蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究

目的：探讨蟾蜍灵对胃癌MGC-803细胞周期及周期蛋白的影响。方法：采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力；瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化；流式细胞仪检测细胞周期；免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达。结果：1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC-803细胞的增殖，24、48、72h的IC50分别为0．086、0．048和0．036umol／L。2)蟾蜍灵在0．01～0．1μmol／L时作用24～72h，形态学上可见细胞体积增大，出现双核、多核细胞。3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0．01～0．1μmol／L时可明显诱导细胞周期G2／M期阻滞。4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC-803细胞，观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调。结论：蟾蜍灵引起胃癌MGC-803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关。     

大蒜素诱导人胃癌细胞M期阻滞的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌细胞系MGC803和SGC7901细胞周期的影响及其作用机制。方法以台盼蓝拒染法检测人胃癌细胞系MGC803和SGC7901细胞的增殖抑制率;以透射电镜观察两种胃癌细胞的直接损伤改变;以流式细胞仪及瑞士姬姆萨染色光镜观察两种胃癌细胞周期的改变;以SP免疫组化及RTPCR方法检测两种胃癌细胞的p21WAF1和p16INK4基因及蛋白表达的变化。结果大蒜素可抑制MGC803细胞生长,24h药物半数抑制浓度(IC50)为6.4μg/ml;也可抑制SGC7901细胞的生长,24hIC50为7.3μg/ml。12μg/ml的大蒜素作用两种胃癌细胞24h后,细胞出现急性直接损伤,膜系统改变明显。以3μg/ml、6μg/ml、9μg/ml终浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞系24h后,与对照组比较,G0和G1期细胞周期百分比(%)明显减少,而G2和M期明显增加(P<0.01);6μg/ml大蒜素作用培养两种胃癌细胞24h后,与对照组比较,细胞分裂指数明显增加,提示两种细胞系经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于M期。经大蒜素处理后,MGC803细胞的p21WAF1和p16INK4基因及蛋白表达均明显增加;SGC7901细胞的p21WAF1基因及蛋白表达明显增加。结论大蒜素可使MGC803及SGC7901两种细胞周期阻滞于M期;大蒜素的M期阻滞作用可能与其上调细胞的p21WAF1和p16INK4基因表达有关。     

过氧化物酶体激活物活化受体γ活化对人胃癌细胞周期的影响

目的:探讨过氧化物酶体激活物活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)活化在诱导人胃癌MGC803细胞周期停滞中的作用。方法:MTT法检测吡格列酮(pioglitazone,PGZ)对MGC803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的改变;RT-PCR方法检测PPARγ、细胞周期蛋白Cyclin D1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4的表达。结果:0.1~10μmol/L PGZ作用MGC803细胞96 h后能显著抑制细胞增殖;10μmol/L PGZ分别作用48、72和96 h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞;在MGC803细胞中PPARγ表达较弱,经10μmol/L PGZ作用48 h表达水平显著增加;作用96 h,细胞中细胞周期调节因子CDK4表达显著降低(P<0.01),Cyclin D1轻微下调。结论:PPARγ活化能诱导MGC803细胞周期G1期阻滞,该作用可能与其下调细胞周期因子CDK4和Cyclin D1的表达有关。     

PPARγ激活剂罗格列酮对人胃癌MGC803细胞周期及其PTEN表达的影响

目的探讨不同浓度的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞增殖及其PTEN蛋白表达的影响。方法不同浓度的罗格列酮(12.5、25、50、100μmol/L)分别与MGC803细胞系共同培养48 h后,采用流式细胞仪检测罗格列酮对MGC803细胞周期的影响,免疫细胞化学检测MGC803细胞PTEN蛋白表达。结果罗格列酮使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,呈剂量依赖性,并诱导PTEN表达上调。结论罗格列酮可以通过诱导PTEN表达上调,使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,进而抑制人胃癌MGC803细胞生长,这可能是PPARγ激活剂抗肿瘤的机制之一。     

9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制

背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cisretinoicacid,9-cisRA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cisRA对胃癌的作用。方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoidXreceptor!,RXRα)、细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cisRA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达。结果:0.1～10μmol/L9-cisRA作用MGC803细胞96h,能显著抑制细胞增殖。10μmol/L9-cisRA分别作用48、72和96h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞。作用72h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48h开始,Bcl-2表达即显著下降。在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10μmol/L9-cisRA作用48h其表达水平显著增加(P<0.01);作用96h,细胞中CyclinD1和CDK4表达显著降低(P<0.01)。结论:9-cisRA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子CyclinD1和CDK4表达有关。     

蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的探讨蟾蜍毒素联合紫杉醇抑制人胃癌MGC803细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法应用MTT法检测不同浓度蟾蜍毒素及紫杉醇单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Westernblot法检测C-FLIPL、Caspase-8蛋白的表达。结果(1)蟾蜍毒素及紫杉醇单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率明显高于单药组,差异有统计学意义(P<0.05)。24、48及72 h联合指数(CI)分别为0.77、0.86、0.72;(2) 40 nmol/L蟾蜍毒素、25 ng/ml紫杉醇单药及联合作用细胞24 h,流式细胞仪检测凋亡率分别为14.13%、19.74%及53.30%,联合组与单药组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)Western blot结果显示,蟾蜍毒素、紫杉醇单药组及联合组作用细胞24 h后,C-FLIPL蛋白表达依次下降至对照组的78.38%、64.71%、46.73%,Caspase-8蛋白表达上调至对照组的150.25%,156.86%,180.58%。结论蟾蜍毒素协同紫杉醇诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调C-FLIP、上调Caspase-8蛋白有关。     

PPARγ的配体15d-PGJ2对人类胃癌细胞生长的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator activated receptor γ，PPARγ）的配体15-脱氧前列腺素J2（15-deoxy-Δ^12,14-prostaglandin J2，15d—PGj2）对人类胃癌MGC803细胞生长的影响及其机制。方法：RT—PCR检测PPARγ和survivin mRNA，Western blot检测PPARγ、survivin、S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase-assoeiated protein2，Skp2）和p27蛋白;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期分布；Hoechst33342染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果：PPARγmRNA和蛋自在MGC803细胞均表达。15d-PGJ2作用MGC803细胞24h后，5、10、20、30、40μmol／L组的增殖抑制率和凋亡率均高于0μmol／L组（P〈0．001），且随浓度的增加而升高。30μmol／L组的MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率，随时间的延长而升高。G0／G1期细胞比例，30μmol／L组明显高于0μmol／L组（P〈0．001）;S和G2／M期细胞比例，30μmol／L组均明显低于0μmol／L组（分别为P〈0．001，P〈0．01）。随15d0PGJ2作用MGC803细胞浓度的增加，survivin mRNA和蛋白及Skp2蛋白的表达均降低，p27蛋白表达升高。结论：15d-PGJz抑制人胃癌MGC803细胞的增殖、诱导其凋亡并将其阻滞在G0／G1期，survivin和Skp2表达下调及p27表达上调在这个过程中起重要作用，提示15d—PGJ2可能对治疗胃癌有效。     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。     

PPARγ激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖机制的研究

目的 探讨PPAR7激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖的机制。方法 采用MTT法、集落形成实验和流式细胞仪分别观察罗格列酮作用于胃癌MGC803细胞48h对细胞增殖和细胞周期的影响。结果 12．5／μmol／L、25μmol／L、50／μmol／L、100／μmol／L的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞生长抑制率分别为10．85％、32．52％、57．47％、78．94％，罗格列酮处理后MGCS03细胞集落形成明显受到抑制，且细胞周期停滞于G1期。结论 罗格列酮对人胃癌MGCS03细胞的增殖抑制作用与诱导细胞周期G1期停滞有关。     

p38通路在二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用

背景与目的:研究表明p38通路参与了细胞G2/M期阻滞过程的调控,但对其调控机制研究很少.本研究旨在探讨p38通路在二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用及其机制.方法:采用MTT法检测MGC803细胞的生长活性;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响;Western blot法检测药物对P38蛋白、磷酸化P38蛋白、Cdc25C蛋白的表达.结果:MTT法检测结果显示,P38特异性抑制剂SB203580可拮抗DADS对MGC803细胞的抑制增殖作用.流式细胞仪分析表明,30 mg/L的DADS处理MGC803细胞24 h后,G2/M期的比率为39.4%,高于对照组的9.3%(P＜0.05);但用SB203580抑制P38的活性后,DADS诱导的G2/M期比率从39.4%降到21.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS处理MGC803细胞后,p38通路快速激活,磷酸化P38的表达与对照组相比,在20 min内升高3.52倍,而P38总蛋白量没有发生明显改变;DADS作用24 h后,Cdc25C磷酸酶表达降低了62%,而用SB203580抑制剂后,DADS对Cdc25C的抑制作用可以部分逆转(P＜0.05).结论:DADS可能通过激活p38通路使部分MGC803细胞停滞在G2/M期,p38通路调节Cdc25C磷酸酶的表达在DADS诱导MGC803细胞G2/M期阻滞中起着重要作用.     

p53、p16蛋白在52例食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的研究ｐ５３、ｐ１６蛋白表达与食管鳞癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶连结法（ＬＳＡＢ）法检测５２例食管鳞癌ｐ５３、ｐ１６蛋白表达。结果２９例食管鳞癌ｐ５３过度表达,阳性率为５５８％;２１例食管鳞癌ｐ１６阳性,阳性率为４０４％。随着恶性程度增加及病程进展,ｐ５３阳性率逐渐上升,ｐ１６阳性率逐渐下降,两者存在明显负相关。ｐ５３、ｐ１６阳性与组织学分级无关;ｐ５３阳性与浸润深度有关,而ｐ１６阳性与浸润深度无关。ｐ５３、ｐ１６阳性均与淋巴结转移有关。ｐ５３阳性患者死亡率明显高于ｐ５３阴性者,且存活时间短;ｐ１６阴性患者死亡率明显高于ｐ１６阳性者,且存活时间短。结论同时检测食管鳞癌组织ｐ５３、ｐ１６蛋白表达,有助于综合判断食管鳞癌恶性程度、转移潜能和预后。     

非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义

目的:探讨非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义。方法:免疫组织化学SP法检测90例非小细胞肺癌的p-ERK和p-AKT表达状况,分析二者表达与通路上游EGFR、KRAS、PI3K表达及患者部分临床病理参数间的相关关系。结果:非小细胞肺癌中,p-ERK表达阳性率为53.33%,其与患者的性别和吸烟史及肺腺癌的分化程度相关（P<0.05）。p-ERK表达与EGFR及KRAS表达均无显著相关关系（P>0.05）。p-AKT表达阳性率为56.67%,p-AKT表达与EGFR表达显著正相关（r=0.336,P<0.05）,但与PI3K表达无显著相关关系（P>0.05）。p-ERK与p-AKT表达显著正相关（r=0.292,P<0.05）。结论:非小细胞肺癌中可能存在ERK的自身激活,检测ERK与AKT蛋白的磷酸化状态可能对筛选EGFR-TKI治疗获益人群有所帮助。     

鼻咽癌细菌L型感染与PCNA、p21、p53表达的关系

目的：探讨细菌L型可能致癌的机理。方法;用革兰染色和免疫级化染色技术对69例鼻咽癌、20例鼻咽粘膜慢性炎症进行细菌L型检测，同时对L型阳性和阴性组织的PCNA、P21、P53表达进行对比分析。结果;鼻咽癌组的L型检出率为79.7％，与慢性炎症组（75.0％）无显著性差异（P＞0.05），但鼻咽癌组的PCNA、p21、p53表达部显著高于L型阴性组（P＜0.01）。表明L型感染与鼻咽癌的PCNA、p21、p53过度表达存在着相关性及L型感染的组织处于高增殖状态。结合提示L型感染参与了ras原癌基因激活和p53抑癌基因的失活。基因突变可能是L型致癌作用的机制之一。     

舌鳞癌p15和p16蛋白的表达及其意义

背景与目的:多种原发性肿瘤中都存在p15、p16表达异常,但它们与舌肿瘤的关系仍不清楚。本研究旨在探讨二者在舌鳞状细胞癌中的表达特点及其与临床病理和预后的关系。方法:采用免疫组化(超敏SP法)和图像分析技术,检测45例舌鳞癌和10例正常舌组织中p15、p16蛋白表达水平,并将结果与临床病理指标及生存时间进行统计分析。结果:正常舌组织鳞状上皮中均有p15和p16蛋白表达;舌鳞癌p15、p16的缺失率分别为46.7％(21/45)和66.7％(30/45);p16蛋白表达阳性的患者中,80％(12/15)伴有p15蛋白表达,而p15缺失标本中有85.7％(18/21)伴随p16蛋白表达缺失;二者共缺失的患者绝大多数处于临床Ⅲ、Ⅳ期(16/18)。临床Ⅰ、Ⅱ期病例p15和/或p16蛋白表达水平比Ⅲ、Ⅳ期者的表达高(P<0.05);无颈淋巴结转移组蛋白附性表达率高于有转移组(P<0.01)。p15单独或与p16共缺失者与p15和p16蛋白均表达正常者比较,其术后3年生存率降低(P<0.05)。结论:p15和p16蛋白的表达与舌鳞癌的临床分期及颈淋巴结转移有关;p15蛋白单独或与p16共缺失时,舌鳞癌的预后较差。p15和p16蛋白可作为临床评估舌鳞癌浸润、转移和预后的参考指标。     

p27及p57在皮肤鳞状细胞癌和Bowen病中的表达

Objective： To investigate the expression and clinical significance of cyclin dependent kinase inhibitors p27 and p57 in cutaneous squamous cell carcinoma and Bowen＇s disease. Methods： The expression of p27 and p57 were evaluated in 10 normal skin tissues, 25 Bowen＇s disease （BD） and 30 cutaneous squamous cell carcinoma （SCC） with immunohistochemistrical staining. Results： The levels of p27 protein expression in SCC were dramatically lower than those in normal skin and BD （P 〈 0.057. The levels of p57 protein expression in SCC were dramatically lower than those in normal skin and BD （P 〈 0.057. There was a posilk, e correlation between p27 and p57 （r = 0.469, P 〈 0.057. Conclusion： The decrease of p27 and skp2 may be used for considering the biological behavior of human cutaneous squamous cell carcinoma and Bowen＇s disease.     

我国不同地区食管癌中p53蛋白积聚的比较观察

作者收集了中国食管癌三个高发区（郑州、大原、汕头）和一个低发区（广州）的食管鳞癌手术切除标本，福尔马林固定，石蜡包埋，采用CM－1和Do－7作一抗，用免疫组化LSAB法对其进行检测，在四个不同地区p53蛋白积聚率无差异（P＞0．05），阳性率为62．8％（Do－7）。因此，食管鳞癌中p53蛋白积聚是一常见现象，在不同地区，p53的改变在该肿瘤形成过程中的作用是类同的。作者还发现PCNA（Proliferatingcellnuclearantigen）的表达与p53蛋白积聚的分布规律一致，两者阳性等级密切相关（P＜0．01），说明有p53蛋白积聚的肿瘤细胞是处于细胞增殖周期中，可能与肿瘤的预后有一定的关系。     

食管鳞癌自发细胞凋亡和核增殖抗原p53关系的研究

目的通过对食管鳞癌组织中凋亡细胞的原位观察和核增殖抗原（ＰＣＮＡ）的表达状态的研究,探讨不同增殖情况的食管鳞癌组织细胞凋亡情况,同时研究ｐ５３基因的突变和ｐ５３蛋白的表达对食管鳞癌组织细胞凋亡的影响。方法３０例术前未经任何治疗的食管鳞癌手术标本,分别进行凋亡细胞的原位检测（ＴＵＮＥＬ）、ＰＣＮＡ、ｐ５３蛋白的免疫组化染色和ｐ５３基因５,６,７,８外显子ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测。结果不同增殖能力的癌组织中,细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组中,增殖程度高与增殖程度低者之间癌细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组与非突变组、ｐ５３蛋白表达阳性组与非阳性组癌细胞凋亡的程度差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论食管鳞癌组织中,细胞增殖活跃则自发性凋亡也相应增多     

转染wt—p53对小鼠移行细胞癌生物学行为影响的研究

为进一步探讨膀胱瘤的治疗途径,方法利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将外源性野生型ｐ５３基因导入小鼠膀胱移行细胞癌ＢＳＴ７３９细胞中,并行到表达。结果细胞在体外标准条件下,生长增殖率降低。流式细胞计检测：细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比例明显增高,凋亡指数升高,细胞生长速度减低,细胞增殖能力下降,体内接种致瘤性下降。结论增加野生型Ｐ５３基因表达能抑制恶性肿瘤的生长。     

Induction of differentiation by wild-type p53 gene in a human glioma cell line

Wild-type human p53 gene was transfected into the human glioma cell line T-98G. Transfectants were then isolated and characterizedfor growth potential and differentiation phenotype. Growth suppression,overexpression of GFAP, and accumulation in G₁phase were more commonly observed in transfectants than inT-98G cells. p21_WAF1/CIP1 wasoverexpressed in transfectants, and the binding of PCNA and CDK 2 top21_WAF1/CIP1 were increased in transfectants. These results suggested the roles of p21_WAF1/CIP1, PCNA,and CDK 2 in regulation of differentiation in glioma cells and the gene transfer of wild-type p53 may be effective forthe control of glial differentiation in glioma cells.