非小细胞肺癌p16基因甲基化及缺失的研究

目的 研究p16基因在非小细胞肺癌组织中的甲基化和缺失情况，探讨其在肺癌诊断中的价值。方法 应用甲基化相关的PCR及双重PCR，检测50例肺癌组织和54例正常肺组织中p16基因第1外显子5′端启动子区域CpG岛甲基化及第2外显子缺失情况。结果 p16基因在非小细胞肺癌组织中甲基化率为32.0%(16/50)。缺失率为28.0%(14/50);54例正常肺组织甲基化率为3.7%(2/54)，缺失率为0，二组比较，甲基化率（Fisher's exact=0.000)及缺失率（Fisher's exact=0.000)均有显著性差异。结论 甲基化和缺失是非小细胞肺癌p16基因失活的主要形式，检测p16基因甲基化和缺失状态可能有助于肺癌的诊断。     

结肠癌组织中p16/MTS1基因5′CpG岛甲基化研究

:〔目的〕研究结肠癌组织中p16基因5′端CpG岛异常甲基化现象。〔方法〕采用甲基化特异PCR方法(MSP)检测了28例结肠癌和20例癌旁正常组织标本。〔结果〕28例结肠癌组织中有9例5′端CpG岛异常甲基化(32%),而20例正常组织中均阴性。〔结论〕p16基因5′端CpG岛异常甲基化在人类结肠癌的发生中可能起一定作用。     

CDKN2／p16基因5‘—CpG岛SmaⅠ位点甲基化与肺癌的关系

目的 研究ＣＤＫＮ２／ｐ１６基因５’端调控序列ＣｐＧ岛甲基化的状态与肺癌发生发展的关系。方法 采用对甲基化敏感的核酸内切酶ＳｍａⅠ,酶切基因组ＤＮＡ的方法,对８９例肺癌标本和１０例正常肺组织的ＣＤＫＮ２／ｐ１６,基因进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果 ８９例肺癌中,ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因甲基化１５例,甲基化频率为１６．９％。４２例ｐ１６蛋白阴性的肺癌患中,有１２例发生甲基化,甲基化频率为２８．６％;另有４７例ｐ１６蛋白阳性患中仅有３例发生甲基化。１０例正常肺组织中均未发现ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因有甲基化现象。结论 ＣＤＮＫ２／ｐ１６基因５’端ＣｐＧ岛甲基化是该基因失活的重要机制,是肺癌细胞区别于正常细胞的分子事件之一,可能参与肺癌的发生发展过程。     

甲状腺肿瘤中p16基因甲基化及p16蛋白的表达

目的探讨甲状腺肿瘤细胞中p16基因异常甲基化及p16蛋白的表达。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶SmaI消化DNA，PCR扩增p16基因外显子1，分析60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15′CpG岛异常甲基化，采用免疫组化Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子。5′CpG岛异常甲基化率为15．0％（9／60）。30例甲状腺癌中为30．0％（9／30）；30例腺瘤中无异常甲基化，组间比较差异有显著性（P〈0．001）。60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46．7％／60）。30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60．0％（18／30）；30例甲状腺癌中为33．3％（10／30），组间较差异有显著性（P〈0．05）。结论p16基因外显子t5′CpG岛异常甲基化与甲状腺癌的发生、发展有关，其主要机制可能与甲状腺恶性肿瘤中p16基因失活导致P16蛋白表达缺失有关。     

p16基因5′-CpG岛甲基化对肺癌的早期诊断价值

目的　检测 p16基因在肺癌患者癌组织及相应痰液脱落细胞中甲基化状态 ,以探讨其在肺癌早期诊断中的价值。方法　采用甲基化敏感的核酸内切酶 Sma 、Sac 酶切基因组 DNA,对 5 6份肺癌组织及相应痰液、6 0份非恶性病变肺组织及 2 8份痰液进行 PCR分析。结果　 p16基因在肺癌组织中甲基化率为 30 .4% (17/5 6 ) ,相应的痰液中为 2 8.6 % (16 /5 6 ) ,两组差异无显著性 (χ2 =0 .0 430 ,P=0 .836 )。 6 0份非恶性病变肺组织甲基化率为 3.3% (2 /6 0 ) ,2 8份痰液无 1份发现 p16基因甲基化。结论　肺癌组织及相应的痰液脱落细胞 p16基因 5′- Cp G岛甲基化率相似 ,即痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态可以反映肺癌组织 p16基因甲基化状态。因此 ,检测痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态有助于肺癌的早期诊断     

启动子区5′CpG岛去甲基化对人肠癌RKO细胞生物学表型的影响(英文)

目的:探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人肠癌RKO细胞生物学特征的关系。方法:应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72小时,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2抑癌基因5’CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后对细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。结果:肠癌RKO细胞p16/CDKN2基因5’CpG岛呈高甲基化状态;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P<0.01),诱导肠癌细胞凋亡,并呈良好的量效依赖关系。结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。     

肺癌E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的检测肺癌组织、相应的癌旁组织及正常肺组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化水平，探讨肺癌的发病机制。方法采用甲基化特异性PCR技术检测22例肺癌组织、相应的癌旁组织和9例正常肺组织中E-cad-herin基因启动子CpG岛甲基化水平。结果肺癌中E-cadherin基因启动子CpG岛完全甲基化率为13.6%（3/22），部分甲基化率为27.3%（6/22），总甲基化率为40.9%（9/22），显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率9.1%（2/22）。9例正常肺组织中该基因未发生甲基化。此外，E-cadherin基因启动子CpG岛异常甲基化与患者性别、年龄无关，甲基化的发生率随着肿瘤的分期早晚有上升的趋势。结论E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化是肺癌发生中的常见分子事件，可能参与了肺癌的发生发展过程。     

肺癌E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达的关系及其意义

背景与目的：目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一.E-cadherin能抑制肿瘤细胞的浸润和转移,被公认为是浸润、转移抑制基因.本研究检测肺癌组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达的关系及其意义.方法：采用甲基化特异性PCR技术,检测22例肺癌组织,相应的癌旁组织和9例正常肺组织中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化的状况.采用免疫组化S-P法相应检测了E-cadherin蛋白的表达.结果：肺癌中E-cadherin基因启动子CpG岛完全甲基化率为13.6%（3/22）,部分甲基化率为27.3%（6/22）,总甲基化率为40.9%（9/22）,显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率9.1%（2/22） （P＜0.05）.9例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化（0/9）.22例癌组织中E-cadherin蛋白表达减弱或缺失率59.1%（13/22）,显著高于相应癌旁组织蛋白表达减弱缺失率27.3%（6/22）.肺癌组织中发生甲基化者蛋白表达率及强度明显低于未甲基化者.结论：肺癌组织中存在E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化,E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化可能是E-cadherin蛋白表达下调的主要原因.     

FHIT和p16基因甲基化与肺癌的发生

背景与目的:探讨FHIT和p16基因甲基化与肺癌发生之间的关系. 材料与方法:采用甲基化特异性PCR检测59例原发性肺癌组织,相对应的32例正常组织及11例支气管鳞状化生组织中FHIT基因、p16基因启动子区CpG岛甲基化状况.结果:肺癌组织和正常肺组织中的FHIT基因甲基化率分别为37.3%(22/59)、0.0%(0/32),两组间的差异有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织FHIT基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌组织和正常肺组织中的p16基因甲基化率分别为50.8%(30/59)、0.0%(0/32),两组间的差异具有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织p16基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌患者吸烟组中FHIT、p16基因甲基化联合检测的阳性率为90.6%(29/32),与非吸烟组(33.3%.9/27)相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论: FHIT基因和p16基因启动子区甲基化可能与肺癌的发生有关.     

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

肺癌组织中错配修复基因hMLH1 启动子甲基化状态分析

目的 探讨肺癌组织中错配修复基因ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及其与蛋白表达的关系。方法 用ＨｐａⅡ酶切ＰＣＲ及ＳＰ免疫组织化学方法,分析５０例肺癌标本ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及蛋白表达。结果 ｈＭＬＨ１启动子甲基化有１６例,占３２．０％（１６／５０）。ｈＭＬＨ１启动甲基化与性别、吸烟状态及临床病理无明显的相关性。ｈＭＬＨ１蛋白表达阴性的１４例中,１１例有甲基化（７８．６％）;而３２例蛋白表达阳性者中,只有５例甲基化（１５．６％）。结论 ｈＭＬＨ１启动子区在肺癌组织中有中等频率的甲基化,是ｈＭＬＨ１蛋白表达降低的主要原因之一。     

沙利度胺改善恶性肿瘤化疗患者生活质量分析

目的 观察沙利度胺对恶性肿瘤化疗患者生活质量的影响。 方法 68 例经病理证实的恶性肿瘤化疗患者,随机分 为实验组和对照组各 34 例。实验组在化疗基础上加服沙利度胺,第 1 周为 100mg/d,每晚睡前服用,如果患者可以耐受不 良反应,每周增加 50mg,直至达到目标剂量 200mg/d 后维持治疗,如不能耐受加量患者,则维持原剂量治疗。对照组单用 化疗。化疗均以 3 周为一周期, 2 周期后评价疗效。分别在治疗前和治疗 2 个周期后评价患者 ECOG 评分、 QOL 评分、睡 眠质量和饮食情况等。 结果 实验组 KPS 评分、 QOL 评分、睡眠状况、饮食情况改善率分别为 64.7％、 67.6％、 58.8％、 55.9％,对照组改善率分别为 26.5％、 29.4％、 17.6％、 11.8％,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。实验组的恶心呕 吐等消化道反应发生率低于对照组,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 沙利度胺能够改善恶性肿瘤化疗患者的生 活质量。     

细胞凋亡与子宫颈癌的发生

目的 探讨细胞凋亡与子宫颈癌发生、发展的关系。方法 １９０例手术切除标本中,正常宫颈鳞状上皮（ＮＥ）４１例;上皮内瘤样病变７８例,其中重度非典型增生（ＳＤ）４１例,原位癌（ＣＩＳ）３７例;早期侵袭癌（ＭＩＣ）３１例;大细胞非角化型浸润癌（ＩＣ）４０例。凋亡细胞检出用ＴＤＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰｂｉｏｔｉｎ ｎｉｃｋ ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ（ＴＵＮＥＬ）方法,增生细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、ｐ５３、ｂｃｌ－２基因蛋白表达采用免疫组化ＡＢＣ染色方法。结果 （１）在ＮＦ组,凋亡细胞分布在表层细胞,增生细胞却局限于深层细胞;在宫颈肿瘤性病变组织中,二者均毫无规律地散在于病灶中。（２）ＴＵＮＥＬ标识率伴随病变进展而降低,尤其从ＮＥ到ＣＩＳ组显著地减少（Ｐ〈０．０１）,而ＰＣＮＡ标识率却伴随病变进展呈进行性增加（Ｐ〈０     

与胃小肠肿瘤发生相关的一个新分子标志的筛选

目的　筛选与胃、小肠肿瘤发生相关的新分子标志。方法　利用随机扩增多态性DNA分析、限制性片段长度多态性分析、Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、克隆、亚克隆及测序对肿瘤组织DNA做综合分析。结果　在从RAPD回收的 32条可能与肿瘤发生相关的DNA片段中 ,有 2 9条被克隆到pCAPs载体上。在这些克隆片段中 ,80 %的插入片段是重复序列 ,少部分是单拷贝序列。其中一单拷贝序列在胃肠肿瘤组织是缺失突变 ,经Northern印迹杂交分析 ,发现并无杂交带。经对此片段的序列结构进行分析 ,发现其内有一真核生物顺式作用的启动子序列CACA盒“GCCACACCC”的类似物“TCCACACCG” ,在下游又发现“ATG”的转录起始密码子。经INTERNET核酸数据库查寻并未发现有此段序列的报道 ,所以在GenBank登记并被收录 ,登录号为AF15 10 0 5。结论　在胃、小肠肿瘤组织发生缺失突变的片段可能为某一抑癌基因的前半部分 ,即含有启动子成分的调控元件部分CACA盒     

凋亡相关基因在肝癌及正常肝组织表达概况

目的 了解凋亡相关基因在肝癌中的表达概况,探寻在肝癌及正常肝组织中的表达差异。方法 以肝癌及癌旁正常肝组织的总RNA反转录合成含有α-^32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交,并应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）验证。结果 放射自显影结果经AtlasImage^TM软件分析显示,在所分析的与凋亡相关的69个基因中,Aktl等4个基因在肝癌组织中表达上调,BAK、Caspase-3等19个基因表达下调。RT－PCR结果证实了Altas微阵列差异杂交的准确性。结论 通过Altas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变,组成了一个肝癌特异的与凋亡相关的基因表达谱,全面系统地研究肝癌中凋亡相关的基因表达改变,为探讨肝癌的发病机制提供了有益的线索。     

脑星形细胞瘤中p53和VEGF的表达及其与肿瘤血管形成的关系

目的探讨p53、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth     

双功能抗体介导胃癌杀伤效应的研究

目的 以化学方法将抗CD3及抗三硝基苯（TNP）的单克隆抗体（McAb)交联为双功能抗体。利用此双功能抗体介导人外周血淋巴细胞（PBLS）对于不同抗胃癌McAb所针对的胃癌细胞进行体内外杀伤试验。方法 利用化学交联法制备双功能抗体,以酶联免疫吸附试验(ELISA）测定McAbs活性,以ELISA桥联法、琼脂糖免疫双扩散及十二烷基磺酸钠－降丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）对于双功能抗体进行鉴定,以细胞杀伤试验及肿瘤生长抑制实验检测双功能抗体作用。结果 将抗CD3及抗TNP McAb交联为双功能抗体,此双功能抗体可介导PBLS对于不同抗胃癌McAb所针对的胃癌细胞进行体内外杀伤试验。结论 此双功能抗体在肿瘤生物免疫治疗中具有应用前景。     

36例喉癌并发原发肺癌的临床分析

目的 探讨喉癌患者以肺癌为表现的第二原发癌的发病情况,治疗方法及预后。方法 总结2182例喉癌患者中出现的36例第二原发肺癌,回顾分析喉癌的治疗（分为单一放疗、单一手术、手术＋放疗）对发生第二原发肺癌的影响,及第二原发肺癌的治疗情况和预后。随访患者均超过5年,随诊率为100％。生存率用寿命表法计算。结果 36例第二原发肺 癌、占喉癌患者总例数的1．7％（36／2182）;占喉癌第二原发癌的45．0％（36／80）,而同期15541例肺癌患者中,则没有在喉部发生第二原发癌者。第二原发肺癌多在喉癌确诊后平均44个月（1－14年）时发现。36例中,鳞癌32例,腺癌2例,小细胞未分化癌1例,大细胞未分化癌1例。第二原发肺癌平均生存23个月,2年生存率41．7％,5年生率为1例,大细胞未分化癌1例。第二原发肺癌平均生存23个月,2年生存率为41．7％,5年生存率为8．3％。结论 喉癌的第二原发癌以肺癌为最多,而肺癌很少出现第二原发喉癌。喉癌的治疗方法对肺癌的方法与否及发生时机影响不大,手术＋放疗优于单一手术及单一放疗。     

不同方式诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株的比较

目的 研究不同诱导方式建立的卵巢癌顺铂耐药细胞株的耐药机理。方法 采用大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立卵巢癌顺铂耐药细胞株Skov3/CDDP-P和Skov3/CDDP-50。结果 Skov3/CDDP-P和Skov3/CDDP-50的耐药指数分别为3．7和48．6,伴有形态改变、生长减慢、细胞周期改变等。耐药细胞株的细胞内药物浓度降低,与多药耐药相关基因（MDR1）、多药耐药相关蛋白（MRP）和肺耐药蛋白（LRP）的表达增强有关。谷胱甘肽S转移酶（GST－π）的表达无明显变化,拓朴异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）活性轻度下降。不同诱导方式存在差异。结论 顺铂耐药涉及多个相关基因的表达,持续诱导方式容易产生耐药。     

胃癌细胞功能分化表型与侵袭转移的关系

目的 建立一种胃癌细胞功能分类新方法,探讨胃癌细胞功能分化表型与侵袭转移的关系。方法 按癌细胞功能分化方向和状态,将361例胃癌分为5型。结果（1）吸收功能分化型（AFDT）：82例,占22．7％,13．6％（9／66）男性伴肝脏转移。（2）黏液分泌功能分化型（MSFDT）：54例,占15．0％,有98．1％（53例）病变侵透浆膜。（3）吸收－黏液产生功能双向分化型（AMPFDT）：180例,占49．9％,女性占34．4％,雌激素受体表达率为71．7％,均明显高于其他型;19．4％女婿姓伴卵巢转移。（4）特殊功能分化型（SFDT）：13例,占3．6％,69．2％（9／13）属弥漫性神经内分泌系统来源。（5）无功能分化型（NFDT）：32例,占8．9％,59．4％（19例）伴淋巴结转移。5组术后5年生存率分别为58．5％、28．6％、24．7％、60．0％和28．1％。结论 胃癌细胞功能分类方法可为判断不同类型胃癌的生物学行为及侵袭转移特点提供有益信息,癌细胞功能分化表型与其相应的基因型以及胃癌生物学行为的内在联系有待深入探讨。