基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的研究

目的在已构建的压电压电石英晶体DNA传感器检测系统中引入HRP-DAB生物信号放大系统,提高传感器的检测灵敏度,并基于该系统建立一种表皮葡萄球菌快速检测方法。方法采用自组装技术在压电石英晶体DNA传感器上固定针对表皮葡萄球菌的寡核苷酸探针,将掺入生物素(biotin)-dUTP的表皮葡萄球菌靶DNA与之进行杂交反应,加入HRP-链亲和素(streptavidin)、DAB工作液,观察反应频率变化;对35份表皮葡萄球菌感染的临床标本进行检测,并与传统培养法进行比较。结果该压电石英晶体DNA传感器微阵列检测表皮葡萄球菌的灵敏度为95.5%,特异度为84.6%,正确诊断指数为0.801,检出限为2×102CFU/ml,与血培养法差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于HRP-DAB信号放大系统的压电石英晶体DNA传感器微阵列,有效的提高了压电石英晶体传感器检测的灵敏度,可用于临床病原菌感染的快速检测,具有较高的临床推广价值。     

新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的实验研究

目的构建一种新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,探讨纳米金界面上进行寡核苷酸探针固定的最佳条件。方法构建纳米金颗粒修饰的石英晶振生物反应界面,进行巯基修饰的寡核苷酸探针的固定,对纳米金自组装pH值条件、探针固定浓度等影响因素进行实验研究;将构建的传感器和未经纳米金颗粒修饰的传感器用于铜绿假单胞菌检测,比较两种传感器的响应性能,并进一步对该纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的再生进行研究。结果纳米金自组装的最佳pH值为6.0,探针最佳固定浓度为3.0μmol/L。纳米金颗粒修饰的石英晶振的响应性能大于未经修饰的石英晶振,可以重复使用5次。结论纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,具有不需标记、操作简单、能实时在线检测、频率响应性能高、无污染和能重复使用等优点,在临床实验诊断方面应用前景广阔。     

运用压电石英晶体生物传感器检测产气荚膜梭菌α毒素的实验研究

目的研究运用压电石英晶体生物传感器对产气荚膜梭菌α毒素（CPα）进行检测的方法和反应条件。方法按照碱基配对的原则,设计特异的产气荚膜梭菌α毒素基因寡核苷酸探针并利用巯基自组装技术固定在石英晶体上,运用压电石英晶体生物传感器的“质量效应”对聚合酶链反应（PCR）扩增得到的产气荚膜梭菌α毒素靶基因进行杂交检测,并探讨不同pH值和不同离子强度的缓冲液对检测的影响。结果压电石英晶体生物传感器成功检测出产气荚膜梭菌α毒素;pH7.6的缓冲液和0.64mol/L的NaCl溶液最适合于检测。结论压电石英晶体生物传感器能够有效地检测产气荚膜梭菌α毒素,有望对临床上开展毒素诊断提供一种新的手段。     

适配子型压电石英晶体传感器检测人免疫球蛋白E的实验研究

目的研制适配子型压电子石英晶体传感器阵列与常用的免疫分析方法进行比较,以评价压电石英晶体传感器阵列检测灵敏度、特异性与临床检测的可行性。方法以AT切型、基频10MHz的镀金石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白E适配子固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池阵列构建新型适配子型压电石英晶体传感器;分别进行标准品及人血清免疫球蛋白E的检测,研究了检测灵敏度、特异性等检测指标。结果该传感器可快速完成检测且无非特异性反应,在检测范围内传感器的响应特性良好,压电晶体频率偏移值与免疫球蛋白浓度呈良好的线性关系;将此免疫传感器用于人血清标本的测定,结果与化学发光法符合(r值=0.9924)。结论研制的传感器阵列具有灵敏度高、特异性好,检测通量高,无需标记,操作简便,能实时在线检测等优点,可用于临床实验诊断,具有较高的临床推广应用价值。     

DNA生物传感器检测电路的设计

设计一种用于检测某种DNA杂交反应的石英晶体传感器及其放大、显示电路。将单链DNA作为探针点在电极表面,测量晶振频率的改变量,并设计出后续处理电路。该设计能实时动态显示出DNA杂交反应中频率的变化。     

压电石英晶体免疫传感器微阵列检测人免疫球蛋白的实验研究

目的以AT切型、基频10MHz的镀金石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白抗体固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池阵列构建一种新型压电石英晶体免疫传感器。方法分别进行标准品及人血清免疫球蛋白的检测,研究了检测温度、时间、特异性等指标对检测的影响。结果该免疫传感器可在15 min内完成检测且无非特异性反应;在检测范围内传感器的响应特性良好,压电晶体频率偏移值与免疫球蛋白浓度呈良好的线性关系,将此免疫传感器用于人血清标本的测定,结果与免疫比浊法符合(r分别为0.94、0.94、0.94、0.92和0.91)。结论此传感器微阵列具有灵敏度高、特异性好,检测通量高,不需标记,操作简便,能实时在线检测和重复使用等优点,可用于临床实验诊断,具有较高的临床推广应用价值。     

肽核酸生物传感器直接检测临床标本中提取的病毒基因组DNA

目的 以肽核酸生物传感器检测系统直接检测从临床标本中提取的乙型肝炎病毒基因组DNA。方法 抽取63例临床免疫学检测证实为乙型肝炎病毒(HBV)感染者标本血清的DNA，以及15例免疫学检测全阴的标本血清中的DNA，分别用肽核酸生物传感器法以及定量PCR法检测，比较两种方法的优劣并确定传感器法的检测限。结果 传感器法检测60例标本阳性，阳性率为95．24％，而定量PCR法检测63例均为阳性；15例阴性血清两种方法检测均为阴性；传感器法的检测限为8．6pg／L；两种方法检测HBV差异无显著性，但传感器检测法所用时间更短，且无需进行探针的标记。结论 利用肽核酸生物传感器成功地绕过了PCR扩增而直接检测出了临床标本中的HBV基因组DNA。     

压电石英晶体生物传感器在微生物检测中的应用

压电石英晶体生物传感器是利用压电石英晶体振荡频率对表面质量负载的高敏感性与生物敏感元件特异选择性相结合的一种新型装置。其工作原理可分为：通过测量晶体振荡频率变化来测量晶体表面质量变化的质量效应传感理论；通过测量晶体振荡频率变化来测量晶体所处体系的密度、黏度、电导率等的变化以实现待测物检测的非质量效应传感理论。另外着重介绍了压电传感器在细菌、病毒、寄生虫等微生物检测中的应用。     

压电石英晶体传感器阵列检测尿微量白蛋白的实验研究

目的探讨并建立压电石英晶体免疫传感器检测尿液微量白蛋白的方法。方法采用葡萄球菌A蛋白(SPA)法固定石英晶体微阵列上单克隆抗白蛋白抗体,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品反应频率漂移量;优化传感器检测条件并运用回收实验,天内、天间重复试验来验证其准确度与精密度,并将免疫比浊法作为参比方法进行方法学比较。结果该传感器平台的非特异性反应低(FS<20Hz),线性范围广(0.01~40mg/L),灵敏度达到5μg/L,准确度高(CV<10%),精密度试验总体CV<10%,并且具有检测时间短(<10 min)等优点,与传统的免疫比浊法具有可比性。结论采用压电石英晶体免疫传感器法检测尿液微量白蛋白,是一种可行的检测方法,可应用于临床检测并为诊断早期肾损伤提供帮助。     

多聚T尾型探针在压电石英晶体微天平DNA传感器检测铜绿假单胞菌中的实验研究

目的 构建一种压电石英晶体微天平(QCM)DNA传感器多聚T尾型探针敏感膜制备新方法,同时对其重要影响因素进行优化探讨.方法 设计一种多聚T尾型探针,固定在压电QCM DNA传感器晶振表面,对探针固定浓度.杂交温度和杂交时间等因素进行实验研究,进一步将构建的多聚T尾型探针DNA传感器和普通探针DNA传感器用于铜绿假单胞菌检测,比较两种传感器的频率响应性能,同时对该压电QCM DNA传感器的再生性能进行研究.结果 探针最佳固定浓度为2.0 μmol/L,最适杂交温度为40℃,最适杂交时间为90 min;多聚T尾型探针DNA传感器的响应性能显著大于普通探针DNA传感器(P<0.05),可以重复使用7次.结论 基于多聚T尾型探针的压电QCM DNA传感器,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,在压电QCM DNA传感器基因检测领域有较好的应用前景.     

适配子压电石英芯片再生性能研究

目的探索适配子压电石英芯片最佳再生试剂,对固定好的适配子型芯片保存性能进行检测。方法用生物素-亲和素法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,分别用HCl、NaOH、EDTA、尿素、甲酰胺5种试剂对适配子芯片进行再生实验,选取较好再生试剂;将固定好的适配子芯片保存在PBS缓冲液（0.1%叠氮钠）中,对芯片的保存时间进行测定。结果用EDTA对适配子芯片进行再生效果最好,重复检测5次后芯片响应信号仍在第1次检测的〉90%,此外HCl也可对适配子芯片重复利用3次;固定好的适配子芯片在加入防腐剂的结合缓冲液中可长期保存,保存21d后信号响应无明显下降。结论与抗体压电传感器相比较,适配子压电传感器有一定优势,适配子芯片成本更低,再生能力强,固定好的芯片保存时间长,体现出适配子检测的优越性。     

适配子型压电传感器的实验研究

目的建立适配子型压电传感器阵列检测人免疫球蛋白E,对适配子型压电石英传感器的各项参数进行初步探索。方法用生物素-亲和素法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,通过压电传感器对适配子与IgE的反应进行实时监测,观察不同浓度IgE的反应趋势及所引起的频率变化,获得IgE检测标准曲线;通过检测BSA、IgG、IgE非特异信号,并与特异性信号相比较对适配子检测的特异性进行检验。结果亲和素法固定适配子对IgE进行检测,最低检出限0.055mg/L,线性范围0.1～2.5mg/L,非特异性信号响应小,不超过同浓度特异性信号的5%。结论构建的适配子压电传感器可检测ng级物质且非特异性信号小,显示该平台在临床检测中有较好的应用前景。     

压电基因传感器在HCMV链置换扩增实时检测中的实验研究

目的探讨自行研发的压电基因传感器对链置换扩增(SDA)的实时检测. 方法以巨细胞病毒(HCMV)为检测对象,建立成熟的SDA反应系统;在自行研发的压电基因传感器检测仪上对巨细胞病毒SDA反应进行实时检测. 结果 SDA反应可引起压电基因传感器的频率持续下降;在一定范围内核酸杂交所引起的频率下降幅度与加入的靶序列浓度呈正相关;加样时温差等因素对早期频率变化曲线的影响不可忽视;实验温度是影响SDA压电基因传感器检测灵敏度的重要因素. 结论自行研发的压电基因传感器可成功实现对SDA反应的实时检测;该系统可直接检测基因组DNA并可广泛应用于病原微生物的临床检测.     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒对新生儿宫内感染的影响

目的 :探讨 HBs Ag、 HBe Ag阳性孕妇外周血单个核细胞 ( PBMC)内乙型肝炎病毒 ( HBV) DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用。方法 :对 HBs Ag/ HBe Ag双阳性共 6 7对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯 PBMC后 ,经抽提、纯化后的 DNA进入 PCR扩增反应 ,引物为 HBV C区基因序列。结果 :6 7例 HBs Ag及 HBe Ag双阳性的孕妇中有 35例 ( 5 2 .2 % )PBMC中 HBV DNA阳性 ,2 5例孕妇在血清及 PBMC中均发现 HBV DNA。6 7例新生儿有 2 2例感染 HBV DNA,感染率 32 .8% ,其中血清 HBV DNA阳性者 10例 ,PBMC HBV DNA阳性者 19例 ,二者均阳性者 7例。结论 :母亲 PBMC内 HBV DNA阳性可能导致新生儿 PBMC中 HBV DNA阳性 ,PBMC内的 HBV DNA可能是 HBV母婴垂直传播的一条重要途径 ,同时 ,HBs Ag及HBe Ag阳性母亲若血清 HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染 HBV的危险性     

快速提取细菌DNA方法的研究

目的:研究快速、有效可以应用于压电基因传感器对病原微生物的快速检测的DNA的提取方法。方法:采用沸水浴法,酚、氯仿法,chelex1 0 0法和试剂盒法提取金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3、铜绿假单胞菌ATCC 2 785 3和大肠杆菌ATCC 2 5 92 2的DNA对产物进行纯度和产量测定,并对1 6SrDNA区域利用通用引物进行扩增。初步应用自行研制的压电基因传感器检测金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3的PCR产物。结果:除沸水浴法,其他3种方法均能抽提出3种细菌的DNA与1 0 0法和酚、氯仿法抽提产物的纯度和产量差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但chelex1 0 0法操作更为简单、成本低;试剂盒法抽提出的产物纯度和产量明显高于酚、氯仿法、chelex1 0 0法P <0 . 0 5 ) ,但成本高,操作繁琐。结论:chelex1 0 0法操作简便、省时、成本低,适宜用于压电传感器样本的预处理。     

内蒙古部分地区乙肝病毒基因型分布特点研究

目的研究内蒙古部分地区HBV基因型的分布特点,为推测内蒙古地区乙肝的流行趋势提供数据资料。方法对内蒙古地区46份乙肝大三阳血样进行HBVDNA提取,之后用PCR法扩增HBV DNA的S基因片段,再对PCR体系进行基因测序,之后基因分型。结果B型1例(2.17%),C型43例(93.48%),D型2例(4.35%)。结论我区HBV DNA基因型分布以C型为主。