~(131)Ⅰ标记抗卵巢上皮癌单克隆抗体进行人卵巢癌裸鼠移植瘤放射免疫显像

用~(131)Ⅰ标记自行制备的抗卵巢上皮癌单克隆抗体COC166-9及COC183-B_2,并对人卵巢癌裸鼠移植瘤进行放射免疫显像,还观察裸鼠体内的生物学分布,注射标记单克隆抗体后48～72小时放射免疫显像呈阳性图象。其生物学分布:T/B为1.09,T/NT为4.38;而对照组T/B为0.16,T/NT为1.1。说明这种单抗对卵巢上皮癌有亲和性。     

抗人卵巢癌抗体可变区cDNA的克隆与ScFv的构建和表达及放射免疫显像

目的:为研究小分子抗体作为导向载体的作用,制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC183B2的单链抗体(single chain Fv,ScFv),并进行放射免疫显像(radioimmunoimaging,RⅡ).方法:利用PCR技术从COC183B2杂交瘤细胞中扩增COC183B2重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),并将其克隆入高效表达载体pTHA90中.重组子转化大肠杆菌TOP10,IPTG诱导表达ScFv融合蛋白,经改进氯化亚锡法进行99mTc标记,在卵巢癌裸鼠皮下瘤模型上进行RⅡ.结果:(1)ScFv融合蛋白以包涵体形式获高效表达;(2)改进氯化亚锡法成功进行小分子抗体ScFv 99mTc的标记,标记率达98%;(3)应用99mTc标记ScFv融合蛋白进行RⅡ,肿瘤显像早,图像清晰.结论:应用单链抗体ScFv可改善RⅡ.     

99mTc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像研究

目的:评价99mTc标记的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(Monoclone antibody,McAb)用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像(Radioimmunoimaging,RII)效果,并进行相关比较分析.方法:①建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;②采用99mTc直接标记法标记抗EGFR的单克隆抗体,并对标记抗体的特性进行鉴定;③利用99Tc-EGFR-McAb进行荷人肺腺癌裸鼠模型的RII及体内分布研究.结果:99mTc对EGFR-McAb的标记率为91.5%±3.8%,标记抗体比活度为(2.8±0.2)MBq/μg,放射化学纯度为96.5%±3.2%.放射免疫显像结果显示,99mTc-EGFR-McAb对肿瘤组织有较高的亲和性,通过感兴趣区(Regional interest,ROI)技术测得T/NT比值为2.74±0.5,明显高于对照组(P＜0.05).标记抗体的体内分布结果与显像结果基本一致.结论:99mTc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像能得到较理想的靶/非靶比值,EGFR是肺腺癌放射免疫显像研究值得推荐的目标抗原.     

~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合多肽在荷人卵巢癌裸鼠体内的分布和显像研究

目的 研究~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)在荷人卵巢癌裸鼠体内分布和放射免疫定位显像.方法 用NHS-MAG3为双功能鳌合剂,固相法合成多肽.~(99)Tc~m预亚锡直接标记法进行标记,纸层析法测定标记率.经尾静脉注射于荷瘤鼠体内,取不同时相进行SPECT显像,测定标记物在体内的分布情况并进行分析.结果 融合多肽的~(99)Tc~m标记率为95.27%,放射化学纯度为96%,放射性浓度24.6 MBq/ml.经鼠尾静脉注射后1 h,植瘤部位开始出现放射性浓集,肾脏、肝脏及膀胱组织也可见显像;注射后3 h肿瘤显像最清晰,每克组织注射百分剂量率(%ID/g)为(30.20±6.89).其余大部分脏器的T/NT值均达最高,最高为肌肉(13.13);注射后4 h肿瘤部位显像逐渐消退.对照组裸鼠的肿瘤部位始终未见显像.结论 筛选获得的VEGFR-3高亲和融合肽能够靶向荷瘤鼠体内肿瘤组织,实现肿瘤的靶向受体显像.     

免疫学

020460抗人卵巢癌抗体可变区cDNA的克隆与scFv的构建和表达及放射免疫显像/刘广芝…//北京大学学报(医学版)一2001,33(4)一362一365 目的:为研究小分子抗体作为导向载体的作用,制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC183B:的单链抗体(ScFv)并进行放射免疫显像(Rn)。方法:利用PCR技术从COCi83B:杂交瘤细胞中扩增COC183BZ重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),并将其克隆人高效表达载体pTHA90中。重组子转化大肠杆菌TOP‘0,IPTG诱导表达SeFv融合蛋白,经改进氯化亚锡法进行’gmTc标记,在卵巢癌裸鼠皮下瘤模型上进行Rll。结果:(1)ScF…     

~(99)Tc~m-EGFR-McAb及~(99)Tc~m-CD44-McAb单独及联合用于荷人肺腺癌裸鼠的显像研究

目的 评价99Tcm-EGFR-McAb及99Tcm-CD44-McAb单独及联合应用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像效果.方法 建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;采用直接法99Tcm标记抗EGFR和CD44的单克隆抗体,运用柱层析法对标记抗体分离、纯化,并对标记、纯化后的抗体特性进行鉴定;利用99Tcm-EGFR-McAb及99Tcm-CD44-McAb单独及联合进行倚人肺腺癌裸鼠显像及体内分布研究.结果 99Tcm对EGFR-McAb和CD44-McAb的标记率分别为(91.5±3.8)%、(92.3±4.1)%,标记抗体比活度分别为(2.8±0.3)MBq/μl、(2.9±0.5)MBq/μl,放射化学纯度分别为(96.5±2.8)%、(96.2±3.1)%.放射免疫显像结果显示,肿瘤组织对2种标记抗体均有较高的摄取,2种标记抗体联合使用肿瘤部位的放射性浓聚明显高于2种标记抗体单独使用,通过ROI技术测得T/NT值分别为(5.58±0.46)、(2.72±0.22)、(2.30±0.18).标记抗体的体内分布规律与显像结果一致.结论 99Tcm-EGFR-McAb、99Tcm-CD44-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像能得到较理想的靶/非靶比值,2种标记抗体的联合应用,可在一定程度上提高靶/非靶比值,优于一种标记抗体的单独使用.     

抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体放射免疫显像的实验研究

目的 检验制备出的抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体经同位素标记后用于胆管癌放射免疫显像诊断的特异性。方法 将纯化的抗人胆管癌相关原单克隆抗体经^131I标记后,注射于荷人胆管癌移植瘤的裸鼠体内,研究标记抗体在荷瘤裸鼠体内组织分布,并于不同时相点在SPECT下观察裸鼠移植瘤的放射免疫显像效果。结果 ①裸鼠移植瘤的放射免疫显像效果良好,在各时相点时,以96h时相点显像效果最佳;②注射放射性标记抗体96h后,肿瘤组织有标记抗体特异性浓聚,T/NT比值达到峰值。结论 制备出的抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体在人体胆管癌的放射免疫显像诊断中具有良好的应用前景,值得进一步研究。     

抗肝癌抗原单链抗体在荷人肝癌裸鼠体内的放射免疫显像效果

目的 :研究13 1I标记抗肝癌鼠源性单链抗体 (mouse derivedscFv2 5 ,mscFv2 5 )在荷人肝癌裸鼠体内放射免疫显像效果 .方法 :采用高效碘标法制备13 1I mscFv2 5 ,2 0只荷人肝癌裸鼠分别通过静脉和ip13 1I mscFv2 5后 1,4 ,8,16 ,2 4 ,2 8h进行裸鼠的体内分布和放射免疫显像研究 .结果 :2 0只荷肝癌裸鼠在 6～ 8h全部明确显像 ,对照组鼠瘤区未出现放射性浓聚 . 13 1I标记的mscFv2 5的瘤 /肝比值 2 4h为(9.6 3± 0 .0 5 ) .结论 :13 1I mscFv能提高瘤 /肝比值 (T/NT) ,缩短显像时间 ,有可能成为肝癌诊断的一项重要技术     

131I标记抗VEGF单抗在荷瘤膀胱癌裸鼠体内的生物学分布

目的研究131I-sc-7269在荷人膀胱癌裸鼠体内的生物学分布特性.方法 (1)Iodogen法标记抗-VEGF McAb(sc-7269),SephadexG-50柱层析分离纯化制备131I-sc-7269,体外细胞结合分析检测标记抗体的免疫活性;(2)荷瘤裸鼠131I-sc-7269体内分布实验.结果 (1)131I-sc-7269比活度为1.00MBq/μg(放射性浓度为18.30MBq/ml),放射性化学纯度为96.20%.体外131I-sc-7269与T24细胞结合率为59.12%;(2)体内分布实验显示131I-sc-7269在肿瘤组织中浓聚的峰时为注入标记抗体后96h,此时各组织T/NT比值为最高.结论 131I-sc-7269动物模型肿瘤/膀胱放射性峰时出现在96h,比值高达6.44,为应用131I-sc-7269放射免疫显像诊断人膀胱癌的实验和临床研究奠定了一定的实验基础.     

99mTc-D2C5用于人肝细胞癌肿瘤受体显像研究

目的:探讨99mTc-D2C5用于人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠原位种植肝癌模型肿瘤受体成像的价值。方法:人肝细胞癌SMMC-7721采用隧道包埋法植入Balb/c nu/nu裸鼠肝左叶建立原位种植肿瘤模型。荷瘤裸鼠16只,随机分为2组,每组8只,分别经尾静脉注射99mTc-D2C5、99mTc-mIgG,放射剂量为14.8MBq。采用SPECT采集99mTc-D2C5和99mTc-mIgG注射后1h、3h显影图像。显像结束后处死动物,采用γ计数器检测体内放射性分布。结果:注射99mTc-D2C5后1 h时,裸鼠肝肿瘤部位显影,3h时肿瘤显影最清晰。注射99mTc-mIgG后,肿瘤部位未见明显放射性浓聚;3h时99mTc-D2C5裸鼠体内靶/非靶组织的比值中,肿瘤/血(T/B)为6.8,肿瘤/肝(T/L)为2.8,肿瘤/肌肉(T/M)为17.3。结论:研究表明99mTc-D2C5可与人肝癌细胞SMMC-7721高特异性和高亲和力的结合,在肝癌显像中应用前景十分乐观。     

锝-99m标记survivin反义寡核苷酸肝细胞癌显像的实验研究

目的研究放射性核素锝99m(99mTc)标记survivin反义寡核苷酸(ASON)显像诊断肝细胞癌的价值。方法用DNA合成仪合成18碱基单链survivinASON,在5′末端经氨基修饰后,以S乙酰基N羟基琥珀酰亚胺巯基乙酰基三甘氨酸(SacetylNHSMAG3)作为螯合剂对survivinASON进行99mTc标记,并对99mTcsurvivinASON在荷瘤(SMMC7721)裸鼠模型体内的生物学分布、肿瘤反义基因显像、肿瘤反义基因抑制显像进行了分析。结果肿瘤组织显像时间早,0.5h即已开始显影。99mTcsurvivinASON在肿瘤组织内的聚集程度随时间延长而逐渐增加,于4h时达到最大,肿瘤/对侧肢体肌肉比值分别为2.48±0.44(体外显像)和3.35±0.57(生物学分布)。正义寡核苷酸(SON)在肿瘤组织内的聚集各时间点均明显低于ASON,差异有统计学意义(P<0.01)。用未标记的survivinASON进行抑制后,99mTcsurvivinASON在肿瘤组织中的聚集明显减少,4h时的肿瘤/对侧肢体肌肉比值降为0.93±0.23,与抑制前的2.48±0.44相比有明显减低(P<0.01)。结论99mTcsurvivinASON可在荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中特异性聚集,为肝细胞癌的特异性诊断提供了一种可能的新方法。     

99Tcm-抗血栓成分单克隆抗体对动物血栓的放免显像研究

目的　评价９９Ｔｃｍ 标记抗血栓成分（ 血小板和纤维蛋白）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ） ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３,对实验性动物（ 兔、狗）股动脉和股静脉血栓模型显像的作用。方法　以亚氨基噻吩盐酸盐（２ － ＩＴ） 修饰,９９Ｔｃｍ 标记葡庚糖酸钠（ＧＨ） 配体交换法标记ＳＺ－ ５１ 和ＳＺ－ ６３。狗、兔股动脉和股静脉血栓模型制备完毕后,耳缘静脉注入９９　Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１或９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 进行ＳＰＥＣＴ 显像。９９Ｔｃｍ 标记非特异性鼠ＩｇＧ 作为阴性对照。结果　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－５１／６３ 对狗新鲜血栓均显示清晰,其最佳显像时间分别为注射后２ ～４ｈ 和０．５ ～２ｈ,而陈旧血栓未见显像。９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 兔陈旧血栓显示清晰,其最佳显像时间为注射后２ ～４ｈ。结论　９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ５１ 和９９Ｔｃｍ － ＳＺ－ ６３ 具有活体内血栓定位导向能力,显像时间短,用于血栓性疾病的放免显像有一定的可行性。     

~(99m)Tc-转铁蛋白在乳腺癌裸鼠的放射性核素显像研究

目的:探讨99mTc-转铁蛋白(Tf)诊断乳腺癌的价值。方法:以99mTc标记转铁蛋白,测定人乳腺癌MCF7细胞膜转铁蛋白受体数及99mTc-Tf与转铁蛋白受体结合的解离常数(Kd)。对人乳腺癌细胞系MCF7裸鼠进行显像研究,获取肿瘤与肌肉、肿瘤与血的单位像素放射性比值。观察99mTc-Tf在BALB/c小鼠体内生物分布。结果:人乳腺癌MCF7细胞膜转铁蛋白受体数为1.95×105/cell,Kd为4.13 nmol/L。人乳腺癌MCF7裸鼠注入99mTc-Tf后12 h,肿瘤/肌肉及肿瘤/血比值分别为4.42±0.46和3.06±0.579。9mTc-Tf主要分布于肝、血及肾脏。结论:99mTc-Tf制备简便,在高表达转铁蛋白受体的肿瘤病变部位聚积。99mTc-Tf为乳腺癌的诊断提供了一种可能的新方法。     

CENERATION AND CHARACTERIZATION OF THREE MONOCLINAL ANTIBODIES TO HUMAN OVARIAN EPITHELIAL ADENOCARCINOMAS

Three murine monoclonal antibodies COCL66-9, COC183A5 and COC183B2 were raised against human epithelial ovarian adenocarcinoma with soluble antigens. The monoclonal antibodies were stable after culture and stored under 80 C for 9 to 20 months. The subclass and titre were all examined and the reactivities were tested on various paraffin embedded tissue sectionism by immunoperoxidase stainings. The results of positive staining against ovarian epithelial adenocarcinoma were 77.7%, 87.2% and 75.6% for COC166-9, COC183A5 and COCL83B2 respectively. Human ovarian carcinoma xenograft in nude mice were radioimaged after 131I-COC183B2 administration. Gamma scintigraphy demonstrated specific localization of the radiolabeled monoclonal antibody on these tumors. The results showed a bright future for immunodiagnosis and immunotherapy.     

^131I标记抗CEA、TPS及混合单抗在荷人乳腺癌裸鼠体内放射免疫显像及生物学分布

目的 研究^131I标记抗CEA、TPS单抗及混合单抗（CEA＋TPS）在荷人乳腺癌裸鼠体内的分布，为放免显像（RII）及临床应用提供依据。方法 荷瘤鼠分为3组，每组尾静脉分别注入^131I标记的抗CEA，TPS及混合单抗3．7MSq／0．1ml，于注射后2，4、48、96、120h行SPELT，于48、96、120h分批处死，测定肿瘤和血、肝、肺等重要脏器的单位放射性比值（T／NT）。结果 标记单抗注射后24～120h内，肿瘤部位出现放射性浓聚，T／NT比值120h最高达21．31。SPECT阳性率分别为50％、58％、91％。结论 混合单抗组在T/NT比值、SPECT阳性率方面明显优于对照组。单抗的混合使用有望成为RⅡ的首选方法。     

抗人胰腺癌细胞单克隆抗体SZ-121的放射免疫显像实验研究

目的研究^99mTc标记抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121在荷人胰腺癌裸鼠体内的显像及生物分布,探讨其用于胰腺癌早期诊断的可行性。方法采用皮下种植法建立荷人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,以2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）修饰SZ-121,^99mTc-葡庚糖酸钠（GH）配体交换法标记SZ-121,经裸鼠尾静脉注入^99mTc-SZ-121后1、4h对裸鼠进行γ显像,于24h测定荷瘤小鼠体内组织的放射性分布。结果γ显像及生物分布显示,^99mTc-SZ-121被静脉注入荷瘤鼠后1h,肿瘤即清晰显影,随时间延长趋于增浓,且瘤组织与非瘤组织的放射性比值（T/NT）也逐渐增高,肿瘤每克组织百分注射剂量率（%IDPg）均高于注射^99mTc-IgG的对照组（P〈0.05）。结论^99mTc-SZ-121具有活体内定位导向能力,显像时间短,可能是一种有前途的胰腺癌显像剂。     

~（99m）Tc标记卵巢癌单抗的实验研究

用９９ｍＴｃ标记卵巢癌单抗，对标记方法、纯化手段、还原后抗体存放时间与标记率关系、标记物免疫活性以及用该标记物对荷瘤裸鼠放免显象进行探讨，提示９９ｍＴｃ标记卵巢癌单抗的可行性。     

99Tcm直接法标记Angiostatin及其在荷瘤小鼠体内研究

目的:99Tcm直接法标记血管抑素(angiostatin,AS),观察其在荷瘤小鼠体内的生物分布并进行显像,以探讨其在监测肿瘤对抗血管生成治疗的应答中的价值. 方法:氯化亚锡还原法进行AS的99Tcm标记,纸层析法测标记率;用人脐静脉内皮细胞系(ECV304)观察其生物活性;为了明确99Tcm-AS与肿瘤的结合,是否存在受体特异性,我们进行了封闭实验. 在给药前2 h用未标记AS预处理荷乳腺癌EMT6瘤株的BALB/c小鼠,尾静脉注射99Tcm-AS,观察其体内分布并进行显像. 结果:氯化亚锡还原法标记AS可获得较高的标记率(>95%),其抑制内皮细胞生长的生物活性与AS相似. 在荷瘤小鼠体内分布结果显示:肿瘤的摄取率随着时间延长而增加,在注射99Tcm-AS后2～12 h,肿瘤可清晰显像,同时,用未标记AS预先封闭肿瘤可使肿瘤对99Tcm-AS摄取率下降. 结论:99Tcm-AS在荷瘤小鼠体内可浓聚于肿瘤,肿瘤对显像剂的摄取存在一定的特异性;99Tcm-AS有可能在肿瘤抗血管生成治疗疗效评价中发挥作用.