六味地黄丸的血清药物化学研究

目的：对六味地黄丸的血清药物化学进行研究。方法：建立六味地黄丸及口服六味地黄丸后大鼠血清的HPLC指纹色谱分析方法；分析比较六味地黄丸、缺味处方、单味生药以及各组分给药后所得血清样品，鉴定口服六味地黄丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果：口服六味地黄丸后从血中发现了11个入血成分，其中4个为新产生的代谢产物；7个成分为六味地黄丸所含成分的原型，其中有一成分虽为地黄中所含成分的原型，但其它两种药材也能代谢产生，对其体内的量变有共同的贡献。结论：血中移行成分及代谢产物将成为六味地黄丸的体内直接作用物质，其来源生药为六味地黄丸的主要药物，对其进行深入的研究，将有助于阐明六味地黄丸的有效成分及作用机理。     

基于体内过程的关黄柏在知柏地黄丸等类方配伍环境下血中移行成分分析

目的：本研究主要探讨了关黄柏在特定配伍环境下血中移行成分与功效取向的相关性。方法：研究应用UPLC-HD-MS/MS联用技术建立关黄柏及知柏地黄丸等类方口服给药后大鼠血中移行成分分析方法。采用主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）阐明不同的方剂配伍环境下关黄柏体内成分表达的差异,探索与关黄柏功效显著相关的潜在药效物质基础。结果：关黄柏在知柏地黄丸等类方中出现了23个共有血中移行成分,OPLS-DA分析充分挖掘了7个与关黄柏退虚热功效显著相关的血中移行成分及6个与关黄柏清热燥湿功效显著相关的血中移行成分。结论：本研究首次建立关黄柏在知柏地黄丸等类方中体内成分分析方法,初步阐明了关黄柏在类方中的配伍规律及其发挥退虚热及清热燥湿功效的药效物质基础。     

HPLC-ESI/MSn 联用技术对桂附地黄丸体内代谢化学成分的研究

目的：应用液相色谱-离子阱质谱法（HPLC-ESI/MSn）对桂附地黄丸的体内代谢化学成分进行研究。方法：应用HPLC 分析比较桂附地黄丸、缺味处方、单味生药体外样品以及各组给药后的血清样品,在线进行选择离子监测（SIM）、二级碎片离子全扫描,对口服桂附地黄丸后大鼠血中的化学成分进行解析并鉴定其原形成分及代谢产物。结果：口服桂附地黄丸后从血中发现了17 个入血成分,其中6 个为新产生的代谢产物,11 个成分为桂附地黄丸所含成分的原型。利用液质联用技术对其进行分析,共鉴定和推测了12 种桂附地黄丸入血成分。其中原型成分为没食子酸、5-羟甲基-2-糠酸、莫诺苷、马钱苷、羟基芍药苷、芍药苷、丹皮酚。同时,推测的代谢产物分别为2-羟基苯乙酮-4-O-葡萄糖醛酸酯、4-甲氧基苯乙酮-2-O-葡萄糖醛酸酯、2,4-二羟基苯乙酮-S-O-硫酸酯、2-羟基-4-甲氧基苯乙酮-S-O-硫酸酯及2,4 一二羟基苯乙酮。结论：口服桂附地黄丸体内代谢化学成分可能成为桂附地黄丸的体内直接作用物质,此研究结果为桂附地黄丸作用机制的阐明及深层次的开发研究奠定了基础。     

六味地黄丸主要血中移行成分对培养大鼠成骨细胞促增殖作用的研究

目的：阐明六味地黄丸主要血中移行成分对培养大鼠成骨细胞促增殖作用。方法：将六味地黄丸主要血中移行成分以适当浓度添加到大鼠成骨细胞培养液中，用MTT法测定细胞的增殖速度。结果：六味地黄丸主要血中移行成分莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷的混合物各剂量组均明显表现出对大鼠成骨细胞的促增殖作用。结论：初步确定六味地黄丸主要血中移行成分莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷是其治疗骨质疏松的药效物质基础。     

浅析六味地黄丸在临床中的新应用

本文通过对六味地黄丸临床应用进展的回顾性分析,对六味地黄丸的临床应用做系统总结。六味地黄丸体内直接作用物质与血药成分二次研发证实,阐述六味地黄丸的最新功效在治疗多种疾病上有显著的疗效。     

葛根芩连汤入血成分的归属

目的：研究葛根芩连汤复方大鼠给药后血中成分的归属。方法：建立葛根芩连汤及口服葛根芩连汤后大鼠血浆的HPLC指纹分析方法；比较复方、葛根、黄芩、黄连、甘草各单方分别给药后所得的血浆样品，分析口服复方后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果：口服葛根芩连汤后从血中发现了31个入血成分，其中15个成分为复方所含成分的原型，13个为代谢产物，3个为复方给药后新产生的物质。结论：此方法简单、稳定，适于葛根芩连汤入血成分的研究，血中移行成分及其代谢产物是葛根芩连汤的体内直接作用物质，对其深入研究将有助于阐明复方效应的物质基础。     

葛根芩连汤入血成分的归属

］目的：研究葛根芩连汤复方大鼠给药后血中成分的归属。方法：建立葛根芩连汤及口服葛根芩连汤后大鼠血浆的HPLC指纹分析方法；比较复方、葛根、黄芩、黄连、甘草各单方分别给药后所得的血浆样品，分析口服复方后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果：口服葛根芩连汤后从血中发现了31个入血成分，其中15个成分为复方所含成分的原型，13个为代谢产物，3个为复方给药后新产生的物质。结论：此方法简单、稳定，适于葛根芩连汤入血成分的研究，血中移行成分及其代谢产物是葛根芩连汤的体内直接作用物质，对其深入研究将有助于阐明复方效应的物质基础。     

六味地黄丸及其类方治疗原发性干燥综合征62例

目的:观察六味地黄丸及其类方治疗原发性干燥症的临床疗效。方法:将186例原发性干燥症患者按照随机数字法分为3组,对照组患者进行常规治疗,六味地黄丸组患者在常规治疗的基础上口服六味地黄丸,知柏地黄丸组患者在常规治疗的基础山口服知柏地黄丸,3组均持续治疗8周,比较3组患者治疗前后主要实验室检查指标和临床疗效。结果:治疗后,3组患者指标较治疗前明显好转(P0.05),六味地黄丸组和知柏地黄丸组患者相关指标明显优于对照组(P0.05),治疗后六味地黄丸组有效率为83.87%,知柏地黄丸组有效率为87.10%,对照组有效率为72.58%,与对照组比较,差异具有统计学差异(P0.05)。结论:六味地黄丸及其类方治疗原发性干燥症疗效显著。     

六味地黄丸血中移行成分的含量测定

目的对六味地黄丸的2种原型血中移行成分进行含量测定.方法采用RP-HPLC法建立了六味地黄丸体外指纹图谱及大鼠血清色谱指纹图谱,在此基础上通过标准品对照法确认六味地黄丸的原型血中移行成分并对其进行含量测定.结果确认丹皮酚和马钱素为六味地黄丸原型血中移行成分,测定丹皮酚含量为0.93±0.01 mg/g,马钱素含量为0.37±0.01 mg/g.结论该方法以六味地黄丸入血成分的含量为指标,为更好地控制其内在质量提供了科学依据.     

六昧地黄丸血中移行成分的含量测定

目的对六味地黄丸的2种原型血中移行成分进行含量测定.方法采用RP-HPLC法建立了六味地黄丸体外指纹图谱及大鼠血清色谱指纹图谱,在此基础上通过标准品对照法确认六味地黄丸的原型血中移行成分并对其进行含量测定.结果确认丹皮酚和马钱素为六味地黄丸原型血中移行成分,测定丹皮酚含量为0.93±0.01 mg/g,马钱素含量为0.37±0.01 mg/g.结论该方法以六味地黄丸入血成分的含量为指标,为更好地控制其内在质量提供了科学依据.     

六味地黄丸血中移行成分对氢化可的松致大鼠肾虚动物模型的保护作用

目的:通过研究六味地黄丸血中移行成分对氢化可的松致大鼠肾虚动物模型的保护作用,阐明六味地黄丸补肾的药效物质基础。方法:70只大鼠随机分为空白组、模型组、总组分组、混合组分组、5-羟甲基-2-糠酸(5-HMFA)组、丹皮酚组和六味组共7个实验组,按5 mL/kg体重连续9 d分别灌胃给予蒸馏水、蒸馏水、总组分药液、混合组分药液、5-HMFA药液和丹皮酚药液;第5~9天,除空白组皮下注射生理盐水外,其他各组按5 mL/kg体重每天皮下注射氢化可的松注射液25 mg/kg,于实验的第10天测定体重等10项评价指标。结果:与模型组相比,各给药组动物的检测指标均有明显改善,其中莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷的混合物组作用最显著。结论:初步确定所分离得到的六味地黄丸的血中移行成分是六味地黄丸补肾的药效物质基础,其中以莫诺苷,獐牙菜苷和马钱子苷的作用最为明显,是补肾的核心成分。     

地黄饮子血清药物化学研究

目的:对经方地黄饮子的血清药物化学进行研究。方法:利用UPLC-ESI-MS对地黄饮子体外样品及灌胃给予地黄饮子或单味药后家兔血清样品进行分析,比较各样品分析结果,确认地黄饮子的血中移行成分、代谢产物及其生药来源。结果:灌胃给予地黄饮子后家兔血清中发现9个血中移行成分,其中7个为新产生的代谢产物,2个为地黄饮子所含的原型成分,分别由五味子、远志、石菖蒲、巴戟天、山茱萸、肉苁蓉、附子、麦冬贡献产生。结论:初步确定了地黄饮子的血中移行成分及代谢产物,对其进行深入的研究,将助于阐明地黄饮子的有效成分及作用机制。     

六味地黄丸入血成分对自杀基因杀伤肝癌细胞的增效作用

目的:探讨六味地黄丸主要入血成分对单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)自杀基因系统杀伤大鼠肝癌细胞(CBRH7919)的增效作用.方法:按CBRH7919/tk占总细胞数10％的比例混合CBRH7919与CBRH7919/tk细胞,分别接种96孔板,每孔加细胞悬液100 μL(2×103个/孔),设置对照组、低、中、高3种浓度的六味地黄丸入血成分组、GCV组、各浓度六味地黄丸入血成分联合GCV组;培养24h后分别加入入血成分马钱素和丹皮酚(质量浓度均为25,50,100 μmol·L-1),莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸、獐牙菜苷(浓度均为37.5,75,150 μmol·L-1)5种化合物和5种化合物混合组分(质量浓度为0.0067,0.0135,0.027 g·L-1);及其混合组分(质量浓度为0.034 g·L-1)作用后淋巴细胞培养上清(占培养液体积分数7.5％,15％,30％),设6个复孔,37℃,5％ CO2培养箱培养72 h后MTT法测定细胞存活率,检测六味地黄丸主要入血成分及淋巴细胞培养上清对自杀基因系统杀伤肝癌细胞的影响.结果:自杀基因系统联合马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸、獐牙菜苷和丹皮酚5种化合物及5种化合物的混合组分,均未显示其对肿瘤自杀基因疗法的直接增效作用;但含药上清联合GCV组对肝癌细胞生长抑制率分别为(22.72±3.12)％,(26.68±1.92)％,(30.50±3.53)％;与单独自杀基因(10％ tk/GCV)组抑制率(15.37±3.96)％比较,差异均有统计学显著性意义;q值分别为1.50,1.75,2.24,均大于1.15,具有协同增效作用,并呈一定的量效关系.结论:六味地黄丸主要入血成分能刺激淋巴细胞产生某些活性物质,并发挥了对HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统对肝癌CBRH7919细胞杀伤的增效作用,这些淋巴细胞产生的内源性活性物质可能才是六味地黄丸对肿瘤自杀基因疗法增效作用的药效物质基础.     

丹参川芎嗪注射液联合知柏地黄丸治疗早期糖尿病肾病疗察

目的：观察丹参川芎嗪注射液联合知柏地黄丸治疗早期糖尿病肾病的疗效。方法：将早期糖尿病肾病患者126例随机分为治疗组63例,对照组63例。治疗组和对照组在控制血压血糖及抗感染等方面基本一致。治疗组丹参川芎嗪注射液10ml＋5％葡萄糖注射液250ml＋胰岛繁3U静脉点滴,1次／d,联合应用知柏地黄丸口服6粒,每日3次;对照组用丹参川芎嗪注射液10ml＋5％葡萄糖注射液250ml＋胰岛素3U静脉点滴,1次／d。两组均连续用药4周。结果：相对于对照组治疗组患者24h尿白蛋白和血肌酐降低（p〈0．05）。结论：丹参川芎嗪注射液联合知柏地黄丸相对于单一应用丹参川芎嗪可更好的降低早期糖尿病肾病患者的尿白蛋白和血肌酐,有利于早期DN的治疗。     

六味地黄丸血中移行成分的分离及结构鉴定

目的：在前期六味地黄丸血清药物化学初步研究的基础上分离并鉴定六味地黄丸血中移行成分。方法：以血清色谱指纹图为指导,采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱及RP-C18柱制备色谱进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果：对11种六味地黄丸血中移行成分进行分离和结构鉴定,共分离得到了8个化合物,分别鉴定为5-羟甲基-2-糠酸（A）、莫诺苷（B）、獐牙菜苷（C）、马钱子苷（D）、2-羟基-苯乙酮-4-葡萄糖醛酸苷（E）、4-甲氧基-5-磺酸基苯乙酮-2-葡萄糖醛酸苷（F）、2,4-二羟基-苯乙酮（G）、（H）2,5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮。其中5-羟甲基-2-糠酸（A）为熟地、山茱萸和泽泻中的成分代谢形成;莫诺苷（B）、獐牙菜苷（C）、马钱子苷（D）为山茱萸所含成分直接入血而形成;2-羟基-苯乙酮-4-葡萄糖醛酸苷（E）、4-甲氧基-5-磺酸基苯乙酮-2-葡萄糖醛酸苷（F）、2,4-二羟基-苯乙酮（G）、（H）2,5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮为丹皮酚的代谢产物。结论：将血清药物化学方法引入到化合物的分离制备领域中,成功地分离鉴定了六味地黄丸的体内直接作用物质。     

六味地黄丸含药血清减弱高糖环境下肾系膜细胞的增殖和炎性因子表达

目的:观察六味地黄丸含药血清对高糖环境下培养的大鼠系膜细胞增殖和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:制备不同剂量大鼠六味地黄丸含药血清,并培养高糖诱导的大鼠系膜细胞。分别给予以下分组处理:空白(NG)组,高糖(HG)组,HG+对照血清组(10%对照血清),HG+低剂量组(2.5%六味地黄丸血清+7.5%对照血清),HG+中剂量组(5%六味地黄丸血清+5%对照血清),HG+高剂量组(10%六味地黄丸血清)。六味地黄丸含药血清处理24,48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法观察系膜细胞活性和增殖的变化,使用ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1和ICAM-1分泌量,RT-PCR法检测系膜细胞MCP-1和ICAM-1 mRNA表达。结果:与空白组比较,高糖组在培养的24,48 h内系膜细胞的增殖活性、上清液中MCP-1和ICAM-1的含量,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达显著上调(P0.01)。与高糖组比较,5%和10%六味地黄丸含药血清均能逆转上述变化(P0.05),且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖关系。结论:高糖可致系膜细胞增殖活性和MCP-1和ICAM-1的表达上调,六味地黄丸可降低增殖活性,减少MCP-1和ICAM-1分泌,下调MCP-1和ICAM-1 mRNA表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化的进展。     

六味地黄丸对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用

目的:研究六味地黄丸对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用.方法:48只小鼠随机分为对照组、模型组、六味地黄丸组、塞络通组;各试验组按照15 mg·kg-1连续sc氢化可的松40 d,第20天时侧脑室注射β-淀粉样蛋白(25-35)(Aβ25-35)6μg建立肾虚型老年痴呆动物模型,对照组给予等量生理盐水.从第21天开始,六味地黄丸组小鼠按8 g·kg-1 ig六味地黄浓缩丸,塞络通组小鼠按32 mg· kg -1 ig塞络通,对照组和模型组以相同体积每日ig蒸馏水.从第31天开始观察、检测各组小鼠的体重及状态、学习记忆能力、自主活动、抗疲劳能力、血清皮质酮含量、免疫学指标及脑组织病理学变化.结果:与对照组相比,模型组小鼠出现体重增长缓慢,自主活动受到抑制,水迷宫学习记忆能力受损,跑步力竭时间缩短,胸腺和脾指数降低,脾细胞刺激指数降低,血清皮质酮值降低.与模型组比较,六味地黄丸组小鼠的体重增长、自主活动、水迷宫上台潜伏期及游出率、跑步力竭时间、胸腺和脾指数、脾细胞刺激指数、血清皮质酮值等得到明显改善(P＜0.05,P＜0.01),而塞络通组小鼠各项指标改善不明显.结论:六味地黄丸对肾虚型老年痴呆症状具有显著改善作用,而塞络通不适合用于改善肾虚症状.     

知柏地黄丸降低三苯氧胺治疗乳腺癌产生的毒副作用临床研究

目的：观察知柏地黄丸对三苯氧胺（TAM）治疗乳腺癌患者所产生毒副作用的治疗效果。方法：将64例符合入选标准的乳腺癌患者,随机分为治疗组和对照组。治疗组口服给予三苯氧胺10mg,每日2次;知柏地黄丸8丸,每日3次。对照组仅予三苯氧胺10mg,每日2次口服。治疗两个月后评价疗效,比较两组患者kupperman症状积分、激素水平以及药物不良反应等观察指标。结果：治疗组kupperman症状积分治疗前后差值与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）;治疗组疗效明显优于对照组,有显著性差异（P〈0．01）。临床观察发现,加用知柏地黄丸治疗对乳腺癌患者雌激素水平无明显影响,不影响三苯氧胺疗效。结论：应用知柏地黄丸配合三苯氧胺治疗乳腺癌,能够改善潮热汗出、失眠、疲乏及情绪异常等毒副作用,提高生活质量,无明显毒副反应。     

补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响

目的研究补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响。方法将60只ICR小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松组、四君子汤组[12.75 g(生药)/kg]、六味地黄汤组[12.5 g(生药)/kg]、桂附地黄汤组[13.5 g(生药)/kg],连续灌胃给药氢化可的松(1.65 mg/kg)14 d建立药源性证候模型;各中药复方组在灌胃氢化可的松的同时及停止氢化可的松灌胃后7 d,每日分别灌胃给药3个中药复方。每日称定小鼠体质量;在第14、21天,运用小鼠辨证论治实验方法学观测小鼠四诊指标;在第15、22天,计算脾脏、胸腺指数,ELISA检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素、肾上腺素和去甲肾上腺素水平,采用实时荧光定量PCR技术检测Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2、Dbh、Ddc、Pnmt、Th mRNA表达,Western blot检测LDLR、SRBI、Star蛋白表达。结果氢化可的松干预后,小鼠体质量,抓力,尾部最低温度,脾脏、胸腺指数,血清皮质酮、促肾上腺皮质激素水平显著下降(P<0.05,P<0.01);显著抑制相关肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并抑制胆固醇转化为肾上腺类固醇激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、StAR)表达。与氢化可的松组比较,桂附地黄汤组显著增加小鼠抓力(P<0.01),四君子汤组、六味地黄汤组和桂附地黄汤组显著升高血清皮质酮均水平(P<0.01),四君子汤组、桂附地黄汤组明显抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),3个复方组能改善LDLR、SRBI、StAR蛋白下降。结论桂附地黄汤对小鼠阳虚证候有所改善,3个中药复方对小鼠阴虚证候疗效不显著。3个中药复方对氢化可的松诱发的肾上腺皮质功能抑制均有缓解作用。