小檗碱对培养大鼠神经细胞内游离Ca2+的影响

以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接测定了体外培养的新生大鼠神经细胞内游离钙([Ca²⁺]i)值,并观察了小檗碱(Ber)的影响。结果表明,Ber对神经细胞静息[Ca²⁺]i无明显影响,Ber1～100μmol·L^-1能剂量依赖地抑制去甲肾上腺素和H₂O₂引起的[Ca²⁺]i升高,其IC₅₀分别为39.9和17.9μmol·L^-1。高剂量Ber(10～100μmol·L^-1)能抑制高K+引起的[Ca²⁺]i升高。姐果提示,Ber对去甲肾上腺素,高K⁺及H₂O₂引起的[Ca²⁺]i升高的抑制作用可能是其抗脑缺血作用机制之一。     

小檗碱对培养大鼠心肌细胞胞内游离Ca2+的作用

利用Fura-2技术和AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接观察了小檗碱对培养大鼠心肌细胞胞内[Ca²⁺]i的影响。结果显示:小檗碱可明显升高心肌细胞静息[Ca²⁺]i且具饱合性,维拉帕米和CoCl₂对其有一定的抑制作用;小檗碱与高K⁺,高Ca²⁺,去甲肾上腺素,哇巴因合用比单用上述激动剂更能明显增高[Ca²⁺]i;维拉帕米对其有抑制作用;在胞外无外Ca²⁺和无外Ca²⁺,外K⁺,外Na⁺时,小檗碱30～200μmol·L^-1仍能升高静息[Ca²⁺]i,维拉帕米只对前者有一定抑制作用。结果提示:小檗碱可能通过促胞外Ca²⁺内流和胞内Ca²⁺释放等途径有限度地增高心肌细胞内游离Ca²⁺浓度,显示强心作用。     

四氢原小檗碱类药物对培养大鼠单个心肌细胞内游离Ca2+的影响

用Fura-2/AM技术和AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接测定了四氢小檗碱(tetrahy-droberberine,THB)、左旋四氢巴马汀(l-tetrahydropalmatine,THP)和左旋千金藤立定(l-stepholidine,SPO)对培养大鼠单个心室肌细胞内游离钙([Ca²⁺]i)的影响,并与维拉帕米(Ver)做了比较。结果显示,THB,THP,SPD浓度为10～100μmol·L^-1时,均可使静息[Ca²⁺]i轻度升高,河豚毒素不能抑制之;浓度为1～100μmol·L^-1时,可明显抑制高K+引起的[Ca²⁺]i增高;30μmol·L^-1对胞外高Ca²⁺和去甲肾上腺素引起的[Ca²⁺]i增高也有明显的抑制作用,但均较Ver的抑制作用为弱;THPB对哇巴因引起的[ca²⁺]i升高无明显抑制作用。结果提示,THB,THP,SPD在抑制电压依赖性钙通道从而影响细胞膜[ca²⁺]i内流方面与Ver相似,但比Ver弱。     

缺氧缺糖条件下大鼠脑皮质神经元内游离钙浓度的变化及神经生长因子的作用

以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为细胞内钙离子的荧光指示剂，用双波长荧光分光光度计测定了缺氧缺糖时体外培养的大鼠胎鼠神经细胞内游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化，并观察了神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。结果表明，脑皮质细胞缺氧缺糖培养１６～２４ｈ时，细胞大量死亡。ＮＧＦ剂量依赖地减少神经元缺氧缺糖培养２４ｈ时乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放，提高细胞生存力。细胞缺氧缺糖早期引起［Ｃａ２＋］ｉ减少，而后期引起［Ｃａ２＋］ｉ显著升高，导致细胞损害。ＮＧＦ５０μｇ·Ｌ－１在缺氧缺糖早期提高［Ｃａ２＋］ｉ到正常水平，降低后期［Ｃａ２＋］ｉ的升高。提示，ＮＧＦ通过稳定［Ｃａ２＋］ｉ或降低后期的胞内钙升高保护了脑皮质神经元免受缺氧缺糖的损害。     

前胡丙素对培养大鼠心肌细胞内游离Ca~(2+)的影响

用Fura-2/AM技术直接观察前胡丙素(Pra-C)对培养大鼠心室肌细胞内游离钙的影响。结果显示Pra-C浓度为0.1～1.0μmol·L~(-1)可明显抑制CaCl_2,高K~+和Bay K 8644引起[Ca~(2+)]i增加,并且有剂量—效应关系,对ouabain引起的[Ca~(2+)]i增加无明显作用。结果提示Pra-C降低心肌细胞[Ca~(2+)]i的作用与抑制电压依赖性钙通道有关。     

前胡丙素对培养大鼠心肌细胞内游离Ca2+的影响

用Fura-2/AM技术直接观察前胡丙素(Pra-C)对培养大鼠心室肌细胞内游离钙的影响。结果显示Pra-C浓度为0.1～1.0μmol·L^-1可明显抑制CaCl₂,高K⁺和Bay K 8644引起[Ca²⁺]i增加,并且有剂量—效应关系,对ouabain引起的[Ca²⁺]i增加无明显作用。结果提示Pra-C降低心肌细胞[Ca²⁺]i的作用与抑制电压依赖性钙通道有关。     

神经生长因子对谷氨酸及过氧化氢介导的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度升高的影响(英)

以Fura－2／AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,测定谷氨酸（Glu）及过氧化氢（H_2O_2）诱导的新生大鼠脑细胞内游离Ca~2 浓度（［Ca~2 ］_i）升高,并观察了神经生长因子（NGF）的影响。结果显示,新生大鼠脑细胞内静息［Ca~2 ］_i为208±22nmol·L~-1,NGF对神经细胞静息［Ca~2 ］_i无明显影响。NGF1,3,10,30及100μg·L~-1能剂量依赖地抑制Glu和H_2O_2引起的［Ca~2 ］_i升高,其IC_50分别为42.5和27.3μg·L~-1。这表明,NGF降低［Ca~2 ］_i的水平可能是其保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤的机制之一。     

缺氧缺糖条件下大鼠脑皮质神经元内游离钙浓度的变化及神经生长因子的作用

以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定了缺氧缺糖时体外培养的大鼠胎鼠神经细胞内游离钙([Ca²⁺]i)的变化,并观察了神经生长因子(NGF)的影响。结果表明,脑皮质细胞缺氧缺糖培养16～24h时,细胞大量死亡。NGF剂量依赖地减少神经元缺氧缺糖培养24h时乳酸脱氢酶(LDH)的释放,提高细胞生存力。细胞缺氧缺糖早期引起[Ca²⁺]i减少,而后期引起[Ca²⁺]i显著升高,导致细胞损害。NGF50μg·L^-1在缺氧缺糖早期提高[Ca²⁺]i到正常水平,降低后期[Ca²⁺]i的升高。提示,NGF通过稳定[Ca²⁺]i或降低后期的胞内钙升高保护了脑皮质神经元免受缺氧缺糖的损害。     

溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙的影响

目的 研究溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)的影响,并探讨其可能机制。方法 用溴氰菊酯处理分离的大鼠脑细胞,用Fura-2/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,测定神经细胞内游离钙浓度;并利用NMDA受体竞争性拮抗剂AP5、非竞争性拮抗剂MK－801、Na^ 离子通道阻断剂TTX、电压依赖性钙通道阻断剂尼莫地平,探讨了溴氰菊酯影响胞内钙的可能机制;另外还观察了去除胞外钙时溴氰菊酯对胞内钙的影响情况。结果 溴氰菊酯浓度在0－200nmol/L范围内,可以显著提高大鼠皮层和海马细胞内游离钙的浓度（P＜0．01）,并有良好的剂量－反应关系（相关系数分别为r=0.964,r=0.981);AP5、MK－801和TTX可以有效阻断溴氰菊酯的升钙作用;而尼莫地平则无影响;去除胞外钙时,溴氰菊酯的升钙作用也消失。结论 溴氰菊酯导致的胞内钙升高,主要是由谷氨酸激活NMDA受体门控钙通道引起的胞外钙内流,和电压依赖性钙通道及胞内钙库释放无关。     

应用Fura-2/AM检测分离的神经细胞内游离钙及其变化

本文以酶法制备新生大鼠脑细胞悬液,运用近年来发展起来的Fura-2技术,检测此神经细胞内游离钙(以下简写为[Ca²⁺]i)及其变化。结果表明:在静息状态下,其[Ca²⁺]i为240±5nmol/L。高钾去极化可使[Ca²⁺]i成倍增加.钙拮抗剂verapamil和Ilifedipinc能阻断高钾升高[Ca²⁺]i的作用。实验结果证明了所制备的神经细胞悬液的可用性及建立的Fura-2测定[Ca²⁺]i方法的可靠性。     

神经肽DGAVP和Org2766对神经细胞内游离Ca~(2+)的影响

运用Ca~(2+)指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的荧光探针,利用AR—CM—MIC阳离子测定系统,检测了分离的神经细胞内游离钙及其变化,并观测了DGAVP和Org2766对蛋白质合成抑制剂茴香霉素(ANI)引起细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)变化的影响。结果表明茴香霉素可使[Ca~(2+)]_i显著升高,且有量效关系;DGAVP本身并不引起[Ca~(2+)]_i发生显著变化,但适当剂量的DGAVP可显著对抗一定剂量范围内ANI升高[Ca~(2+)]_i的作用,提示DGAVP对抗ANI的蛋白质合成抑制效应可能是通过拮抗ANI升高[Ca~(2+)]_i这一途径实现的,另一神经肽Org2766则可能不是通过这一机制发生作用。从细胞内Ca~(2+)的角度看,这两种肽的作用机理显然是不同的。     

神经肽DGAVP和Org2766对神经细胞内游离Ca2+的影响

运用Ca²⁺指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的荧光探针,利用AR—CM—MIC阳离子测定系统,检测了分离的神经细胞内游离钙及其变化,并观测了DGAVP和Org2766对蛋白质合成抑制剂茴香霉素(ANI)引起细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]_i)变化的影响。结果表明茴香霉素可使[Ca²⁺]_i显著升高,且有量效关系;DGAVP本身并不引起[Ca²⁺]_i发生显著变化,但适当剂量的DGAVP可显著对抗一定剂量范围内ANI升高[Ca²⁺]_i的作用,提示DGAVP对抗ANI的蛋白质合成抑制效应可能是通过拮抗ANI升高[Ca²⁺]_i这一途径实现的,另一神经肽Org2766则可能不是通过这一机制发生作用。从细胞内Ca²⁺的角度看,这两种肽的作用机理显然是不同的。     

银耳多糖对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响

为进一步探讨银耳多糖(TP)免疫调节作用的机制,建立了特异性荧光探针Fura-2测定脾细胞内游离钙离子浓度的方法,观察TP对脾细胞内游离钙离子浓度的影响。结果表明,TP在一定剂量范围内可以剂量依赖方式增加脾细胞内游离钙离子的浓度,并与ConA有协同作用。在外钙为零时,TP对内钙释放无影响,钙通道阻断剂维拉帕米(verapamil 10μg·mL^-1)可阻断TP升高脾细胞内游离钙离子浓度的作用。     

催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙的刺激作用

妊娠末期催产素刺激子宫蜕膜细胞产生与分娩有关的前列腺素,但其作用方式仍未知。本实验分离妊娠19d大鼠蜕膜细胞,测定了催产素作用后蜕膜细胞内游离钙的变化,结果加入0.001～1μmol·L^-1催产素后,蜕膜细胞内[Ca²⁺]i出现瞬息增加,其峰值与催产素浓度呈剂量依赖关系,且此作用有自身钝化现象。说明催产素可能激活妊娠末期大鼠蜕膜细胞内的肌醇磷酯蛋白激酶C系统。给妊娠末期大鼠ip硫酸去氢表雄酮钠盐后分离的蜕膜细胞,催产素作用引起[Ca²⁺]i瞬息增加峰值较对照升高。     

TMB-8对去甲肾上腺素和BHQ引起新生大鼠单个脑细胞内游离钙增高的影响

应用AR-CM-MIC阳离子测定系统,研究TMB-8对体外新生SD大鼠单个脑细胞内游离钙的抑制作用及其机制。结果表明,在无细胞外钙情况下,静息[Ca²⁺]i为79±13nmol·L^-1。TMB-810,30μmol·L^-1能明显降低静息[Ca²⁺]i。TMB-8100μmol·L^-1对高钾去极化引起的[Ca²⁺]i显著增高无明显影响。在细胞外钙为1.3mmol·L^-1时,去甲肾上腺素诱导的细胞内[Ca²⁺]i升高可部分被TMB-8抑制;TMB-8(30μmol·L^-1)对BHQ引起的[Ca²⁺]i的升高无明显抑制作用。而当细胞外液[Ca²⁺]i为0时,TMB-8几乎完全抑制了去甲肾上腺素和BHQ的作用。提示TMB-8降低脑细胞内游离钙的作用机制是通过促使细胞内钙进入肌浆网以抑制内钙的释放,并通过饱和肌浆网内Ca²⁺间接地阻滞细胞膜钙通道。