TP53诱导的糖酵解和凋亡调控因子在常见心血管疾病中的研究进展

TP53诱导的糖酵解和凋亡调控因子(TIGAR)可以减少糖酵解并保护机体免受氧化应激,与呼吸系统、神经系统、消化系统及泌尿系统等多系统疾病之间存在密切关系。近年来研究显示,TIGAR与各心血管疾病,如心肌缺血再灌注损伤、糖尿病心肌病、动脉粥样硬化、心力衰竭之间也存在密切关系。本文就TIGAR结构、生理功能及在常见心血管疾病中的作用作一综述,为心血管疾病的防治提供新的潜在靶点。     

西格列汀通过调控自噬和凋亡减轻棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的:观察西格列汀是否通过调节心肌细胞自噬来减轻棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡.方法:棕榈酸和西格列汀处理H9c2细胞24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞存活率;共聚焦和Western blotting检测自噬标志蛋白LC3的表达情况;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况;Western blotting分析凋亡相关蛋白...     

三氧化二砷对胃癌细胞凋亡与自噬的影响北大核心CSCD

目的探讨三氧化二砷对HGC-27胃癌细胞凋亡与自噬的影响,联用自噬抑制剂氯喹后进一步观察三氧化二砷的抗癌作用。方法取对数生长期的HGC-27胃癌细胞,分为对照组(正常培养的细胞)、不同浓度实验组(三氧化二砷浓度为2,4,8,16μmol·L-1)、氯喹组(氯喹6.25μg·ml-1)、联合用药组(三氧化二砷4μmol·L-1+氯喹6.25μg·mL-1)。以噻唑蓝(MTT)法检测三氧化二砷对HGC-27胃癌细胞的影响,以Annexin V-FITC/PI双染法检测药物对胃癌细胞凋亡的影响,以透视电镜观察胃癌细胞的结构,以Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,以蛋白质印迹(Western Blot)法检测凋亡与自噬相关蛋白。结果药物干预48 h, 2,4,8,16μmol·L-1实验组HGC-27胃癌细胞抑制率分别为(68.40±0.18)%,(61.33±0.39)%,(29.35±1.28)%,(6.00±0.72)%,氯喹组与联合用药组细胞抑制率分别为(87.57±4.22)%,(31.13±1.39)%;药物干预48 h,对照组和2,4,8,16μmol·L-1实验组细胞凋亡率分别为(6.23±1.45)%,(8.97±1.44)%,(14.50±1.39)%,(34.23±2.85)%,(69.07±1.27)%,氯喹组与联合用药组细胞凋亡率为(5.43±1.33)%,(28.33±0.50)%;药物干预48 h,对照组、氯喹组、4μmol·L-1实验组与联合用药组穿过Transwell小室的细胞数分别为60.00±8.04,33.25±3.86,24.00±1.83,6.00±2.16。药物干预48 h,与对照组相比,三氧化二砷能增加细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ的表达量,降低p62蛋白的表达量;增加细胞中凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP及Bax的表达,减少PARP及Bcl-2蛋白表达;与对照组和4μmol·L-1实验组相比,联用自噬抑制剂氯喹后,胃癌细胞中自噬相关蛋白p62及LC3B-Ⅱ表达量显著增加,凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP及Bax表达明显增加,而PARP及Bcl-2蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论三氧化二砷通过降低胃癌细胞的增殖活性,增加胃癌细胞的凋亡率,抑制胃癌侵袭力来发挥抗肿瘤作用,同时三氧化二砷能诱导胃癌细胞产生自噬,而抑制自噬能进一步增强三氧化二砷对胃癌细胞的抗癌作用。     

幽门螺杆菌通过NF-κB信号通路调控胃上皮细胞自噬及凋亡的机制研究

目的 研究幽门螺杆菌通过NF-κB信号通路调控胃上皮细胞自噬及凋亡的机制.方法 体外培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)及人胃上皮AGS细胞株,收集Hp处理0 h、3 h、6 h、9 h及对照组、18μmol·L-1 NF-κB特异性抑制剂SN50处理6 h、18μmol·L-1 SN50+Hp处理6 h的AGS细胞,利用流式细胞仪分别检测各组细胞的自噬率及凋亡率;收集Hp梯度时间处理后的AGS细胞,提取各组总蛋白,蛋白质印迹法(Western Blot)检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ),凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及NF-κB通路相关蛋白p65、p-p65的表达.结果 AGS细胞的自噬率与凋亡率均随着Hp作用时间的延长逐渐升高,各时间点与0 h相比均差异有统计学意义(P<0.01).自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、凋亡相关蛋白Bax及NF-κB通路相关蛋白p-p65的表达随着Hp作用时间的延长逐渐增高,自噬相关蛋白LC3Ⅰ及凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达随着Hp作用时间的延长逐渐降低,与0 h相比,各检测时间点蛋白表达差异有统计学意义(P<0.01).NF-κB通路相关蛋白p65的表达未出现显著性变化(P>0.05).与对照组相比[(6.56±1.40)%、(11.76±1.70)%],Hp处理后,AGS细胞自噬率(9.86±1.78)%与凋亡率(13.25±1.56)%显著增强(t1=11.054,P1=0.000;t2=10.456,P2=0.000);SN50处理后,AGS细胞自噬率(19.65±2.14)%与凋亡率(28.65±2.14)%显著减弱(t1=3.403,P1=0.009;t2=2.799,P2=0.023);Hp与SN50联合处理后,AGS细胞自噬率(20.65±2.14)%与凋亡率(29.65±2.14)%显著高于对照组,但低于Hp单独处理组,差异有统计学意义(t1=5.164,P1=0.001;t2=5.890,P2=0.000;t3=4.718,P3=0.002;t4=5.738,P4=0.000).结论 Hp刺激显著促进AGS细胞的自噬与凋亡,作用机制可能与NF-κB通路的活化有关.     

阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响

目的:研究阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响。方法:以SGC-7901、BGC-823细胞为研究对象,磷酸盐缓冲液(PBS)为阴性对照组,作用时间为48 h,采用MTT法检测1、2、4、6、8、10 mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对胃癌细胞存活率的影响;采用流式细胞术检测2、5mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-MA联用对胃癌细胞凋亡率和细胞周期分布的影响;采用Hoechst33258染色观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞核形态学的影响;采用Transwell小室试验检测5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞迁移的影响;采用激光共聚焦扫描显微镜观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬体形成的影响;采用Western blot法检测2、5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组比较,阿司匹林能明显抑制SGC-7901、BGC-823细胞的存活率,且呈浓度依赖性,但对SGC-7901、BGC-823细胞的凋亡率没有明显影响,能够诱导细胞周期阻滞在G_1期。与阿司匹林单用组比较,阿司匹林+氯喹和阿司匹林+3-MA作用后SGC-7901、BGC-823细胞存活率明显升高,G_1期细胞分布率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照组比较,阿司匹林作用后SGC-7901、BGC-823细胞均未见明显的DNA裂解片段、凋亡小体以及碎块状的浓密亮蓝色,迁移数量明显减少(P<0.001),自噬体明显增加,LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:阿司匹林能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长,使其细胞周期停滞在G_1期,其作用机制可能与激活细胞自噬有关。     

重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的:研究重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法:将肾母细胞瘤细胞分别与高、中、低浓度(1×10~9、1×10~8、1×10~7VP/m L)的重组人p53腺病毒注射液共同孵育20 h,以不加注射液的细胞为空白对照。检测细胞增殖、周期、凋亡及相关基因p21、Bax蛋白表达,检测细胞中自噬相关基因LC-3、Atg7、Atg12表达和自噬体数量。结果:高、中、低浓度重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞的增殖抑制率分别为(42.86±3.18)%、(33.64±7.25)%、(16.26±9.07)%,细胞凋亡率分别为(53.85±9.36)%、(37.35±9.64)%、(23.64±10.65)%。与空白对照比较,高、中、低浓度药物作用下G_0/G_1期细胞均增加,其中高、中浓度药物效果较明显(P<0.05或P<0.01);高浓度下细胞中p21、Bax蛋白和LC-3、Atg7、Atg12基因表达增强,自噬体数量增加(P<0.01);中浓度下细胞中Bax蛋白表达增强(P<0.05),其余指标无明显变化(P>0.05)。结论:重组人p53腺病毒注射液可抑制肾母细胞瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬。     

miR-28-5p靶向BECN1对OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的调控作用

目的 探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法 通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28-5p和BECN1的靶向关系。结果 TUNEL染色和caspase-3蛋白水平检测：与对照组比较,姜黄素明显增加凋亡细胞百分比并表达裂解蛋白caspase-3(P<0.05)。相比姜黄素单独作用,细胞凋亡被miR-28-5p显著减弱抑制(P<0.05)。与对照组比较,姜黄素组beclin1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著降低、P62蛋白表达明显升高(P<0.05);与姜黄素组比较,姜黄素+miR-28-5p抑制剂组beclin1表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高、P62蛋白表达明显降低(P<0.05)。通过在线数据库预测：miR-28-5p与BECN1存在靶向的关系;双荧光素酶报告基因实验显示：与阴性对照组比较,miR-28-5p模拟物显著降低BECN1-wt组的荧光素酶...     

百可利通过调控自噬抗帕金森病的作用机制

目的帕金森病是以运动障碍为主的多巴胺能神经元退行性疾病,其特征性病变是神经元内可见路易小体,α-突触核蛋白聚集形成难以清除的寡聚体。细胞自噬有助于清除胞内损伤的细胞器与蛋白,维持细胞稳态,而α-突触核蛋白寡聚体的清除能力下降可能与胞内自噬障碍有关。百可利通过调节氧化应激与炎症反应、促进寡聚体清除等多种途径发挥神经保护作用,而这种保护作用可能与调控自噬过程有关。方法建立鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞模型,考察百可利对SH-SY5Y细胞的保护作用。Western蛋白印迹法考察鱼藤酮损伤与百可利作用后细胞内α-syn变化,并探究不同时间点下自噬标志性蛋白LC3B表达变化。选取适宜的损伤时间,提取不同组别细胞总蛋白,观察不同浓度的百可利对LC3B表达的影响。通过免疫荧光直接观察细胞中LC3B荧光的表达含量,并考察百可利对LC3B荧光强度的调节作用。进一步探究不同组别细胞蛋白中自噬上游AMPK、m TOR与自噬过程中ULK表达变化,考察自噬上游过程是否被激活。结果百可利对鱼藤酮损伤后的SH-SY5Y细胞具有保护作用,不仅提高细胞生存率,还抑制LDH过度释放,抑制细胞内α-突触核蛋白寡聚物积聚。在鱼藤酮损伤的SH-SY5Y细胞模型中,自噬标志性蛋白LC3B表达量随损伤时间增加而增加。鱼藤酮损伤24 h时,受损细胞中LC3B表达明显增加,给予百可利的细胞中LC3B含量显著下调。免疫荧光结果也证明鱼藤酮促进LC3B荧光强度增加,而百可利不仅抑制核损伤,还能降低过度增加的荧光含量。同时,鱼藤酮损伤细胞中自噬调节蛋白AMPK/m TOR/ULK均明显上调,而百可利有助于恢复至正常水平。结论百可利通过提高细胞生存率,降低LDH表达,减少α-突触核蛋白毒性发挥神经保护作用。鱼藤酮损伤促进细胞内自噬过程的活化,百可利在抑制细胞凋亡的同时,还通过调控自噬活化发挥神经保护作用,而这种保护作用与对自噬体与溶酶体合成过程的调控有待进一步探究。     

冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制

研究冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬拮抗凋亡的机制。MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的细胞毒作用。通过相差显微镜观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化，用流式细胞仪检测细胞自噬和凋亡水平，用Western blotting检测分析药物对蛋白质表达的影响。冬凌草甲素明显抑制HeLa细胞的增殖，诱导HeLa细胞凋亡，同时诱导HeLa细胞发生自噬。Western blotting检测结果表明，冬凌草甲素作用24 h后，促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT-1的表达明显改变。冬凌草甲素(64 μmol·L^-1)诱导的自噬通过影响SIRT-1和线粒体途径蛋白的表达下调凋亡。     

氧化苦参碱通过下调miR-155-5p对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭作用

目的 探讨氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭中的作用和其潜在机制。方法 使用TRIzol法提取组织标本和细胞系的总RNA,检测胃癌组织与癌旁组织中的miR-155-5p表达情况。采用qRT-PCR评估miR-155-5p在人胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）与正常胃黏膜上皮（GES-1、AGS）细胞中的表达情况。将MGC803分为空白组、转染错义序列siRNA组、miR-155-5p模拟物组、miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱（100 μmol/L）组、氧化苦参碱＋miR-155-5p模拟物组。采用MTT法观察不同干预下胃癌细胞的生长抑制作用,用细胞集落形成试验检测不同干预下胃癌细胞的增殖情况。用流式细胞技术分析不同干预对胃癌细胞凋亡的影响。Transwell法检测不同干预后胃癌细胞的迁移、侵袭情况。蛋白质印迹法检测MGC803细胞中Claudin 1、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果 与癌旁组织和胃黏膜细胞（GES-1、AGS）相比,在胃癌组织和胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）中miR-155-5p相对表达量升高（P＜0.001）。而氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达抑制胃癌细胞生长。MTT实验表明,miR-155-5p模拟物的转染后MGC803细胞活力显著增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞、转染和miR-155-5p模拟物的细胞活力（P＜0.001）。与空白组、错义序列siRNA组相比,miR-155-5p模拟物转染后MGC803细胞活力显著增加,细胞集落生成增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞的活力和转染miR-155-5p模拟物的细胞活力,及细胞集落生成数（P＜0.001）。miR-155-5p-模拟物组的细胞迁移和侵袭细胞数显著增加、凋亡比例降低,而氧化苦参碱组和miR-155-5p-抑制剂组细胞迁移和侵袭细胞数量降低、凋亡比例升高（P＜0.001）。miR-155-5p模拟组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2相对表达量增加,而Caspase-3相对表达量降低（P＜0.01、0.001）。而miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱组和氧化苦参碱＋miR-155-5p抑制剂组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2表达较miR-155-5p模拟组显著下降,Caspase-3表达增加（P＜0.001）。结论 miR-155-5p可能是胃癌的治疗靶点,氧化苦参碱可通过miR-155-5p的调节作用发挥抗肿瘤作用。     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。     

逍遥散诱导胃癌细胞凋亡实验研究

采用形态学、结构及原位末端 DNA检测的方法 ,观察逍遥散提取液对胃癌 (MGC- 80 3)细胞的作用。结果显示 ,逍遥散提取液使胃癌 (MGC- 80 3)细胞出现典型的凋亡形态学变化 ,药物组与对照组相比 ,凋亡率差异高度显著 (P <0 .0 1) ,且呈明显的时间、剂量依赖性     

miR-34a通过调控雄激素受体基因抑制前列腺癌细胞系LNCaP增殖

目的:探究miR-34a对雄激素受体(AR)基因的调控作用及对前列腺癌(PCa)LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。方法:收集2016年10月至2019年9月本院泌尿外科行前列腺穿刺活检确诊为PCa患者组织标本36例,另取同期行手术治疗切除的良性前列腺增生(BPH)组织标本41例。体外培养LNCaP细胞,分别转染miR-34a mimics(mimics组),miR-34a mimic NC(NC组),设正常生长细胞为空白对照组(BC组),另在mimics组基础上转染AR过表达(AR过表达组)载体及其对照(AR对照组),采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-34a及AR mRNA表达水平,免疫印迹法检测AR蛋白、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及原癌基因产物(c-Mcy)、细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、capase-3)的表达水平。结果:与BPH组织比较,PCa组织中miR-34a表达水平显著降低(P<0.05),AR mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与BC、NC组比较,mimics组LNCap细胞miR-34a表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著增加(P<0.05),AR、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05),同一时间LNCap细胞活力均显著降低(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示,miR-34a与AR可能存在一定的调控关系,过表达AR基因可逆转miR-34a mimics对LNCaP细胞增殖抑制,促进凋亡作用。结论:miR-34a可能通过调控AR抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,促进其凋亡。     

去甲泽拉木醛通过调控细胞周期和自噬诱导的细胞凋亡抑制K562细胞生长的机制

目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC₅₀值为2.59μmol·L^-1,使细胞周期阻滞于G₁期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。     

半枝莲总黄酮调控MIIP对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的作用及机制研究

目的 研究半枝莲总黄酮（TF-SB）对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的影响和分子机制。方法 采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测TF-SB（0、25、50、100、200 μg·mL⁻¹）作用24 h对AGS细胞存活率的影响。将AGS细胞分为对照组、溶剂对照（含相同浓度的甲醇）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）组、质粒空载体（pcDNA,200 nmol·L⁻¹）组、迁移侵袭抑制蛋白（MIIP）过表达质粒（pcDNA-MIIP,200 nmol·L⁻¹）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）＋小干扰RNA对照（si-con,200 nmol·L⁻¹）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）＋MIIP小干扰RNA（si-MIIP,200 nmol·L⁻¹）组,转染质粒后TF-SB处理24 h,CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl）、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cleaved Caspase-3）、MIIP表达;不同照射量X射线（0、2、4、6、8 Gy）照射后,克隆形成实验检测细胞存活率,并绘制单击多靶模型拟合曲线,Western blotting法检测γ-H2AX蛋白表达。结果 与TF-SB 0 μg·mL⁻¹组比较,TFSB 25、50、100、200 μg·mL⁻¹组AGS细胞存活率显著降低（P＜0.05）;与对照组及溶剂对照组比较,TF-SB 100 μg·mL⁻¹组AGS细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,Bcl-xl蛋白表达显著降低（P＜ 0.05）,cleaved Caspase-3和MIIP蛋白表达显著升高（P＜0.05）;放疗后,TF-SB组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著升高（P＜0.05）,放疗敏感性增加。与pcDNA组比较,pcDNA-MIIP组AGS细胞凋亡率显著增加,细胞存活率显著降低,Bcl-xl蛋白表达显著降低,cleavedCaspase-3蛋白表达增加（P＜0.05）;放疗后,pcDNA-MIIP组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著升高（P＜0.05）,敏感性增加。与TF-SB＋si-con组比较,TF-SB＋si-MIIP组AGS细胞凋亡率显著降低,细胞存活率显著增加,Bcl-xl蛋白表达显著增加,cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低（P＜0.05）;放疗后,TF-SB＋si-MIIP组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著降低（P＜0.05）,敏感性降低。结论 TF-SB通过上调MIIP可抑制AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高其放疗敏感性。     

保护性自噬对顺铂诱导人乳腺癌 MCF-7细胞凋亡的抑制作用探讨

目的：探讨顺铂对乳腺癌 MCF-7细胞自噬的影响及自噬在顺铂诱导凋亡中的作用。方法顺铂处理乳腺癌 MCF-7细胞,MTT 检测细胞增殖的能力,Hoechst 33342染分析细胞的凋亡,吖啶橙染色分析细胞的自噬,Western blot 分析自噬蛋白 LC3Ⅰ／Ⅱ和 p62的表达和凋亡蛋白多聚 ADP-核糖聚合酶 PARP 表达。结果顺铂呈时间和剂量依赖性抑制乳腺癌 MCF-7细胞的增殖,并且凋亡细胞数量随顺铂浓度的递增而增加;同时顺铂能诱导微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白的增加,p62蛋白的减少以及酸性自噬溶酶体的增加,顺铂联合氯喹明显增加了 LC3Ⅱ和 p62的蛋白的表达;与单药顺铂相比,自噬抑制剂氯喹明显降低细胞存活率（89．17％±2．56％）vs （74．63％±1．51％）,（P ＜0．05）,而且 PARP 蛋白发生了明显的裂解（P ＜0．05）。结论顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞保护性自噬,抑制自噬可以增加顺铂诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,自噬抑制剂联合顺铂为乳腺癌提供了新的治疗策略。     

术前区域化疗对胃癌局部淋巴结转移癌细胞凋亡及增殖的影响

目的探讨术前区域化疗对胃癌局部淋巴结转移癌细胞凋亡及增殖的影响.方法应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术对21例经术前区域化疗的进展期胃癌的局部淋巴结转移癌进行凋亡及细胞增殖的检测,并以未经治疗的22例进展期胃癌的局部淋巴结转移癌作为对照. 结果对照组淋巴结转移癌细胞的凋亡率为6.4%±3.5%,而术前区域化疗组的细胞凋亡率16.6%±8.4%,两者差异有统计学意义(P<0.05).PCNA的阳性率对照中为86.4.%(19/22),而术前区域化疗组中其阳性率为42.1%(8/19).结论术前区域化疗可促进胃癌局部淋巴结转移癌细胞凋亡并抑制其增殖,术前区域化疗可作为一种有效的辅助化疗手段.     

人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT染色法检测MFC细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测MFC细胞周期和凋亡情况;MFC移植瘤小鼠,经受试药物处理后,剥取瘤组织称量并计算抑瘤率.结果 与对照组比较,人参皂苷Ro在6～96 μg· mL-1范围内对MFC细胞增殖的抑制率随浓度的增加而显著升高.与对照组比较,人参皂苷Ro高剂量组对MFC细胞G0/G1期和凋亡率明显升高,G2/M期,S期明显降低;人参皂苷Ro各剂量组均能显著抑制肿瘤生长,与模型组比较,各给药组肿瘤的质量明显降低,其中,高剂量组的抑瘤率为62.7％.结论 人参皂苷Ro对MFC移植瘤具有抑制生长的作用,这可能与诱导MFC细胞凋亡和抑制增殖有关.