穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响。通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理。荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和i NOS水平。穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平。免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况。结果与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的i NOS水平(P0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 m RNA水平。穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 m RNA表达水平相关。     

苹果多糖的制备及对脂多糖诱导RAW 264.7细胞凋亡的影响

摘 要 目的：观察苹果多糖（AP）对脂多糖（LPS）诱导RAW 264.7细胞凋亡的影响及其机制。方法: 采用水提醇沉法从苹果果渣中提取苹果多糖,并测定其糖含量和分子量。采用流式细胞仪考察AP对LPS诱导RAW 264.7细胞凋亡的作用。采用Western Blot法考察AP对LPS诱导RAW 264.7细胞中Bcl 2、Bax蛋白表达的影响。结果: 经水提醇沉法提取纯化得到苹果多糖的糖含量为91.3%,重均分子量为184613 Da。流式细胞仪检测结果显示,LPS诱导RAW 264.7细胞凋亡明显高于正常对照组（P<0.01）;与LPS组比较,浓度为0.5 mg·mL^-1的AP作用72 h后RAW 264.7细胞凋亡率显著降低（P<0.01）,浓度为1.0 mg·mL^-1的AP作用48,72 h后RAW 264.7细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。Western Blot检测结果显示,与正常对照组比较,LPS诱导RAW 264.7细胞中的Bcl 2蛋白在48,72 h表达明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与LPS组比较,浓度为1 mg·mL^-1的AP作用后,升高了LPS诱导的RAW 264.7细胞Bcl 2蛋白的表达,降低其Bax蛋白的表达,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:AP抑制LPS诱导RAW 264.7细胞凋亡,其机制可能是通过提高RAW 264.7细胞中Bcl 2蛋白的表达,降低其Bax蛋白表达。     

HPLC波长切换技术同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的含量

摘 要 目的： 建立HPLC法同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯4个有效成分的含量。 方法: 采用依利特C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;以甲醇-乙腈（2∶1）与0.5%冰醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.1 ml·min^-1;柱温为25 ℃;检测波长（0～20 min、在222 nm波长下检测补骨脂素和佛手柑内酯;20～40 min、在351 nm波长下检测去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯）。结果: 4个有效成分的线性范围分别为：补骨脂素5.380～107.600 μg·ml^-1（r=0.999 5）、佛手柑内酯6.870～137.400 μg·ml^-1（r=0.999 7）、去甲蟛蜞菊内酯4.580～91.600 μg·ml^-1（r=0.999 2）、蟛蜞菊内酯7.300～146.000 μg·ml^-1r=0.999 9）;平均回收率分别为96.82％、98.81％、99.06％、98.39％,RSD分别为0.77％、1.40%、1.20％、0.80%（n=6）。结论:该方法操作准确稳定、灵敏度高、重复性好,可用于息喘丸中上述4个有效成分的定量测定。     

苹果多酚对脂多糖刺激的RAW264.7细胞COX-2/PGE2和iNOS/NO表达的研究

目的 研究苹果多酚(APE)对脂多糖(LPS)诱发的RAW264.7细胞炎症COX-2/PGE2和iNOS/NO表达的抑制作用.方法 采用APE干预LPS刺激的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7,然后用Griess Reagent法和ELISA法检测细胞分泌的一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)的水平,并且采用RT-qPCR和Western blotting技术检测APE对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)水平的影响以及核转录因子(NF-κB)的蛋白表达.结果 APE能显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞中NO、PGE2的含量,下调iNOS及COX-2的表达及NF-κB的磷酸化.结论 APE通过下调NF-κB的活性及iNOS与COX-2表达而发挥抗炎作用.     

芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变。结果芦荟大黄素在0.69～2.50mg·L-1剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00mg·L-1剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性。结论芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的。     

蟛蜞菊内酯对人肾癌细胞的体外生长抑制作用

目的　探讨蟛蜞菊内酯对人肾癌细胞的生长抑制作用及相关机制。 方法　采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察蟛蜞菊内酯对肾癌细胞活力的影响;通过流式细胞分析检测蟛蜞菊内酯对肾癌细胞凋亡和细胞周期的影响;通过免疫印迹法检测细胞凋亡和细胞周期相关蛋白的表达水平。 结果　蟛蜞菊内酯能够以剂量依赖的方式抑制肾癌细胞 ACHN 和 786-O 的生长;蟛蜞菊内酯能显著诱导肾癌细胞发生凋亡和 G0/G1 期阻滞。蟛蜞菊内酯能明显上调促凋亡蛋白 Bax 的表达,抑制抗凋亡蛋白 Bcl-2 和 Bcl-xL 的表达。此外,蟛蜞菊内酯还可抑制细胞周期相关蛋白 cyclin D1、CDK4 及 CDK6 的表达。 结论　蟛蜞菊内酯可诱导肾癌细胞凋亡并发生细胞周期阻滞,从而影响细胞活力,抑制其生长,可作为肾癌治疗的潜在药物。     

新疆圆柏有效成分抑制COX-1/2、5-LO作用及对脂多糖诱导RAW264.7细胞释放TNF-α的影响

目前,临床上常用的抗炎药物主要为非甾体抗炎药,其疗效明显,但均存在潜在的副作用[1]。因此,寻找低毒高效的新型抗炎药是药物研究的一个重要课题。新疆圆柏（Juniperus Sabina）为柏科圆柏属植物常绿匍匐灌木,广泛分布于新疆、甘肃和陕北的干旱荒山和沙地之中。据《维吾尔药志》记载,新疆圆柏枝叶和果实常用于类风湿关节炎等疾病的治疗[2]。     

蟛蜞菊内酯的电喷雾离子阱质谱分析

目的：应用电喷雾离子阱质谱（ESI-MSn）技术对蟛蜞菊内酯进行质谱裂解分析,通过主要特征碎片离子研究其裂解规律。方法：样品溶液进样后,采用ESI-MS1～3碰撞裂解方式,解析蟛蜞菊内酯的特征碎片离子。结果：蟛蜞菊内酯在正离子模式下,采用ESI-MS1获得准分子离子峰[M＋H]＋m/z 315;采用ESI-MS2获得了离子碎片m/z 297、m/z 287;采用ESI-MS3获得m/z259、m/z231等离子碎片。负离子模式下采用ESI-MS1获得[M-H]-m/z313,采用ESI-MS2获得了离子碎片m/z298;采用ESI-MS3获得m/z270、m/z254等离子碎片。结论：蟛蜞菊内酯在软电离模式下,正负离子模式对质谱裂解方式产生差异,其中主要产生的正负离子碎片分别为m/z287和m/z298。本研究为进一步研究蟛蜞菊内酯化合物的体内代谢过程与结构修饰提供实验依据。     

STAT5通路抑制剂对脂多糖诱导RAW264.7细胞的保护作用研究

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)5通路抑制剂对经脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法将处于对数期的RAW264.7细胞分为空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定iNOS mRNA的表达量,Western blot测定iNOS以及磷酸化STAT5(p-STAT5)的蛋白表达量。结果RAW264.7细胞培养24 h后,空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组以及STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞中NO的含量差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);低、中、高浓度STAT5通路抑制剂对RAW264.7细胞释放NO的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞iNOS mRNA以及蛋白质的表达量比较差异有统计学意义(F=123.59、23.37,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞p-STAT5/STAT5表达比较差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论STAT5通路抑制剂能够抑制RAW264.7细胞iNOS的表达以及NO的产生,其机制可能与抑制STAT5磷酸化的表达有关。     

藁本内酯对脂多糖诱导神经炎症的抑制作用

目的 研究藁本内酯(Lig)对细菌脂多糖(LPS)诱导的神经炎症的抑制作用.方法 用1、2.5、5、10、20 μmol·L-Lig作用于小鼠RAW264.7巨噬细胞,加1μg·mL-1LPS刺激构建细胞炎症反应模型,采用MTT法检测细胞毒性,一步法检测NO的释放量,ELISA法检测TNF-α、IL-6的释放量,免疫细胞化学法检测iNOS的水平;将LPS注入小鼠侧脑室构建体内神经炎症模型,术前30 min及术后6h于腹腔注射30 mg· kg-1Lig,造模后24h取大脑,用免疫组织化学法检测GFAP、TNF-α的蛋白表达.结果 经Lig处理后,细胞存活率无明显变化,细胞分泌NO显著减少(P＜0.05或P＜0.01),且呈剂量依赖性,TNF-α、IL-6、iNOS的表达均明显下调(P＜0.05);Lig能显著降低小鼠海马区GFAP、TNF-α的表达(P＜0.01).结论 Lig能够抑制LPS诱导的小鼠体内外的炎症反应,提示Lig对神经炎症相关的多种疾病可能具有潜在的治疗作用.     

LC2W胞外多糖对大肠杆菌脂多糖诱导RAW264.7细胞因子表达的影响

<正>乳杆菌对维持肠道内微生态平衡、提高机体抗感染、抗病毒能力,发挥机体局部或全身的防御功能具有重要作用。乳杆菌的生理功能可能与其所分泌的胞外多糖(Exopolysac-charide,EPS)有密切关系[1-2]。药理研究表明,多糖能激活     

HPLC法测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯

目的建立HPLC波长切换法同时测定肾炎灵胶囊中柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯。方法采用高效液相色谱法,Agilent Extend-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–乙腈(1∶1)与0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长:330 nm(0~14 min检测远柳穿鱼叶苷)、203 nm(14~20 min检测地榆皂苷-Ⅰ)、224 nm(20~29 min检测女贞苷和特女贞苷)、351 nm(29~45 min检测去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯);体积流量:0.8 m L/min;柱温:30℃;进样量为10μL。结果柳穿鱼叶苷、地榆皂苷-Ⅰ、女贞苷、特女贞苷、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯分别在2.97~59.40、19.59~391.80、1.78~35.60、4.96~99.20、1.13~22.60、3.29~65.80μg/m L线性关系良好;平均回收率分别为97.97%、99.78%、96.98%、98.52%、98.10%、99.10%,RSD值分别为0.76%、1.01%、0.66%、1.22%、0.95%、1.56%。结论该方法简便,分析速度快,为完善肾炎灵胶囊的质量标准提供参考。     

原花青素对脂多糖诱导RAW2647细胞COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞COX-2酶活性及蛋白表达的影响。方法放射免疫法检测COX-2酶活性，RT-PCR检测COX-2 mRNA表达，Western blotting检测COX-2蛋白表达。结果原花青素(0.8，4和20 mg·L^-1)不影响LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性，可下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA表达；原花青素(4和20 mg·L^-1)下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2蛋白表达。结论原花青素不影响LPS诱导RAW2647细胞COX-2酶活性，但对LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA及蛋白表达抑制作用明显。     

复方甘草酸苷制剂对脂多糖诱导小鼠RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节作用

目的:研究复方甘草酸苷片剂和注射剂对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的调节作用。方法:采用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RWA264.7,建立体外炎症模型。取复方甘草酸苷片剂和注射剂,制备供试药液。分别通过,MTT、Griess和双抗体夹心ABC-ELISA等实验,测定在不同浓度的供试药液作用下RAW264.7细胞活力以及经脂多糖诱导后的RAW264.7细胞的一氧化氮、肿瘤坏死因子TNF-α及白介素IL-1β、-6和-10等炎症因子分泌量的变化。结果:复方甘草酸苷的2种制剂药液在0～300μmol.L-1浓度范围内对RAW264.7细胞活力无影响。复方甘草酸苷注射剂药液在75、150和300μmol.L-1浓度下对经脂多糖处理的RAW264.7细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为13.8%、40.4%和53.8%,并致细胞的TNF-α分泌量降低29.8%、41.5%和52.1%,IL-1β分泌量降低39.5%、55.6%和69.6%,IL-6分泌量降低18.3%、29.5%和39.1%,但IL-10分泌量却提高了8.2%、23.8%和30.8%;而复方甘草酸苷片药液在相同浓度下对同样细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为9.8%、27.1%和37.8%,致细胞的TNF-α分泌量降低16.6%、37.0%和48.4%,IL-1β分泌量降低28.1%、47.9%和57.9%,IL-6分泌量降低13.5%、19.9%和28.2%,IL-10分泌量提高了3.9%、14.8%和23.4%。复方甘草酸苷的2种制剂对细胞分泌炎症因子的调节作用与阳性对照药地塞米松相似,其中注射剂的作用强于片剂。结论:复方甘草酸苷可剂量依赖性地显著抑制脂多糖诱导小鼠RAW 264.7细胞产生促炎因子一氧化氮、TNF-α及IL-1β和-6并促进抗炎因子IL-10的表达,这可能为其抗炎作用机制。     

鱼腥草素钠对脂多糖诱导单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨鱼腥草素钠(SH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白对照组(等体积培养基),模型组(等体积培养基),SH低、中、高剂量组(1.25,5,10μmol/L),以含不同浓度SH的常规培养基培养细胞2 h,后4组细胞加入LPS继续培养24 h。收集细胞上清液,测定一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及前列腺素E₂(PGE₂)的水平;提取细胞总蛋白,采用Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)蛋白及核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白(NF-κB-P-P65蛋白和P-IκB-α蛋白)的表达水平。结果 与模型组比较,SH中、高剂量组细胞NO水平显著降低,SH低、中、高剂量组细胞TNF-α,IL-6,PGE₂水平和COX-2,NF-κB-P-P65,P-IκB-α蛋白表达水平均显著降低,SH中、高剂量组细胞iNOS蛋白表达水平显著降低...     

蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白结合率的测定

目的：测定蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合率。方法：采用平衡透析法模拟蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合过程,建立HPLC-UV法测定蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白的结合率。结果：在透析24 h后,蟛蜞菊内酯在低（0.62μg·mL-1）、中（3.10μg·mL-1）、高（9.92μg·mL-1）3个质量浓度下与大鼠血浆蛋白的结合率分别为（87.9±2.1）%、（84.7±2.5）%、（83.8±1.9）%。结论：蟛蜞菊内酯与大鼠血浆蛋白有较强的结合作用。     

青蒿乙素对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制及机制

目的 探讨青蒿乙素的抗炎活性及其作用机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,经青蒿乙素处理后,采用Griess试剂检测NO的含量;采用酶联免疫法(ELISA)检测促炎症因子的水平;采用Western Blot检测炎症相关蛋白及激酶的表达水平.结果 青蒿乙素能明显抑制RA...     

铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响

目的研究铁皮石斛多糖(polysaccharides from Den-drobium officinale,DOP)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞活性;ELISA法检测TNF-α的分泌水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-αmRNA表达量;Western blot技术检测胞质I-κBα蛋白的表达量。结果 DOP在20～160mg·L-1范围内明显促进RAW264.7细胞增殖,无细胞毒性;与空白对照组比较,DOP剂量依赖性地促进TNF-α的分泌;上调TNF-αmRNA表达;Western blot结果显示DOP能明显降低胞质内I-κBα蛋白水平。结论 DOP能增强RAW264.7细胞分泌TNF-α,其作用机制可能与降低胞质内I-κBα蛋白水平,活化核转录因子NF-κB,诱导TNF-αmRNA的表达有关。     

11种中药提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成一氧化氮的影响

目的研究11味中药提取物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的抑制作用。方法使用MTT法测试样品对RAW264.7的细胞毒作用,Griess法测定样品对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的含量,N-单甲基-L-精氨酸单乙酸酯(L-NMMA)为阳性对照。结果 11味中药甲醇提取物均具有一定的抑制RAW264.7细胞生成NO的作用,其中秦艽、五加皮、独活、雷公藤、仙鹤草提取物的抑制作用最强(IC50在4.3±0.6~14.8±2.6μg·m L-1),且选择指数较高(SI>27)。结论本研究系统评价了11味常用中药提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响,研究结果进一步证实这些中药的抗炎活性。