低氧对大鼠肺组织一氧化氮合酶分布及活性的影响

本研究利用低压缺氧性肺动脉高压大鼠模型，通过NADPH－d组织化学染色对肺组织一氧化氮合酶（NOS）进行定性及定位分析、并利用3H－L一精氨酸转化实验定量测定肺组织NOS的活性，以观察低氧对大鼠肺组织NOS分布及活性的影响，旨在探讨NO及NOS在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。酶活性测定结果表明缺氧2周大鼠肺组织总NOS活性略有升高，其中原生型NOS（CNOS）活性显著降低（P＜0．05），诱生型NOS（iNOS）活性极显著升高（P＜0．01），NADPH－d染色结果显示肺血管内皮及平滑肌细胞NOS活性均明显增强。提示缺氧可能使肺血管内皮CNOS活性降低，NO生成减少，从而导致肺血管收缩反应增强，肺动脉压升高；缺氧还可能诱导肺血管内皮和平滑肌细胞iNOS表达和活性增加，在缺氧性肺血管收缩反应和结构重组中起到一定的调节作用，从而限制肺动脉压的过度升高。     

缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

肺心营养合剂对大鼠缺氧性肺、脑血管反应及肺血管改建的影响

研究了肺心营养合剂（ＰＸ）对慢性缺氧大鼠的肺循环、脑膜微循环、肺血管改建以及肺脑血管对急性缺氧反应的影响。结果：大鼠低压缺氧２１ｄ复制慢性缺氧性肺动脉高压，缺氧前５周开始进食ＰＸ者肺动脉平均压（Ｐｐａ）、肺血管对急性缺氧的收缩反应均比单纯慢性缺氧对照组低［Ｐｐａ分别为（２．４６±０．１０）、（３．６４±０．１１）ｋＰａ，△Ｐｐａ％分别为（２．０５±０．９８）％、（１３．２５±１．９１）％，Ｐ＜０．０１］，右室／（室间隔＋左室）的重量比值亦明显低于缺氧对照组（Ｐ＜０．０１），二组的急性缺氧性脑血管扩张反应（ＨＣＶＤ）差别无显著性（Ｐ＞０．０５）。ＰＸ能阻抑慢性缺氧所造成的肺中伴行于小气道的无肌动脉肌化和肌型小动脉中膜增厚。提示：ＰＸ能阻抑大鼠慢性缺氧性肺动脉高压、右心肥大及肺血管改建，能抑制缺氧性肺血管收缩反应而不影响缺氧性脑血管扩张反应。     

一氧化氮与慢性缺氧

慢性缺氧可引起肺血管平滑肌细胞迁移、增生和细胞外基质的堆积,引起肺血管结构改建,最终导致缺氧性肺动脉高压。在此过程中一氧化氮(nitrc oxide,NO)作为细胞内和细胞间的信使分子,在对抗缺氧引起的肺动脉高压的过程中担负着重要角色^[1].研究NO在肺慢性缺氧过程中的作用,对阐明肺动脉高压的发病机制、防治肺动脉高压具有深远意义。本文着重介绍NO作为信使分子在缺氧性肺动脉高压形成过程中的可能作用机制及其调节,以及应用外源性NO治疗肺动脉高压的研究现状。     

巯甲丙脯酸对大鼠急、慢性缺氧性肺动脉高压发生的影响

本文研究了血管紧张素I转化酶抑制剂巯甲丙脯酸(Captopril)对大鼠慢性缺氧性肺动脉高压的作用。发现巯甲丙脯酸(55——65mg/kg/day)长期灌胃能减轻由慢性缺氧所引起的肺动脉高压和右心室肥大;慢性缺氧能使肺循环ACE活性降低,提示在慢性缺氧性肺动脉高压发生中,肺循环ACE活性是降低的,AII的生成当是减少的,因此不是促进而是限制肺血管的收缩反应。本实验还发现慢性缺氧大鼠的肺血管对急性缺氧和AII的收缩反应均减弱。肺血管反应的降低可能为慢性肺动脉高压和肺血管硬化、与血管壁顺应性降低所致。长期用巯甲丙脯酸能减轻由慢性缺氧引起的肺血管阻力和血管型结构变化,也减少肺血管反应性变化。     

钙敏感受体在缺氧肺动脉平滑肌细胞中的表达及意义

目的观察肺动脉平滑肌细胞缺氧时钙敏感受体（calcium sensing receptor,CaSR）的表达,探讨其与缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的关系。方法Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用western blot技术分析CaSR、cyclinD1蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描显微镜观察不同干预情况下细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）的变化,应用BrdU掺入方法分析不同处理因素对细胞DNA合成的影响。结果 CaSR蛋白在肺动脉平滑肌细胞有表达。缺氧能够增加CaSR、cyclinD1的表达、BrdU掺入率及[Ca2＋]i（与对照组比较,P〈0.05）。GdCl3（CaSR激动剂）能够增强缺氧的上述作用,NPS2390（CaSR抑制剂）则能够减弱缺氧的作用。结论缺氧诱导的CaSR表达增加参与了缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖。     

一氧化氮对急、慢性缺氧大鼠血流动力学及缺氧性肺血管收缩反应的影响

观察了吸入０．００４％的一氧化氮（ＮＯ）对急、慢性缺氧大鼠血流动力学、缺氧性肺血管收缩反应（ＨＰＶ）、血气及高铁血红蛋白（ＭｅｔＨｂ）的影响。结果表明：（１）常氧吸入ＮＯ时能明显降低慢性缺氧大鼠肺动脉平均压（Ｐｐａ）和肺血管阻力（ＰＶＲ），但对正常大鼠的Ｐｐａ和ＰＶＲ无明显影响；（２）慢性缺氧大鼠急性缺氧时ＨＰＶ较正常大鼠弱，吸入ＮＯ不但降低两者的急性缺氧肺动脉高压，且完全逆转两者的ＨＰＶ；（３）吸入ＮＯ对急、慢性缺氧大鼠体循环血流动力学、血气及ＭｅｔＨｂ含量无明显影响。提示吸入ＮＯ能选择性降低，急、慢性缺氧性肺动脉高血压，且逆转ＨＰＶ。     

一氧化氮对急,慢性缺氧大鼠血流动力学及缺氧性肺血管收缩…

观察了吸入０．００４％的一氧化氮（ＮＯ）对急，慢性缺氧大鼠血流动力学，缺氧性肺血管收缩反应（ＨＰＶ），血气及高缺铁红蛋白（ＭｅｔＨｂ）的影响，结果表明：（１）常氧吸入ＮＯ时能明显降低慢性缺氧在鼠肺动脉平均压（Ｐｐａ）和肺血管阻力（ＰＶＲ），但对正常大鼠的Ｐｐａ和ＰＶＲ无明显影响；（２）慢性缺氧大鼠急性缺氧时ＨＰＶ较正常大鼠弱，吸入ＮＯ不但降低两者的急性缺氧肺动脉高压，且完全逆转两者的ＨＰＶ，（３）     

一氧化氮在慢性缺氧大鼠肺血管低反应机制中的作用

目的　探讨一氧化氮 ( NO)在慢性缺氧大鼠肺血管低反应机制中的作用。方法　采用离体肺动脉环实验。结果　 1用 L-单甲基精氨酸 ( L- NMMA)阻断 NO合成后 ,慢性缺氧鼠肺血管张力增值明显小于正常大鼠 [( 8.7±2 .4) m g vs( 18.2± 3 .1) m g,P<0 .0 5 ];而用 L- arginine促进 NO合成后 ,其张力下降值明显大于正常对照组 [( 9.6± 2 .4) m g vs( 4.8± 1.3 ) mg;P<0 .0 1];2用 L- NMMA阻断 NO的生成 ,可使正常大鼠离体肺动脉环缺氧性肺血管收缩反应 ( HPV)强度几乎减半 ;而对慢性缺氧鼠 HPV无明显变化 ;3 L- arginine可轻度增强正常鼠及慢性缺氧鼠HPV,但两者变化无显著差异。结论　 1慢性缺氧可能使肺动脉 NO生成减少 ,从而降低 NO在维持肺血管低张力中的作用 ;2急性缺氧使肺动脉 NO生成减少 ,从而介导 HPV;3慢性缺氧鼠肺动脉 NO生成减少 ,因而降低 NO在介导HPV中的作用。后者可能是慢性缺氧致离体肺动脉环 HPV钝化的一个重要机制     

新生乳猪缺氧性肺动脉高压中平滑肌细胞增殖和凋亡

目的 :研究平滑肌细胞增殖和凋亡在新生乳猪生后正常发育及缺氧性肺动脉高压肺血管重构中的作用。方法 :4 2只新生乳猪分成正常发育组和缺氧性肺动脉高压组 ,其中 2 0只新生乳猪置于低气压仓 (5 0 .8kPa)中 3或11d形成不同程度的缺氧性肺动脉高压模型。采用免疫组化方法和TUNEL方法检测和观察肺小阻力动脉中层平滑肌细胞 (SMC)的增殖和凋亡变化。结果 :平滑肌细胞复制率在出生时即较高 ,出生后早期进一步升高。短期缺氧对平滑肌细胞复制率有一定程度的抑制。较长期缺氧 (11d)引起肺血管重构显著变化同时 ,平滑肌细胞复制率显著增加 ;新生期无论在正常状态 ,缺氧或缺氧恢复阶段 ,在肺血管壁上均未见细胞凋亡阳性信号。结论 :新生乳猪出生后肺血管重构与平滑肌细胞增殖有关。平滑肌细胞增殖在严重缺氧性肺动脉高压形成中起重要作用。细胞凋亡在出生早期肺血管重构中作用尚待研究     

低氧时复合培养的肺动脉平滑肌细胞Janus激酶蛋白表达的状况

目的：探讨低氧对复合培养的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）中Janus激酶（Janus Kinase,JAK）蛋白表达的作用。方法：采用复合胶原酶法培养大鼠PASMC，再与大鼠肺微血管内皮细胞（LMEC）进行复合培养，免疫细胞化学SABC法检测低氧状况下PASMC中JAK蛋白的表达情况。结果：与正常PASMC弱阳性（＋）比较，低氧处理单独培养PASMC的JAK1、JAK3免疫组化染色，胞浆呈深紫蓝色，呈极强阳性（＋＋＋＋）；低氧处理复合培养的PASMC的JAK1、JAK3免疫组化染色，胞浆呈强阳性（＋＋＋）。与对照的正常细胞呈弱阳性（＋）比较，低氧2h组JAK1和JAK3蛋白表达明显升高；低氧6h组复合培养PASMC的JAK1和JAK3表达显著升高至高峰；12h组比低氧6h组已有降低，仍高于2h组的表达水平。结论：低氧在复合条件下可进一步激活PASMC中JAK蛋白的表达，从而高调多种信号通路，促进细胞增殖。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号转导及转录激活因子基因表达的影响

目的：研究低氧对肺动脉平滑肌细胞中信号转导及转录激活因子（STATs）基因表达的影响。方法：低氧处理培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞，采用半定量RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组的STAT3和STAT5基因的表达水平。结果：低氧培养2h组肺动脉平滑肌细胞中STAT3、STAT5 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。结论：低氧增强培养的肺动脉平滑肌细胞中STATs基因的表达，在低氧所致的肺肺动脉收缩等疾病中可能发挥重要作用。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素6（IL－6）表达的影响。方法：低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞，采用RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组IL－6基因的表达水平，并测定细胞培养上清中IL－6的活性。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中IL－6　mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，低氧12h组有所降低，但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL－6的活性明显升高，6h组细胞上清中IL－6的活性水平最高，12h组的活性降低，24h组的水平低于2h组。IL－6活性水平与其基因表达的水平一致。结论：低氧可以增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中IL－6基因的表达，使细胞培养上清中IL－6活性升高，进有可能激活其它一些信号转导相关基因调节细胞的低氧反应。     

丹参酮ⅡA磺酸钠抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及其机制

目的: 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMC)增殖的影响及其潜在的作用机制。方法: 将大鼠PASMC分为常氧组、常氧+STS组(5、10、20 ng/mL)、低氧组(3%O2)、低氧+STS组(5、10、20 ng/mL),培养60 h后,采用CCK-8法测定PASMC的增殖率;另将大鼠PASMC分为常氧组、低氧组、低氧+STS组(10 ng/mL),qRT-PCR测定mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相对表达量;再将PASMC分为常氧组、低氧组、低氧+STS组(10 ng/mL)、低氧+雷帕霉素组(20 nmol/L),蛋白质印迹法检测mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c myc蛋白的表达量。结果： 与常氧组比较,低氧组细胞增殖率明显升高(P＜0.05);与低氧组比较,低氧+STS组细胞增殖率明显降低(P＜0.05)。qRT-PCR显示低氧组mTOR、eIF2α和c-myc mRNA相对表达量较常氧组明显升高(P均＜0.05),低氧+STS组3种mRNA相对表达量较低氧组降低(P均＜0.05)。蛋白质印迹显示,与常氧组比较,低氧组mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达均显著升高(P均＜0.05);与低氧组比较,低氧+STS组和低氧+雷帕霉素组的mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达均升高(P均＜0.05);而低氧+雷帕霉素组与低氧+STS组无明显差异(P＞0.05)。 结论： STS可抑制低氧诱导的大鼠PASMC增殖,可能通过抑制mTOR/eIF2α信号通路而发挥作用。     

低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶（JAK）基因表达的作用。方法：鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养，采用半定量RT－PCR技术检测常氧组、低氧2、6、12h组的JAK1、JAK2和JAK3基因的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。RT－PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结论：低氧增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中JAK基因的表达，而JAK基因在低氧所致的肺动脉收缩和低氧肺动脉高压的信号转导中可能发挥重要作用。     

miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

【目的】观察miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用并探讨其可能的机制。【方法】原代分离和培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）,并给予3%低氧处理后,用Real-time PCR法检测miR-34a和Notch1mRNA在大鼠PASMC中的表达;低氧条件下用细胞转染法过表达和抑制miR-34a、沉默Notch1基因的表达后用EDU法观察细胞增殖情况,并用Real-time PCR和Western blot法检测细胞核增殖抗原PCNA的表达。【结果】分离和培养大鼠PASMC并给予3%低氧处理后,大鼠PASMC中miR-34a表达明显降低,且低氧48h降低较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。而Notch1的表达明显增高,且48h增高较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。此外,过表达miR-34a和沉默Notch1后会显著抑制低氧引起的细胞增殖,抑制miR-34a的表达后则会促进细胞增殖,且组间差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】在低氧诱导的PASMC细胞增殖过程中miR-34a参与了PASMC的增殖过程,且可能是通过上调Notch1引起了细胞增殖。     

The effect ofErigeron breviscapus on proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells in hypoxic porcines

Summary In order to study the effect ofErigeron Breviscapus (EB) on proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) in hypoxic porcines, immunohistochemical and MTT methods were employed to measure the proliferation of PASMC. It was found that the proliferation of PASMC in porcines was obvious, and the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was significantly high within 48 h after exposure to hypoxia. The EB could inhibit the proliferation and the expression of PCNA in PASMC under hypoxia, but it had no effect on the proliferation and expression of PCNA in PASMC under normal condition. The EB could inhibit the proliferation and the expression of PCNA in PASMC induced by phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), an agonist of PKC in normal and hypoxic conditions. It was concluded that the hypoxia could enhance the proliferation and expression of PCNA in PASMC. The EB can inhibit the proliferation and expression of PCNA in PASMC under hypoxia through PKC-signal way. The EB may be used in treating the pulmonary hypertension by inhibiting the proliferation of PASMC and the pulmonary vascular remodeling. This project was supported by a grant from the National Natural Sciences Foundation of China (No. [1997]436).     

The Effect of Erigeron Breviscapus on Proliferation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells in Hypoxic Porcines

Erigeron breviscapus can relax microarteries,improve microcirculation,increase tissue bloodstream,enhance heart function and decrease bloodviscosity.Presently,good curative effects on is-chemia has been achieved,but few studies have beenconducted on the treatment of hypoxic pulmonaryhypertension( HPH) .In this study,MTT and ex-pression of PCNA was used to examine the prolifera-tion of PASMC and investigate the mechanism of ef-fectof EB on HPH.1　 MATERIALSAND METHODS1 .1　 Cult…     

肺、脑动脉内皮和平滑肌细胞急性缺氧时某些第二信使的变化

目的研究急性缺氧时细胞内第二信使系统的变化。方法培养猪肺、脑动脉内皮细胞与平滑肌细胞,测定在急性缺氧时胞浆游离钙、磷酸肌醇和环核苷酸的变化。结果肺动脉内皮细胞缺氧时有Ｃａ内流增加、ＩＰ３和ｃＡＭＰ无明显变化,ｃＧＭＰ于缺氧４ｍｉｎ升至高峰,随即回降;而脑动脉内皮细胞缺氧时不仅有Ｃａ内流,且有内钙释放、ＩＰ３和ｃＡＭＰ增多,ｃＧＭＰ浓度在缺氧８ｍｉｎ时仍继续上升。肺与脑动脉平滑肌细胞间缺氧时第二信使的变化,仅有ｃＧＭＰ不同。结论内皮细胞的异质性可能与两血管反应性差异有关。