秦对细胞因子及细胞因子mRNA表达的影响

目的：探讨头孢地对正常及金黄色葡萄球菌感染的败血症小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭ）肿瘤坏死因子与白细胞介素６（ＩＬ－６）分泌及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采集小鼠ＰＭ，体外给药，分离细胞培养上清。生物检测法测定ＴＮＦα，ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ－６；ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：头孢地秦使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性降低，使金黄色葡萄球菌感染小鼠ＰＭ４８ｈ２上清中ＴＮＦα活性升高。２００ｍ     

急性髓细胞白血病细胞IL—2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２Ｒα ｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒＨＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ组织ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病     

uPAR mRNA测定及其在U937细胞中的表达

目的 研究凝血酶、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ等对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的影响,观察凝血系统、炎症介质与纤溶功能变化间的关系。 方法 建立并应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定培养Ｕ９３７细胞的ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ。 结果：１．经测定批间变异系数（ＣＶ间）确认了ＲＴ－ＰＣＲ法测定ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的稳定性;２．以不同浓度凝血酶刺激２４ｈ,对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ有抑制和促进两种不     

头孢地秦对细胞因子及细胞因子mRNA表达的影响

目的：探讨头孢地秦对正常及金黄色葡萄球菌感染的败血症小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭ）肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与白细胞介素６（ＩＬ６）分泌及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采集小鼠ＰＭ，体外给药，分离细胞培养上清。生物检测法测定ＴＮＦα，ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ６；ＲＴＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：头孢地秦使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性降低，使金黄色葡萄球菌感染小鼠ＰＭ４８ｈ培养上清中ＴＮＦα活性升高。２００ｍｇ／Ｌ的头孢地秦对正常小鼠ＰＭ的ＴＮＦαｍＲＮＡ表达有显著抑制作用，但对感染小鼠ＴＮＦαｍＲＮＡ表达没有明显影响。头孢地秦抑制正常小鼠ＰＭ４８ｈ培养上清中ＩＬ６的产生，明显增加金黄色葡萄球菌感染小鼠ＰＭ培养上清中的ＩＬ６。头孢地秦对ＩＬ６ｍＲＮＡ表达的影响与细胞因子的改变一致。结论：头孢地秦对正常和感染状态下小鼠ＴＮＦα和ＩＬ６产生的影响不同，其对ｍＲＮＡ表达的影响与细胞因子的检测结果一致     

TNFα在重症急性胰腺炎致病机制中的作用

目的 探讨重症急性胰腺炎病情加重机制中ＴＮＦα的作用。方法 将４０只ＳＤ大鼠,随机分成４组。Ａ组,ＰＭＮ－弹力蛋白酶处理组;Ｂ组,单纯诱模组,Ｃ组,ＭＤＬ２７３２４治疗组;Ｄ组,假手术组,各组动物６ｈ后处死。取胰腺标本观察病理变化。采用酶联免疫法测定血浆ＰＭＮ－弹力蛋白酶含量的变化。ＲＴ－ＰＣＲ方法测定外周血细胞中ＴＮＦαｍＲＮＡ的表达水平。结果 Ａ、Ｂ、Ｃ组胰腺组织有不同程度的胰腺腺泡坏死。炎性