中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.方法采用 MTT 比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响.结果黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用.结论养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物.     

当归补血汤对糖尿病大鼠肾组织的保护作用

目的研究当归补血汤对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)以建立糖尿病模型,给予当归补血汤或苯那普利治疗。实验第4、8周时,观察各组肾重/体重比值、血糖、血脂、蛋白尿及肾组织结构的改变,放免法测定血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,原位杂交法检测肾皮质转化生长因子β1(TGFβ1)基因表达的变化。结果当归补血汤具有与苯那普利类似的控制肾脏肥大,防止和减轻肾功能恶化及肾脏病理改变的作用,这与AngⅡ无关,而与其抑制肾皮质TGFβ1mRNA表达有关。结论当归补血汤可抑制TGFβ1mRNA的表达,改善肾功能,延缓糖尿病肾病慢性病理进展。     

当归补血汤不同配比组方抗动脉血管内皮细胞凋亡作用

目的:研究当归补血汤不同配比组方的抗动脉血管内皮细胞凋亡的作用。方法:不同配比的当归补血汤及黄芪、当归提取液作用于血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉内皮细胞(RAOEC)凋亡模型,观察作用前后RAOEC凋亡率的变化。结果:不同配比的当归补血汤作用于Ang II诱导的RAOEC凋亡细胞后,凋亡率均有不同程度下降,其中3∶1组、5∶1组和黄芪单方组分别为(6.25±2.05)%、(8.69±0.69)%和(7.13±1.53)%,与模型组(14.45±1.87)%相比,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论:当归补血汤不同配比组方均具有抗动脉血管内皮细胞凋亡的作用,但以黄芪当归5∶1和3∶1配比较为显著。     

当归补血汤对糖尿病大鼠肾组织损伤的保护作用

目的探讨当归补血汤(当归、黄芪以5∶1的比例配制)对糖尿病大鼠肾组织损伤的保护作用及可能机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)的方法建立糖尿病大鼠模型,分为正常组,模型组,当归补血汤高、低剂量组[3.6、1.8 g/(kg·d)]及氯沙坦钾组[0.03 g/(kg·d)],灌胃给药,每日1次;12周后,检测当归补血汤对模型大鼠体质量、肾质量体质量比、24 h尿蛋白定量、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)及磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)的影响。结果当归补血汤组大鼠体质量显著增加,肾质量体质量比显著减小,24 h尿蛋白定量、BUN及SCr水平显著降低;当归补血汤可以提高模型组大鼠肾组织SOD活性、降低MDA含有量及降低TNF-α、IL-6和hs-CRP表达;同时有效抑制p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结论当归补血汤具有保护糖尿病大鼠肾组织损伤的作用与其降低氧化应激水平,抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,进而产生抗炎活性有关。     

清热中药对高糖培养下肾小球系膜细胞增殖的影响

为研究清热中药治疗糖尿病肾病的作用机理,验证中医理论对糖尿病发病机制的认识,并为临床用药提供依据。采用MTF比色法,观察具有清热作用的中药知母、生地、胡黄连和地骨皮水提物对体外高糖条件下培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果显示,知母、生地和胡黄连对系膜细胞增殖有抑制作用,而地骨皮无明显作用。提示清热中药可能通过抑制系膜细胞的增殖从而对糖尿病肾病的发生产生一定的影响。     

糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:观察糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖及周期的影响,阐明作用机制。方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖肾康4.6g/kg组、糖肾康13.8g/kg组、糖肾康41.4g/kg组和罗格列酮0.36mg/kg组5组,分别灌胃等体积生理盐水、糖肾康生药4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg和罗格列酮0.36mg/kg,1次/d,连续灌胃7d后腹主动脉取血制备含药血清;小鼠肾小球系膜细胞在高糖(30mmol/L葡萄糖)诱导下经含药血清治疗,分为正常血清组、高糖对照组、10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组、10%糖肾康4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组,治疗24h、48h、72h和96h后,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,划痕标记荧光染料示踪技术检测细胞间隙连接通讯功能(GJIC),RTq-PCR技术检测Cx43、DAG、IP3和PKC的mRNA的表达。结果:(1)与高糖对照组比较,10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组A值在24h、48h、72h和96h各时间段均明显下降,且糖肾康各剂量含药血清组A值从72h开始下降程度优于10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组。(2)与高糖对照组比较,含药血清治疗到72h时,G0/G1期细胞百分比升高,S期百分比降低,细胞增殖指数明显降低;与10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组比较,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组效果更优。(3)与高糖对照组比较,10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组均能改善肾小球系膜细胞的细胞间隙连接通讯功能,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组最优。(4)与高糖对照组比较,10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清均能降低DAG、IP3、PKC的mRNA,升高CX43mRNA,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组最优。结论:糖肾康能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增生,调节细胞周期,改善细胞间隙连接通讯功能功能,促进增殖细胞凋亡,治疗早期糖尿病肾病,其可能机制是糖肾康阻断了DAG/PKC信号通路,增加了Cx43表达,改善了细胞间隙连接通讯功能。     

真武汤对高糖诱导下肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

正糖尿病肾病(DKD)是糖尿病最常见的微血管并发症之一,目前认为细胞的氧化应激反应与糖尿病的微血管病变关系密切。本实验通过观察真武汤对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖和氧化应激的影响,探究其对肾小球系膜细胞增殖和抗氧化能力的影响。1材料与方法1.1实验动物:健康雄性Wistar大鼠50只,体质量220±20g,购于浙江中医药大学动物实验中心,许可证号:SYXK(浙)2017-0015。实验对动物的处理方法符合中     

当归补血汤补血作用机理的探讨

当归补血汤能显著促进正常小鼠SCM,LCM中,及血虚小鼠SCM中CSFs的产生。当归促进,而黄芪显著抑制正常小鼠SCM中CSFs生成。结果揭示当归补血汤的补血活血作用与其刺激CSFs分泌有关,且系当归的作用所致。     

糖肾安对高糖环境下大鼠肾脏及肾系膜细胞炎性因子ICAM-1表达的影响

目的探讨糖肾安对高糖环境下大鼠肾脏及肾系膜细胞炎性因子细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的影响。方法 1实验一:50只健康SD大鼠随机分成正常组和造模组,造模组高糖高脂喂养4周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导2型糖尿病模型,成模大鼠随机分为模型组、糖肾安高剂量组、糖肾安中剂量组、糖肾安低剂量组和西药组,各给药组给予相应药物8周后收集肾脏标本。2实验二:大鼠肾系膜细胞株解冻复苏后制成细胞悬液,将其按照实验一分组方法进行分组,各药物干预组在相应含药血清中培养24 h后收集细胞。2组实验采用Western blot、RT-PCR方法检测ICAM-1表达情况。结果 1实验一:模型组、糖肾安中剂量组、糖肾安低剂量组及西药组ICAM-1表达量均明显高于正常组(P均0.05),糖肾安各组及西药组ICAM-1表达量均明显低于模型组(P均0.05),糖肾安高剂量组ICAM-1表达量明显低于糖肾安中剂量组、糖肾安低剂量组及西药组(P均0.05)。2实验二:各药物干预组ICAM-1表达量均明显高于正常组(P均0.05),但明显低于模型组(P均0.05);糖肾安高剂量组ICAM-1表达量明显低于糖肾安中剂量组、糖肾安低剂量组(P均0.05)。结论糖肾安可抑制大鼠肾脏及肾系膜细胞炎性因子ICAM-1的表达,减轻肾脏组织病理学改变,其肾脏保护作用可能与抑制ICAM-1表达水平有关。     

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法：体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-［4,5-dimethylthylthiazol-2-yl］-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果：与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论：高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

护肾固精方对大鼠系膜细胞增殖周期的影响

目的探讨中药复方护肾固精方对大鼠系膜细胞(MC)生物学行为的影响。方法采用体外培养大鼠MC和血清药理学方法,分为护肾固精方血清组、脂多糖(LPS)病理组及正常对照组,将不同浓度的作用物加入MC共同培养,培养后的MC制成单细胞悬液,经流式细胞仪检测后,计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2/M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞PI。结果不同浓度的作用物对MC增殖周期有不同影响。LPS血清能明显刺激MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比减以及S期细胞增加;细胞的S期抑制百分比明显下降,而细胞的PI则显著增高;中、高浓度的中药血清明显抑制MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比增加及S期细胞减以,细胞的S期抑制百分比明显增加,而细胞的PI则显著降低。并且使大量MC阻滞在G0/G1期,能诱导MC发生凋亡。结论护肾固精方治疗系膜增殖性肾炎等肾小球疾病的作用机理之一,可能与抑制MC增殖和促其细胞凋亡有关。     

肾炎灵对大鼠肾系膜细胞增殖影响的实验研究

目的:研究治疗慢性肾炎有效的中药复方肾炎灵对大鼠肾系膜细胞增殖的影响。方法:取SD大鼠肾脏进行肾系膜细胞体外培养,用肾炎灵浸膏喂服系膜增生性肾炎大鼠,将含药大鼠血清、模型组大鼠血清、正常大鼠血清加入到体外培养的大鼠系膜细胞中,应用MTT法、流式细胞仪检测方法研究肾炎灵对系膜细胞的增殖和细胞周期的影响。结果:喂服中药肾炎灵浸膏大鼠的血清与正常组、模型组大鼠血清相比,显著抑制体外培养系膜细胞的增殖,且将系膜细胞增殖阻滞在G0-G1期。结论:肾炎灵临床治疗有效的机制可能与抑制肾系膜细胞增殖有关。     

复方鱼腥草提取物不同组分对高糖培养小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:比较复方鱼腥草提取物挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:高糖条件下培养小鼠肾小球系膜细胞,分成复方鱼腥草挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物4个药物组,各组给药浓度均为1. 0、2. 0、4. 0、8. 0、16. 0、32. 0、64. 0、128. 0mg/L,给药24 h后以MTT法测定复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用。结果:复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞的增殖均具有抑制作用,其抑制效果具有浓度依赖性;以Graph Pad Prism 5计算得挥发油组分IC_(50)为124. 9 mg/L,水提组分IC_(50)为37. 8 mg/L,醇提组分IC_(50)为44. 6 mg/L,总提取物IC_(50)为27. 7 mg/L。结论:复方鱼腥草提取物不同组分对高糖培养肾小球系膜细胞增殖均具有抑制作用,总提取物效果最明显。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及TGF-β_1 mRNA和NF-κB表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及GMC中转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)及核转录因子(NF-кB)蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①利用噻唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;②用荧光定量PCR的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中TGF-β1mRNA表达的情况;③用Western-blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-кB蛋白的表达情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也增加(P0.05)。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应减少(P0.05或P0.01),并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖及GMC中TGF-β1mRNA和NF-кB蛋白的表达增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,抑制细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖、GMC中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化和间质纤维化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

金钗石斛多糖对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察金钗石斛多糖对高糖作用下大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)氧化应激的影响.方法 采用水提醇沉法进行多糖的提取并经过DEAE-FF对提取粗多糖进行分离纯化;鉴定方法包括红外光谱分析该多糖的特征性吸收峰;紫外分光光度法对多糖纯度进行判定;苯酚-硫酸法进行多糖含量测定.后将HBZY-1细胞分为6组,对照组(NC)、高糖作用组(HG)、NAC组(NAC)、金钗石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)剂量干预组,药物作用时间24h,ABTS法检测各组细胞的总抗氧能力;流式细胞术检测细胞内活性氧的变化;WST-1法检测各组细胞的增殖情况.结果 经水提醇沉及阴离子交换柱纯化得到金钗石斛多糖组分FDP1,测得金钗石斛多糖相对含量为98.1％.与对照组相比,高糖作用组细胞的总抗氧能力下降,而ROS表达明显增加(P＜0.05).金钗石斛多糖干预组与高糖作用组相比,增加ROS生成.高糖作用组较正常组细胞的增殖速度加快(P＜0.05),金钗石斛多糖各剂量组对高糖诱导的细胞增殖无影响.结论 金钗石斛多糖FDP1具有抑制高糖诱导下的HBZY-1细胞总抗氧化能力的下降、ROS生成的增加,对高糖诱导下细胞氧化应激损伤有保护作用.     

不同浓度当归补血汤膜提取物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的:研究不同浓度当归补血汤膜提取物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响.方法:当归补血汤膜提取物的有效成分,以不向浓度分别加到孵化6 d的鸡胚绒毛尿囊膜上,继续孵化3 d观察血管生长状况.结果:在当归补血汤膜提取物较长有效剂量范围内,促鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用随浓度增大而增加.结论:当归补血汤膜提取物能明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生.     

糖肾安对高糖环境下人肾系膜细胞HO-1、VEGF表达的影响

目的观察糖肾安含药血清对高糖环境下培养的人肾系膜细胞血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法选用SPF级雄性Wistar大鼠制备不同质量浓度的糖肾安含药血清,并在高糖环境下培养人肾系膜细胞。实验随机分6组,正常组在正常糖浓度下培养,其余5组(模型组、糖肾安低、中、高剂量组、厄贝沙坦组)在高糖浓度下培养。培养结束后进行实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time PCR, qRT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测高糖环境下人肾系膜细胞HO-1的m RNA及蛋白表达变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高糖环境下肾系膜细胞上清液中VEGF的质量浓度。结果各给药组HO-1的m RNA及蛋白表达较模型组显著上调(P 0.01),VEGF的质量浓度显著下降(P 0.01)。结论糖肾安干预糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)的作用机制可能与上调HO-1的表达,降低VEGF质量浓度有关。     

糖肾安对高糖环境下人肾系膜细胞Nrf2/ARE通路的影响

目的:探讨糖肾安对肾脏的保护作用是否与激活核转录因子NF-E2相关因子(neclear factorerythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)通路,发挥抗氧化应激作用,减轻炎症反应有关。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分6组,正常组、模型组、糖肾安低、中、高剂量组、厄贝沙坦组,制备含药血清;将正常组含药血清加入正常糖浓度培养的肾系膜细胞中培养,其他5组加到高糖培养的肾系膜细胞中培养;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2和谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteinesynthetase,γ-GCS)的mRNA及蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-1,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α)的含量。结果:与模型组比较,各给药组Nrf2,γ-GCS mRNA及蛋白表达显著上调(P0.01),IL-6和TNF-α的含量下降(P0.01)。结论:糖肾安能通过激活Nrf2/ARE通路,发挥抗氧化应激作用,减轻炎症反应,最终实现肾脏保护作用。     

当归补血汤免疫调节作用的研究

从五个方面对当归补血汤的免疫调节作用作了综述。即:对细胞免疫影响的研究、对体液免疫影响的研究、对单核-巨噬细胞影响的研究、对细胞因子诱生作用的研究、对其它免疫调节作用的研究。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞Nrf2表达及T-SOD、MDA的影响

目的研究当归补血汤对高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)核因子相关因子2(Nrf2)表达及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)治疗中的作用机制。方法将60只大鼠分为正常组、高糖组、当归补血汤高剂量组[7 g/(kg·d)]、当归补血汤中剂量组[3.5 g/(kg·d)]、当归补血汤低剂量组[1.75 g/(kg·d)]、格列奇特组[(2 mg/kg·d)],每组10只。应用RT-PCR法检测各组GMCs的Nrf2 mRNA表达情况,Western blot法检测各组GMCs的Nrf2蛋白表达情况,应用黄嘌呤氧化酶法检测各组GMCs培养上清液的T-SOD活性,应用硫代巴比妥酸法检测各组GMCs培养上清液的MDA含量。结果正常组Nrf2 mRNA和蛋白有一定量的表达,高糖组和正常组相比Nrf2 mRNA和蛋白表达均增加,当归补血汤高剂量组对高糖条件下系膜细胞Nrf2 mRNA和蛋白表达均有明显上调作用(P均0.01);与正常组相比,高糖组T-SOD活性明显降低(P0.01),MDA含量明显增多(P0.01),而当归补血汤各剂量组能提高T-SOD的活性,抑制高糖条件下MDA的过多生成,尤其以高剂量组最为明显(P0.01)。结论当归补血汤能上调高糖条件下系膜细胞Nrf2的表达,提高T-SOD的活性,抑制MDA的过多生成,从而抵抗高糖诱导的氧化应激反应,保护系膜细胞。