鲜壁虎冻干粉抑制H22肿瘤血管生成机理的实验研究

目的 探讨鲜壁虎冻干粉对H22肝细胞癌血管生成的机制。方法 建立移植瘤小鼠H22肝细胞癌模型。将30只小鼠随机分为顺铂治疗组、壁虎治疗组以及对照组,分别给予顺铂腹腔注射（1mg/g）,口服鲜壁虎冻干粉（1．2g/kg）及口服等量生理盐水。给药20次后,用肿瘤组织称重法评价抗肿瘤活性,用TUNEL方法检测细胞凋亡率。采用Weidner方法检测肿瘤组织的微血管密度,S-P免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞因子（bFGF）的蛋白表达。结果 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡,并可降低肿瘤组织VEGF、bFGF蛋白的表达,使肿瘤组织内微血管密度下降。结论 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及血管生成,其机制可能与下调VEGF、bFGF蛋白的表达有关。     

消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消癥丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表达的影响。[方法]运用血清药理学方法,选择不同浓度的消癥丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育,用MTT法计算增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癥丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖,且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癥丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点,大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癥丸能显著降低其表达。[结论]消癥丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖,降低Bcl-2表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,发挥其临床抗肿瘤,抑制脑瘤的作用。     

消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞增殖与凋亡的影响

[目的]观察消瘕丸含药血清对胶质瘤C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其对Bcl-2表迭的影响。[方法]运用血清药理学方法，选择不同浓度的消癓丸含药血清与胶质瘤C6细胞共同孵育，用MTT法计算增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；免疫组织化学法检测C6细胞中的Bcl-2的表达情况。[结果]MTT法结果显示大、中剂量组消癓丸含药血清可显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖，且呈现含药血清浓度-时间依赖性的特点。流式细胞仪检测可见各组消癓丸含药血清作用下C6细胞凋亡率呈含药血清浓度依赖性特点，大、中剂量组凋亡率较高。免疫组化学检测Bcl-2表达显示消癓丸能显著降低其表达。[结论]消癓丸可通过抑制胶质瘤细胞的增殖，降低Bcl-2表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤，抑制脑瘤的作用。     

人参皂甙对人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡基因的影响

本研究应用DNA断裂点标记法（TUNEL）、DNA凝胶电泳、光镜及RT-PCR等技术探讨人参皂甙对人T淋巴细胞白血病细胞株（6T-CEM）凋亡基因的影响。结果：放线菌酮、放线菌素D本身可诱导6T-CEM细胞凋亡;人参皂甙 放线菌酮、人参皂甙 放线菌素D两组的凋亡率与放线菌酮、放线菌素D组差异无显著性,人参皂甙可使6T-CEM细胞Bcl-2、bax基因表达显著降低,其中Bcl-2降低尤为明显,提示放线菌酮或放线菌素D通过抑制某些抗凋亡蛋白的合成而诱导6T-CEM细胞凋亡,人参皂甙诱导6T-CEM细胞凋亡的通过抑制bcl-2基因表达、降低bcl-2/bax比率,从而诱导细胞凋亡。     

五味子多糖对环磷酰胺诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的探讨五味子多糖对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CY)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用及相关机制。方法小鼠腹腔注射CY,建立胸腺细胞凋亡模型,施以不同浓度五味子多糖灌胃,利用流式细胞仪、末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色)及Bcl-2、Bax免疫组化分别观察不同剂量的五味子多糖对CY诱导的胸腺细胞凋亡的影响及机制。结果流式细胞仪和TUNEL染色显示CY组与对照组相比的细胞凋亡率明显增高,五味子多糖治疗组与CY组比较凋亡率明显降低(P<0.01)。CY组bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显增加,Bcl-2/Bax比值下降。五味子多糖组与之相反,二者比值升高(P<0.01)。结论五味子多糖能够抑制CY诱导的胸腺细胞凋亡,降低胸腺细胞的损伤,其抑制作用可能通过促进Bcl-2表达、抑制Bax蛋白表达实现的。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的:研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡相关基因表达的影响。方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测双苓扶正抗癌制剂对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关基因bax、bcl-2的阳性蛋白标记率。结果:双苓扶正抗癌制剂80~320μg/ml可诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时可促进凋亡诱导基因bax和下调凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论:双苓扶正抗癌制剂的抗肿瘤作用机制之一可能与其影响bax基因及bcl-2基因的表达而诱导癌细胞凋亡有关。     

温胆汤改良方对Aβ(25-35)诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的:温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡相关蛋白bcl- 2、bax表达的影响。方法:温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15 细胞建立的AD细胞模型,镜下观察细胞生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl- 2、bax蛋白的表达。结果:与模型组比较,含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低（p<0．05）, bel-2表达无显著性差异（p>0．05）,bax蛋白表达减弱（p<0．01）,bcl-2／bax比值升高（p<0．01）。结论:温胆汤改良方能有效地抑制AD细胞模型凋亡,其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达,升高bcl-2／bax比值有关。     

中药复方癌宁对人胃腺癌细胞凋亡基因表达的影响

目的:探索癌宁对体外人胃癌细胞基因表达的影响。方法:采用流式细胞术,检测了中药复方癌宁及顺铂诱导胃癌细胞凋亡基因的表达。结果:顺铂、癌宁组与空白对照比较,bcl-2、c-myc基因表达产物含量显著降低,p~(53)、bax基因表达产物含量显著增高(P<0.01),bax/bcl-2比值显著增高。结论:癌宁对人胃癌细胞的诱导凋亡作用与其对癌基因、抑癌基因表达的改变有关。     

调衡方对Lewis肺癌细胞凋亡标志物bax及bcl-2表达的影响

目的探讨调衡方含药血清诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的含药血清（无特定病原体雌性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只,灌服给药,制备调衡方大、中、小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,调衡方大、中、小剂量含药血清组,中剂量含药血清＋AG490干预组,正常血清组）处理Lewis肺癌细胞,用溴化四唑蓝（MTT）法检测药物对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定碘化丙啶染色细胞周期的变化;采用实时聚合酶链式反应（PCR）法检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果调衡方含药血清处理Lewis肺癌细胞后,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢。流式细胞仪检测结果显示,调衡方含药血清使Lewis肺癌细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加,中、大剂与中剂量＋AG490组尤为明显（P〈0.01）。调衡方含药血清还能够促进细胞中bax mRNA表达,减少bcl-2 mRNA表达（P〈0.05,P〈0.01）,并呈浓度依赖性。结论调衡方含药血清能降低Lewis肺癌细胞内bcl-2含量及提高bax的表达,使bax/bcl-2比值升高,这可能是调衡方抗肿瘤诱导Lewis肺癌细胞凋亡的机制。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究

目的 :观察消瘤平移合剂含药血清对肝癌H 74 0 2细胞凋亡的诱导作用。方法 :运用血清药理学方法 ,选择不同浓度的含药血清与人肝癌H 74 0 2细胞共同孵育 ,于不同时间观察 ,并与空白血清作对照。结果 :消瘤平移合剂含药血清可显著抑制H 74 0 2细胞的增长 ;H 74 0 2细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变 ,流式细胞仪检测可见亚G1峰 ,凋亡呈含药血清浓度、时间依赖性特点 ,对照组及 5 %、10 %含药血清作用 2 4h ,其凋亡率分别为 0 4 9%、5 5 8%、8 4 6% ,4 8h凋亡率分别为 0 83%、11 5 8%、14 2 5 % ;bcl 2基因检测显示bcl 2基因表达受抑。结论 :消瘤平移合剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡 ,发挥其临床抗肿瘤、抗转移的作用。     

外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl-2基因及bax基因表达的影响

目的观察外燥对小鼠气管细胞凋亡与bc l-2基因及bax基因表达的影响。方法30只昆明种小鼠随机分为常温常湿组(A组),温燥组(B组),凉燥组(C组),每组10只。经处理后第14天用免疫组化法检测各组气管细胞凋亡率(%)、bc l-2、bax阳性指数(PI,%)、bc l-2/bax累积阳性指数(AI,%)与bc l-2:bax蛋白表达比值。结果3组小鼠气管细胞凋亡率均≤0.3%;B组与C组bc l-2 PI与AI均低于A组(P<0.01),B组、C组气管细胞bc l-2:bax蛋白比值中bax增加。结论外燥致气管细胞bc l-2表达降低、bc l-2:bax蛋白比值改变,bc l-2、bax阳性细胞以气道炎性病灶或纤毛缺损处多见,提示与外燥分子致病机制有关。     

麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2及其抑制基因bax的影响,探讨麝香乌龙丸对关节软骨的保护作用是否与抑制细胞凋亡与调节bcl-2及bax的表达有关.方法 选用健康日本大耳白兔30只,随机分成正常对照组、造模组、麝香乌龙丸组.用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型, 4周后处死全部动物,取右膝关节胫骨内侧髁软骨,软骨组织切片用TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平.结果 麝香乌龙丸组细胞凋亡率明显低于造模组(P＜0.05),bcl-2在麝香乌龙丸组中的表达高于造模组(P＜0.05),bax的表达低于造模组(P＜0.05).结论 麝香乌龙丸通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,达到抑制兔实验性膝骨关节炎软骨中软骨细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗骨性关节炎机制之一.     

纳米脂质体承载榄香烯诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨纳米脂质体承载榄香烯诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用以及对相关基因caspase-3表达的影响。 方法 以同等剂量的榄香烯－纳米脂质体、普通榄香烯和空白培养液作用于C6胶质瘤细胞,分别于0、48、72 h时通过流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的凋亡情况,以免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达。 结果 榄香烯－纳米脂质体和普通榄香烯组细胞瘤于48 h和72 h时出现了明显的凋亡,而且其凋亡率明显高于空白对照组。榄香烯－纳米脂质体和普通榄香烯组细胞瘤48 h和72 h时出现了明显的Caspase-3蛋白表达,而且其蛋白表达率也明显高于空白对照组。 结论 榄香烯具有促进C6胶质瘤细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达的作用,经纳米脂质体承载后榄香烯的这种作用有增强的趋势。     

消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究

目的：观察消瘤平移合剂含药血清对肝癌H－7402细胞凋亡的诱导作用。方法：运用血清药理学方法，选择不同浓度的含药血清与人肝癌H－7402细胞共同孵育，于不同时间观察，并与空白血清作对照。结果：消瘤平移合剂含药血清可显著抑制H－7402细胞的增长；H－7402细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变，流式细胞仪检测可见亚G1峰，凋亡呈含药血清浓度、时间依赖性特点，对照组及5％、10％含药血清作用24h，其凋亡率分别为0．49％、5．58％、8．46％，48h凋亡率分别为0．83％、11．58％、14．25％；bcl-2基因检测显示bcl-2基因表达受抑。结论：消瘤平移合剂可通过诱导肿瘤细胞凋亡，发挥其临床抗肿瘤、抗转移的作用。     

藤黄酸诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用

目的：探讨藤黄酸(gambogic acid，GA)诱导体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：通过MTT比色法分析藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞在24，48，72 h增殖的影响，并通过光镜、电镜观察细胞形态学的改变及流式细胞术检测藤黄酸对SGC-7901肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响，用免疫组化方法检测凋亡相关基因bax和bcl-2的蛋白表达变化。结果：藤黄酸可明显抑制SGC-7901细胞的增殖，48h半数生长抑制剂量(IC50)为1．47，1．6 μmol／L的藤黄酸可导致7901细胞形态学的改变，流式细胞术显示细胞周期亦发生变化，G2／M期细胞增加，凋亡率呈时间-剂量相关性。同剂量的藤黄酸还可增加抑癌基因bax和减少诱癌基因bcl-2的蛋白表达量。结论：藤黄酸可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与其减少Bcl-2／Bax的比值相关。     

蝎毒对白血病HL—60细胞生长的抑制和诱导凋亡作用研究

目的：研究蝎毒对HL－60细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法：应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用,光镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变,原位末端标记检测DNA断裂,流式细胞术分析凋亡细胞和bcl-2蛋白表达。结果：蝎毒可明显地抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,作用在一定范围内呈对浓度和时间的依赖性,蝎毒并能下调HL－60细胞bcl-2蛋白表达。结论：蝎毒能抑制HL－60细胞生长和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与bcl－2蛋白表达的下降有关。     

龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠诱导的大鼠软骨细胞bax、bcl-2表达的影响

目的：比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠（SNP）诱导后软骨细胞bax、bcl-2表达的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机理。方法：取第三代4周龄SD大鼠关节软骨细胞,经SNP诱导凋亡后,采用免疫组化染色法及Realtime-PCR观察龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞bax、bcl-2表达的影响。结果：龟鹿二仙胶及其拆方各组均可引起bcl-2表达升高及bax下降,与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,龟鹿二仙胶与龟板、鹿角比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：龟板、鹿角、人参、枸杞均具有抑制软骨细胞凋亡的作用,而4味药同用,人参、枸杞并无显著加强龟板、鹿角的抑制凋亡作用。     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。