成纤维细胞表面粘附分子β_1整合素在伤口愈合中的表达

目的研究伤口愈合过程中,细胞外基质(Extracelluar matrix,ECM)中粘附分子整合素β_1的表达与胶原合成之间的密切关系。方法运用间接免疫胶体金标记技术,在电镜下观察了12例中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子β_1整合素的表达及细胞超微结构的变化,并作了流式细胞仪检测。结果中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子整合素α_5及β_1亚单位的表达与对照组相比有显著差异;同时,前者细胞内富含有核糖体积聚的内质网,微管、微丝等细胞器的含量也较高。结论上述结果揭示了在伤口愈合过程中,粘附分子整合素β_1的表达与胶原合成之间有重要的关系,为进一步探索粘附分子在伤口愈合中的作用打下了基础。     

瘢痕成纤维细胞α1-4整合素表达研究

目的 了解增生性瘢痕组织内成纤维细胞膜上α１－４整合素粘附分子表达水平,并探讨整合素在瘢痕增生发展过程中的作用及意义。方法 提取增生性瘢痕及正常皮肤组织中的细胞膜蛋白,以免疫斑点杂交检测整合素表达水平;组织标本石蜡切片,以免疫组织化学染色方法显示不同亚型整合素的表达部位。结果 ①从增生性瘢痕组织中提取的膜蛋白内含有相对较高的α１、α２、α３和α４整合素成份;②在正常皮肤及增生性瘢痕组织的表皮基底细     

瘢痕成纤维细胞中TGF-β受体与整合素相互作用的实验研究

目的:了解TGF-β受体和整合素在瘢痕增生和挛缩过程中的作用.方法:通过荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定经TGF-β受体、整合素和粘着斑激酶(FAK)抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞TGF-β受体以及整合素表达量的变化.结果:经不同抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞其TGF-β RI和整合素β 1的基因拷贝数均较阴性对照组有不同程度的下降(P＜0.05).结论:TGF-β受体和整合素介导的信号传导途径间可能存在着正反馈的效应,共同促进瘢痕的增生和挛缩.FAK是两条信号传导途径的交汇点和作用的中心环节.     

厚朴酚通过抑制TGF-β1抑制增生性瘢痕成纤维细胞中的炎症因子

目的 探讨厚朴酚是否能够通过影响TGF-β1影响增生性瘢痕成纤维细胞的炎症反应。方法 自2019年9月至2020年9月,铁岭市第二人民医院外科从10例增生性瘢痕患者身上采集了10份增生性瘢痕组织样本,10例皮瓣移植患者术后采集10份正常皮肤组织样本。通过ELISA检测增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中白细胞介素（interleukin, IL）-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达情况。获取增生性瘢痕成纤维细胞后,分别采用0、10、20和40μmol/L厚朴酚处理增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞,在处理后24 h,采用ELISA和实时定量PCR检测检测细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、IL-1β和TNF-α的表达情况,Western blot实验检测TGF-β1的表达情况。分别在细胞中转染对照和TGF-β1后,采用0μmol/L和40μmol/L厚朴酚处理细胞,在处理后24 h时,采用ELISA和实时定量PCR检测细胞中IL-1β、TNF-α和TGF-β1的表达...     

光动力学疗法对瘢痕成纤维细胞中转化生长因子β_1的作用

目的:探讨光动力学疗法(Photodynamic therapy,PDT)对体外培养瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSF)中转化生长因子β_1的影响。方法:将原代培养的HSF分为对照组、HMME-PDT组、单纯光敏剂组和单纯激光照射组,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PDT后HSF分泌至上清液的TGF-β_1蛋白表达量,应用Western-Blot观察PDT对细胞浆内转化生长因子β_1的作用。结果:HSF分泌至细胞上清液的TGF-β_1蛋白含量较高,而HMME-PDT后降低;HSF合成的TGF-β_1蛋白水平高,HMME-PDT后HSF中的TGF-β_1蛋白含量减少。结论:HMME-PDT能够阻止TGF-β_1的信号传向细胞核,改变TGF-β_1在HSF细胞水平的表达,使细胞核内细胞增殖及胶原合成有关的靶基因得不到激活,从而抑制HSF增殖。     

荧光定量PCR测定整合素β_1在瘢痕中的表达

目的　了解整合素 β1在增生性瘢痕中表达水平及在瘢痕增生中的作用。方法　应用荧光定量PCR测定整合素 β1在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达。结果　增生性瘢痕中整合素 β1表达明显高于正常皮肤 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论　应用荧光定量PCR可对皮肤细胞内的整合素 β1作较准确的测定 ,其方法简便且敏感。增生性瘢痕与正常皮肤中整合素 β1的表达差异可能是引起瘢痕增生的重要原因     

β1转化生长因子对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白及其受体α5β1整合素表达的影响

目的　研究 β1转化生长因子 (TGF β1)对瘢痕成纤维细胞纤维粘连蛋白 (FN)及其受体α5β1整合素表达的影响 ,探讨TGF β1、FN及其受体α5β1整合素在增生性瘢痕形成发展中的作用。方法　采用细胞培养、ELISA法、免疫组织化学、图像分析技术 ,观察浓度分别为 0、5、10、2 5、5 0、10 0 μg/L的TGF β1作用下 ,瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素表达的变化。结果　TGF β1浓度在 10～ 5 0μg/L之间时 ,可明显刺激瘢痕成纤维细胞FN及其受体α5β1整合素的表达 ,与对照组相比较 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,其作用呈一定的剂量效应关系 ,随着TGF β1浓度增加 ,促合成作用也随之增加 ,浓度在 10 0 μg/L时 ,作用达到饱和。 结论　TGF β1作用下FN及其受体α5β1整合素在成纤维细胞中的过度表达可能与增生性瘢痕形成有关。     

成纤维细胞表面粘附分子β1整合素在伤口愈合中的表达

目的研究伤口愈合过程中,细胞外基质（Ｅｘｔｒａｃｅｌｕａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）中粘附分子整合素β１的表达与胶原合成之间的密切关系。方法运用间接免疫胶体金标记技术,在电镜下观察了１２例中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子β１整合素的表达及细胞超微结构的变化,并作了流式细胞仪检测。结果中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子整合素α５及β１亚单位的表达与对照组相比有显著差异;同时,前者细胞内富含有核糖体积聚的内质网,微管、微丝等细胞器的含量也较高。结论上述结果揭示了在伤口愈合过程中,粘附分子整合素β１的表达与胶原合成之间有重要的关系,为进一步探索粘附分子在伤口愈合中的作用打下了基础。     

成纤维细胞表面粘附分子β1整合素在伤口愈合中的表达

目的 研究伤口愈合过程中,细胞外基质（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒ ｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）中粘附分子整合素β１的表达与胶原合成之间的密切关系。方法 运用间接免疫胶体金标记技术,在电镜下观察了１２例中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子β１整合素的表达及细胞超微结构的变化,并作了流式细胞仪检测。结果 中厚取皮供区创面成纤维细胞表面粘附分子整合素α５及β１亚单位的表达与对照组相比有显著差异;同时,前者细胞     

蛋白激酶A在TGF-β_1刺激增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用

目的 :探讨蛋白激酶 A在 TGF- β1 刺激增生性瘢痕和正常人皮肤成纤维细胞 (HS- FB和 NS- FB)合成胶原中的信号转导作用。　方法 :利用 32 P掺入底物法测定TGF- β1 刺激的 HS- FB和 NS- FB的 PKA活性 ,3H-脯氨酸掺入法和放射免疫法测定胶原合成能力。　结果 :NS-FB被 TGF- β1 刺激后 PKA的活性短暂升高后很快恢复 ,HS- FB则在 30～ 6 0 m in降低 (P<0 .0 5 )。TGF- β1 对两种细胞有加速合成胶原的作用 (30 min后 P<0 .0 5 ) ,HS- FB的合成能力比 NS- FB强 (刺激 6 0 min后 P<0 .0 5 )。c AMP有抑制作用 (6 0 min后 P<0 .0 5 ) ,H7则有拟 TGF- β1 作用(与对照比较时 30 min后 P<0 .0 5 ) ,而 H7可增强 TGF- β1刺激的作用 (30～ 6 0 min时 P<0 .0 5 )。　结论 :TGF- β1 刺激两种细胞后 PKA的活性变化提示 c AMP/ PKA通道参与介导 TGF- β1 信号 :TGF- β1 对 HS- FB的短期刺激作用与PKA活性降低有关 ,但长期刺激作用与 PKA通道活性变化无关 ;c AMP/ PKA活化可以抑制 FB合成胶原。     

整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞VEGF的调控作用

目的 探讨整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)在人瘢痕成纤维细胞中的表达及对成纤维细胞VEGF的调控作用.方法 8例人增生性瘢痕标本采用组织块法分离培养瘢痕成纤维细胞,选取第5～6代细胞备用.实验分为3组①对照组:不做任何处理,只用含10%FCS的DMEM培养液同步培养;②空质粒组:用空质粒转染人瘢痕成纤维细胞;③ILK cDNA表达质粒转染组:用ILK cDNA表达质粒转染人瘢痕成纤维细胞.首先通过免疫细胞化学染色法检测ILKcDNA转染前后成纤维细胞ILK、VEGF的表达变化;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot检测成纤维细胞ILK、VEGF的mRNA和蛋白水平变化;最后采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测3组成纤维细胞上清液中的VEGF蛋白含量.结果 免疫细胞化学染色结果显示瘢痕成纤维细胞胞浆中ILK表达阳性,VEGF表达不明显,经ILK cDNA转染细胞后ILK与VEGF表达均增强;RT-PCR显示ILK cDNA转染组VEGF mRNA表达(0.338±0.060)均高于对照组(0.022±0.001)和空质粒组(0.028±0.005,P＜0.05);Western blot结果显示ILK cDNA转染组VEGF蛋白表达(0.819±0.019)显著高于对照组(0.607±0.033)和空质粒组(0.591±0.024,P＜0.05);ELISA法检测ILK cDNA转染组的VEGF蛋白含量高于其他两组(P＜0.05).结论 ILK可以上调VEGF mRNA及蛋白水平,并且促进成纤维细胞分泌VEGF,ILK可能通过提高瘢痕成纤维细胞合成分泌VEGF而促进增生性瘢痕血管生成.

Abstract：

Objective To explore the expression of intergrin-linked kinase (ILK) and its effect on VEGF expression in fibroblasts from human hypertrophic scar. Methods Fibroblasts were isolated from hypertrophic scar of 8 patients and cultured in vitro. Then the cells were divided into three groups: ① Cells were cultured only in DMEM containing 10% FCS in the control group; ② Cells were transfected with empty plasmid in the empty plasmid group; ③ Cells were transfected with plasmid experessing ILKcDNA in the ILK cDNA plasmid transfection group. First, the expression of ILK and VECF was observed by immunocytochemistry before and after ILK cDNA transfection. Second, ILK and VEGF mRNA expression was investigated by real-time PCR ( RT-PCR). Third, the protein expression of ILK and VEGF was detected by Western blot. Finally, the protein level of VEGF in supernatant of fibroblasts was measured by ELISA. Results Before ILK cDNA transfection, the expression of ILK was positive and the VEGF expression was weak in cytoplasm of fibroblasts . After ILK cDNA transfection, both the expression of ILK and VEGF was enhanced. The level of VEGF mRNA was significantly higher in ILK cDNA transfection group (0.338 ±0.060) than that in control group (0.022 ±0.001) and empty plasmid group (0.028 ± 0. 005 , P ±0. 05 ). The level of VEGF protein was significantly higher in ILK cDNA transfection group (0. 819 ±0. 019) than that in control group (0. 607 ±0. 033) and empty plasmid group (0. 591 ±0. 024, P ＜0. 05). Secretion of VEGF increased remarkably in ILK cDNA transfection group comparing with the other two groups (P＜0. 05). Conclusions ILK could up-regulate the VEGF mRNA and protein level in human scar fibroblasts. It may play an important role in the angiogenesis in hypertrophic scar.     

整合素连接激酶对人瘢痕成纤维细胞中创面收缩相关因子mRNA表达的影响

创面愈合后瘢痕形成及挛缩可致各种畸形,造成严重功能障碍.创面收缩主要缘于Fb与胶原以及ECM之间的相互作用[1],创面愈合后这种作用持续存在,导致瘢痕挛缩.整合素连接激酶( integrin-linked kinase,ILK)通过整合素β1通路促进烧伤创面Fb增生,从而加速创面愈合[2].Fb内的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)和Ⅰ型胶原等与细胞增殖、分化、表型改变等生物学行为有密切关系,在瘢痕形成过程中亦然[3-5].本研究拟观察ILK对人增生性瘢痕Fb中Fn、α-SMA和Ⅰ型胶原以及细胞超微结构的影响,并探讨其可能机制.1 材料与方法1.1 主要试剂与设备小牛血清(FCS)及DMEM培养液购自美国Gibco公司.     

异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1_β作用下的细胞凋亡研究

目的　明确低血清及白介素 1β(IL - 1β)对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法　对 6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及 6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法 ,通过检测Bax、Bcl 2蛋白及特异性DNA梯形条带 ,对不同成纤维细胞在低血清中及IL 1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果　①在低血清中 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Bax Bcl 2蛋白表达比值没有明显改变 ,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡 ,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡 ;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡 ,且Bax Bcl 2比值升高 ,表明发生细胞凋亡。②IL 1β作用下 ,三者成纤维细胞均发生凋亡 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重 ,但Bax Bcl 2比值在瘢痕疙瘩升高 ,在正常皮肤降低 ,增生性瘢痕无明显变化。结论　不同的成纤维细胞特性存在差异。     

6-O-羧甲基壳聚糖对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β_1表达的影响

目的：观察不同浓度6-O-羧甲基壳聚糖（6-O-CMC）对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibrob lasts,HSFBs）转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）蛋白及mRNA表达的影响,在分子水平上探讨其抑制增生性瘢痕生长的作用机制。方法：体外培养人HSFBs,选取第3～5代细胞进行下一步实验。实验分组采用含不同浓度6-O-CMC（0,100,200,400μg/ml）的DMEM培养液分别进行培养。培养24h后,显微镜下观察各组HSFBs形态及生长情况。收集细胞培养上清,运用双抗体夹心ELISA法检测各组TGF-β1蛋白表达水平。运用荧光定量RT-PCR技术检测各组TGF-β1 mRNA表达水平。结果：与空白组相比,三个药物剂量组HSFBs TGF-β1蛋白及mRNA的表达均减少（P〈0.05）,药物浓度越高表达量越低（P〈0.05）,且TGF-β1蛋白及mRNA表达的变化具有一致性。结论：6-O-CMC有抑制体外培养的人HSFBs TGF-β1表达的作用,初步探讨了6-O-CMC发挥抑制增生性瘢痕生长的作用机制,为羧甲基壳聚糖类药物的开发利用提供理论依据。     

水蛭素对皮肤增生性瘢痕成纤维细胞bFGF及TGFβ_1表达的影响

目的：检测水蛭素对人皮肤瘢痕成纤维细胞碱性成纤维细胞因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGFβ1）表达的影响,探讨水蛭素抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：体外培养并鉴定人皮肤瘢痕成纤维细胞,实时荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测不同浓度水蛭素作用人成纤维细胞24h后,bFGF、TGFβ1的mRNA和bFGF、TGFβ1蛋白表达水平。结果：浓度为0.156～2.5 U/L的水蛭素可下调瘢痕成纤维细胞TGFβ1mRNA、蛋白的表达,同时上调bFGF的mRNA、蛋白的表达,不同浓度组间比较,差异有统计学意义。水蛭素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGFβ1,促进其分泌bFGF。结论：水蛭素抑制瘢痕可调节bFGF、TGFβ1分泌,由此抑制成纤维细胞的生长、增殖并进一步抑制瘢痕形成。     

miR-137通过PTN抑制瘢痕成纤维细胞生长

目的分析miR-137对瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法通过芯片分析技术筛选出增生性瘢痕差异性表达的miRNAs,并在增生性瘢痕组织中进行验证。通过miRDB软件预测miR-137能够打靶的蛋白质,采用荧光素酶报告基因实验分析miR-137对PTN的靶向作用。提取原代瘢痕成纤维细胞分别构建miR-137过表达或低表达的细胞系。采用western blot及real time PCR检测miR-137对细胞中PTN的影响,以及MTT方法检测miR-137对细胞增殖的作用;检测miR-137对细胞中Cyclin B1的影响。结果 miR-137在增生性瘢痕组织中呈低表达,可以与PTN的3′UTR区域直接结合来抑制其表达及活性,从而抑制瘢痕成纤维细胞的增殖。Western blot和real time PCR检测结果显示,miR-137能抑制Cyclin B1在瘢痕成纤维细胞中的表达。结论 miR-137可以抑制PTN的表达,而且可以通过抑制PTN来抑制瘢痕成纤维细胞的生长。     

17-β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子-β_1合成的影响

目的　研究雌激素、孕激素对增生性瘢痕形成的影响。方法　体外培养增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB) ,利用免疫组化及计算机图像分析系统测定转化生长因子 (TGF β1)含量。结果　较对照组 ,17 β雌二醇(17 βE2 )各组的HSFB胞浆内阳性信号明显加强 (P <0 .0 5 ) ;而孕酮 (P)各组均不明显 (P >0 .0 5 )。结论　在体外 ,17 βE2 可以明显促进增生性瘢痕成纤维细胞的TGF β1合成 ,而P的作用不明显。     

整合素连接激酶对含成纤维细胞胶原网格收缩的影响

目的 探讨整合素连接激酶(ILK)对含成纤维细胞胶原网格(FPCL)收缩的影响和机制.方法 (1)运用人皮肤成纤维细胞(Fb)构建FPCL,观察ILK-AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对FPCL收缩的影响.(2)运用Western blot印迹法检测ILK小干扰RNA(siRNA)转染和LY294002对Fb中ILK和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果 第24小时和第48小时LY294002组FPCL收缩率[(20.23±9.57)％、(22.47±10.93)％]明显低于对照组[(48.73±6.60)％、( 54.33±12.88)％](P＜0.05),第72、96和120小时FPCL收缩率为(25.58±7.40)％、(26.67±13.76)％、(28.82±3.48)％明显低于对照组(58.00 ±7.54)％、(59.67±11.29)％、(66.95±9.98)％和DMSO组(47.34±12.41)％、(52.26±10.90)％、(56.38±10.75)％ (P＜0.05).LY294002组和ILK siRNA转染组α-SMA蛋白表达(0.992 ±0.255、1.225 ±0.323)与各对照组(2.009 ±0.820、2.190 ±0.577、1.758±0.732)比较均显著降低(P＜0.05).结论 阻断ILK信号通路可明显抑制Fb构建的FPCL收缩和Fb中α-SMA的表达.