Study of Plastids in Fritillaria thunbergii Miq.

本文用电镜观察了浙贝母不同器官的质体中，未出土黄色幼叶中的质体是白色体，叶子出土后白色体将变为叶绿体。地上绿色叶子中的质体为叶绿体。浙贝母鳞片中的质体为淀粉质体，它含有一至多个淀粉粒。幼年鳞茎鳞片中的淀粉质体壳结构不清晰，成年鳞茎鳞片中的淀粉质体壳结构清晰。随着老鳞片中淀粉粒的降解，淀粉质体壳也被降解。     

湖北贝母茎叶非生物碱成分的研究

目的 研究湖北贝母茎叶部分非生物碱部位的化学成分. 方法 对湖北贝母茎叶部分的乙醇提取物进行萃取分离,分成生物碱部位和非生物碱部位,应用溶剂极性梯度从非生物碱部位获得了几个化学部位,并应用硅胶柱层析对醋酸乙酯部位进行分离纯化,从中分离出5个单体化合物,应用质谱、氢谱、碳谱等现代波谱技术加以鉴定. 结果 鉴定得到5个化合物,分别为CH3(CH2)26CH3 、CH3(CH2)24OH、CH3(CH2)20COOH、β-谷甾醇（β-sitosterol）和胡萝卜苷（daucosterol）. 结论 5个化合物均为首次从湖北贝母茎叶部分分离所得,其中前3个化合物为首次从贝母属植物中获得.     

贝母属药材化学成分、药理作用及临床应用研究进展

目的为贝母的合理使用及资源的可持续发展提供理论指导。方法通过查阅近年来的相关文献,对贝母的药用历史及化学成分、药理作用、临床应用等进行综合评价。结果与结论各种贝母主要有效成分均为生物碱类成分,各种贝母间代表性生物碱成分相近,且含量差异不大。贝母一直被作为止咳祛痰良药,药理作用相似,可考虑不同贝母的相互替代可能性。     

浙贝母对甲状腺功能亢进模型鼠的保护作用研究

目的:研究浙贝母对甲状腺功能亢进(甲亢)模型鼠的保护作用。方法:采用甲状腺素复制甲亢模型鼠,并观察浙贝母对甲亢模型鼠三碘甲状腺素原氨酸(T3)、四碘甲状腺素原氨酸(T4)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)以及耐缺氧能力的影响。结果:浙贝母具有显著降低甲亢模型大鼠T3、T4、cAMP的作用,且能显著提高甲亢模型小鼠的耐缺氧能力。结论:浙贝母具有较好对抗甲亢的作用。     

浙贝提取物固体分散体的制备及溶出特性研究

目的：制备浙贝提取物固体分散体,考察其中贝母素甲及贝母素乙的溶出效果,从而确定制备的最佳方法和最佳比例。方法：选择聚乙二醇6000（PEG6000）与聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30）两种载体材料,分别采用熔融法和溶剂法制备浙贝提取物固体分散体;通过比较提取物、固体分散体的溶出性能,确定最佳工艺。结果：使用HPLC-ELSD法测定贝母素甲及贝母素乙的溶出量,结果准确、可靠、稳定。制备成固体分散体能显著提高贝母素甲及贝母素乙的体外溶出速度;PEG6000作为载体的浙贝提取物固体分散体溶出速度快于PVP K30为载体的浙贝提取物固体分散体。结论：以PEG6000为载体,采用熔融法制备的药物/载体比例为1∶6的固体分散体能显著提高浙贝提取物中贝母素甲及贝母素乙的溶出速率。     

浙江产贝母花粉形态的研究

本文借助光学显微镜和扫描电镜的观察,对三种浙江产贝母(浙贝母、东贝母、野生浙贝)的花粉形态进行了比较研究,结果表明不同种之间花粉形态差异较大,同一个种其品种间差异较小。说明花粉形态有明显的种间特异性。并在此基础上评估花粉形态研究在贝母展分类上的意义。     

5种贝母类药材的定性鉴别

目的:考察浙贝母、川贝母、湖北贝母、平贝母和伊贝母的粉末显微鉴别特征及薄层色谱(TLC)鉴别特征。方法:按《中国药典》方法对5种贝母粉末进行显微鉴别;采用2种展开系统,分别对5种贝母进行TLC鉴别。结果:得到5种贝母粉末的显微特征区别点。浙贝母、川贝母、湖北贝母、平贝母的TLC图谱中均含有贝母素甲和贝母素乙,均无西贝母碱;伊贝母的TLC图谱中无贝母素甲和贝母素乙,但含有西贝母碱。结论:本试验结果可为5种贝母类药材的鉴别提供参考依据。     

Temperature Effects on Seed Dormancy Relieving of Fritillaria thunbergii Miq

浙贝母种子的休眠在８～１０℃下需要５０天时间能够解除，而在３～５℃下则需要８０天时间。为了研究浙贝母种子休眠解除的生理基础，利用分光光度法和电泳方法研究了过氧化物酶、酸性磷酸酶和蛋白质的变化。结果表明，随着低温处理，过氧化物酶活性和酸性磷酸酶的活性升高，蛋白质电泳图谱上有新带出现。这些变化最终导致了休眠的解除。     

浙贝母淀粉体的发育与内膜系统的关系

用透射电子显微镜技术观察了浙贝母淀粉体的发育过程,淀粉体的发育过程不仅仅是淀粉的积累与降解,其自身的膜系统也在不断发育,在淀粉的发育过程中,始终都有内质网,高尔基体以及囊泡等细胞内膜系统的参与。     

浙贝母鳞茎总RNA提取方法的研究

建立适合功能基因分析的浙贝母Fritillaria thunbergiiMiq.鳞茎总RNA的提取方法,将为后续与药效成分相关功能基因的分析奠定良好的工作基础。本研究通过紫外分光光度法、非变性琼脂糖电泳法以及DDRT-PCR方法比较异硫氰酸胍法、改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良CTAB法提取浙贝母鳞茎总RNA的质量。结果表明,通过改良的CTAB法提取出的总RNA的完整性好(28 s/18 s约为2),纯度高(其A260/A280和A260/A230分别为1.95和2.30),以其为模板进行DDRT-PCR分析时能获得清晰的差异条带。通过本研究建立的改良CTAB法可于浙贝母鳞茎总RNA的提取,并可为其它植物鳞茎的总RNA提取提供参考。     

Metabolic profiling investigation of Fritillaria thunbergii Miq. by gas chromatography–mass spectrometry

Thunberg fritillary bulb (the dry bulbs of Fritillaria thunbergii Miq.), a traditional Chinese Medicine, is widely applied as an expectorant and antitussive. In this investigation, the primary metabolites of bulbs, flowers, leaves, and stems of F. thunbergii were analyzed by gas chromatography–mass spectrometry. Principal component analysis, partial least squares-discriminate analysis, orthogonal projection to latent structures-discriminate analysis, and heat map analysis showed that there were dissimilar metabolites, and a negative correlation between amino acids and saccharides in different analytes. Furthermore, carbodiimide, tryptophan, glucose-6-phosphate, xylose, 2-piperidinecarboxylic acid, monoamidomalonic acid, phenylalanine, and histidine were found to play an important role in the plant metabolism net of F. thunbergii.     

浙贝母总生物碱对人肺腺癌A549/顺铂细胞耐药性的逆转作用(英文)

目的研究浙贝母总生物碱(TAF)对人肺腺癌A549/顺铂(DDP)细胞DDP耐药性的逆转作用。方法①离体实验:采用MTT法观察TAF(12.5～200mg·L-1)对A549和A549/DDP细胞的毒性作用;采用MTT法检测TAF 9mg·L-1对A549/DDP细胞耐药的逆转作用,同时设环孢菌素A(Cys A)1mg·L-1和汉防己甲素(Tet)1mg·L-1为阳性对照;实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞多药耐药基因1(MDR1)mRNA相对表达;Western蛋白免疫印迹法检测A549/DDP细胞P-糖蛋白(P-gp)相对表达。②在体实验:制备BALB/c裸鼠A549/DDP移植瘤模型,随机分为模型对照、DDP 5mg·kg-1、TAF2 mg·kg-1、DDP 5 mg·kg-1+TAF 0.5,1和2 mg·kg-1联用组,每两天ip给予DDP,每天ig给予TAF,持续13d,检测移植瘤体积和质量的变化。结果 TAF作用72 h抑制A549和A549/DDP细胞存活的IC50值分别为141±5和(298±22)mg·L-1;IC10值分别为15.3±1.9和(9.0±1.2)mg·L-1。DDP 0.01～100mg·L-1与TAF 9 mg·L-1合用后,DDP抑制A549/DDP细胞存活的IC50值由(14.06±3.72)mg·L-1降至(0.79±0.14)mg·L-1,抑制A549细胞存活的IC50值无明显变化;TAF对A549/DDP细胞DDP耐药性的逆转倍数为17.80倍,高于Cys A(10.16倍)和Tet(14.05倍)。TAF可明显降低A549/DDP细胞MDR1 mRNA及P-gp相对表达(P<0.01)。DDP 5mg·kg-1体内抑瘤率为49.9%,与TAF 2mg·kg-1合用后抑瘤率增至67.4%(P<0.01)。结论 TAF在体内外均可逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可降低MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达。     

HPLC测定草乌与贝母配伍后乌头碱类成分含量的变化

目的探讨生草乌与贝母不同配比在煎煮过程及体外模拟消化环境中乌头碱类成分的变化规律。方法采用HPLC法,测定生草乌与浙贝母不同配比水煎液及其经人工胃、肠液解离后的溶液中乌头碱及其水解产物焦乌头碱、苯甲酰乌头碱和苯甲酸的含量。结果除草乌贝母(2∶1)合煎液外,草乌贝母不同配比合煎或单煎后混合溶液中乌头碱的含量均较草乌单煎液明显提高。经人工胃肠液处理后各配伍液中乌头碱类成分的含量明显降低,但水解产物焦乌头碱、苯甲酰乌头碱与乌头碱的构成比较处理前明显提高。结论草乌与贝母一定比例下的配伍,毒性成分明显增大,证实了"草乌反贝母"的科学性。     

浙江七叶树种子中三萜皂苷成分的研究

目的研究传统中药浙江七叶树Aesculus chinensis Bunge var.chekiangensis(Hu et Fang)Fang种子中的皂苷类成分.方法采用大孔树脂柱色谱、高效液相色谱等方法进行分离和纯化,根据化合物的谱学数据鉴定其结构.结果从浙江七叶树种子的70%乙醇提取物中分得6个化合物,分别鉴定为七叶树皂苷(escins)IVc、IVd、Ia、Ib和异七叶树皂苷(isoescins)Ia、Ib.结论这6个化合物均为首次从浙江七叶树种子中分得.     

Structural elucidations of two ent-kaurane dimers from bulbs of Fritillaria ebeiensis var. purpurea

A novel ent-kaurane diterpenoid dimer, fritillebinide B (1) together with one known diterpenoid dimer fritillebinide A (2) were isolated from the bulbs of Fritillaria ebeiensis var. purpurea G.D. Yu et P. Li. Compound 1 has been established to be ent-3β-acetoxy-kauran-16β,17-acetal ent-16β-kauran-17(R)-aldehyde (1) by means of spectral analysis and chemical evidence.     

不同基源川贝母镇咳、祛痰功效差异性实验研究

目的：观察4种不同基源川贝母镇咳、祛痰的功效差异。方法：（1）将健康豚鼠70只,完全随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、暗紫贝母组、梭砂贝母组、卷叶贝母组和甘肃贝母组7组,连续给药3d,末次给药30min后,雾化吸入枸橼酸60s。记录咳嗽的潜伏期、5min内咳嗽的次数。（2）将健康小鼠60只,随机分为空白对照组、阳性对照组、暗紫贝母组、梭砂贝母组、卷叶贝母组和甘肃贝母组6组,连续给药3d,末次给药30min后,由腹腔注射0.5%酚红溶液0.5mL/只。30min后,处死小鼠,取出气管,冲洗,再加入5%碳酸氢钠溶液0.1mL,离心,取上清液,用酶标仪（波长570nm）测定OD值、祛痰指数。结果：（1）与卷叶贝母比较,暗紫贝母组、梭砂贝母组均能延长咳嗽潜伏期（P〈0.05）。（2）与梭砂贝母组、甘肃贝母组、卷叶贝母组分别比较,暗紫贝母组能促进酚红排泌OD（opticaldensity）值增加（P〈0.05,P〈0.01）。结论：4种不同基源川贝母在镇咳、祛痰功效方面可能存在一定的差异,在镇咳方面暗紫贝母、梭砂贝母优于卷叶贝母、甘肃贝母,在祛痰方面暗紫贝母优于甘肃贝母、卷叶贝母、梭砂贝母。     

草乌与贝母配伍禁忌的化学研究

目的:探讨草乌与贝母在煎煮过程及体外模拟消化环境中生物碱类成分的变化规律,初步阐明草乌配伍贝母毒性作用变化原因。方法:采用酸性染料比色法、改良异羟肟酸铁分光光度法和HPLC法,测定草乌与贝母不同配比合煎液及人工胃、肠液处理后溶液中总生物碱和酯型生物碱、乌头碱类成分的含量,并通过主成分分析(PCA)和聚类分析(HCA)综合考察各配比和处理方法对毒性作用变化情况。结果:通过PCA和HCA的综合考察,两者得到的结果相似,均显示11个样品被分为3组,其中样品1为Ⅰ组,样品2、5、9、10、11为Ⅱ组,样品3、4、6、7、8为Ⅲ组,样品的分类结果可能与草乌生物碱和贝母生物碱含量有关;草乌与贝母在一定的比例下毒性增加,尤其是其合煎剂经胃液处理后毒性进一步增大,而经过肠液处理后毒性有一定的降低。结论:"草乌反贝母"是在一定条件下的配伍禁忌,可能与配伍比例和药物体内释放部位有一定的关系。     

Structural Elucidations of Two Ent-Kaurane Dimers from Bulbs of Fritillaria ebeiensis var. purpurea

Abstract

A novel ent-kaurane diterpenoid dimer, fritillebinide B (1) together with one known diterpenoid dimer fritillebinide A (2) were isolated from the bulbs of Fritillaria ebeiensis var. purpurea G.D. Yu et P. Li. Compound 1 has been established to be ent-3β-acetoxy-kauran-16β,17-acetal ent-16β-kauran-17(R)-aldehyde (1) by means of spectral analysis and chemical evidence.     

Simultaneous determination of 10 nucleosides and nucleobases from different cultivation years of Fritillaria unibracteata var. wabuensis by HPLC-DAD

Determination of nucleosides and nucleobases is important for the quality control of Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C. Hsia var. wabuensis (FUW) due to their physiological and pharmacologicalactions. In the present study, we developed a sensitive and reliable HPLC-diode-array detection method to simultaneously determine ten nucleosides and nucleobases, including cytosine, uracil, cytidine, uridine, thymine, adenine, inosine, guanosine, thymidine and adenosine. Complete separation of all the analytes was achieved on a Zorbax 300 Å 300 Extend C₁₈ column with a gradient of methanol-ultrapure water at a flow rate of 1 mL/min in less than 30 min. The diode-array detector wavelength was set at 260 nm for the UV detection of nucleosides and nucleobases. The optimized method provided good linearity (R²≥0.9993 for all the analytes), satisfactory precision (RSD≤3.715%), good repeatability (RSD≤3.748%) and good recovery (RSD from 97.688% to 102.923%). In addition, the developed method was successfully applied to simultaneous determination of ten nucleosides and nucleobases from FUW, and their content changes of various cultivation time (1-7 years) were further analyzed for the first time. Our findings were useful for ensuring the cultivation time choice of artificial cultivation, quality control, pharmaceutical studies and clinical efficacy of FUW.