DNA损伤应答通路研究现状

目的：分析不同DNA损伤诱导的细胞DNA修复和凋亡通路,以及相关因子在其中所起作用。方法：应用PubMed及CNKI全文数据库检索系统,以“DNA损伤、细胞凋亡和DNA修复”等为关键词,检索200601—201112的相关文献,共检索到1826篇,中文文献579篇。纳入标准：1）细胞对DNA损伤的监测;2）DNA损伤触发的DNA修复;3）DNA损伤触发的细胞凋亡。根据纳入标准符合分析的文献21篇。结果：细胞的DNA损伤应答是复杂的过程,DSBs或DNA复制阻滞是最常见DNA损伤性结构改变,其能启动多种信号通路,涉及的损伤识别因子主要有MRN、P13激酶ATM及ATR等,最终触发细胞周期抑制、DNA损伤修复或诱导细胞凋亡。结论：细胞能够识别具有潜在致死性的DNA损伤,进而激活特异的损伤通路以抑制细胞周期,增强DNA修复或诱导细胞凋亡。而因子p53和NF—KB的促细胞凋亡和促细胞存活双重作用对细胞的凋亡或者存活起决定作用。     

运用单细胞凝胶电泳研究稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA的损伤

背景与目的:探讨稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA的损伤.材料与方法:给小鼠灌胃氧化钬的盐酸溶液,24h后取股骨骨髓细胞进行单细胞凝胶电泳,观察有无染色体损伤和DNA损伤.结果:试验表明在20～80 mg/kg剂量范围内,彗星细胞的尾长随剂量的增加而增长,而头长则随剂量的递增而缩短,并且在40～80 mg/kg剂量范围内与阴性组差异存在显著性;同时,拖尾率与DNA损伤率也随剂量的增加而升高.结论:稀土元素钬对小鼠骨髓细胞DNA具有一定的损伤作用.     

DNA损伤与肿瘤发生的研究进展

生物体基因组时刻都暴露在体内外各种应激因素的作用下，即使在非常健康的细胞其基因组DNA的完整性也持续受到威胁。DNA存细胞内外各种因素的作用下可不断产生损伤，如体内代谢过程中产生的自由基和其它活性化合物，DNA在复制和重组过程中自发的错误；环境中的紫外线和离子辐射以及一些化学物质均能损伤DNA。细胞能通过周期阻滞修复DNA或者细胞凋亡对DNA损伤产生反应。细胞对DNA损伤反应的异常将导致肿瘤的发生。本文综述当前对DNA损伤修复和凋亡的分子调控以及它与肿瘤发生的研究进展。     

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的：研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制。方法：Western—blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western—blot、DNAladder、Hoechest33258／PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应。结果：Western—blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chkl和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、P—chkl、P—chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化。MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡。结论：ATM在细胞周期的多个环节均有凋控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用。     

PIG3在细胞凋亡及DNA损伤修复中的作用

PIG3作为p53下游调控细胞凋亡的靶基因,能够通过参与合成活性氧簇及对氧化应激的调控,而在细胞凋亡过程中发挥着重要的作用。近年来,其在DNA损伤应答通路中的作用也被大家广泛地研究。鉴于PIG3在细胞中扮演着两种不同的角色,而且这两种角色分别对应着不同的预后,因而了解PIG3在不同情形下发挥的作用尤为重要。本文针对PIG3在细胞凋亡和DNA损伤修复中的作用进行综述,并探讨了在不同细胞状态下PIG3表达的调控机制。     

DNA的损伤与修复

细胞的生物信息储存在DNA中。在真核细胞中,绝大多数（98％）DNA与蛋白质结合形成染色质存在于细胞核内,一小部分存在于其他细胞器中,如线粒体内。DNA由鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、戊糖和磷酸组成,碱基不同的排列顺序编码了不同的生物信息。在细胞的生存过程中,DNA会遭到内源性和外源性的损伤（表1）,例如放射线和化学物质。正常细胞的DNA损伤是诱发疾病的原     

彗星试验检测间接诱变剂对小鼠睾丸细胞的DNA损伤

目的：探讨组织原代细胞在检测间接诱变剂中的作用。方法：采用单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）对３种典型的间接诱变剂（环磷酰胺、２－氨基芴和二甲基苯蒽）所致的离体小鼠睾丸细胞的ＤＮＡ损伤进行了研究。结果：在一定浓度范围内,３种受试物均可直接引起离体小鼠睾丸细胞ＤＮＡ单链断裂,出现拖尾的彗星细胞,其拖尾细胞百分率和ＤＮＡ迁移长度均随受试物浓度的增加而增加,且有明显的剂量反应关系。结论：原代小鼠睾丸细胞具有一定的代谢活化作用。可以用于彗星试验直接检测间接诱变剂所致的ＤＮＡ损伤研究。     

不同细胞DNA氧化损伤及自身修复能力的分析

本文利用先进的“彗星”电泳法分析了不同种类细胞ＤＮＡ氧化损伤及自身修复能力，结果显示Ｈｅｌａ，ＧＭ１８９９，ＨｅｐＧ２，分化的成纤维细胞对Ｈ２Ｏ２引起的损伤具有高度敏感性，当Ｈ２Ｏ２剂量达到１００μＭ时，四种细胞ＤＮＡ损伤率在室９８－９９％，然后淋巴细胞在１００μＭＨ２Ｏ２剂量处理后ＤＮＡ损伤率仅有４２．１％显示出对氧化损伤具有较高的抵抗力，在分析ＤＮＡ修复能力时发现，ＤＮＡ损伤率达到９８％的Ｈｅ     

WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用

背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据.材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTKl细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(Single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测.结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTKl细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主.过氧化氢诱发了WTKl细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系.随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).结论:WTKl细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究.采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价.     

运用彗星试验检测醋酸铅对小鼠离体、在体生殖细胞的DNA损伤作用

背景与目的探讨一定剂量的醋酸铅对离体、在体小鼠雄性生殖细胞的DNA损伤作用。材料与方法以50、100、500、1000μmol/L醋酸铅处理离体小鼠睾丸生殖细胞,阴性对照加PBS;用12.5、25、50mg/kg浓度醋酸铅腹腔连续注射5d,第6d处死取小鼠睾丸生殖细胞,应用彗星试验检测醋酸铅对细胞DNA的损伤率和细胞DNA迁移距离的影响。结果4种浓度醋酸铅均可致小鼠离体睾丸细胞DNA损伤,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与剂量相关(分级计数r=0.5114,尾距r=0.407)。3种浓度醋酸铅组可致小鼠体内睾丸细胞产生DNA损伤,与阴性对照组比较差异有统计学意义且呈剂量相关(分级计数r=0.4801,尾距r=0.5314)。结论醋酸铅可致小鼠睾丸生殖细胞的DNA损伤,对小鼠生殖细胞可能有遗传毒性。     

移植于裸鼠的人鼻咽癌细胞DNA合成生物节律的初步研究

目的：探讨鼻咽癌细胞DNA合成的生物节律为临床制订鼻咽癌时辰化疗方案提供必要的参数。方法：BALB/C裸小鼠15只，置于积控的独立光照系统中（12h光照，12h黑暗）中同步化至少3周。然后双侧腋下接种人鼻咽低分化鳞癌细胞裸小鼠移植瘤CNE-2，成瘤后按灯亮后3、9、15、21h（即3、9、15、21 HALO）的时间点取瘤块，制成单个细胞悬液，固定，染色后流式细胞仪侧DNA含量。用SPSS软件系统ANOVA法检验各期细胞在4个时间点差异的显著性，用Cosinor法考察G1、S、G2/M期细胞在24h的分布是否符合余弦函数。结果：G1、S、G2/M期细胞在3、9、15、21 HALO的分布随时间变化有显著性差异，G1、G2/M期细胞变化符合余弦节律。结论：移植于裸鼠的人鼻咽癌细胞的DNA合成随昼夜交替呈节律性变化。     

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的:研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制.方法:Western-blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western-blot、DNAladder、Hoechest 33258 /PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应.结果:Western-blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chk1和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、p-chk1、p-chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化.MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡.结论:ATM在细胞周期的多个环节均有调控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用.     

三氧化二砷治疗Scid小鼠鼻咽癌移植瘤的初步实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对人鼻咽癌小鼠移植瘤的抑制作用。方法 :以人鼻咽癌细胞株CSNE 1为研究对象 ,观察腹腔注射As2 O3对鼻咽癌在Scid小鼠体内生长的抑制作用及其毒副反应。结果 :As2 O3腹腔注射 1mg/kg和 5mg/kg均能在小鼠体内诱导鼻咽癌细胞凋亡。在 5mg/kg剂量组 ,凋亡诱导最明显且能诱导鼻咽癌细胞分化 ,并有显著的抑制肿瘤生长作用 ,抑瘤率为 70 %。上述剂量对小鼠外周血白细胞无抑制作用 ,但病理组织学检查显示对肝脏和心脏有轻度毒性。 10mg/kg迅速致实验鼠中毒死亡。结论 :砷剂在Scid小鼠体内治疗人鼻咽癌移植瘤有效 ,但存在最适剂量问题 ,诱导调亡和分化可能是其抑瘤机制     

扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾细胞DNA单链断裂的影响

目的研究扶正解毒颗粒（FJG）对镍（NiSO4）诱发大鼠肾细胞DNA损伤的拮抗作用。方法以Wistar大鼠NiSO4 ［2.5 mg/(kg·d)］染毒造模,FJG灌胃处理,分别以单细胞凝胶电泳（SCGE）技术及比色法检测肾组织细胞DNA单链断裂及总抗氧化力（TAC）。结果与NiSO4组相比,FJG各组“彗星”样细胞出现率（计数一定量细胞中彗星样细胞所占的比例）、尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长比均明显降低（P<0.05和P<0.01）,TAC则显著升高（P<0.05和P<0.01）。结论FJG对镍致细胞DNA损伤有一定的拮抗作用,其机制与抑制镍诱导氧化损伤有关。     

冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤作用的影响

目的　探讨冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的抑制作用。方法　用小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验和大白鼠肝原代细胞非程序DNA合成(unscheduledDNAsynthesis ,UDS)实验检测冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的影响。结果　冬凌草甲素可明显地抑制环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓PCE微核发生率(P <0 .0 1)及盐酸氧芥(NH2 ·HCl)诱导的小鼠肝原代细胞UDS(P<0 .0 1)。结论　冬凌草甲素具有明显的抑制哺乳动物细胞DNA损伤的作用。     

Anti-proliferation Effects of Isorhamnetin on Lung Cancer Cells in Vitro and in Vivo

Background: Isorhamnetin (Iso), a novel and essential monomer derived from total flavones of Hippophaerhamnoides that has long been used as a traditional Chinese medicine for angina pectoris and acute myocardialinfarction, has also shown a spectrum of antitumor activity. However, little is known about the mechanisms ofaction Iso on cancer cells. Objectives: To investigate the effects of Iso on A549 lung cancer cells and underlyingmechanisms. Materials and Methods: A549 cells were treated with 10~320 μg/ml Iso. Their morphological andcellular characteristics were assessed by light and electronic microscopy. Growth inhibition was analyzed byMTT, clonogenic and growth curve assays. Apoptotic characteristics of cells were determined by flow cytometry(FCM), DNA fragmentation, single cell gel electrophoresis (comet) assay, immunocytochemistry and terminaldeoxynucleotidyl transferase nick end labeling (TUNEL) . Tumor models were setup by transplanting Lewislung carcinoma cells into C57BL/6 mice, and the weights and sizes of tumors were measured. Results: Isomarkedly inhibited the growth of A549 cells with induction of apoptotic changes. Iso at 20 μg/ml, could induceA549 cell apoptosis, up-regulate the expression of apoptosis genes Bax, Caspase-3 and P53, and down-regulatethe expression of Bcl-2, cyclinD1 and PCNA protein. The tumors in tumor-bearing mice treated with Iso weresignificantly smaller than in the control group. The results of apoptosis-related genes, PCNA, cyclinD1 and otherprotein expression levels of transplanted Lewis cells were the same as those of A549 cells in vitro. Conclusions:Iso, a natural single compound isolated from total flavones, has antiproliferative activity against lung cancer invitro and in vivo. Its mechanisms of action may involve apoptosis of cells induced by down-regulation of oncogenesand up-regulation of apoptotic genes.     

汞、镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用

背景与目的: 研究氯化汞、氯化镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用,比较两种细胞DNA损伤的敏感性差异。材料与方法: 分别以0、0.01、0.1、1 mmol/L剂量氯化汞和0、0.04、0.2、1、5 mmol/L剂量氯化镉处理离体小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞1h,应用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)技术检测氯化汞和氯化镉对细胞DNA的损伤率和细胞DNA迁移距离的影响。结果： 氯化汞、氯化镉处理组两种细胞DNA损伤率增高, DNA迁移距离增加。DNA损伤率和迁移距离存在明显的剂量效应关系。0.01 mmol/L剂量氯化汞、1 mmol/L氯化镉及以下剂量处理两种细胞引起睾丸生殖细胞DNA的损伤率高于骨髓细胞的DNA损伤率。结论： 氯化汞和氯化镉可引起小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞DNA损伤,且睾丸生殖细胞DNA受氯化汞和氯化镉损伤更敏感。     

RT-PCR克隆人IL-6、IL-10、IL-13和SCF等四种细胞因子膜外区cDNA

在逆转录病毒介导下将TNF基因转染入小鼠LAK细胞中．结果发现．转染TNF基因的LAK细胞比正常LAK细胞和转染对照基因的LAK细胞分泌更高水平的TNF．其体外生长能力和杀伤活性均显著升高．抗TNF单抗可显著抑制其体外杀伤活性．表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的TNF介导的。将较低数量的TNF基因转染的LAK细胞与IL-2联合腹腔内注射后，对腹水型肝癌小鼠有显著的治疗效果．