甘油蔗糖液对哺乳动物桑椹胚的渗透反应及冻存效果研究

为了提供快速冷冻前胚胎发生部分脱水的科学依据，我们观察了家兔桑椹胚在冷冻保护液中的体积变化。当桑椹胚置于仅含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油液中，桑椹胚立即皱缩，２ｍｉｎ时体积为等渗时体积的５８．９％或５９．６＾％，１０ｍｉｎ时桑椹胚体积达到等渗量的９０．８％或７６．９％，将这些桑椹胚接着移入含３．０ｍｏｌ／Ｌ或４．０ｍｏｌ／Ｌ甘油加０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖保护液中，桑椹胚再次发生皱缩主膨大变     

精子冻存损伤

精子冻存已成为一项成熟的技术,其应用日益广泛,但冻存后精子授精能力减弱.本文就冻存过程对精子结构、功能的影响及预防措施进行综述.     

冻存对自发性高血压大鼠精子结构和顶体反应的影响

自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat，SHR)作为公认的研究人类高血压病的动物模型，对其保种技术的要求越来越高。其中精子的冻存是极有前途的保种技术。但大鼠的精子冻存成功的报道几乎没有。本研究旨在探索冷冻对SHR精子结构和顶体反应的影响。目的：选择适合SHR大鼠精子的冻存保护剂，探讨冷冻对大鼠精子细胞膜完整性，     

利用普通冰箱冻存肿瘤细胞的技术研究

<正> 利用普通冰箱-18℃冷冻保存组织、细胞,迄今少见报道.本实验以人肝癌细胞株Bel_(7402)为对象,探讨-18℃冷冻保存方法.1材料与方法1.1 细胞来源及培养方法人肝癌细胞株Bel_(7402)引自中山医科大学实验动物中心,置于含100mL/L新生牛血清的RPMI1640培养液中,在37℃,50mL/LCO_2,饱湿条件下传代培养,细胞贴壁生长.1.2 试剂DMSO(AR)由北京化工厂生产;新生牛血清由杭州四季青生物工程材料研究所生产;RPMI 1640由Life Technologies Ins生产;胰蛋白酶(AR)由新疆化学研究所生产.1.3 冻存方法处于对数生长期的细胞经D-Hank’s液洗2次,后用0.25%胰蛋白酶消化,再用含100mL/L新生牛血清的1640液洗涤1次.后分别用含5%、10%、15%、20%DMSO的完全培养基(含100mL/L新生牛血清1640)重新制成细胞悬液.细胞浓度保持在1×10~6/mL左右.将细胞悬液置于2mL的硬塑料冻存管中,加盖密封,做好标记.直接迅速地放入-18℃冰箱中冻存.每份样品分装4支冻存管,每管装1mL悬液.于1周,1个月,2个月,3个月后分别进行融冻.     

自动程序降温法冻存小鼠脾淋巴细胞的研究

<正> 深低温保存淋巴细胞在移植免疫学、免疫试验质控和治疗,以及老年医学研究中有重要应用价值。采用程序降温仪实施自动程序降温是国外目前研究最多,并且是迄今最有效的冻存淋巴细胞的方法。我们利用国产装置建立了自动程序降温冻存小鼠脾淋巴细胞的方法,取得良好的效果,现将实验结果报告如下。     

不同冷冻保护剂在羊卵巢整体冻存中的效果比较

目的 应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选最佳冷冻保护剂组合。 方法 将收集的28个羊完整卵巢,随机分配到新鲜对照组（A组）、海藻糖组（B组）、甘油组（C组）,二甲基亚砜（DMSO）组（D组）。冻融后组织切片行HE染色及原位缺口末端转移酶标记技术（TUNEL）检测,并通过RT-PCR技术检测组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)及冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）的mRNA表达。 结果 B组正常卵泡形态比率与A组差异无显著性(P>0.05),C组及D组正常形态卵泡比率显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。 B、C、D 3组冻存组基质细胞密度均低于A组,其中D组最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。冻存组中,B组TUNEL反应阳性的细胞数目显著少于C组及D组,差异具有统计学意义(P<0.05),且均显著多于新鲜组。A组及B组bax基因 mRNA的表达量明显低于C组及D组（P<0.05）;B组CIRP基因 mRNA的表达量明显高于C组及D组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。 结论 羊卵巢整体冻存后可较好保存组织学形态,海藻糖组的冷冻保护剂在组织结构保存及抑制细胞凋亡方面优于甘油组及DMSO组。     

深低温冻存时限对成骨细胞生物学特性影响的实验研究

探讨深低温冻存不同时限后复苏对成骨细胞生物学特性的影响。取新生SD大鼠颅骨,胶原酶消化法培养成骨细胞。采用活细胞数、成骨细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性的测定等对深低温冻存1、3、6个月后复苏的成骨细胞和新鲜培养的细胞进行了比较。发现各组成骨细胞在细胞增殖功能、碱性磷酸酶活性方面均无显著性差异(P>0.05)。深低温冻存6个月后复苏组成骨细胞活细胞数与冻存1、3月后复苏组及新鲜培养的细胞组相比,活细胞数降低,有显著性差异(P<0.05),深低温冻存1、3个月后复苏组的活细胞数与新鲜培养的细胞组相比无显著性差异(P>0.05)。实验结果表明:较长时间深低温冻存能减少复苏后成骨细胞的活细胞数。但经深低温冻存后复苏的细胞仍保持成骨细胞原有的生物学特性。     

低温冻存对成人骨髓间质干细胞生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对骨髓间质干细胞（MSCs）其生物学特性的影响，探讨MSCs理想的保存方法。 方法： 体外分离培养、扩增正常成人骨髓MSCs,在5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护剂条件下，分别采用二步法和程控降温冻存方法低温保存3月，以台盼蓝拒染回收率(TBR)、MSCs生长曲线、MSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测，比较两种不同的冻存方法对MSCs生物学特性的影响。 结果： 程控降温冻存后MSCs活力优于二步法［TBR（87.67±2.52）％ vs （79.00±3.61）％，P<0.05］。多因素方差分析显示MSCs代数和冻存方法均是影响冻存后MSCs增殖的重要因素。两种冻存方法中P8代细胞的增殖能力明显劣于P1代细胞（P<0.01）或P4代细胞（P<0.01）。MSCs程控冻存后增殖能力与冻存前无差异（P<0.05），优于二步法冻存后的增殖能力（P<0.05）。 程控冻存后MSCs稳定表达CD29、CD44、CD166（与冻存前比较，P>0.05）。而二步法冻存后细胞CD29表达下降（与冻存前比较，P<0.05）。两种冻存方法对MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元细胞分化没有显著影响，与冻存前比较，P>0.05。 结论： 采用5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护液和程控降温的冻存体系，可较完整保持MSCs生物学特性，是深低温保存MSCs的理想方案。     

精浆催乳素及血清催乳素浓度对精子活力的影响

我们对95例不育者精液及30例有正常生育能力男性精液进行了精液常规分析,用放射免疫分析测定血清催乳素、精浆催乳素浓度.旨在了解血清催乳素、精浆催乳素浓度、精子活力三者的关系.     

人丘脑及其邻近结构毛细血管的定量研究

本研究用4例新生儿脑标本,双色动-静脉连续灌注,硝化棉包埋,制成500μm、100μm和30μm3种厚度交替的连续冠状切片。前者透明封片,后两者Nissl染色,用测微计测量毛细血管内径,图像分析仪测量毛细血管密度,全部数据进行方差分析和相关回归分析。结果表明,丘脑及其邻近结构的毛细血管密度差异十分显著。壳核、外侧膝状体细胞层、丘脑前核和底丘脑核的密度最高;丘脑背内侧核、腹外侧核、枕核、腹后外侧核、后外侧核、中央中核、内侧膝状体、腹前核和内髓板等居中;内囊和外侧膝状体纤维层的最低。在毛细血管直径方面,腹前核和内囊的最粗,壳核和外侧膝状体细胞层的最细。在已测量的同一结构中,毛细血管直径和密度之间存在着负相关。     

不同直径人皮质骨拉力螺钉的生物力学性能研究

目的;比较三种不同直径人骨拉力螺钉的剪切和扭转性能。方法：新鲜青壮年尸体股骨骨干,经深冻后制成直径为４ｍｍ,５ｍｍ,６ｍｍ的人骨拉力螺钉,在材料试验机上分别对螺钉的光杆部和螺纹部行剪切强度及刚度测试,再行扭转破坏。结果：直径为４ｍｍ,５ｍｍ,６ｍｍ的拉力骨螺钉的光杆部的剪切强度分别是５２６Ｎ,１０３４Ｎ,１４５９Ｎ,其螺纹部的剪切强度分别是２９０Ｎ,５０５Ｎ,９３１Ｎ,同一直径人骨拉力螺钉的光杆部     

人补体第4成分基因在各种HLA单倍型上的结构特点及其规律性

对５５个已知ＨＬＡ单倍型的细胞株进行人补体第４成分（Ｃ４）基因限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）检测，在所检测的２４种ＨＬＡ单倍型中观察到７种Ｃ４基因结构形式；探讨了Ｃ４蛋白质的遗传多态性与其基因结构多态性之间的关系；阐述了Ｃ４基因结构与ＨＬＡ祖传单倍型（ＡＨ）之间严格的规律性，相同的ＨＬＡ单倍型携带着同样的Ｃ４基因结构形式，即Ｃ４基因的结构多态性具有ＨＬＡ单倍型性质，而且有的Ｃ４基因结构形式为某一种ＨＬＡ单倍型所特有，即ＨＬＡ单倍型特异性；结果支持了ＨＬＡ祖传单倍型在遗传进化的过程中是高度保守的。     

小腿三头肌构筑学研究

对１６侧人小腿三头肌的肌构筑研究表明，腓肠肌内侧头的肌重和生物横切面积分别是外侧头的１．４６倍和１．６６倍，但肌纤维长仅后者的５／６。外侧头的肌质亚部，其肌纤维长／生理横切面积比率（１．９４）显著大于其他亚部。比目鱼肌的生理横切面积是腓肠肌的１．４倍，但肌纤维长／生理横切面积的比率仅及后者的１／４。这提示，腓肠肌两个头均属力量型肌，内侧头产生的张力大于外侧头，但外侧头缩短速度的潜力比内侧头高。比目     

不同诱导因子对人脐带血非造血干细胞神经分化的影响

目的 探讨诱导人脐带血非造血干细胞向神经细胞分化的最佳条件.方法 通过密度梯度离心法原代培养脐带血非造血干细胞;用流式细胞术分析脐带血获得的贴壁细胞的CD34、CD90、CDl66、HLA-ABC、HLA-DR等免疫表型;并用不同诱导因子组合:1.维甲酸(RA);2.表皮生长因子(EGF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF);3RA EGF bFGF;4二甲基亚砜(DMSO) 丁羟基茴香醚(BHA)诱导后,用免疫荧光化学法检测各组脐带血非造血干细胞中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖苷酶-C(Gal-C)等神经细胞、星型胶质细胞及少突胶质细胞的特异性标记抗原的表达.结果 脐带血非造血干细胞CD90、CD166、HLA-ABC表达阳性;无论那一种诱导因子组合,分化为少突胶质细胞的比率均高于神经元及星型胶质细胞;即各组分化为少突胶质细胞数＞神经元的细胞数＞星型胶质细胞数.对于少突胶质细胞(Ga-C)以RA EGF bFGF组合诱导率最高,达57.02%,其次是DMSO BHA诱导组.而对于神经元及星型胶质细胞的分化各组比较,以RA组最高,其次是DMSO BHA诱导组合.结论 RA对神经元及星型胶质细胞的诱导作用较好,而RA EGF bFGF组合对于少突胶质细胞诱导作用最明显.     

不同年龄人牙龈肥大细胞的组织化学和电镜研究

取４０例临床下沉的人牙龈组织，按年龄不同分为２－１６岁，１７－６０岁，６１－６５岁三组，对每组肥大细胞进行光镜与电镜观察，结果发现：随着年龄增长，肥大细胞数量表现为由少到多，又由多到少的变化：Ａｌｃｉａｎ蓝－藏红组化染色后，三组均以蓝染的肥大细胞为主 ，呈红蓝混合色的肥细胞亦随年龄增长出现由少到多，又由多到少的变化；临界电解质浓度的测定结果显示，三组均较高，但随年龄增长仍有增高趋势；电镜下多数肥大     

人胚胎表皮角蛋白细胞分化中PAI-2表达的研究

目的　通过研究人胚胎期表皮分化中PAI 2的表达及变化规律 ,探讨PAI 2与人表皮角蛋白细胞的关系。　方法　用免疫细胞化学及原位杂交技术对早、中、晚期人胚胎表皮角蛋白细胞染色 ,观察PAI 2蛋白及其mRNA原位分布、合成情况 ;用免疫细胞化学及核酸斑点杂交实验检测离体培养的人胚胎表皮角蛋白细胞中PAI 2的表达情况。　结果　PAI 2在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层角蛋白细胞内。胚胎期的表达高峰在胚胎中期 ,胚胎晚期其蛋白水平开始降低 ,而mRNA则维持在相对高位。PAI 2聚集于原位及离体培养的角质蛋白细胞胞浆近胞膜处。　结论　PAI 2可能参与了表皮角蛋白细胞分化的调控。     

人三角肌各亚部的构筑研究

用固定的成年尸体研究了１４例人三角肌各亚部的构筑特征。结果表明，人三角肌各亚部的构筑显不同，中亚部的生理横切面积最大（２０．５２ｃｍ＾２），是前亚部的３．５倍，后亚部的５．２倍；而其肌纤维长度（５．５５ｃｍ）及肌纤维长／肌长比率（０．３７）均最小。前、后亚部的肌纤维为平行排列，无羽状角，中亚部为多羽状肌，羽状角平均为１０．４°。我们认为，肌的构筑特征与肌的功能相适应，相对而言，三角肌中亚部倾向于