胰岛素对新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨胰岛素在新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤中对细胞凋亡的影响。方法:通过给原代培养乳鼠心室肌细胞行缺氧2 h/复氧4 h,建立缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation)心肌细胞损伤模型。将培养心肌细胞随机分为:正常对照组(CON)、缺氧/复氧组(A/R)、缺氧/复氧+胰岛素组(I/R+INS)。于复氧4 h后,利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA)含量,原位末端标记法(TINEL)和DNA梯带法(DNA Ladder)检测细胞凋亡,并比较各组间差异。结果:与A/R组相比,A/R+INS可明显降低MDA、LDH值(P<0.01),抑制心肌细胞凋亡(P<0.01)。结论:胰岛素具有减少新生大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤作用,其作用机制与抑制细胞凋亡作用有关。     

缺氧/复氧诱导细胞凋亡及其调控

缺氧/复氧诱导细胞凋亡与其诱导细胞产生的复杂的生理反应,如线粒体细胞色素C释放、活性氧生成及线粒体Ca2+向胞质转移等密切相关,这些生理异常均直接或间接地启动了细胞凋亡;缺氧/复氧诱导细胞凋亡过程受Bcl-2家族蛋白、能量代谢、缺氧诱导因子以及缺氧反应基因等多因素的调控.     

瘦素对血管内皮细胞ECV-304缺氧/复氧损伤的保护作用

探讨外源性瘦素（Leptin）对血管内皮细胞ECV-304缺氧／复氧（H／R）损伤保护作用及其作用机制。建立人脐静脉（ECV．304）内皮细胞缺影复氧损伤模型,观察不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用。设立正常对照组、损伤组、干预组,每组6例;利用试剂盒测定乳酸脱氢酶、丙二醛和超氧化物歧化酶的释放量;四唑盐比色法（MTT）测定血管内皮细胞的存活率。结果显示,单纯缺氧组和缺彰复氧组均可见细胞变圆、收缩、脱落;细胞死亡率较正常组增加;细胞上清中丙二醛（MDA）与乳酸脱氢酶（LDH）含量增加,超氧化物歧化酶（SOD）含量降低;缺氧／复氧组较单纯缺氧组损伤更加明显,与正常培养组相比具有显著意义（P〈0．05）。Leptin晚期预处理后,细胞形态基本上保持正常,上述检测指标与缺氧／复氧组相比有显著意义（P〈0．05）。并且50μg／L Leptin的保护作用最为明显。表明Leptin对ECV-304细胞缺氧／复氧损伤的保护作用具有剂量依赖性。     

肝硬化患者血浆降钙素原与肝细胞凋亡及Fas/FasL表达的关系

通过检测肝硬化患者血浆降钙素原 (procalcitonin ,PCT)水平 ,并同步观察肝细胞凋亡和肝组织凋亡蛋白Fas FasL的表达状况 ,探讨它们之间的相互关系及在肝硬化病情演变中的作用。肝炎后肝硬化患者 6 5例 ,乙肝单独感染 5 1例 ,乙肝与其它肝炎病毒重叠感染 14例。血浆PCT水平采用化学发光法定量测定 ;肝组织损伤程度采用Knodell记分法 (HAI) ,<6分为轻度 ,6～10分为中度 ,>10分为重度 ;肝细胞凋亡采用原位末端标记技术 (TUNEL)检测 ,低倍镜视野阳性细胞 <1 3为 +,1 3～ 2 3为 ++,>2 3为 +++,细胞核无棕褐色染色为 - ,分别记为 0～ 3…     

复方丹参滴丸对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧/复氧时Fas/FasL蛋白表达的影响

探讨复方丹参滴丸 (DanShenPill,DSP)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧及缺氧 /复氧时凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法 :按常规培养新生 4d乳鼠心肌细胞 ,于培养 2 4h后进行缺氧及缺氧 /复氧实验 ,以免疫组织化学方法检测心肌细胞Fas/FasL蛋白表达的变化。结果 :缺氧 4 5h及 10 5h后 ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的阳性表达指数 (positiveexpressionindex ,PEI %)均显著高于对照。 10 5h组与 4 5h组无明显差异。复方丹参滴丸组PEI明显低于缺氧组 (P <0 0 5 )。缺氧 30min后再给氧 4h与 10h ,心肌细胞Fas/FasL蛋白的PEI显著高于对照 ,复氧 10h组与 4h组无明显差异 ,复方丹参滴丸组PEI低于缺氧复氧组 (P <0 0 5 )。结论 :缺氧及缺氧 /复氧时均有凋亡相关基因Fas及其配体FasL蛋白表达的增强 ,复方丹参滴丸可通过下调Fas/FasL蛋白表达以减少凋亡从而减轻缺氧损伤及缺氧 /复氧损伤。     

白血病中Fas/FasL系统诱导的细胞凋亡作用

Fas FasL系统是研究最深入的介导细胞凋亡的途径 ,当Fas与FasL结合时 ,可直接引起Fas+ 细胞的凋亡。但是在白血病的发病过程中 ,尽管高表达Fas,似乎仍存在着血细胞的凋亡不足。许多研究表明 ,白血病细胞对Fas FasL途径介导的凋亡不敏感或存在抵抗也是导致白血病耐药的原因之一 ,白血病的Fas抗性与多种因素有关 ,对它们的研究可为白血病的治疗提供新的方法     

干燥综合征泪腺组织细胞凋亡及Fas,FasL和C—myc的表达

合征的发病机制。一、材料与方法从１９９７年８月至１９９８年３月在北京协和医院眼科门诊手术患者中取１２例干燥综合征患者的睑部泪腺组织（约３ｍｍ３）。其中原发性干燥综合征１０例，继发性干燥综合征２例。干燥综合征诊断标准见文献［１］。另取７例对照泪腺组织，其中１例为绝对青光眼患者，１例为泪腺脱垂患者。其余为非正常死亡健康人。原位细胞凋亡检测试剂盒为ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｎ公司产品。兔抗人Ｆａｓ、ＦａｓＬ多抗、鼠抗人ｃｍｙｃ单抗为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。ＳＰ试剂盒购自北京中山生物技术有…     

缺氧复氧对肠上皮细胞凋亡指数及线粒体膜电位的影响

观察缺氧复氧对IEC-6(肠上皮)细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,探讨其细胞损伤的机制.建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位变化.结果表明IEC-6细胞缺氧复氧损伤后,细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.01).     

Fas／FasL与凋亡研究进展

Fas/FasL是凋亡(Apoptosis)诱导家族的重要成员之一,是一组调节组织发育和体内平衡的重要分子,其自身的分泌受到许多病理和生理因素的影响。已知有多种Fas变型基因的存在,表达可溶性Fas(sFas),与自身免疫性疾病和肿瘤等多种疾病有密切关系。     

三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Fas/FasL的影响

目的：探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及三七总皂甙的作用及机制。 方法: 健康日本大耳白兔84只，随机分为对照组、肺缺血再灌注1、3、5 h组和三七总皂甙干预1、3和5 h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法观测肺组织细胞凋亡指数，免疫组化和原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统蛋白和基因表达的变化。 结果: 肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Fas/FasL蛋白及基因表达均显著高于对照组（均P<0.01）。三七总皂甙干预组Fas/FasL mRNA及其蛋白质的表达显著低于缺血再灌注组（P<0.01），肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组（P<0.01）。肺组织细胞凋亡指数分别与Fas/FasL蛋白和Fas/FasL mRNA之间均呈显著正相关（r分别=0.540,0.658,0.668,0.686;均P<0.01）。 结论: Fas/FasL系统活化启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。三七总皂甙可能通过抑制Fas/FasL系统的激活，阻遏肺组织细胞凋亡，从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

FasL/Fas pathway is involved in dengue virus induced apoptosis of the vascular endothelial cells

The hallmark of the dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome is hematologic abnormality. The pathogenesis of dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome remains unknown. Our work showed that the dengue virus serotype‐2 induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells. Fas (CD95), Tumor Necrosis Factor receptors, and Tumor Necrosis Factor‐related apoptosis‐inducing ligand receptors are the most common death receptors, which can induce apoptosis. Compared with the untreated human umbilical vein endothelial cells, Fas expression was increased both in the mRNA level and on the surface of infected human umbilical vein endothelial cells. FasL was expressed at similar levels on human umbilical vein endothelial cells over a course of dengue virus serotype‐2 infection, but the expression in mRNA level was increased in infected human umbilical vein endothelial cells. It is possible that there is soluble FasL secreted from human umbilical vein endothelial cells in the supernatant. Tumor Necrosis Factor‐related apoptosis‐inducing ligand receptor 1 and Tumor Necrosis Factor receptors 1–2 were constantly very low, whereas Tumor Necrosis Factor‐related apoptosis‐inducing ligand receptors 2–4 decreased after dengue virus serotype‐2 infection. This result suggested that dengue virus serotype‐2 may inhibit Tumor Necrosis Factor‐related apoptosis‐inducing ligand receptors‐induced apoptosis. The apoptotic rates in human umbilical vein endothelial cells were decreased upon the addition of caspase family inhibitors. In addition, activated caspase 8 and caspase 3 were also observed by Western blot following dengue virus serotype‐2 infection. Thus, it is shown that the Fas/FasL pathway may participate in dengue virus‐induced apoptosis of vascular endothelial cells in vitro. J. Med. Virol. 82:1392–1399, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

肺缺血再灌注损伤中Fas/FasL系统的表达及川芎嗪的影响

目的： 探讨肺缺血再灌注损伤Fas/FasL系统的表达及其与肺泡上皮细胞凋亡的关系及川芎嗪的影响。方法: 采用在体兔单侧肺左肺门持续性阻断1 h，再灌注1、3、5 h缺血-再灌注损伤的动物模型。TMP干预组于缺血前1h静脉滴注川芎嗪60 mg/kg。用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的发生情况；用原位杂交的方法检测兔肺组织Fas/FasL mRNA的表达。结果: IR组与 TMP组在肺缺血再灌注后1、3、5 h发生明显的肺泡上皮细胞凋亡。TMP组各时相细胞凋亡指数明显低于IR组（P<0.01）；肺组织Fas/FasL mRNA的表达与肺泡上皮细胞凋亡呈显著正相关（r₁=0.900,r₂=0.869,均P<0.01）。 结论: Fas/FasL系统在肺缺血再灌注诱导的肺泡细胞凋亡中起着重要作用，川芎嗪因抑制Fas/FasL，而减轻由Fas/FasL系统激活导致的细胞凋亡，从而对缺血再灌注肺具有保护作用。     

Fas/FasL信号在免疫系统中的作用

Fas/FasL通路是介导细胞凋亡的一条重要途径.近年来研究发现,它可以促进分泌炎症细胞因子,激发炎性反应,参与免疫豁免、免疫逃逸、肿瘤形成及转移等过程.此外,FasL还可以作为受体传递反向信号,促进细胞增殖,并参与一些自身免疫性疾病的发生.     

Coelomic cells show apoptosis via Fas/FasL system: a comparative study between healthy human pregnancies and missed miscarriages

BACKGROUND: The Fas/Fas ligand (FasL) system represents one of the mainapoptotic pathways controlling placental apoptosis throughoutgestation. In the current study, we have examined the Fas/FasLprotein expression and the apoptotic incidents of coelomic cells,amniotic cells and trophoblastic tissue in first trimester humanpregnancies and missed miscarriages (MM). METHODS: Protein expression was determined by immunofluoresence, westernblotting analysis, immunohistochemistry and indirectly by RT–PCR,whereas apoptotic cell death was assessed by in situ DNA fragmentationanalysis. RESULTS: Coelomic cells express Fas/FasL proteins, can undergo apoptosisand were the only cells in which apoptosis, Fas protein expressionand FasL protein expression were accordingly increased alongwith gestational age (P = 0.001, P = 0.008; P = 0.012, respectively).In contrast, amniotic cells and trophoblast showed a consistencyin the expression levels of Fas/FasL proteins in healthy pregnancies.MM were accompanied by increased Fas/FasL protein expressionin all examined samples (P < 0.001). The increase of Fas/FasLprotein expression was accompanied by proportional increaseof apoptotic incidents among the coelomic cell population (P= 0.023, P = 0.009, respectively), whereas amniotic cells andtrophoblast appeared to be resistant to Fas-induced apoptosis.The lowest expression of Fas/FasL proteins and the minimum occurrenceof apoptotic incidents were detected in the trophoblast. CONCLUSIONS: These data suggest that there is a different regulation andfunction of the Fas/FasL system in early human pregnancies.Aberration of the Fas-mediated apoptosis may represent one ofthe execution-step necessary for pregnancy loss in MM cases.     

Fas/FasL系统参与的几种生物学效应

Fas／FasL通路是介导细胞凋亡的一条重要途径。近年来的研究表明,它参与了胸腺选择、免疫赦免以及协调了免疫反应的平衡,同时它亦与一些肿瘤的发生发展、移植排斥、自身免疫性疾病的产生以及诸多的生理病理反应密切相关。     

犬急性心肌梗死晚期再灌注对心肌Fas/FasL系统的影响及其可能的氧化应激机制

目的：探讨急性心肌梗死晚期再灌注对心肌细胞凋亡基因Fas/FasL表达的影响及其可能的氧化应激机制。方法：18条健康成年杂种犬，按随机方法分为3组，每组6条。晚期再灌注组：结扎冠状动脉前降支6 h后再灌注6 h;持续缺血组:开胸后6 h,结扎冠状动脉前降支6 h,不行再灌注处理；对照组：冠状动脉前降支只穿线不结扎持续12 h。免疫组化法检测梗死边缘区心肌Fas和FasL蛋白表达，TUNEL法测心肌细胞凋亡指数(AI)，比色法测定心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原性谷胱甘肽酶（GR）活性、丙二醛（MDA）含量等。结果：心肌Fas和FasL蛋白表达以及细胞凋亡指数在持续缺血组和晚期再灌注组明显高于对照组（分别为P<0.05,P<0.01），而且晚期再灌注组明显高于持续缺血组（P<0.05）。持续缺血组和晚期再灌注组的心肌细胞SOD活性和GR活性明显低于对照组(分别为P<0.05, P<0.01),而 MDA含量均明显高于对照组（P<0.05），并且两组之间亦有显著差别（P<0.05）。结论：AMI晚期再灌注使梗死边缘区心肌细胞Fas/FasL蛋白表达以及细胞凋亡指数增加，提示晚期再灌注仍然存在再灌注损伤，其机制可能与氧化应激有关。     

Fas/FasL和Bcl-2在人乳腺癌组织中的表达及其与浸润淋巴细胞的关系

目的通过观察乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas、FasL、Bcl-2的表达及其与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的关系,探讨Fas、FasL、Bcl-2与乳腺癌发生、发展的关系,为乳腺癌的生物治疗提供实验依据。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织。用免疫组织化学方法和图像分析技术对21例乳腺癌标本进行检测。结果乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织(P<0.05),且淋巴细胞浸润性乳腺癌组织中Fas的阳性表达明显低于非浸润性乳腺癌组织(P<0.05);乳腺癌组织中FasL、Bcl-2的阳性表达率明显高于相对正常乳腺组织(P<0.05),且淋巴细胞浸润性乳腺癌组织明显高于非淋巴细胞浸润性乳腺癌组织(P<0.05);乳腺癌组织中Fas阳性淋巴细胞的数量与相对正常乳腺组织相比明显增多(P<0.05);乳腺癌组织Bcl-2阳性淋巴细胞的数量与相对正常乳腺组织相比明显减少(P<0.05)。结论①乳腺癌组织中Fas表达下调和FasL的过度表达,逃避了免疫监视,诱导Fas敏感的TIL凋亡,从而导致肿瘤的生长;②乳腺癌组织中癌基因Bcl-2过度表达及Bcl-2阳性淋巴细胞的低表达,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,肿瘤细胞对Fas/FasL易感性较淋巴细胞相对低,导致TIL死亡,而不是肿瘤细胞死亡。     

Fas／FasL在超抗原SEA诱导T细胞凋亡中的作用

目的超抗原能诱导 T细胞凋亡 ,但其作用机制尚未阐明 ,Fas系统与 Ca2 在其中的作用尚待进一步研究。方法超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)诱导人外周血建立的短期 SEA反应 T细胞系凋亡 ,1.8%琼脂糖凝胶 DNA电泳于不同时间观察凋亡的特征条带 ;FCM检测 Fas、Fas L 的表达量变化 ,Fura- 2 / AM荧光指示剂检测胞浆游离 [Ca2 ]i的变化。结果使用 FCM特异性检测凋亡亚 G0 / G1峰大小及 1.8%琼脂糖凝胶电泳检测凋亡 DNA梯状图谱证明 ,SEA能诱导短期 SEA反应 T细胞凋亡 ,其凋亡的时间与程度与 SEA的剂量有关。SEA1μg/ ml建立的短期 SEA反应 T细胞对 SEA1μg/ml的再次刺激 ,凋亡量随作用时间的延长而增多 ,在作用的第 16 h最高 ,达 5 8%。 FCM间接荧光染色法检测发现 ,Fas及Fas L 亦随 SEA作用时间的延长而表达增多 ,16 h时表达最多 ,分别为 92 %和 6 0 %。用 Fura- 2 / AM荧光指示剂检测 ,此时细胞胞浆 [Ca2 ]i已从刺激前的 (2 90± 33) nm ol/ L 上升到 (6 80± 16 ) nmol/ L。结论 Fas系统与 SEA诱导的 T细胞凋亡密切相关。换言之 ,Fas系统在超抗原诱导 T细胞凋亡中起作用 ,而胞浆 [Ca2 ]i升高与 SEA诱导的凋亡 T细胞 DNA断裂及其它凋亡形态变化有关。     

支气管哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞线粒体跨膜电位以及Fas/FasL变化

目的探讨哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞跨膜电位（mitochondrial membrane potential,△.ψm）和淋巴细胞表面Fas、FasL表达水平,并与其血液、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）水平比较。方法流式细胞仪、免疫组化方法检测对照组和哮喘组激发后2、6、12、24、48h各时间点淋巴液、血液、BALF中淋巴细胞线粒体的跨膜电位、淋巴细胞表面Fas、FasL蛋白表达。结果哮喘组淋巴液、血液和BALF中淋巴细胞△.ψm峰值在各时间点均较对照组明显升高（P〈0.01）,Fas、FasL蛋白表达水平低于对照组水平（P〈0.01）;哮喘组淋巴液中淋巴细胞△.ψm在不同时间点均较血液水平明显升高（P〈0.05）,血液中淋巴细胞△.ψm与BALF水平间无显著性差异（P〉0.05）。结论哮喘大鼠淋巴液、血液、BALF中均存在明显的淋巴细胞早期凋亡障碍和Fas/FasL表达降低,尤其是哮喘淋巴液中淋巴细胞凋亡障碍和Fas/FasL降低程度较其血液、BALF更为明显。