维生素C对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型的影响

目的从mtDNA缺失改变，线粒体呼吸酶活力和氧化应激水平的角度研究维生素C（Vc）对D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型的影响。方法建立衰老小鼠模型，PCR法检测实验小鼠mtDNA固定片段的缺失情况，氧电极法检测肝线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶（SUCOX）和NADH氧化酶（NADHOX）活力，荧光法检测肝和脑MDA含量和GPX活性，化学法检测SOD的活性。结果模型组和Vc保护组小鼠都出现mtDNA固定片段缺失，但Vc保护组荧光强度明显低于模型组。与模型组相比，对照组线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶和NADH氧化酶活性显著降低，Vc保护组线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶和NADH氧化酶活性显著升高；对照组和Vc保护组小鼠肝脑MDA含量和SOD活性降低。结论Vc可以减轻D-半乳糖诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤，保护mtDNA和增强线粒体氧化呼吸酶活性。     

抗衰1号对老年小鼠肝线粒体DNA缺失的影响

目的研究抗衰1号对老年Balb/c小鼠肝线粒体DNA(mtDNA)缺失突变的影响.方法老年Balb/c小鼠随机分为老年空白组和抗衰1号组,分别给予生理盐水和抗衰1号4个月.采用聚合酶链反应(PCR)技术和光密度扫描检测两组mtDNA的缺失情况.结果与老年空白对照组比较,抗衰1号能显著减少老年Balb/c小鼠mtDNA的缺失(P＜0.001). 结论抗衰1号可以抑制老年小鼠mtDNA的缺失,提示补肾健脾活血通腑法组方能减少mtDNA的氧化损伤,对mtDNA有保护作用,从而从分子水平提供了本法延缓衰老的可能机理.     

康欣口服液对老年小鼠肾线粒体DNA缺失突变的影响

目的 研究康欣口服液对老年Balb/c小鼠肾线粒体DNA（mtDNA）缺失突变的影响.方法 老年Balb/c小鼠随机分为空白组和康欣口服液组,分别给予生理盐水和康欣口服液4个月.采用聚合酶链反应（PCR）技术和光密度扫描检测两组mtDNA的缺失突变情况.结果 与空白对照组比较,康欣口服液能显著减少老年Balb/c小鼠肾mtDNA的缺失（P＜0.001）.结论 康欣口服液可以抑制老年小鼠mtDNA的缺失突变,对mtDNA有保护作用.     

不同游泳形式运动对衰老小鼠模型骨骼肌线粒体DNA缺失的影响

目的 研究不同形式运动对衰老小鼠模型骨骼肌线粒体DNA(mtDNA)的影响.方法 用D-半乳糖诱导衰老模型小鼠,以不同形式运动方式训练小鼠6 w后检测腓肠肌组织SOD活性、MDA含量和mtDNA的缺失比例.结果 运动各组与无运动组相比小鼠腓肠肌组织SOD活性显著提高(P＜0.05),MDA含量显著降低(P＜0.05),mtDNA缺失比例显著降低(P＜0.05).结论 运动能够降低线粒体缺失率和减轻自由基的损伤,使抗氧化酶和线粒体产生适应性的变化,从而延缓衰老的发生或减轻衰老的程度.     

松花粉对衰老成纤维细胞线粒体DNA缺失突变的影响

目的 通过研究松花粉对衰老细胞线粒体(mt) DNA4977缺失突变的影响,探讨松花粉抗衰老的作用机制.方法 将细胞分为青年组、衰老细胞组、含240 mg/dl松花粉的衰老细胞处理组,三组细胞分别用不同培养基培养后,抽提线粒体DNA,进行PCR检测mtDNA4977缺失突变,以线粒体DNA中保守序列PCR扩增结果作为内参,比较各组mtDNA4977缺失突变在总线粒体DNA中的比例;同时对各组细胞进行β-半乳糖苷酶染色;并测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果 松花粉能够改善衰老成纤维细胞的衰老变化,并能降低衰老细胞mtDNA4977的缺失突变,提高细胞SOD活性及降低其MDA含量(P＜0.05).结论 松花粉可能通过减轻成纤维细胞的氧化损伤,从而保护细胞mtDNA延缓成纤维细胞的衰老.     

菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝线粒体保护作用的实验研究

目的探讨菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝脏线粒体的保护作用及机制。方法将纯系昆明种小鼠50只,随机分为青年组、衰老模型组、给药15d组、给药30d组和给药45d组。D-半乳糖制作衰老模型,经胃灌服菟丝子醇提液。采用比色分析法测定呼吸链复合体Ⅳ活性,PCR法检测线粒体DNA缺失,RT-PCR法检测COⅠmRNA的表达水平;同时观察不同给药天数对上述指标的影响。结果D-半乳糖可诱导小鼠肝线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性降低（P〈0.01）,肝mtDNA的缺失增加,呼吸链复合体ⅣCOⅠ亚基mRNA的表达水平增高。菟丝子醇提液可提高呼吸链复合体Ⅳ活性,减少mtDNA缺失,降低呼吸链复合体ⅣCOⅠ亚基mRNA的表达。结论菟丝子醇提液可提高衰老模型小鼠呼吸链复合体Ⅳ活性,降低COⅠ亚基mRNA表达,减少mtDNA缺失,而发挥保护肝脏线粒体的作用,并随给药时间的延长作用更显著。     

鸡胚低分子提取物对D-半乳糖拟衰老小鼠线粒体DNA缺失突变的影响

目的 探讨鸡胚低分子提取物对D-半乳糖诱导的衰老小鼠线粒体DNA(mtDNA)缺失突变的影响.方法 采用D-半乳糖诱导制备衰老小鼠模型并用鸡胚低分子提取物处理.用聚合酶链反应技术和琼脂糖凝胶电泳检测mtDNA缺失片段,密度扫描技术对扩增片段进行相对定量.缺失片段构建质粒后,直接测序进行鉴定.结果 全部小鼠的肝、大脑皮质与海马组织内均存在4239 bp的mtDNA缺失片段.衰老模型鼠不同组织mtDNA缺失的相对百分含量均明显高于正常对照组(均为P%0.01),而鸡胚低分子提取物可明显降低模型鼠肝、大脑皮质与海马组织内mtDNA缺失的比例(均为P＜0.05).肝组织中mtDNA缺失的比例较大脑皮质和海马组织更高.结论 4239 bp的mtDNA缺失片段普遍存在于小鼠中,鸡胚的低分子提取物可以明显减少D-半乳糖拟衰老小鼠4239 bp的mtDNA缺失的发生.     

康欣口服液对老年小鼠脑线粒体DNA缺失突变的影响

目的 研究补肾健脾养血活血法对Balb/c小鼠脑线粒体DNA(mtDNA)缺失突变的影响.方法 近交系Balb/c老年小鼠(14个月)分别灌胃给予生理盐水(老年空白对照组),康欣口服液(老年康欣口服液组),连续4个月后处死,提取脑组织的mtDNA,采用PCR技术分别扩增野生型和缺失型的mtDNA 片段,运用凝胶成像仪进行光密度扫描,比较两组缺失型mtDNA/野生型mtDNA的光密度比值.结果 近交系老年Balb/c小鼠脑mtDNA中存在明显的片段缺失,与老年空白对照组相比,康欣口服液能显著降低老年Balb/c小鼠mtDNA的缺失率(P＜0.001).结论 补肾健脾养血活血法可以抑制老年小鼠脑mtDNA的缺失.     

自然衰老与半乳糖衰老模型大鼠心肌与非酶糖基化相关性研究

目的以非酶糖基化和自由基学说探讨心肌老化的发生机制。方法用D-半乳糖制作老化模型与自然衰老组及成年对照组SD大鼠相比较,观察电镜下心肌超微结构的改变及心肌内AGEs含量,抗氧化指标的变化,及各组线粒体DNA(mtDNA)的缺失率。结果2组衰老组糖基化终末期产物(AGEs)、mtDNA缺失率及丙二醛(MDA)均较成年对照组显著增高,过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)在2组衰老模型较成年对照组显著降低,自然老化和半乳糖老化病理都表现为肌细胞肿大,脂褐素沉积,线粒体和肌质网等膜结构明显损伤。结论心肌的老化与非酶糖基化(NEG)相关,而其诱导自由基的损伤,导致心肌细胞的凋亡。     

一种新发现的线粒体DNA大片段缺失与衰老的关系初探

目的 在人外周血细胞中筛选新的线粒体DNA（mtDNA）大片段缺失突变,探讨mtDNA尤其在片段缺失突变与衰老的关系。方法 以人外周血细胞DNA为模板,进行聚合酶链反应（PCR）扩增,产物克隆、测序。用PCR半定量方法测定1条长达13．1kb的mtDNA缺失突变,＜60岁组和≥60岁组突变型与野生型的比例,差异有显著性。结论 该突变以前未见报道,可能是一种与衰老有关的缺失突变。     

老年耳聋的线粒体DNA4977缺失研究

目的探讨mtDNA4977缺失与老年耳聋的关系。方法提取老年耳聋组(20例)与老年听力正常组(20例)的外周血DNA,采用聚合酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)及巢式PCR技术,扩增正常及缺失区mtDNA片段。结果在6例老年耳聋中检测到了mtDNA4977缺失,而听力正常的老年组中未检测到mtDNA4977缺失。结论mtDNA4977缺失是老年耳聋的发病原因之一。     

病毒性心肌炎与扩张型心肌病心肌线粒体DNA缺失的定量分析

目的对比研究病毒性心肌炎(VMC)与扩张型心肌病(DCM)患者活检心肌组织线粒体DNA(mtDNA)缺失突变情况及其与外周淋巴细胞mtDNA缺失程度的相关性.方法用定量PCR法检测20例VMC患者、12例DCM患者心肌细胞及其外周血淋巴细胞mtDNA4977碱基对(mtDNA4977)和mtDNA7436碱基对(mtDNA)缺失率.取12例健康意外死亡者心肌和23例献血员外周血淋巴细胞作正常对照.结果正常对照者、VMC和DCM患者心肌细胞均存在mtDNA4977及mtDNA7436缺失,合计缺失率分别为0.175%、0.385%和3.004%;外周淋巴细胞mtDNA缺失程度与心肌细胞呈一致性改变,且有良好的相关性(r=0.960,P＜0.001).结论mtDNA缺失可能是VMC发病及其向DCM演变的一个重要心肌损伤机制;外周淋巴细胞在研究心肌细胞mtDNA缺失中的作用值得进一步探讨.     

增龄对SAM小鼠脑线粒体DNA氧化损伤的影响

目的探讨增龄对SAM小鼠脑线粒体DNA(mtDNA)缺失、活性氧自由基水平及脑组织总抗氧化能力的影响。方法SAM-P／8和SAM-R／1小鼠分别分为三组幼年组(0．5月龄)、青年组(2月龄)和老年组(12月龄)各6只。用PCR方法测定脑组织线粒体DNA缺失、用化学发光法测定总抗氧化能力及活性氧自由基。结果随增龄，SAM—P／8小鼠脑组织线粒体DNA缺失增加，线粒体活性氧自由基水平升高，脑组织总抗氧化能力下降。结论随增龄，SAM-P／8小鼠脑组织氧化损伤增加，可能是导致其记忆学习障碍的原因之一。     

充血性心力衰竭患者线粒体DNA缺失的意义

为探讨线粒体DNA（mtDNA）5．0kb缺失与充血性心力衰竭（CHF）发病的关系，应用聚合酶链反应（PCR）技术分析72例CHF患者的mtDNA。结果显示，CHF患者mtDNA5．0kb缺失率明显高于对照组（0.254％±0．08％比0．032％±0．01％，P＜0．01）；CHF组内扩张型心肌病组及冠心病组mtDNA5．0kb缺失率高于风心病及高血压心脏病组（P＜0．05）。研究中还发现，随着心功能分级增加，mtDNA5．0kb缺失率增高（P＜0．05）。提示mtDNA缺失影响心肌细胞线粒体呼吸功能，心肌能量供应障碍与CHF的发生、发展有关。     

慢性染砷大鼠肝脏线粒体DNA及相关酶活性变化研究

目的 探讨慢性染砷大鼠肝脏线粒体DNA（mtDNA）及线粒体相关酶，特别是mtDNA编码酶活性的变化。方法 Wistar大鼠经饮水给75mg／L三氧化二砷6个月。用分光光度法测定肝脏线粒体呼吸酶活性：碱变性法提取大鼠肝脏mtDNA；以PCR大片段扩增法扩增长片段mtDNA；用HindⅢ、EcoRⅠ、SalⅠ、BamHⅠ、MspⅠ、MboⅠ、StuⅠ7种限制性内切酶对扩增片段进行酶切分析。结果 染砷大鼠肝脏线粒体细胞色素C氧化酶（CytCOX）和ATP酶活性下降；而经mtDNA扩增片段凝胶电泳分析和7种限制性内切酶酶切分析，未发现染砷大鼠肝脏参与编码上述2种线粒体酶的4151bp片段有碱基缺失、重复和突变等异常表现。结论 慢性染砷能够导致肝细胞mtDNA参与编码的CytCOX和ATP酶活性下降，进一步证实了染砷对肝细胞及其线粒体的损害作用。但其活性下降的机制，目前尚不能以砷致mtDNA片段的变化来解释，需进一步进行DNA序列分析研究。     

病毒性心肌炎小鼠心肌与骨骼肌细胞线粒体损伤及其相关性

目的探讨病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌与骨骼肌细胞线粒体损伤（线粒体膜磷脂脱失和线粒体DNA3867缺失）程度及二者的相关性。方法50只BALB/c小鼠随机分为2组,实验组（40只）腹腔注射内含柯萨奇B3病毒（Coxsackievirus B3,CVB3,TCID50=108）的Eagle液制备VMC小鼠模型,另10只为对照组。分别于病毒感染后3、11和24 d行心肌和骨骼肌细胞线粒体膜磷脂脱失程度和mtDNA3867缺失率的测定,并用Spearman法对其进行相关分析。结果实验组小鼠在病毒感染后3 d,可见心肌和骨骼肌细胞mtDNA3867缺失率显著高于对照组（P<0.05）,而线粒体膜磷脂脱失程度与对照组相比无显著性差异;病毒感染后11 d,心肌和骨骼肌细胞mtDNA3867缺失性损伤达高峰（P<0.05）,线粒体膜磷脂脱失程度亦显著高于对照组（P<0.05）;病毒感染后24 d,心肌和骨骼肌细胞线粒体膜磷脂脱失和mtDNA3867缺失程度与感染后11 d组比较无显著性差异,但与对照组和病毒感染后3 d组比较,仍有显著性差异（P<0.05）。线粒体的上述损伤性改变在心肌和骨骼肌细胞呈一致性同步变化,且具有良好相关性（P<0.05）。结论CVB3可显著损伤心肌和骨骼肌线粒体DNA和膜磷脂,两者损伤具有相关性,提示骨骼肌有望成为反映心肌细胞线粒体损伤的外周细胞“窗口”。     

线粒体脱氧核糖核酸缺失与病毒性心肌疾病患者心功能损伤的关系

目的探讨不同心功能状态病毒性心肌疾病患者外周淋巴细胞线粒体脱氧核糖核酸(mtI)NA)缺失率,为进一步明确mtDNA损伤在病毒性心肌疾病发病中的作用提供分子依据方法将83例病毒性心肌疾病患者分为病毒性心肌炎组(VMC组,n=50)和扩张型心肌病组(DCM组,n=33),23例健康献血者为对照组.用定量多聚酶链反应(PCR)法检测患者外周淋巴细胞mtDNA4977碱基对(mtDNA4977)和mtDNA7436碱基对(mtDNA7436)缺失率,并分析mtDNA缺失程度与心脏扩大及心功能状态的关系.结果VMC组和DCM组外周淋巴细胞mtDNA缺失率显著高于对照组(P<0.001);mtDNA缺失率的高低与心功能损害呈一致性改变,NYHA心功能I级与IV级者mtDNA缺失率分别比对照组高12.4倍和110.3倍;mtDNA缺失率与心功能分级、心胸比率及心腔内径呈正相关,与左心室射血分数(LVEF)呈负相关;mtDNA4977和mtDNA7436缺失率与LVEF的相关系数分别为-0.681和(0.675(P均<0.05).结论mtDNA缺失突变与病毒性心肌疾病患者心功能的损伤密切相关,可能在该病发生与发展中起一定作用.     

心肌mtDNA4977缺失与扩张型心肌病猝死的关系

目的探讨扩张型心肌病(DCM)猝死者心肌线粒体DNA(mtDNA)4977缺失情况及其与猝死的关系.方法从近7年尸检案例中挑选11例DCM猝死和14例对照组病例及心肌组织蜡块,按常规方法提取心肌mtDNA,用PCR、琼脂糖紫外凝胶成像技术确定扩增产物激光密度,初步定量检测mtDNA4977缺失率.结果DCM猝死11例中,未成年人2例;成人9例,均为男性,年龄22～49(平均38)岁.对照组14例中,未成年人1例;成人13例,其中男11例,女2例,年龄19～47(平均37.23)岁,死因为机械性损伤和窒息各2例,电击死2例,中毒2例,非心肌病猝死6例.DCM11例(占100%)、对照组2例(占14.28%)检见不同程度的mtDNA4977缺失;两组病例mtDNA4977缺失率均值分别为0.92%和0.09%,差异有统计学意义.结论DCM猝死者心肌可检见mtDNA49 77缺失;其心肌mtDNA4977缺失突变与DCM猝死有关.     

增龄大鼠心肌线粒体DNA损伤及DNA修复酶γ表达的变化

目的:探讨大鼠增龄过程中心肌组织DNA损伤和DNA修复酶表达的变化。方法:从不同月龄的大鼠心肌组织中提取DNA、RNA及蛋白。采用定量多聚酶链反应(Q-PCR)检测心肌DNA损伤;用RT-PCR和Western blot检测DNA修复酶γ(Polγ)表达的变化。用ELISA法检测DNA内8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平。结果:随着鼠龄的增长,大鼠心肌组织中核DNA(nDNA)损伤不明显,线粒体DNA(mtDNA)损伤严重,DNA内8-OHdG的水平增加,Polγ的表达下降。结论:随着鼠龄的增长,大鼠心肌组织中DNA修复酶Polγ的表达下降,mtDNA损伤增加。DNA损伤与DNA修复能力下降间会引起恶性循环,最终可导致DNA损伤的增加加快心脏衰老。     

间歇有氧运动训练上调SIRT3改善衰老心肌线粒体功能

目的 探讨间歇有氧运动训练（AIT）对调节SIRT3介导的抗氧化酶系统改善老年小鼠心肌线粒体功能的影响。方法 采用C57小鼠（20月龄）20只,随机分为AIT组和非运动组,每组10只。以成年野生型C57小鼠非运动组(4月龄,10只)为对照组。建立间歇有氧运动训练12周小鼠模型,跑台训练由3部分构成:10 min热身运动,7 min间歇训练（4 min高强度和3 min低强度训练）及1 min冷却。每日训练1 h,每周训练5 d,训练时间为12周。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体抗氧化酶相关蛋白的表达。结果 AIT显著上调衰老心肌中线粒体去乙酰化酶sirtuin-3（SIRT3）表达水平,提高AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平(P<0.05);AIT可改善老年组小鼠心肌线粒体抗氧化酶(MnSOD、Catalase)的活性,有效减少衰老心肌脂质过氧化损伤(P<0.05);AIT训练显著提高衰老心肌线粒体生物合成能力改善了线粒体的功能(均P<0.05)。结论 有氧间歇运动训练可有效地上调衰老小鼠心肌细胞SIRT3水平,有效提高衰老小鼠心肌线粒体功能,其机制可能与激活心肌SIRT3所介导的抗氧化酶系统有关。