顺铂与姜黄素联用抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖作用的研究

目的:研究顺铂（cDDP）对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响。方法:采用MTT法计算细胞存活率,Giemsa染色观察细胞形态变化及细胞凋亡情况,用流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:姜黄素可明显抑制3AO细胞的生长,其半数生长抑制率（IC_50）约为27.8μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2/M期并可诱导细胞凋亡。cDDP与各种浓度姜黄素联合可显著抑制3AO细胞增殖（P<0.01）。姜黄素和cDDP均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:姜黄素可与cDDP协同抑制人卵巢癌细胞株3AO的增殖。其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

拓扑替康及其联合化疗对卵巢癌细胞系3AO及耐药系3AO/cDDP作用的实验研究

目的 :探讨拓扑替康 (Topotecan ,TPT)及联合化疗对卵巢癌细胞系的治疗效果。方法 :将TPT单用或与 3种临床上常用的卵巢上皮癌化疗药物顺铂 (cDDP)、卡铂(CBP)、VP 16合用 ,观察人卵巢上皮癌 (OEC)细胞系 3AO及其顺铂耐药细胞系 3AO/cDDP的生长抑制率及耐药指数 ,药物敏感试验采用MTT法。结果 :3AO对cDDP最为敏感 (P<0 .0 1) ;CBP +TPT对 3AO的作用优于其他方案 (P <0 .0 5 )。 3AO/cDDP对cDDP耐药 ,对CBP的耐药性也较强 ,而对TPT较为敏感 (P <0 .0 1)。cDDP、VP 16与TPT联合化疗对3AO/cDDP的抑制率最强。结论 :TPT对人卵巢癌细胞系 3AO和顺铂耐药细胞系 3AO/cDDP具有较好的抑制作用 ,可以作为临床上初发和复发OEC的化疗药物 ,也可用作第一线药物     

盐酸拓扑替康、紫杉醇及顺铂对人卵巢癌细胞株OC_3体外作用的实验研究

目的 :研究国产盐酸拓扑替康 (TPTHCh)、紫杉醇 (PIX)与顺铂 (cDDP)对人卵巢癌细胞株OC3 的生长抑制作用。方法 :采用MTT法观察上述药物单药应用、双药联合及 3药联合使用对卵巢癌细胞株OC3 生长的影响 ,评价药物联合应用的效果。结果 :3种药物单药应用、双药联合及 3药联合应用均对卵巢癌细胞株OC3 有显著的抑制作用 ,以卵巢癌的标准化疗方案PIX加cDDP为对照组 ,3药联合应用的抑制效果显著增强 ,且三药全量及半量联合应用效果差异无显著性。结论 :PIX、TPTHCh及cDDP联合应用具有高效协同抑制卵巢癌细胞株OC3 的作用 ,可为临床难治性和复发性卵巢癌患者的化疗及小剂量化疗提供参考     

三氧化二砷对卵巢癌细胞的生长及化疗敏感性的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌COC1细胞顺铂(cDDP)化疗敏感性的影响,As2O3与cDDP联合作用的效应以及As2O3对COC1细胞的生长抑制效应及机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度As2O3、cDDP作用72h对卵巢癌细胞生长的抑制作用,As2O3对顺铂化疗敏感性的影响及两药联合作用的效应。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测PIK3CA mRNA和AKT、ERK、MMP-2蛋白表达的变化。结果:单独应用As2O3或cDDP和联合用药时卵巢癌COC1细胞生长均受到抑制,并呈浓度依赖关系,联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05);0.08~0.15μmol/L As2O3无明显细胞毒性,不能提高COC1细胞对顺铂的敏感性。各浓度(1、3、8、16μmol/L)As2O3作用24h可以下调AKT、MMP-2蛋白水平(P<0.05),并呈浓度依赖效应,但对ERK蛋白的表达无显著影响。0.5、1、2、4μmol/L As2O3作用4h,PIK3CA mRNA表达分别降低45.03%、53.05%、61.67%和72.91%(P<0.05)。结论:As2O3抑制COC1细胞增殖具有浓度依赖性,与顺铂联用有相加效应,可能与As2O3下调PIK3CA mRNA、AKT、MMP-2蛋白水平等有关。     

病毒蛋白22增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦基因治疗系统杀伤卵巢癌细胞的体内研究

目的　探讨病毒蛋白 2 2 (VP2 2 )的细胞间传递作用 ,以及其促进单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK ) 更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统对卵巢癌移植瘤细胞的体内杀伤效应。方法　用慢病毒感染卵巢癌 3AO细胞 ,形成携带HSV TK基因的 3AO细胞 (3AO TK)及携带HSV VP2 2 TK融合基因的3AO细胞 (3AO VP2 2 TK)。分别在裸鼠皮下接种 10 %含卵巢癌 3AO TK(3AO TK组 )或 3AO VP2 2 TK(3AO VP2 2 TK组 )的混合细胞 ,并以接种单纯 3AO细胞裸鼠为对照 (3AO组 ) ,每组裸鼠 10只。当肿瘤体积达 15 0mm3后 ,分别于腹腔注射GCV 10mg kg、5 0mg kg。结果　注射 10mg kgGCV后 ,3AO TK组与 3AO VP2 2 TK组肿瘤体积、重量比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ,3AO VP2 2 TK组肿瘤生长明显受到抑制 ;注射 5 0mg kgGCV后 ,两组肿瘤体积、重量比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。注射GCV 10mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 37 7% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 91 5 % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;注射GCV 5 0mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 81 8% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 96 7% ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　VP2 2介导的自杀基因产物细胞间扩散作用 ,可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B的影响

目的:研究雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B体外生长特性的影响。方法:观察雷公藤甲素作用后子宫内膜癌细胞株HEC-1B的生长情况;用MTT法检测雷公藤甲素抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪观察雷公藤甲素作用后对细胞周期及凋亡的影响。结果:倒置相差显微镜下示雷公藤甲素作用后细胞生长明显受到抑制;MTT检测显示雷公藤甲素能抑制HEC-1B细胞生长且生长抑制作用呈剂量-时间依赖性;流式细胞仪检测示雷公藤甲素低浓度(5ng/ml)条件下,能诱导HEC-1B细胞发生细胞周期阻滞,主要阻滞在S期,高浓度(40,80ng/ml)雷公藤甲素使细胞主要阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡。结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞株HEC-1B的生长有抑制作用,使其阻滞在S期和G2/M期,并诱导其凋亡。     

低密度脂蛋白-阿克拉霉素复合物对卵巢癌靶向治疗的研究

目的 :研究卵巢癌 3AO细胞对阿克拉霉素 低密度脂蛋白复合物 (ACM LDL)及游离ACM的摄取及ACM LDL对卵巢癌细胞的靶向杀伤作用。方法 :采用保温交换法制备ACM LDL复合物 ,观察在相同的作用时间下 ,卵巢癌 3AO细胞对ACM LDL复合物及游离ACM的摄取量 ,测定细胞蛋白合成量及MTT法观察ACM LDL复合物对卵巢癌细胞的杀伤作用。结果 :( 1)相同的作用时间内 ,卵巢癌 3AO细胞摄取ACM LDL复合物的量显著高于游离ACM ;( 2 )ACM LDL复合物对卵巢癌细胞具有剂量依赖性的生长抑制作用 ,当药物浓度达到 2 0 μg/ml时 ,细胞生长停止 ;( 3)ACM LDL复合物对卵巢癌细胞的杀伤作用显著强于游离ACM ,ACM LDL复合物的半数抑制量 (ID50 )为 5 μg/ml ,而游离ACM的ID50为 2 0 μg/ml。 结论 :通过LDL受体 (LDLR)的转运作用 ,以LDL为载体 ,可有效地提高卵巢癌细胞内的化疗药物浓度而相应地提高对癌细胞的杀伤作用     

DEHP对HTR-8/Svneo细胞功能的影响及机制研究

目的:通过研究常见的邻苯二甲酸酯类中邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对人滋养细胞HTR-8/SVneo(简称HTR-8)功能的影响及机制,初步探讨DEHP导致稽留流产的机制。方法:采用不同浓度DEHP溶液干预HTR-8细胞,CCK-8检测细胞毒性、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用Western-blot方法探讨DEHP对凋亡相关蛋白的影响,分析DEHP致凋亡的可能通路。结果:(1)CCK-8检测细胞毒性示:DEHP≥30 ng/ml作用24小时及48小时,HTR-8细胞活性明显受抑制(P0.05);DEHP浓度为20 ng/ml时作用24小时,对HTR-8细胞活性无明显抑制作用;但作用48小时,HTR-8细胞活性同样受到抑制(P0.01)。(2)凋亡实验结果:小剂量DEHP(15 ng/ml)能抑制HTR-8细胞凋亡(P0.05);而大剂量DEHP(30 ng/ml)促进细胞凋亡(P0.05)。(3)流式细胞检测发现:DEHP浓度15 ng/ml作用HTR-8细胞24小时,细胞阻滞于S期(P0.05);DEHP浓度30 ng/ml作用HTR-8细胞24小时,细胞阻滞于G0/G1期(P0.01)。(4)DEHP浓度15 ng/ml作用HTR-8细胞6小时,促凋亡因子Bax蛋白表达下降而凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白表达增加。结论:大剂量DEHP(≥30 ng/ml)使滋养细胞活力明显受抑制,且不受作用时间的影响。小剂量DEHP(≤15 ng/ml)对滋养细胞活力无明显影响,但抑制其凋亡,可能与小剂量的DEHP下调Bax、上调Bcl-2的表达有关,这可能是DEHP致稽留流产的机制之一。     

丙氨瑞林与DDP对卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)丙氨瑞林(Alarelin)与顺铂(DDP)对人卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响.方法 CoC1/cDDP细胞分别加入不同浓度的丙氨瑞林及DDP+丙氨瑞林培养,设空白对照组(不加药),流式细胞仪检测亚G1期细胞及凋亡细胞和线粒体膜电位(ΔΨm),半定量RT-PCR法检测CoC1/cDDP细胞生存素(survivin)-⊿Ex3 mRNA及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3 mRNA的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长抑制率.结果 ①随DDP浓度增加,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例上升,对细胞的抑制作用增强(P＜0.05).丙氨瑞林作用于卵巢癌耐药细胞CoCl/cDDP后,随浓度增加降低ΔΨm,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例增加,凋亡细胞增多,细胞增殖抑制率上升(P＜0.01).联合应用丙氨瑞林及10 μg/ml DDP后,线粒体膜电位(ΔΨm)降低,Rh123-细胞数增加,G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞增多,细胞抑制率明显上升,强于单用DDP或丙氨瑞林；②丙氨瑞林单独或联合DDP作用于CoCl/cDDP细胞,caspase-3mRNA的表达随丙氨瑞林浓度增加而上调,但survinin-⊿ Ex3 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论 丙氨瑞林能促进凋亡,逆转CoCl/cDDP细胞对DDP耐药,其机制可能与降低ΔΨm,上调caspase-3mRNA表达有关.     

靶向调控的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌的治疗作用

目的 观察人端粒酶逆转录酶启动子-二步转录增强系统调控下表达活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的治疗作用.方法 应用活细胞计数法--细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞仪和蛋白印迹法(western blot)检测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol作用后卵巢癌AO细胞的细胞存活率、凋亡率、细胞周期和细胞中活性caspase-3片段p17及其底物聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶的裂解片段p85的表达情况;观测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol治疗前后荷卵巢癌裸鼠生存情况、移植瘤体积、肝酶水平及各器官组织的病理检查结果.结果 AdHTVP2G5-rev-casp3[感染复数(MOI)=5～20]或flavopiridol(300 nmol/L)单独作用均不引起AO细胞的显著凋亡,凋亡率均＜11%;联合应用能产生显著的协同杀伤作用,当两者分别以MOI=20、300 nmol/L联合作用时,细胞存活率为11.6%,凋亡率为73.5%,该协同作用在AdHTVP2G5-rev-casp3感染细胞后72 h再加入flavopiridol作用48 h最为显著.低剂量(MOI=10)的AdHTVP2G5-rev-casp3能引起细胞的S期比例显著增高(62.5%).两者联合作用后的AO细胞中p17和p85的表达水平也显著高于两者单独作用时.单独应用AdHTVP2G5-rev-casp3或flavopiridol均可延长荷瘤裸鼠的生存时间[分别为(141±14)、(134±10)d]并抑制肿瘤生长(抑瘤率分别为30%、40%),但两者联合应用具有协同作用,裸鼠生存时间可达(286±6)d,抑瘤率为81%.两者联合应用后裸鼠的肝酶水平无显著升高,肝等各器官组织的HE染色病理检查未见异常.结论 低剂量的活性caspase-3可引起卵巢癌细胞在S期的募集,从而增强细胞对flavopiridol的敏感性;低剂量的活性caspase-3联合flavopiridol对卵巢癌细胞具有显著的协同杀伤作用,能显著抑制移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的生存期,并降低flavopiridol对肝脏的毒性作用.     

卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞株的建立及其多药耐药蛋白的表达

目的 以较大剂量和反复间歇用药的方式建立卵巢上皮性癌顺铂（ｃＤＤＰ）耐药细胞株３ＡＯ／ｃＤＤＰ,并检测其肺耐药蛋白（ＬＲＰ）、多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）和Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的表达。方法 以卵巢上皮性癌化学治疗用药的最低剂量换算终浓度,采用大剂量ｃＤＤＰ（１０μｇ／ｍｌ）反复间歇２４ｈ暴露法建立３ＡＯ／ｃＤＤＰ细胞株;用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测ＬＲＰ、ＭＲＰ和Ｐ－ｇｐ的表达。结果 历时４．５个月     

人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞系3AO/cDDP模型的建立及耐药机理的实验研究

目的：模拟临床卵巢上皮性癌化疗的用药特点建立顺铂耐药细胞系3AO／CDDP,检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopeⅡ表达。方法：以临床卵巢上皮性癌化疗用药的最低剂量换算终浓度,采用大剂量顺铂（10μg／ml）反复间歇24h暴露法建立顺铂耐药细胞系;用FCM法检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopoⅡ表达。结果：历时4．5个月建成顺铂耐药株3AO／cDDP,耐药性稳定,耐药指数1．62,与临床耐药倍数相近。3AO／cDDP细胞MRP、P－gp表达与3AO相比无明显变化（P＞0．05）,LPR、GSTπ表达明显升高（P＜0．005及P＜0．05）,Tope-Ⅱ含量明显降低（P＜0．05）。结论：3A0／cDDP是模拟临床用药特点建立的、研究顺铂耐药的理想模型;顺铂耐药与LRP、GSTπ表达升高及TopoⅡ含量降低有关,与MRP、P-gp无关。     

TRAIL对3AO裸鼠移植瘤治疗作用的实验研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对 3AO裸鼠皮下及腹腔移植瘤的治疗作用。方法 :将 5× 10 6 和 2× 10 7对数生长期的 3AO分别接种于BALB/C裸鼠右下肢皮下和腹腔内 ;待皮下组移植瘤长至 0 .2 5cm3,腹腔移植瘤组移植后 96h ,随机分为 5组。裸鼠皮下和腹腔移植瘤A、B组为TRAIL组 ,剂量分别为 0 .5 μg/ml和 1μg/ml;C组为TRAIL0 .5 μg/ml加cDDP 1.5mg/kg ,D组为cDDP 3mg/kg ;E组为对照组 (将生理盐水分别注射于瘤周和腹腔 ) ,观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期和生存期延长率。同时观察停药后 1d、1周、2周裸鼠移植瘤细胞的细胞凋亡率及CD95、Apo2 .7、P5 3、Bcl 2基因表达的变化。结果 :(1)A、B、C和D组裸鼠皮下移植瘤的抑制率分别为 2 3%、4 9.1%、6 2 .3%和 5 2 .6 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(2 )腹腔移植瘤组 :A、B、C、D组裸鼠移植瘤的成瘤率分别为 89.1%、72 .3%、5 1.7%和 6 1.5 % ;差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(3)TRAIL作用裸鼠移植瘤后CD95与Apo2 .7的表达均升高 ,P5 3基因表达稍升高 ,Bcl 2基因表达降低。结论 :(1)TRAIL对人卵巢癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用 ,TRAIL能明显降低裸鼠的成瘤率及死亡率 ,延长生存期 ;(2 )其机制可能与基因CD95、Apo2 .7、Bcl 2的调节有关     

TWEAK调控凋亡增加上皮性卵巢癌细胞对铂类药物敏感性的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（TWEAK）在调控上皮性卵巢癌（EOC）细胞对顺铂（DDP）敏感性中发挥的作用。方法：不同浓度TWEAK刺激A2780/cDDP细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;采用透射电镜检测细胞核染色质形态和凋亡小体的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3的活化情况。结果：TWEAK对A2780/cDDP细胞的增殖能力无影响,但能显著增加A2780/cDDP细胞对DDP的敏感性。流式结果显示,随着TWEAK剂量增加,A2780/cDDP细胞的凋亡显著增加。TWEAK刺激后A2780/cDDP细胞中caspase 3活化体表达增加,细胞核染色质发生形态变化,诱导了细胞的凋亡及凋亡小体形成。结论：TWEAK通过活化凋亡相关通路,促进EOC细胞凋亡,提高了DDP耐药EOC细胞对DDP的敏感性。这可能为临床开创逆转EOC铂类耐药的治疗新途径提供理论依据。     

Analysis of the in vitro synergistic effect of 5-fluorouracil and cisplatin on cervical carcinoma cells

5-Fluorouracil (5-FU) is currently being used as an anticancer drug to reduce tumor bulk in order to increase the operability rate and postoperative survival in patients with cervical cancer, which has been combined with cisplatin (CP) because of its superior activities observed in human carcinoma cells. However, the combined anticancer effect of 5-FU and CP in cervical carcinoma cells is poorly understood. Therefore, we conducted a study to investigate whether anticancer drugs 5-FU and CP may exhibit the combined antiproliferative effect in cervical carcinoma cells. Using proteomics analysis, including two-dimensional gel electrophoresis and matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS), we investigated the antiproliferative effect-related proteins after treatment with 5-FU and/or CP. Our experiments showed that the combination of 5-FU and CP engaged both the apoptotic pathways: the membrane death receptor-mediated apoptosis pathway and the mitochondrial apoptotic pathway. Moreover, the combination of 5-FU and CP resulted in remarkable increasing susceptibility to apoptosis. We suggest that the combination of 5-FU and CP suppresses the growth of cervical carcinoma cells by synergistic effect with the induction of apoptosis. In vitro synergistic effect of 5-FU and CP supports the basis of the clinical application of the combination chemotherapy to the patients with cervical cancer.     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。     

妇科恶性肿瘤淋巴结转移的腹膜后与腹腔化学治疗的比较

目的 比较妇科恶性肿瘤患者淋巴结转移的腹膜后化学治疗（化疗）和腹腔化疗的疗效,并进一步评价腹膜后化疗。方法 选择６２例妇科恶性肿瘤患者,手术前分别随机进行腹膜后化疗４３例、腹腔化疗重复给药１１例和腹腔化疗单次注药（５氟嘧啶,５－ＦＵ）８例,采用高效液相色谱侧定法（ＨＰＬＣ）检测淋巴结内－５ＦＵ的浓度。其中１６例腹膜后化疗重复给药患者,比较注药侧与未注药侧淋巴结内５－ＦＵ的浓度。选择腹膜后化疗患者６