骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子α的研究

目的：探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓细胞凋亡及髓内肿瘤坏死因子α（TNFα）水平,初步揭示MDS无效造血机制,方法：采用TUNEL法检测26例MDS及10例正常健康对照组新鲜骨髓单个核细胞（BMMNC）凋亡,RT－PCR探讨…BMMNC中TNFαmRNA表达,ELISA法测定骨髓上清液TNFα蛋白水平。结果：早期MDS（RA＋BM原始细胞＜10％RAEB）患者的骨髓细胞凋亡率明显增加,进展期MDS（BM原始细胞＞10％RAEB＋RAEB－t)骨髓细胞凋亡率与对照组无显著差异,凋亡累及各阶段幼稚粒细胞及有核红细胞。早期MDS细胞凋亡程度与骨髓增殖程度有关。58％（15／26）MDSTNFαmRNA,77%(20/26)MDS髓内TNFα蛋白升高,早期MDS髓内TNFα水平与凋亡呈正相关,并于外周血血红蛋白（Hb）量呈负相关。结论：早期MDS骨髓细胞凋亡增加,随病情演变,凋亡逐渐下降,这可能与异常克隆逃逸凋亡有关。髓内TNFα增加是骨髓细胞发生凋亡的机制之一。α     

骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞免疫表型的测定

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组难治的以血细胞质、量异常和极易发展为急性髓系白血病为特征的恶性克隆性造血干细胞疾病。对MDS的髓系免疫表型的研究已有报道。笔者从1997年开始应用流式细胞仪对12例MDS患者的骨髓单个核细胞淋巴细胞、髓细胞等进行了免疫表型的检测,现将结果报道如下。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与TNF—α和Fas／FasL系统关系的研究

目的：探讨TNF—α和Fas／FasL的表达及骨髓细胞凋亡与骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS）发生发展的关系。方法：采用ELISA法检测MDS患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度，采用流式细胞术测定骨髓CD34^＋细胞Fas、FasL的表达率和细胞凋亡率。结果：各型MDS惠者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度和CD34^＋细胞Fas、FasL的表达率均明显高于正常对照组（P〈0．01）。其中RA／RAS组的TNF-α浓度和CD34^＋细胞Fas^＋表达率均明显高于RAEB和RAEB-t组（P〈0.001），而RAEB与RAE-t组组间无明显差异（P值分别为0.115和0．239）；RAEB和RAEBt组细胞的CD34^＋ FasL^＋表达率明显高于RA／RAS组（P值分别为0．001和0．010）。RA／RAS和RAEB组的细胞凋亡率均高于对照组（P值均为0.000），而RAE-t组的细胞凋亡率与对照组相近（P=0.216）。各型MDS患者TNF-α浓度与CD34^＋Fas^＋表达率呈正相关（r=0．570，P=0．012）。而CD34^＋细胞凋亡率与TNF-α浓度或CD34^＋Fas^＋表达率之间均无直线相关关系（P值分别为0．103和0．091）。结论：MDS患者骨髓细胞的调亡受多因素的调节．TNF-α与Fas／FasL系统介导的凋亡以及机体对其调控的失常参与了MDS骨髓无效造血的病理生理过程。     

骨髓增生异常综合征细胞学诊断

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组源于造血于细胞的恶性克隆性疾病。病程不同阶段患者反应的差异可呈不同的临床表现和血液学异常。对本病的诊断主要靠细胞形态学指标。我院84～92年收治50例，现报告如下。l临床资料50例中男刀例，女19例，年龄2）1至70岁，参照82年FAB关于MDS诊断标准及杨崇礼等关于白血病前期骨髓象、血象的改变［’1诊断分型。RA20例，RA—SIS例，RAEBg例，RAEB—T6例。47例有程度不同的贫血，发热9例，出血18例，肝、脾、淋巴结有一项及以上肿大者问例，就诊前病程1周至7年，6个月以内者22例。全血细胞数呈一…     

骨髓增生异常综合征

本文根据1982年FAB协作组提出的骨髓增生异常综合征(简称MDS)分类诊断标准,总结了我院从1981年10月～1989年6月住院病人中的MDS患者45例。其中难治性贫血(RA)15例,难治性贫血伴有环状铁粒幼细胞(RAS)5例,原始细胞增多的难治性贫血(RAEB)15例,慢性粒单核细胞性白血病(CMML)1例,原始细胞增多的难治性贫血转化型(RAEB-T)9例。并就MDS的临床表现,血象及骨髓象的形态设变进行了分析。并着重讨论MDS与白前的关系,诊断、分型及治疗。经追踪观察45例中已有12例转化成急性白血病。     

骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性的研究

目的：通过研究骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性,探讨致ＭＤＳ无效造血的可溶性因素。方法：以甲基纤维素半固体细胞培养法,观察患者血清对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ,ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用,及对单个核细胞素集落生成的刺激作用;以ＤＮＡ末端标记技术,检测１例ＭＤＳ患者血清与正常骨髓单个核细胞共育后的凋亡细胞。     

AXL基因在骨髓增生异常综合征外周血单个核细胞中的表达

目的 探讨AXL基因在正常人、骨髓增生异常综合征(MDS)及其他血液病患者外周血单个核细胞中的表达情况。方法 采用RT—PCR法。结果 ①AXL基因在10例正常人外周血单个核细胞中不表达，正常骨髓单个核细胞中有表达。②50例MDS患者的外周血单个核细胞中有41例(82％)A)比基因阳性。FAB亚型与AXL表达关系：35例难治性贫血(RA)者中27例阳性，3例环形铁粒幼细胞性难治性贫血(RAS)阳性；9例难治性贫血伴过多母细胞(RAEB)者中8例阳性，3例难治性贫血伴过多母细胞伴有转化(RAEB-T)患者均阳性。6例实验时临床不能确诊为MDS者AXL基因阳性，经随访骨髓转为MDS；3例骨髓疑为MDS或诊为MDS者AXL基因阴性，经随访确诊为其他疾病。②12例再生障碍性贫血(AA)、1例缺铁性贫血(IA)、1例溶血性贫血、2例夜间阵发性血红蛋白尿(PNH)、3例特发性血小板减少性紫瘸(ITP)患者的A)比均阴性。结论 AXL基因在MDS外周血中有较高表达。     

87例骨髓增生异常综合征血象骨髓象分析

对我院87例骨髓增生异常综合征(MDS)的血象与骨髓象进行了分析,并对MDS分型标准进行了讨论,通过对比分析,我们认为FAB分型中MDS的母细胞百分率计算法亦应按非红细胞计数进行。     

小儿骨髓增生异常综合症(MDS)13例临床分析

目的：探讨小儿骨髓增生异常综合症(MDS)的实验室检查特征及临床特点。方法：对13例诊断为MDS患儿的外周血、骨髓像及临床表现进行回顾性分析：结果：13例患儿11例为男性，2例女性。临床以发热、贫血、肝脾肿大为主要表现。13例患儿均为中重度贫血，外周血见有核红细胞，白细胞表现为增高、正常或减低。4例患儿外周血见幼稚细胞，血小板可正常或减低，网织红细胞多数偏高。骨髓均增生活跃，有红系或粒系病态造血，以巨幼样改变为主；诊断为RA10例，RAEB2例，RAEB-t1例。结论：小儿MDS诊断仍主要靠骨髓检查，骨髓至少一系出现病态造血，巨幼样改变较易见，并除外其他引起病态造血的疾病，需注意和再障相鉴别：     

Expression and function of c-kit receptor in bone marrow mononuclear cells of patients with myelodysplastic syndromes

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)骨髓单个核细胞c kit受体的表达与功能。方法　采用免疫荧光方法测定c kit受体蛋白 (CD117)的表达 ;逆转录 聚合酶链反应方法测定c kitmRNA的表达 ;细胞培养检测c kit受体的功能。结果　CD117表达率正常人为 3 0 4 %± 1 4 9% ,MDS患者为 8 58%± 5 2 8% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;RA患者为 5 12 %± 2 13% ) ,RAEB RAEB t患者为 10 0 1%± 5 0 7% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;MDS继发白血病患者为 32 4 3%± 18 16 %。MDS患者c kit基因mRNA表达与CD117表达相一致。正常骨髓单个核细胞体外半固体培养 ,在加入造血干细胞因子、白细胞介素 3、红细胞生成素 (SCF IL 3 Epo)后形成的粒 巨噬细胞集落 (CFU GM)较仅加入IL 3 Epo显著增多 (P <0 0 5) ,红系爆式集落 (BFU E)数量极显著增多 ,且BFU E体积显著增大(P <0 0 1)。MDS患者在上述相同条件下CFU GM数量无明显变化 (P >0 0 5) ,与正常对照比较 ,CFU GM和BFU E数量均显著减少 (P <0 0 5)。结论　MDS患者骨髓单个核细胞CD117表达明显高于正常对照 ,且与病情进展相关 ;c kitmRNA表达与CD117表达相一致 ;MDS患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,SCF协同IL 3、Epo促进造血干 祖细胞增殖分化能力较正常对照明     

骨髓增生异常综合征患者骨髓造血细胞分化抗原表达及其意义

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓成熟粒系和红系细胞分化抗原表达特点并分析其与IPSS、WPSS评分的相关性.方法 采用流式细胞术检测34例(12例低危、22例高危)MDS患者及31名正常骨髓粒系CD11b、CD13、CD16、HLA-DR以及红系CD71和血型糖蛋白A(GlyA)抗原的序贯表达比例和模式.结果 选择CD13/CD11b、CD13/CD16及CD11b/CD16组合来分析粒细胞分化抗原表达模式,对照组骨髓粒系细胞组合模式分别为"对钩"、"镰刀"或"反7"状,MDS患者骨髓粒系细胞发育分化中的抗原表达模式出现不同程度的改变.高危组CD11b-/CD11b+比值(0.39±0.34)明显高于低危组(0.10±0.09)和对照组(0.07±0.05)(P<0.01);高危组CD16-/CD16+比值(1.33±0.77)明显高于对照组(0.39 ±0.31)(P<0.05);低危和高危组骨髓粒细胞CD13的平均荧光强度(MFI)高于对照组,侧向角散射光信号(SSC)的MFI低于对照组,但差异无统计学意义.高危组CD11b-HLA-DR+3.88%±3.07%、CD11b-HLA-DR-16.23%±15.59%、CD16-HLA-DR-41.12%±24.53%、CD11b+CD16-33.53%±17.26%及CD13+CD16-44.51%±21.99%细胞占粒细胞比例明显高于低危组和对照组(P<0.05),其他组间比较差异无统计学意义.应用CD71和GlyA的组合来分析红系细胞的分化,对照组两种抗原的组合模式均为双阳性表达,部分MDS患者可见CD71和GlyA表达不同步现象.低危组和高危组CD71+和GIyA+双阳性细胞分别占CD45-细胞和GIyA+细胞的比例均显著低于对照组.MDS患者粒、红系抗原表达的比例和模式异常数目与IPSS积分(r=0.690,P=0.000)、WPSS积分(r=0.651,P=0.000)均呈正相关.结论 MDS患者造血细胞分化抗原表达异常,异常程度与预后相关.这提示分化抗原检测可能有助于MDS患者的诊断和预后判断.     

骨髓单个核细胞对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响

目的研究骨髓单个核细胞（BMMNCs）对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型;梯度离心法提取BMMNCs;酶联免疫吸附法（ELISA）评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌IL-10、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后6h经尾静脉注射BMMNCs或PBS,脑梗后1,4,7d采用神经功能损害评分表（mNSS）、免疫荧光法、Fluoro—JadeB（FJB）染色进行神经功能、小胶质细胞活性及神经元变性死亡数目的评估。脑梗死后7d,TTC染色评价脑梗死体积。结果（1）BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24h后,低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子（IL-10、VEGF和IGF-1）的能力明显强于常氧环境,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）与PBS治疗组相比,BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后第4,7天的mNSS评分、小胶质细胞的活性、神经元变性死亡数量均显著降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;（3）BMMNCs治疗组小鼠脑梗死体积[（27．8±7．5）％]明显小于PBS治疗组[（37．1±6．9）％],差异有统计学意义0P〈0．05）。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子IL-10、VEGF和IGF-1抑制小胶质细胞的活性,明显抑制脑梗死后神经元的变性死亡,减少脑梗死体积,促进神经功能恢复。     

骨髓增生异常综合征患者的基因表达谱研究

目的 研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者的基因表达谱,试图发现与MDS发病相关且具有诊断意义的基因改变。方法 应用含500个基因克隆的定制cDNA芯片分析10例MDS患者(4例难治性贫血、1例难治性血小板减少症、4例伴有原始细胞增多的难治性贫血和1伴有原始细胞增多的难治性贫血转化型)骨髓单个核细胞(BMNC)的转录谱,并应用半定量RT-PCR检测5个基因在50例MDS中的表达水平。结果 在5例以上MDS患者中均有表达差异的基因共有95个,累及细胞生长和分化调控、细胞周期调节、信号传导、氧化还原反应等过程;聚类分析将不同阶段MDS患者分在两个组内,同时也将1例难治性血小板减少症患者与其他难治性贫血聚在2个独立的亚组。半定量RT-PCR揭示5个所选基因中3个基因(60％)的表达水平与芯片结果一致;RNA螺旋酶相关蛋白(RNAHP)、G1／S期转化因子(GSPTI)和DNA损伤诱导的转录因子(DDIT3)在MDS患者与正常对照中具有不同的表达态势。结论 MDS患者BMNC具有其内在的分子性质,检测DDIT3和RNAHP等基因的表达可能对MDS具有辅助诊断意义。     

Transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells for patients with lower limb ischemia

Background Many treatment options for lower limb ischemia are difficult to apply for the patients with poor arterial outflow or with poor general conditions. The effect of medical treatment alone is far from ideal, especially in patients with diabetic foot. A high level amputation is inevitable in these patients. This study aimed to explore the effect of transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells on the treatment of lower limb ischemia and to compare the effect of intra-arterial transplantation with that of intra-muscular transplantation.
Methods In this clinical trial, 32 patients with lower limb ischemia were divided into two groups. Group 1 （16 patients with 18 affected limbs） received transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells by intra-muscular injection into the affected limbs; and group 2 （16 patients with 17 affected limbs） received transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells by intra-arterial injection into the affected limbs. Rest pain, coldness, ankle/brachial index （ABI）, claudication, transcutaneous oxygen pressure （tcPO2） and angiography （15 limbs of 14 patients） were evaluated before and after the mononuclear cell transplantation to determine the effect of the treatment.
Results Two patients died from heart failure. The improvement of rest pain was seen in 76.5% （13/17） of group 1 and 93.3% （14/15） of group 2. The improvement of coldness was 100% in both groups. The increase of ABI was 44.4% （8/18） in group 1 and 41.2% （7/17） in group 2. The value of tcPO2 increased to 20 mmHg or more in 20 limbs. Nine of 15 limbs which underwent angiography showed rich collaterals. Limb salvage rate was 83.3% （15/18） in group 1 and 94.1% （16/17） in group 2. There was no statistically significant difference in the effectiveness of the treatment between the two groups.
Conclusions Transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells is a simple, safe and effective method for the treatment of lower limb ischemia,     

不同移植路径下骨髓单个核细胞对缺血性脑梗死大鼠梗死灶血管再生的影响

目的：探讨不同移植路径下骨髓单个核细胞对大鼠缺血性脑梗死新生血管的影响。方法采用改良线栓法制造大鼠MCAO模型,根据随机数字表随机分成对照组、静脉移植组和蛛网膜下腔移植组。提取、分离和培养骨髓单个核细胞,对照组经股静脉注射注入200μl PBS液;静脉移植组经股静脉注射注入200μl含2×10^7个骨髓单个核细胞;蛛网膜下腔移植组经蛛网膜下腔注入200μl含2×10^7个骨髓单个核细胞。采用定量ELISA法对大鼠脑脊液中VEGF含量进行检测,利用免疫荧光定量观察梗死灶血管再生情况。结果骨髓单个核细胞移植后7 d、14 d和28 d,蛛网膜下腔移植组大鼠脑脊液中VEGF含量分别为（207．4±8．9）pg／ml、（171．2±10．3）pg／ml和（143．8±13．8）pg／ml,均高于静脉移植组大鼠脊液中VEGF含量,差异均具有统计学意义（P＜0．05）;移植后14 d和28 d时,蛛网膜下腔移植组BrdU阳性细胞数分别为（2043．8±514．2）个和（1834．8±307．4）个,均高于静脉移植组,均差异具有统计学意义（P＜0．05）,蛛网膜下腔移植组微血管数分别为（384．6±45．1）个和（514．8±51．3）个,均高于静脉移植组,均差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论骨髓单个核细胞移植能够增加VEGF分泌,促进脑梗死灶血管新生,经蛛网膜下腔移植效果更佳。     

BXSB狼疮鼠骨髓细胞凋亡的实验研究

目的 通过在体外对BXSB狼疮鼠骨髓细胞进行培养,检测BXSB狼疮鼠骨髓细胞的凋亡情况,从而在干细胞水平上探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制.方法 取4月龄雄性BXSB狼疮鼠和雄性BALB/c小鼠各6只.从小鼠股骨提取骨髓细胞后,用台盼蓝染色法检测骨髓细胞的活性,计数.然后将骨髓细胞悬液加入6孔培养板,每孔加入等量的骨髓细胞.置于37℃、5%CO2中培养24 h后收集骨髓细胞,用TUNEL法检测细胞的凋亡.结果 ①BXSB狼疮鼠骨髓细胞数量明显高于同龄BALB/c小鼠,而且BXSB狼疮鼠与同龄BALB/c小鼠相比,骨髓细胞数/小鼠体重之比也明显升高.②BXSB狼疮鼠骨髓细胞中凋亡水平明显下降.结论 BXSB狼疮鼠的发病可能与其骨髓细胞的凋亡异常有关.     

骨髓单个核细胞移植治疗大鼠脑出血后脑损伤的实验研究

目的观察静脉移植骨髓单个核细胞（bonemarrowmononuclearcells,BMMNCs）治疗脑出血（ICH）大鼠脑损伤的效果及对出血后炎症反应的影响。方法应用立体定位技术将Ⅳ型胶原酶注人大鼠尾状核纹状体内制作脑出血模型,建模后按随机化原则分为假手术组、ICH组、PBS组、BMMNCs移植组;梯度离心法提取、分离、纯化大鼠骨髓单个核细胞,ICH6h后经股静脉输注3×10^7BMMNCs或等量PBS缓冲液。采用改良神经功能损伤评分评价脑出血后1d、3d、7d、14d神经行为功能改善情况;干湿重法测定血肿周围脑组织含水量;免疫荧光法检测脑出血侧小胶质细胞活化及中性粒细胞浸润情况。结果BMMNCs移植组大鼠的神经缺损症状在出血后7d、14d明显改善,与ICH组及PBS组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;在脑出血后3d,BMMNCs移植组的大鼠脑组织含水量[（78．62±0．97）％]明显降低,与ICH组[（81．09±0．83）％]及PBS组[（80．99±0．79）％]比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;BMMNCs移植组脑内小胶质细胞活化增殖及中性粒细胞浸润数目[（55．8±22．1）个／mm2、（49．6±12．9）个／mm2]均显著低于PBS组[（125．0±20．7）个／mm2、（86．8±13．6）个／mm2],差异有统计学意义（P〈0．01）。结论骨髓单个核细胞可明显减轻脑出血后脑水肿程度,促进神经功能恢复,其机制与其减轻脑出血后小胶质细胞活化和中性粒细胞浸润有关。     

自体骨髓单个核细胞心肌内移植的实验研究

目的：观察自体骨髓单个核细胞（BMMNC）在动物模型心肌微环境中的存活和分化情况，探索该方法应用至临床的可行性。方法：选取成年新西兰兔共20只，随机分为四组。无菌状态下取胫骨骨髓15ml，采用改进后的密度梯度离心法分离出BMMNC，荧光染料CFSE作细胞标记后备用。正中切口进胸，心肌内注入上述备用细胞悬液。于术后1、2、4、8周先后处死四组动物，取心脏标本冰冻切片在共聚焦显微镜下观察局部含荧光细胞的存活发育情况。结果：移植后4周可观察到与心肌纤维平行的荧光带，部分标本血管内壁中观察到了荧光细胞。结论：自体BMMNC心肌内移植可在心肌微环境的诱导下分化为心肌样细胞及血管内皮细胞。改进后的BMMNC分离纯化方法过程简便、可靠，处理过程无毒性，获得的细胞纯度和活性较高，该方法可应用于临床研究。